mg118遺傳疾病的診斷doc-第18章遺傳疾病的診斷

1、PAGE PAGE 19Evaluation Warning: The document was created with Spire.Doc for .NET.第十八章遺傳病的診斷遺傳病診斷是一項復(fù)雜的工作，需要多學(xué)科的密切配合。遺傳病的診斷包括常規(guī)診斷和特殊診斷。常規(guī)診斷指與一般疾病相同的診斷方法，特殊診斷是指采用遺傳學(xué)方法，包括染色體檢查，家系分析等，是遺傳病確診的關(guān)鍵。目前，臨床上遺傳病診斷包括：臨癥診斷、癥狀前診斷（presymptomatic diagnosis）、出生前診斷和植入前診斷。第一節(jié) 臨臨癥診斷斷臨癥診斷（ssympptommatiic ddiaggnossis）是根據(jù)

2、患者的各種臨床表現(xiàn)進(jìn)行分析，確診并判斷遺傳方式，是遺傳病診斷的主要內(nèi)容。一、病史、癥癥狀和體體征（一）病史史遺傳病大多多有家族族聚集傾傾向，因因此病史史的采集集非常重重要。在在采集病病史時要要準(zhǔn)確、詳詳盡。另另外還要要收集病病人的家家族史、婚婚姻史和和生育史史等相關(guān)關(guān)信息。遺傳病史的采集比其他疾病更重要，因為遺傳病的家族聚集性和其傳遞的規(guī)律性決定了病史采集可能會獲得更有用的信息，對后續(xù)的分析工作可能會有很大的幫助。病史采集的關(guān)鍵是材料的真實性和完整性。病史采集，主要是通過采集對象的描述和有關(guān)個體的病案查詢工作來完成。實踐中還應(yīng)注意不同個體描述是否可以相互印證，以確定資料的可信度。對于發(fā)病原因、

3、過程、時間、地點、治療情況等也應(yīng)詳細(xì)記錄。（二）癥狀狀與體癥癥遺傳病除了了具有其其他疾病病相同的的體征外外，還有有特異性性征候群，這這些都為為初步診診斷提供供線索。大大多遺傳傳病在嬰嬰兒和兒兒童期有有相應(yīng)的的體征和和癥狀，如如Dowwn綜合合征患兒兒的特殊殊面容和和智力低低下等，當(dāng)然還還需要通通過染色色體檢查查進(jìn)一步步確診。二、家系分分析根據(jù)對患者者及家族族成員發(fā)發(fā)病情況況的調(diào)查查結(jié)果繪繪制系譜譜，確定定單基因因病或多多基因病病，遺傳傳方式等等。系譜譜分析時時應(yīng)注意：系譜的的完整性性和準(zhǔn)確確性；單單基因遺遺傳病的的分析非非常有用用，常染染色體顯顯性遺傳傳病、常常染色體體隱性遺遺傳病，XX連鎖顯

4、顯性遺傳傳病，XX連鎖隱隱性遺傳傳病，YY連鎖遺遺傳病。單基因遺傳分析中要注意外顯不全，延遲顯性，顯、隱性的相對性，新的突變產(chǎn)生，遺傳印記，動態(tài)突變，以及遺傳異質(zhì)性等問題，避免判斷上的錯誤和發(fā)病風(fēng)險的錯誤估計。線粒體遺傳傳病通過過母系遺遺傳，主主要特點點是晚發(fā)發(fā)，進(jìn)行行性。多多基因病病是一大大類常見見的疾病病，有家家族聚集集傾向，但但不遵循循孟德爾爾分離規(guī)規(guī)律。以往被認(rèn)為為是多基基因病的的一些疾疾病，一一部分被被證明是是遺傳異異質(zhì)性所所致，即即受單個個主基因因決定，如如癲癇，先先天性心心臟病和和先天性性巨結(jié)腸腸等。三、細(xì)胞遺遺傳學(xué)檢檢查細(xì)胞遺傳學(xué)學(xué)檢查染染色體檢檢查或核核型分析析，是輔輔助診斷

5、斷和對染染色體病病確診的的主要方方法。隨隨著顯帶帶技術(shù)的的應(yīng)用，特特別是高高分辨染染色體顯顯帶技術(shù)術(shù)的發(fā)展展，能夠夠更準(zhǔn)確確地發(fā)現(xiàn)現(xiàn)和確定定更多的的染色體體數(shù)目和和結(jié)構(gòu)異異常，并并發(fā)現(xiàn)新新的微小小畸變綜綜合征。利用染色體顯帶技術(shù)，可以對許多疾病在染色體水平找到原發(fā)性改變，如腫瘤，發(fā)育缺陷、心血管疾病等，把疾病相關(guān)基因確定在一個較小的范圍內(nèi)。染色體原位位雜交是是應(yīng)用標(biāo)標(biāo)記的DDNA片片段（探探針）與與玻片標(biāo)標(biāo)本上的的細(xì)胞、染染色體，以以及間期期的DNNA或RRNA雜雜交，研研究核酸酸片段的的位置、相相互關(guān)系系的技術(shù)術(shù)。一般般用生物物素、地地高辛等等標(biāo)記探探針，原原位雜交交后，用用熒光染染料標(biāo)記記

6、的生物物素親和和蛋白、抗抗親和蛋蛋白的抗抗體進(jìn)行行免疫檢檢測和雜雜交信號號放大，使使探針雜雜交的區(qū)區(qū)域發(fā)出出熒光，這這種原位位雜交稱稱熒光原原位雜交交（FIISH），靈靈敏度高高，特異異性強(qiáng)，可可以檢測測染色體體微小結(jié)結(jié)構(gòu)異常常，也可可應(yīng)用在在基因定定位和基基因制圖圖等領(lǐng)域域。另外外還有雙雙色FIISH、多多色FIISH和和染色體體涂染等等方法，大大大提高高了染色色體畸變變的檢出出率和準(zhǔn)準(zhǔn)確性。染色體檢查查標(biāo)本主主要有外外周血，羊羊水中胎胎兒脫落落細(xì)胞和和胎兒的的臍帶血血，病人人的骨髓髓、胸腹腹水、手手術(shù)切除除的病理理組織，培養(yǎng)細(xì)胞等。染色體檢查查適應(yīng)癥癥包括：明明顯智力力發(fā)育不不全者；生長遲

7、遲緩或伴伴有其他他先天畸畸形者；夫妻之之一有染染色體異異常，如如平衡異異位，嵌嵌合體等等；家族族中已有有染色體體異?；蚧蛳忍旎蔚膫€個體；多多發(fā)性流流產(chǎn)婦女女及其丈丈夫；原發(fā)性性閉經(jīng)和和女性不不育癥；無精子子癥和不不育的男男性；兩兩性畸形形者；疑疑為先天天愚型的的患兒及及其父母母；原因因不明的的智力低低下并伴伴有大耳耳、大睪睪丸和多多動癥者者；355歲以上上的高齡齡孕婦。四、生化檢檢查生化檢查是是遺傳病病診斷的的重要輔輔助手段段，主要要是對由由于基因因突變所所引起的的酶和蛋蛋白質(zhì)的的定量和和定性分分析，對對單基因因病和先先天性代代謝病進(jìn)進(jìn)行診斷斷，包括括一般的的臨床生生化檢驗驗和針對對遺傳病

8、病的特異異檢查。目前已知的的多種遺遺傳性代代謝病中中，大多多數(shù)為酶酶缺陷?？煽捎捎诨蛲蛔冏?、基因因缺失、基基因表達(dá)達(dá)異常或或翻譯后后加工修修飾缺陷陷所致。目目前臨床床主要對對酶活性性和代謝謝產(chǎn)物進(jìn)進(jìn)行檢測測，以血血液和尿尿液為主主要檢材材，有的的可以制制成濾紙紙片和通通過顯色色反應(yīng)進(jìn)進(jìn)行檢測測，隨著著對遺傳傳病發(fā)病病機(jī)理認(rèn)認(rèn)識的深深入和檢檢測方法法的改進(jìn)進(jìn)，檢測測將更加加簡便、快快捷。第二節(jié) 出生前前診斷出生前診斷斷或稱產(chǎn)前診診斷（pprennataal ddiaggnossis）是采用羊膜穿刺術(shù)或絨毛取樣等技術(shù)，對羊水、羊水細(xì)胞和絨毛進(jìn)行遺傳學(xué)檢驗，對胎兒的染色體、基因進(jìn)行分析診斷，是預(yù)

9、防遺傳病患兒出生的有效手段，越來越廣泛的被應(yīng)用。一、出生前前診斷對對象根據(jù)遺傳病病的危害害程度和和發(fā)病率率，可將將出生前前診斷的的對象排排列如下下：夫婦之之一有染染色體畸畸變，特特別是平平衡易位位攜帶者者，或者者夫婦染染色體正正常，但但生育過染染色體病病患兒的的孕婦；35歲歲以上的的孕婦；夫婦之之一有開開放性神神經(jīng)管畸畸形，或或生育過這這種畸形形患兒的的孕婦；夫婦之之一有先先天性代代謝缺陷陷，或生生育過這這種患兒兒的孕婦婦；X連鎖鎖遺傳病病致病基因因攜帶者者孕婦；有習(xí)慣性性流產(chǎn)史史的孕婦婦；羊水過過多的孕孕婦；夫婦之之一有致致畸因素素接觸史史的孕婦婦；有遺傳傳病家族族史，又又系近親親結(jié)婚的孕孕

10、婦。但但應(yīng)當(dāng)注注意，已出現(xiàn)先先兆流產(chǎn)產(chǎn)、妊娠娠時間過過長、有有出血傾傾向者的的孕婦不不宜做產(chǎn)產(chǎn)前診斷斷。二、出生前前診斷的的方法（一）B超超 B超是一種種安全無無創(chuàng)的檢測測方法，能能夠詳細(xì)細(xì)檢查胎胎兒的外外部形態(tài)態(tài)和內(nèi)部部結(jié)構(gòu)，使使許多遺遺傳性疾疾病得到到早期診診斷?？煽梢栽\斷斷的疾病病有，神神經(jīng)管缺缺陷、腦腦積水、無無腦畸形形；唇裂、腭腭裂，頸頸部淋巴巴管腫瘤瘤；先天天性心臟臟病，支支氣管、肺肺發(fā)育異異常、胸腔積積液；其其他的異異常，如如先天性性單側(cè)腎缺缺如，先先天性幽幽門狹窄窄、先天天性巨結(jié)結(jié)腸等。（二）羊膜膜穿刺羊膜穿刺是是在B超超的監(jiān)視視下，用用消毒的的注射器器抽取胎胎兒羊水水（圖11

11、8-11）?？煽梢詫Τ槌槿〉难蜓蛩捌淦渲械奶ヌ好撀渎浼?xì)胞進(jìn)進(jìn)行細(xì)胞胞培養(yǎng)，分分析染色色體，以及生化化和基因因的檢測測。如羊水中中甲胎蛋蛋白濃度度過高時時，提示示胎兒可能能有無腦腦、開放放性脊柱柱裂、脊脊髓脊膜膜膨出和和腦積水水等異常常。羊膜穿穿刺一般般在妊娠娠1620周周進(jìn)行，流流產(chǎn)的風(fēng)風(fēng)險相對對較小。圖18-11 羊羊膜穿刺刺示意圖圖（三）絨毛毛取樣法法絨毛取樣一一般在妊妊娠79周進(jìn)進(jìn)行，是是妊娠早早期診斷斷方法。也也是在B超超監(jiān)視下下，用特特制的取取樣器，從陰道經(jīng)宮頸進(jìn)入子宮，沿子宮壁到達(dá)取樣部位，用內(nèi)管吸取絨毛（圖18-2）。絨毛取樣的優(yōu)點是檢查時間早，需要作出選擇性流產(chǎn)時，給孕婦帶

12、來的損傷和痛苦較小。缺點是經(jīng)子宮頸取樣標(biāo)本容易被污染，胎兒和母體感染和操作不便，引起流產(chǎn)的風(fēng)險是羊膜穿刺的兩倍。羊膜穿刺法法和絨毛毛取樣可可用來診診斷染色色體病，遺遺傳代謝謝病，胎胎兒性別別鑒定，所所有可用用胚胎或或胎兒DDNA檢檢測的疾疾病，另另外，開開放性神神經(jīng)管缺缺陷只能能采用羊羊膜穿刺刺術(shù)診斷斷。圖18-22 絨毛毛取樣法法示意圖圖（四）臍帶帶穿刺術(shù)術(shù)臍帶穿刺術(shù)術(shù)是在BB超的監(jiān)監(jiān)視下，用用細(xì)針經(jīng)經(jīng)腹壁、子子宮進(jìn)入入胎兒臍臍帶抽取取胎兒血血液。本本方法取取樣最好好在妊娠娠18周周，常用用于因錯錯過絨毛毛取樣或或羊膜穿穿刺最佳佳時機(jī)或或羊水檢檢查失敗敗的補(bǔ)救救措施，還還可以檢檢測胎兒兒的血

13、液液系統(tǒng)疾疾病，先先天性免免疫缺陷陷，某些些單基因因病。（五）胎兒兒鏡檢查查又稱羊膜腔腔鏡或?qū)m宮腔鏡檢檢查，它可在進(jìn)進(jìn)入羊膜膜腔后，直接觀察胎兒的外形、性別和發(fā)育狀況，是否有畸形，還可以同時抽取羊水或胎血進(jìn)行檢查，或進(jìn)行宮內(nèi)治療。因此，理論上這是一種最理想的方法。但由于操作困難，容易引起多種并發(fā)癥，目前還不能被廣泛采用。胎兒鏡檢查的最佳時間是妊娠1820周，可以診斷大皰性表皮松懈癥及某些皮膚病。（六）分離離孕婦外外周血中中的胎兒兒細(xì)胞目前用于出出生前診診斷材料料的獲得得對于胎胎兒和母母體都是是創(chuàng)傷性性的，存存在流產(chǎn)產(chǎn)和感染染等風(fēng)險險。從220世紀(jì)紀(jì)90年年代末，開開始探索索一種無無創(chuàng)傷性性的出

14、生生前診斷斷方法。利利用妊娠娠期少量量胎兒細(xì)細(xì)胞可以以通過胎胎盤進(jìn)入入母體血血液中，采采用流式式細(xì)胞儀儀分離技技術(shù)，磁磁激活細(xì)細(xì)胞分選選技術(shù)，免免疫磁珠珠法，顯顯微操作作分選法法，分離離胎兒細(xì)細(xì)胞。用用這些方方法富集集的胎兒兒細(xì)胞很很少，需需要用高高靈敏的的技術(shù)方方法進(jìn)行行下一步步分析檢檢測，目目前常用用的方法法是PCCR。（七）植入入前診斷斷隨著人工受受精，試試管嬰兒兒和胚胎胎移植技技術(shù)的開開展，以以及單個個細(xì)胞基基因診斷斷技術(shù)的的應(yīng)用，目目前正探探索在胚胚胎植入入前診斷斷（pree-impplanntattionn diiagnnosiisi）。在受精精后6天天胚胎著著床前，通過顯微操作技

15、術(shù)取出一個細(xì)胞，應(yīng)用PCR，F(xiàn)ISH等技術(shù)進(jìn)行特定基因和染色體畸變的檢測，將人類的遺傳缺陷掌控在最早階段，這是遺傳病產(chǎn)前診斷的重大突破。Indiccatiionss foor PPrennataal DDiaggnossis1.Advvancced matternnal agee (oofteen aat lleasst 335 yyearrs aat tthe exppectted datte oof cconffineemennt): Iff thheree iss noo prreviiouss hiistoory of a cchroomossomee abbnorrmallityy,

16、 iit iis oonlyy inn thhe aadvaanceed mmateernaal aage rannge thaat tthe rissk oof aa chhrommosoomallly abnnormmal fettus excceedds tthe rissk oof mmisccarrriagge ddue to thee prroceedurre iitseelf. Thhe aage cuttofff ussed varriess soomewwhatt ammongg diiffeerennt pprennataal ggeneeticcs ccentterss

17、buut iis uusuaallyy att leeastt 311 too 322 yeearss off agge.2.Preevioous chiild witth aa dee noovo chrromoosomme aabnoormaalitty: If thee paarennts of a cchilld wwithh a chrromoosomme aabnoormaalitty hhavee noormaal cchroomossomees tthemmsellvess, ttherre mmay nevvertthellesss bee a rissk oof tthe

18、samme aabnoormaalitty iin aa suubseequeent chiild. Foor eexammplee, iif aa woomann unnderr 300 yeearss off agge hhas a cchilld wwithh Doown synndroome, thhe rrecuurreencee riisk is aboout 1/1100, inn coompaarisson witth aa geenerral poppulaatioon rriskk off abboutt 1/8000. PPrennataal mmosaaiciism i

19、s posssibble expplannatiion of thee inncreeaseed rriskk.3.Preesennce of strructturaal cchroomossomee abbnorrmallityy inn onne oof tthe parrentts: Herre tthe rissk oof aan aabnoormaal cchilld iis uusuaallyy 200% oor llesss, bbut it mayy bee hiigheer. 4.Fammilyy hiistoory of somme ggeneeticc deefecct

20、tthatt maay bbe ddiaggnossed or rulled outt byy biiochhemiicall orr DNNA aanallysiis: Mosst oof tthesse ddisoordeers aree caauseed bby ssinggle-genne ddefeectss annd hhavee riiskss off 255% oor 550% in sibbs oof aaffeecteed cchilldreen. Casses in whiich thee paarennts havve bbeenn diiagnnoseed aas c

21、carrrierrs aafteer aa poopullatiion scrreenningg teest rattherr thhan aftter thee biirthh off ann afffecctedd chhildd arre aalsoo inn thhis cattegoory. Evven befforee DNNA aanallysiss ennterred thee piictuure, nuumerrouss biiochhemiicall diisorrderrs ccoulld bbe iidenntiffiedd prrenaatallly, annd DD

22、NA anaalyssis hass grreattly inccreaasedd thhe nnumbber.5.Fammilyy hiistoory of an X-llinkked dissordder forr whhichh thheree iss noo sppeciificc prrenaatall diiagnnosttic tesst: Wheen ttherre iis nno aalteernaativve mmethhod, thhe ppareentss maay uuse fettal sexx deeterrminnatiion to hellp tthemm d

23、eecidde wwhettherr too coontiinuee orr teermiinatte tthe preegnaancyy. WWithh thhe ddeveeloppmennt oof DDNA anaalyssis forr prrenaatall diiagnnosiis oof XX-liinkeed ddisoordeers succh aas DDuchhennne mmuscculaar ddysttropphy andd heemopphillia A aand B, firrst thee feetall seex iis ddeteermiinedd, a

24、and theen DDNA anaalyssis is perrforrmedd iff thhe ffetuus iis mmalee.6.Rissk oof aa neeuraal ttubee deefecct (NTDD): Onlly ffirsst-aand seccondd-deegreee rrelaativves of NTDD paatieentss arre eeliggiblle ffor amnnioccenttesiis bbecaausee off a siggnifficaantlly iincrreassed rissk oof hhaviing a cch

25、illd wwithh ann NTTD, butt maany fettusees wwithh oppen NTDDs ccan noww bee deetecctedd byy ottherr teestss.第三節(jié) 基基因診斷斷利用分子生生物學(xué)的的技術(shù)，檢檢測體內(nèi)內(nèi)DNAA或RNNA結(jié)構(gòu)構(gòu)或表達(dá)達(dá)水平變變化，從從而對疾疾病做出診斷的方方法，稱稱為基因因診斷（ggenee diiagnnosiis），通常又稱稱為分子子診斷（mmoleecullar diaagnoosiss）?；蛟\診斷始于于19778年，應(yīng)用限制性酶切長度多態(tài)性（RFLP）技術(shù)檢測胎兒鐮狀細(xì)胞貧血癥。 基因診斷技技術(shù)已

26、逐逐步從實實驗研究究進(jìn)入臨臨床應(yīng)用用，不僅僅適用于于遺傳性性疾病，而而且已擴(kuò)擴(kuò)展到一一些感染染性疾病病、腫瘤瘤的診斷斷。基因診斷具具有如下下特點：以特定定基因為為目標(biāo)，檢檢測基因因的變化化，特異異性性強(qiáng)強(qiáng)；采用用分子雜雜交技術(shù)術(shù)和PCCR技術(shù)術(shù)具有信信號放大大作用，用用微量樣樣品即可可進(jìn)行診診斷，靈靈敏度高高；在疾病病尚無出出現(xiàn)臨床床表現(xiàn)前前，胎兒兒出生前前的產(chǎn)前前診斷，以以及特定定人群的的篩查等等，應(yīng)用用廣泛；檢測樣樣品獲得得便利，不受個體發(fā)育階段性和基因表達(dá)組織特異性的限制。 需要說明的的是，由由于基因因突變的的類型多多種多樣樣，除了了缺失、倒倒位、點點突變、動態(tài)突變可以進(jìn)行基因的檢測外，

27、大多數(shù)基因突變的分析復(fù)雜而繁瑣，有一定的難度。一、基因診診斷的主主要技術(shù)術(shù)方法基因診斷主主要采用用核酸分分子雜交交、PCCR和DNAA序列測測定等技技術(shù)。（一）核酸酸分子雜雜交核酸雜交技技術(shù)是在基因因診斷中中，用于于檢測樣樣品中是是否存在在相應(yīng)的的基因以以及相應(yīng)應(yīng)基因表表達(dá)狀態(tài)態(tài)等等。其其中Soouthhernn印跡法主主要用于于基因組組DNAA的分析析，Norrtheern印印跡法用用于檢測測樣品中中RNAA的種類類和含量量。1. 斑點點印跡雜雜交 把待待檢測的的核酸樣樣品點在在NC膜上，變變性后與與標(biāo)記的的探針進(jìn)進(jìn)行結(jié)合合反應(yīng)，經(jīng)經(jīng)過顯色色和顯影影后檢測測雜交信信號的強(qiáng)強(qiáng)度，與與對照樣樣品

28、比較較后確定定所測核核酸量的的高低。根根據(jù)NCC膜上所所點核酸酸樣品的的種類不不同，分分為DNNA ddot bloottiing和和 RNNA ddot bloottiing。點點樣方式式如采用用狹縫點點樣器點點樣，得得到的線線狀雜交交信號，稱稱狹線印印跡法。2. 原位位雜交 把把組織或或細(xì)胞樣樣品經(jīng)過過適當(dāng)處處理，用用探針與與核酸進(jìn)進(jìn)行雜交交。這種種方法不不需要提提取核酸酸，可以以確定被被檢核酸酸在組織織或細(xì)胞胞，以及及中期染染色體中中的定位位，具有有重要的的生物學(xué)學(xué)和病理理學(xué)意義義。3. PCCR-AASO ASOO為等位位基因特特異性寡寡核苷酸酸雜交法法（alleele-speecif

29、fic oliigonnuclleottidee，ASSO）的的簡稱，是基于于核酸雜雜交的一一種方法法。根據(jù)據(jù)已知基基因突變變位點的的堿基序序列，設(shè)設(shè)計和制制備與野野生型或或突變型型基因序序列互補(bǔ)補(bǔ)的兩種種探針，分分別與被被檢測者者樣品中中的DNNA分子子進(jìn)行雜雜交，根根據(jù)樣品品與兩種種探針雜雜交信號號的強(qiáng)弱弱，確定定是否存存在基因因突變，判判斷被檢檢者是突突變基因因的純合合體或雜雜合體（圖圖18-3）。圖18-33ASSO探針針雜交原原理示意意圖4基因芯芯片技術(shù)術(shù)基因因芯片技技術(shù)是近近年來發(fā)發(fā)展十分分迅速的的大規(guī)模模、高通通量分子子檢測技技術(shù)?；具^程程是將許許多特定定的寡核核苷酸片片段或

30、基基因片段段作為探探針，有有規(guī)律地地排列固固定于支支持物上上，如玻片片、硅片片或尼龍龍膜等，形形成矩陣陣點。現(xiàn)現(xiàn)在的技技術(shù)可以以做到在在1cmm2上排列列成千上上萬個“點”。樣品品DNAA/RNNA通過過PCRR擴(kuò)增、體體外轉(zhuǎn)錄錄等技術(shù)術(shù)摻入熒熒光標(biāo)記記分子，然后與待測樣本進(jìn)行雜交反應(yīng)，再通過激光共聚焦熒光顯微鏡對芯片進(jìn)行掃描，獲取信息，電腦系統(tǒng)分析處理所得資料，對上千種甚至更多基因的表達(dá)水平、突變和多態(tài)性進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測?；蛐酒煽梢赃M(jìn)行行微量化化、大規(guī)規(guī)模、并并行化、高高度自動動化地處處理有價價值的生生物樣品品，精細(xì)細(xì)地研究究各種狀狀態(tài)下分分子結(jié)構(gòu)構(gòu)變異，了了解組織織細(xì)胞基基因表達(dá)達(dá)

31、情況。既可檢測基因的多態(tài)性，又能檢測基因突變，特別適用于多個基因、多個位點的同時檢測。這一技術(shù)目前處于發(fā)展和優(yōu)化階段，已經(jīng)有多種針對遺傳性疾病、腫瘤檢測的基因芯片用于臨床診斷。（二）其它它常用的的技術(shù)1. PCCR-RRFLPP 將聚合合酶鏈反反應(yīng)（PPCR）與RFLP方法結(jié)合的一種檢測技術(shù)。由于DNA序列的差異，造成了內(nèi)切酶位點的變化，或是新酶切位點的產(chǎn)生；或是原酶切位點的消失等。通過酶切后電泳圖譜的判斷，確定檢測結(jié)果。該方法包括PCR：利用一對或數(shù)對特異性引物，將目標(biāo)DNA擴(kuò)增；酶切：利用某些限制性內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，如PCR產(chǎn)物中含有相應(yīng)的酶切位點序列，DNA鏈則被切開；利用瓊脂糖凝膠

32、或聚丙烯酰胺凝膠分離酶切后的PCR產(chǎn)物，根據(jù)電泳圖譜判斷結(jié)果。如果某DNNA序列列已經(jīng)全全部確定定，則可可以通過過計算機(jī)機(jī)輔助設(shè)設(shè)計特異異性PCCR引物物；擴(kuò)增增DNAA片段和進(jìn)進(jìn)行酶切切位點分分析，該該方法簡簡便易行行，精確確度也很很高。但但是該方方法也有有一定的的局限性性，如果果多態(tài)性性位點的的DNAA序列沒沒有相應(yīng)應(yīng)的內(nèi)切切酶，則則該方法法不適用用。2. PCCR-SSSCPP 單鏈鏈構(gòu)象多多態(tài)性（sinnglee-sttrannd cconfformmatiion pollymoorphhismm，SSSCP），是一種檢測核酸序列中點突變的技術(shù)。當(dāng)雙鏈DNA變性為兩條單鏈后，會在中性條

33、件下形成各自特定的空間構(gòu)象，因而在電泳時將在不同的位置上出現(xiàn)不同的電泳條帶。如果DNA序列發(fā)生改變，甚至僅有一個堿基變化時，空間構(gòu)象有可能發(fā)生改變，電泳時表現(xiàn)出不同的遷移率，被檢DNA電泳條帶與已知序列的對照DNA電泳條帶不一致，出現(xiàn)新生條帶時，表明有突變存在（圖18-4）。該方法與PCR聯(lián)合應(yīng)用，因此稱PCR-SSCP，主要用于突變分子的初步篩查。圖18-44 SSSCPP原理示示意圖 33. RRT-PPCR 逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄PCCR以mRRNA為為模板合合成cDDNA，再再進(jìn)行PPCR，用用于基因因表達(dá)水水平的檢檢測和分分析。 44. Wessterrn 印印跡技術(shù)術(shù) Wessterrn 印印跡

34、技術(shù)術(shù)是檢測測特定蛋蛋白質(zhì)的的方法，可可用于某某種與遺遺傳病相相關(guān)的蛋蛋白質(zhì)定定性定量量分析。如如假肥大大型肌營營養(yǎng)不良良（DMMD）患患者基因因缺陷使使肌細(xì)胞胞的增強(qiáng)強(qiáng)蛋白（ddysttropphinn）合成成異常，采采用Weesteern 印跡法法檢測患患者增強(qiáng)強(qiáng)蛋白，進(jìn)進(jìn)行診斷斷。二、基因診診斷技術(shù)術(shù)的應(yīng)用用（一）基因因診斷在在遺傳病病中的應(yīng)應(yīng)用1鐮狀細(xì)細(xì)胞貧血血的基因因診斷鐮狀細(xì)細(xì)胞貧血血癥的基因因突變發(fā)發(fā)生在珠珠蛋白基基因內(nèi)部部，可以用用限制性性內(nèi)切酶酶Mstt進(jìn)行檢檢測?；诰幋a碼珠蛋白白鏈的第66位密碼碼子由GGAG變?yōu)镚TG，改變變了限制制性內(nèi)切切酶Msst的酶切位點點。當(dāng)酶

35、切切正常人人DNAA和患者者DNAA后再用用標(biāo)記的的珠蛋白白基因為為探針作作Souutheern雜雜交時，就就會出現(xiàn)現(xiàn)不同的的DNAA條帶。限限制性內(nèi)內(nèi)切酶MMst切割的的序列是是CCTTNAGGG（其其中N是是任何一一種核苷苷酸），切切割正常常DNAA產(chǎn)生11.15kb DNAA片段；若切割割患者DDNA時時，形成成1.335kb 珠蛋白白的DNNA片段段，雜合合體則形形成1.15，11.355兩個片片段（圖圖11-7）。2血友病病A的基基因診斷斷血友友病A是是X連鎖鎖隱性遺遺傳病，由由于遺傳傳性凝血血障礙所所致的出出血性疾疾病。該該病是凝凝血因子子（Faactoor，F(xiàn)）基因因的缺陷陷，其

36、中中大范圍圍的基因因重排（如如缺失、插插入和重重復(fù)）只只占5，主要要突變類類型為堿堿基取代代或少數(shù)數(shù)堿基的的缺失和和插入，這這些突變變產(chǎn)物可可能是不不完整的的、無活活性的或或不穩(wěn)定定的因子子肽鏈，導(dǎo)導(dǎo)致臨床床癥狀輕輕重不一一。采用用基因診診斷方法法可以檢檢出有部部分基因因缺失的的患者和和女性攜攜帶者，可可進(jìn)行產(chǎn)產(chǎn)前檢查查。對該該基因的的產(chǎn)前診診斷可以以通過RRFLPP連鎖分分析進(jìn)行行，在基因因的內(nèi)側(cè)及及旁側(cè)有有多組RRFLPP位點可可供基因因診斷。目目前多采采用PCCR技術(shù)術(shù)與RFFLP相相結(jié)合的的方法，先先用PCCR技術(shù)術(shù)將包含含突變DDNA的的片段擴(kuò)擴(kuò)增出來來，然后后用識別別該位點點的限制制酶來酶酶切，電電泳后直直接檢測測多態(tài)性性位點的的狀態(tài)。3. a地地中海貧貧血的基基因診斷斷 aa地中海海貧血是是由于aa基因的的缺失造造成的。a鏈?zhǔn)怯蓛蓪蚩刂频?，如果在一條16號染色體上的2個a基因都缺失，稱為a0地貧；如果一條16號染色體上的2個基因缺失一個，稱為a+地貧，這兩種a地貧基因可以組合引起不同的綜合征。在基因的兩端設(shè)計引物，擴(kuò)增后的片段電泳，可以檢測缺失突變，確定被檢測者的基因型，對可疑的胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷。