比濁法自動(dòng)測(cè)定乙酰螺旋霉素片的效價(jià)

1、比濁法主動(dòng)測(cè)定乙酰螺旋霉素片的效價(jià)【摘要】目的創(chuàng)立比濁法測(cè)定乙酰螺旋霉素片的要領(lǐng)。要領(lǐng)金葡菌為實(shí)行菌，加菌量約0.5%(V/V)，(370.5)造就3.54.5h測(cè)定。效果抗生素線性濃度為3.215.6g/l，均勻接納率為100.7%(n=9)，RSD=1.4%。結(jié)論本要領(lǐng)操縱便利、快速，敏捷、可信限率低，效果正確，細(xì)密度好，可作為乙酰螺旋霉素片效價(jià)的測(cè)定要領(lǐng)?！娟P(guān)鍵詞】效價(jià)；比濁法；乙酰螺旋霉素KEYRDSPteny;Turbidietriethd;Aetylspirayintablets乙酰螺旋霉素是螺旋霉素乙?；苌?，屬半合成大環(huán)內(nèi)酯抗生素，是單乙酰螺旋霉素II、單乙酰螺旋霉素III與

2、雙乙酰螺旋霉素II、雙乙酰螺旋霉素III四個(gè)組分為主的混淆物，毒性低，不良反響小，較普及有用地應(yīng)用于金葡菌、鏈球菌、肺炎桿菌、大腸埃希菌、淋球菌等引起的熏染1。因乙酰螺旋霉素為多組分抗生素，一樣平常的化學(xué)闡發(fā)要領(lǐng)或高效液相色譜法均無(wú)法測(cè)定其含量，雖有文獻(xiàn)2，3報(bào)道可用紫外分光光度法測(cè)定乙酰螺旋霉素制劑的含量，但紫外分光光度法專屬性差，測(cè)定效果偏向較大。對(duì)乙酰螺旋霉素及其制劑的含量測(cè)定，中國(guó)藥典2022年版4接納管碟法測(cè)定其效價(jià)，但管碟法操縱繁雜、泯滅時(shí)間慢長(zhǎng)(需d2才氣得到效果)，影響因素多，且需有履歷的實(shí)行職員才氣得到抱負(fù)的效果，同時(shí)由于乙酰螺旋霉素是多組分，輕易導(dǎo)致雙圈征象，使重現(xiàn)性差。比

3、濁法是一種快速、便利、經(jīng)濟(jì)的測(cè)定抗生素含量的要領(lǐng)，中國(guó)藥典2022年版微生物檢定法新增濁度法測(cè)定慶大霉素效價(jià)5。海內(nèi)正在研制微生物比濁法測(cè)定儀，我們應(yīng)用該測(cè)定儀在線主動(dòng)測(cè)定乙酰螺旋霉素效價(jià)，淘汰了多種實(shí)行影響因素，節(jié)流了大量人力勞動(dòng)，4h即可得到實(shí)行效果。1儀器與試劑1.1儀器金葡菌(Staphylusaureus)(B)26003、大腸埃希菌(Esherihiali)(B)44103與肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneuniae)(B)46117均由中國(guó)藥品生物成品檢定所提供。營(yíng)養(yǎng)瓊脂造就基(批號(hào)20220318)與抗生素檢定造就基III(批號(hào)060211)均為北京奧博星生物技能有限責(zé)

4、任公司消費(fèi)；0.9%氯化鈉溶液和磷酸鹽緩沖溶液(pH7.0)均按中國(guó)藥典2022年版二部附錄5配制。2效價(jià)測(cè)定2.1管碟法按中國(guó)藥典2022年版二部要領(lǐng)4測(cè)定。2.2比濁法(1)含菌造就基的配制取金葡菌奇怪歪面造就物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂造就基小歪面上，置3537造就1820h，用0.9%氯化鈉溶液洗下菌苔，并用0.9%氯化鈉溶液稀釋，使其在650n波長(zhǎng)處的吸光度約為1.0。取菌液約5l加至造就基100l中，搖勻，為含菌造就基。(2)溶液的配制尺度品溶液細(xì)密稱取乙酰螺旋霉素尺度品適量，加乙醇溶解后，加滅菌水稀釋至1000g/l的溶液，作為儲(chǔ)藏溶液；臨用前再用磷酸鹽緩沖溶液(pH7.0)稀釋至實(shí)行濃度

5、。供試品溶液細(xì)密稱取研細(xì)后的乙酰螺旋霉素片適量，加乙醇溶解后，加滅菌水稀釋至1000g/l的溶液，作為儲(chǔ)藏溶液；別的稀釋步調(diào)同尺度品溶液。(3)造就與測(cè)定別離細(xì)密汲取實(shí)行用尺度品溶液和供試品溶液各1.0l，參加滅菌造就管中，再參加含菌造就基9.0l，置抗生素比濁法丈量?jī)x內(nèi)，于(370.5)造就。另取稀釋溶劑1.0l，空缺造就基9.0l，混勻，作為空缺比較；再取稀釋溶劑1.0l，含菌造就基9.0l，混勻，作為陽(yáng)性比較。儀器在線于530n波長(zhǎng)處測(cè)定各管金葡菌對(duì)數(shù)生恒久內(nèi)差異造就時(shí)間下的吸光度(A)或濁度。按照量反響平行線原理6盤算供試品的效代價(jià)。3效果3.1測(cè)定條件的選擇(1)實(shí)行菌的選擇由于乙酰

6、螺旋霉素實(shí)用于革蘭陽(yáng)性菌如金葡菌、鏈球菌、肺炎桿菌、大腸埃希菌等，按照其抗菌作用與中國(guó)藥典2022年版常用的效價(jià)測(cè)定用菌株，開(kāi)端選擇大腸埃希菌、金葡菌與肺炎克雷伯菌為實(shí)行用菌株，舉行進(jìn)一步的篩眩繪制菌株在差異抗生素濃度的生長(zhǎng)曲線(圖1)，按照生長(zhǎng)曲線及在差異抗生素濃度下菌液吸光度值的變革，創(chuàng)造大腸埃希菌對(duì)乙酰螺旋霉素不敏感，對(duì)差異濃度的乙酰螺旋霉素，造就后菌液吸光度值相差很小，菌株生長(zhǎng)曲線無(wú)顯著地對(duì)數(shù)生恒久，不實(shí)用。乙酰螺旋霉素對(duì)肺炎克雷伯菌按捺作用較強(qiáng)，對(duì)差異濃度的乙酰螺旋霉素，造就后菌液吸光度值差值較小，且菌生長(zhǎng)遲鈍，也不實(shí)用。金葡菌對(duì)乙酰螺旋霉素敏感，對(duì)差異濃度的乙酰螺旋霉素，造就后菌液

7、吸光度值差值較符合，菌株生長(zhǎng)曲線有較好地對(duì)數(shù)生恒久，可以選擇。圖1金葡菌的生長(zhǎng)曲線(2)實(shí)行菌濃度的選擇按含菌造就基的配制要領(lǐng)，參加差異體積的菌液2.08.0l至造就基100l中，效果表現(xiàn)菌液濃度太低時(shí)，細(xì)菌生長(zhǎng)受抗生素按捺，生長(zhǎng)時(shí)間達(dá)4h，吸光度值仍達(dá)不到0.2；菌液濃度太高時(shí)，吸光度值很快凌駕0.7，且由于造就基中含菌量太多，菌自己互相按捺，導(dǎo)致菌生長(zhǎng)紊亂，偏離平行較差；終極選擇菌液濃度為0.5%擺布，此時(shí)菌生長(zhǎng)精良，有顯著地對(duì)數(shù)生恒久，吸光度一樣平常為0.30.7，偏離平行精良。3.2線性與范疇細(xì)密汲取實(shí)行用儲(chǔ)藏溶液適量，別離用磷酸鹽緩沖溶液(pH7.0)稀釋至以下濃度：1.231.5g

8、/l，別離量取上述溶液各1.0l，參加滅菌造就管中，每個(gè)濃度35管，再參加含菌造就基9.0l，置抗生素比濁法丈量?jī)x內(nèi)，于(370.5)造就。儀器在線于530n波長(zhǎng)處每隔5in主動(dòng)測(cè)定各管肺炎克雷伯菌對(duì)數(shù)生恒久內(nèi)差異造就時(shí)間下的吸光度或濁度(A)，以吸光度或濁度(A)對(duì)濃度()的對(duì)數(shù)舉行回歸盤算，效果為乙酰螺旋霉素在1.283.12g/l濃度范疇內(nèi)，高、低劑量間的濁度無(wú)顯著差異；在12.831.125g/l濃度范疇內(nèi)，吸光度或濁度(A)與濃度()的對(duì)數(shù)固然也成線性干系，但在陽(yáng)性菌生長(zhǎng)為符合的濁度時(shí)，樣品溶液中的菌被較強(qiáng)地按捺，生長(zhǎng)遲鈍，此范疇不得當(dāng)比濁測(cè)定用；在3.215.6g/l濃度范疇內(nèi)吸光

9、度或濁度(A)與濃度()的對(duì)數(shù)線性干系精良，陽(yáng)性菌與樣品溶液中的菌均生長(zhǎng)精良，尤以6.415.6g/l濃度范疇為最正確，此時(shí)不單陽(yáng)性菌與樣品溶液中的菌均生長(zhǎng)精良，各劑距間吸光度或濁度的差距較大，尺度曲線的歪率大，所得效果中可信限率最好，線性方程為：A=-0.9514g+1.4662r=0.99953.3測(cè)定要領(lǐng)3.4正確度細(xì)密稱取乙酰螺旋霉素尺度品適量，按乙酰螺旋霉素片處方參加輔料，照供試品溶液的稀釋要領(lǐng)稀釋至實(shí)行濃度，作為供試品溶液。尺度品溶液的配制同上，劑量為80%、100%、120%的均勻接納率為100.7%，RSD=1.4%，在效價(jià)測(cè)定范疇內(nèi)，接納率精良。3.5細(xì)密度實(shí)行用尺度品溶液的

10、配制同2.2(2)，同時(shí)也用作供試品溶液，按尺度曲線法重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)定值別離為98.64%、101.33%、99.51%、102.29%、101.14%和102.50%，RSD=1.5%，在效價(jià)測(cè)定范疇內(nèi)，該要領(lǐng)細(xì)密度精良。3.6測(cè)定樣品用兩個(gè)廠家差異測(cè)定原理的儀器對(duì)3批乙酰螺旋霉素片舉行測(cè)定并與管碟法效果舉行比力(表1)，效果無(wú)明顯性差異。4討論(1)比濁法較管碟法有顯著長(zhǎng)處，操縱便利、快速，可信限率低，尤其是儀器在線主動(dòng)丈量，使效果更正確，細(xì)密度更好，值得推廣應(yīng)用，對(duì)病院和企業(yè)檢測(cè)半成品能收縮檢測(cè)時(shí)間，進(jìn)步事情服從?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1四川抗菌素產(chǎn)業(yè)研究所.抗生素及抗熏染藥物.上海：上?？茖W(xué)技

11、能出書社，1981：213.2齊薊，李振龍.紫外分光光度法測(cè)定乙酰螺旋霉素含量J.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2001，24(5)：50.3陳俊芳，王環(huán)平，張振軍.紫外分光光度測(cè)定乙酰螺旋霉素片的含量J.中國(guó)藥事，2002，16(11)：699.4國(guó)度藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2022年版(二部)S.北京：化學(xué)產(chǎn)業(yè)出書社，2022：7.5楊亞莉，胡昌勤.中國(guó)藥典2022年版微生物檢定法的增修訂環(huán)境及要點(diǎn)J.中國(guó)抗生素雜志，2022，30(12)：721726.6國(guó)度藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2022年版(二部)S.北京：化學(xué)產(chǎn)業(yè)出書社，2022：附錄7984.7DnaldP,PaulA,alterH,etal.Seiau