抗狂犬病血清生產(chǎn)簡(jiǎn)介課件

1、 抗狂犬病血清 生產(chǎn)簡(jiǎn)介 2006年5月2020/10/131 抗狂犬病血清 生產(chǎn)簡(jiǎn)介 202 抗狂犬病血清 系由狂犬病固定毒免疫馬的血漿，經(jīng)精制、胃酶消化、純化制得的液體或凍干免疫球蛋白制劑。 用于狂犬病的預(yù)防。 2020/10/132 抗狂犬病血清 系由狂犬病固定毒免疫馬的血漿，經(jīng)精一、免疫血漿 為獲抗毒效價(jià)高的免疫血漿 ，馬匹、免疫原及免疫方法是重要的條件。2020/10/133一、免疫血漿 為獲抗毒效價(jià)高的免疫血漿 ，馬匹、免（一）馬匹的選擇 制造抗毒素所用馬匹應(yīng)健壯(過幼者免疫器官發(fā)育不健全，過老者免疫機(jī)能衰退，最好是48歲)。 無傳染病(包括馬傳染性貧血、馬鼻疽、布氏桿菌病、馬副傷

2、寒性流產(chǎn)及其他傳染病)和惡性腫瘤等。2020/10/134（一）馬匹的選擇 制造抗毒素所用馬匹應(yīng)健壯(過幼者免疫 由液體石蠟與羊毛脂配成“油包水” 的不完全福氏佐劑是馬匹免疫最常用、效能最好的佐劑。（二）免疫原長(zhǎng)期反復(fù)地給馬進(jìn)行免疫，在馬體內(nèi)將產(chǎn)生高效價(jià)的抗血清。 2020/10/135 由液體石蠟與羊毛脂配成“油包水” 的不完全福氏佐劑是(三)免疫方法 基礎(chǔ)免疫：從馬體初次接受免疫原刺激，到產(chǎn)生少量特異性抗體的階段即第一次免疫應(yīng)答階段。 超免疫：基礎(chǔ)免疫以后的強(qiáng)化免疫。2020/10/136(三)免疫方法 基礎(chǔ)免疫：從馬體初次接受免疫原刺激，到 有了第一次免疫應(yīng)答后，再次接觸同一免疫原就會(huì)迅

3、速出現(xiàn)第二次免疫應(yīng)答?？寡逍r(jià)將會(huì)急劇上升。 對(duì)超免成功的馬匹予以采血并開始再次免疫注射，如此反復(fù)的每一循環(huán)通稱“1程”、“2程”超免疫。2020/10/137 有了第一次免疫應(yīng)答后，再次接觸同一免疫原就會(huì)迅速出(四)采血及血漿的分離 免疫血清效價(jià)不低于100IU/ml時(shí)即可采血。 ( 2005年版藥典三部 ) 采血有 “部分采血”與“全采血”兩種方式。前者指每程超免疫后由頸靜脈采血l3次，每次5000m1左右；后者指由頸動(dòng)脈采血直至馬匹死亡。2020/10/138(四)采血及血漿的分離 免疫血清效價(jià)不低于100IU/ml二、抗血清的精制 抗血清制造方法的改進(jìn)與制品質(zhì)量的提高大體經(jīng)歷了三個(gè)歷

4、史階段。2020/10/139二、抗血清的精制 抗血清制造方法的改進(jìn)與制品質(zhì)量的提高大 最初的階段是“原制血清”即不做加工處理，僅加防腐劑、除菌過濾。 其次是應(yīng)用適宜的理化方法(主要是硫酸銨鹽析法)去除血漿中的大部分非特異性蛋白(包括白蛋白、纖維蛋白等)，并使抗體蛋白得到一定的濃縮，單位體積所含抗毒素單位數(shù)量顯著提高，稱為“濃制血清”。 蛋白酶精制法的研究和創(chuàng)建，使得抗血清制造方法跨入了一個(gè)新的歷史階段。 2020/10/1310 最初的階段是“原制血清”即不做加工處理，僅加防腐劑純凈度：含雜蛋白的程度。 提純系數(shù)：通稱R值，即精制品每g蛋白 所含單位數(shù)與原血漿每g蛋白所含單位數(shù)的比值。 收獲

5、率：精制品總單位數(shù)與原血漿總單位數(shù)的比值(%)。 前兩指標(biāo)經(jīng)常與后者互相矛盾，在工藝上予以適度調(diào)節(jié)而兼顧。 衡量精制效果優(yōu)劣的主要指標(biāo)2020/10/1311純凈度：含雜蛋白的程度。 提純系數(shù)：通稱R值，即精制品質(zhì)量的要求及檢定 抗毒素除做預(yù)防用外還常被用于治療，而且治療劑量往往很大。 制造工藝比較復(fù)雜，生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，容易被污染。2020/10/1312質(zhì)量的要求及檢定 抗毒素除做預(yù)防用外還常被用1安全性 主要指制品污染的雜質(zhì)引起的副作用。例如細(xì)菌、熱原質(zhì)、類A血型物質(zhì)以及其它毒性物質(zhì)等， 2005年版藥典三部中都有具體的檢定方法并規(guī)定有最低要求標(biāo)準(zhǔn)(參閱2005年版藥典三部)。2020/10

6、/13131安全性 主要指制品污染的雜質(zhì)引起的副作用。例如2純度及比活性 由于馬匹免疫方法及抗血清精制方法的改進(jìn)，抗血清的純度(免疫球蛋白的純一性)與比活性(每g蛋白所含單位數(shù))均有顯著的提高，這些是代表精制抗毒素質(zhì)量的主要指標(biāo)，2005年版藥典三部中均有檢查方法及要求標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。2020/10/13142純度及比活性 由于馬匹免疫方法及抗血清精制方法的改進(jìn)精制工藝改進(jìn) 抗血清制造工藝的改進(jìn)很大的提高了臨床應(yīng)用于治病防病的免疫血清制品的質(zhì)量。 2020/10/1315精制工藝改進(jìn) 抗血清制造工藝的改進(jìn)很大的提高了臨床應(yīng)用于治蛋白酶精制法 馬血清抗體的分子結(jié)構(gòu)與人的IgG基本相同，分子量184K

7、D，大小427.7nm。 馬血清抗體在馬匹免疫初期階段從屬于免疫血清的球蛋白。 隨著免疫程度的逐步加深，抗血清的分布逐漸向球蛋白轉(zhuǎn)移，從屬于與兩球蛋白之間新出現(xiàn)的免疫球蛋白，被稱為T球蛋白或2球蛋白(此時(shí)原球蛋白稱作1球蛋白)。 2020/10/1316蛋白酶精制法 馬血清抗體的分子結(jié)構(gòu)與人的IgG基本相同 抗毒免疫馬血清經(jīng)硫酸銨鹽析。30一50飽和沉淀物幾乎全是2 (T)球蛋白部分。此部分經(jīng)胃酶處理后，又在2與之間出現(xiàn)一個(gè)新峰。進(jìn)一步用硫酸銨鹽析濃縮，此新峰乃被提純成精制抗血清。2020/10/1317 抗毒免疫馬血清經(jīng)硫酸銨鹽析。30一50飽和沉淀物幾 經(jīng)胃酶處理，IgG分子在重鏈間的二硫

8、鍵的c端側(cè)被切斷。切下的Fc片段無抗毒活性，不耐熱，經(jīng)繼續(xù)消化與熱變性而被除掉。保留下來的F(ab)2片段具有抗毒活性，即前述的所謂改性球蛋白抗毒素，分子量98KD，分子大小4.113.6nm，電泳位置在2與兩球蛋白之間。2020/10/1318 經(jīng)胃酶處理，IgG分子在重鏈間的二硫鍵的c端側(cè)2020/10/13192020/10/1319層析技術(shù)抗血清純度提高 從 50%-60% 提高到80%以上。 比活性 從 10000 IU/g以上。2020/10/1320層析技術(shù)抗血清純度提高 2020/10/1320抗狂犬病血清工藝流程 免疫血漿 馬匹檢疫、免疫、基免、超免、 采血、血漿分離 血漿精制 去除雜蛋白 胃酶消化 切去Fc端 第一次沉淀 硫酸銨沉淀、去除Fc端 及加熱處理 2020/10/1321抗狂犬病血清工藝流程 免疫血漿 馬匹檢 第二次沉淀 硫酸銨沉淀 明礬沉淀 純化 濃縮 最后處理 2020/10/1322 第 原液檢定 半成品配制及除菌 半成品檢定 分裝 成品檢定 入庫(kù)2020/10/1323 2020/