艾滋病病毒抗體快速檢測技術(shù)手冊

1、艾滋病病毒抗體快速檢測技術(shù)手冊2011年版中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心二o一一年三月前言近年來在黨和政府的高度重視和領導下各項艾滋病防治措施得到有效落實艾滋病疫情快速上升的勢頭有所減緩 病死率有所下降艾滋病病毒感染者、病人的生活質(zhì)量鮮明改善社會歧視有所少。但我國艾滋病流行形勢依然嚴峻艾滋病傳遞方式越發(fā)隱蔽性傳遞已成為要的傳遞途徑男男性行為傳遞上升鮮明許多感染者和病人尚未發(fā)現(xiàn)。2009年中國艾滋病疫情估量有74萬HIV感染者 但截止2010年底經(jīng)過網(wǎng)絡直報累計數(shù)只有38.6萬人還有近一半的感染者和病人沒有被發(fā)現(xiàn)。 為了盡早、盡快發(fā)現(xiàn)感染者國務院關(guān)于進一步加強艾滋病防治工作的通知國發(fā)

2、【2010】48號明確提出要進一步加強監(jiān)測檢測網(wǎng)絡建設依托現(xiàn)有醫(yī)療衛(wèi)生資源配備必的設備和人員擴大檢測服務范圍推廣使用快速簡便的檢測方法提高檢測可性。組織各級各類醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)主動開展艾滋病病毒檢測咨詢。目前我國已經(jīng)建了較為完整的艾滋病檢測實驗室網(wǎng)絡截止2010年底全國共有318個艾滋病檢測確證實驗室、8870個艾滋病篩查檢測實驗室它們在艾滋病檢測進程中發(fā)揮著不可替代的主導作用。但我國地域遼闊在一些有檢測需求、尚不具備條件建立驗室的單位囊括醫(yī)療機構(gòu)、農(nóng)村鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務中心和艾滋病愿咨詢點等需要建立快速檢測點以擴大檢測覆蓋面、發(fā)現(xiàn)更多的感染者。為、有效地開展艾滋病病毒快速檢測在全國艾滋病檢

3、測技術(shù)規(guī)矩2009年版的基礎上國家參比實驗室關(guān)于快速檢測的使用進行了細化在廣泛征求專家基層工作人員意見的基礎上起草了艾滋病病毒抗體快速檢測技術(shù)手冊以簡稱手冊。 本手冊共分九章囊括人員要求檢測點的設置、要求與管理試劑選擇樣本采集及注意事項檢測策略及流程實驗記錄結(jié)果報告告知檢測質(zhì)量控制生物安全及個人防護。 本手冊上報衛(wèi)生部經(jīng)獲準由中國疾病預防控制中心印發(fā)。本手冊作為技術(shù)指導性文件將為檢測點開展HIV快速檢測提供有力的技術(shù)支持。 本手冊起草單位中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心。 本手冊參加編寫單位中國藥品生物制品檢定所上海市疾病預防控制中心中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院微生物流行病究所北京出

4、入境檢2 驗檢疫局中國疾病預防控制中心婦幼保健中心云南省疾病預防控控制中心湖南省疾病預防控控制中心四川省涼山州疾病預防控控中心湖南省張家界市疾病預防控控制中心。 本手冊編寫組人員蔣巖、姚均、汪寧、王佑春康來儀、李敬云、鐘平、朱紅、毛宇嶸、邢文革、肖瑤、潘良、張桂云、邱茂鋒、王臨虹、熊燃、楊莉、賀健梅、王芳、馬名駒、林麒。 本手冊主要國際技術(shù)顧問美國疾病預防控制中心項目MarcBharatS.ParekhOu齊明山郝玲和世界衛(wèi)生組織駐華代表處張嵐Osborne。 本手冊編寫工作聯(lián)系人姚均。 本手冊自發(fā)布之日起實施手冊解釋權(quán)屬于中國疾病預防控制中 心。艾滋病病毒抗體快速檢測工作組2011年4月20

5、日3 縮略語艾滋病獲得性免疫缺陷綜合征SynromeHIV人免疫缺陷病毒艾滋病病毒HumanRT: 快速檢測試驗Test酶聯(lián)免疫吸附試驗Enzyme Immunosorbent ST性傳遞疾病 Transmitte 高效抗逆錄病毒療法 TherapyOI機會性感染艾滋病自愿咨詢檢測HIVanTestingPITC醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)的醫(yī)務人員主動提供艾滋病檢測詢ProvierHIVTestingan。PMTCT預防母嬰傳遞PreventiononMothertoPLWHA艾滋病病毒感染者艾病患者PeopleIU靜脈藥癮者靜脈吸毒者IntravenousrugUserCCCenterforControl

6、anPreventionWHO世界衛(wèi)生組織聯(lián)合艾滋病計劃署ProgrammePT: 能力驗證Testing4目 錄 第一章 人員要求.6檢測點的設置、要求與管理.三章 試劑選擇.9樣本采集及使用注意事項章 檢測策略及流程.章 實驗記錄.5結(jié)果報告與告知.章 檢測質(zhì)量控制.章 生物安全與個人防護.0 1 HIV 抗體快速檢測試劑臨床質(zhì)量評估結(jié)果2007-2010年222 附表HIV抗體復檢送檢表.33艾滋病病毒抗體快速檢測記錄本.4 快速檢測結(jié)果登記表.85 檢測點現(xiàn)場督導提綱.5HIV快速檢測的人員需有相關(guān)的試驗或醫(yī)學知識經(jīng)過縣級以上相關(guān)專業(yè)技術(shù)部 門培訓取得合格證書。需要掌握的內(nèi)容囊括理論與

7、實驗操作兩部分1.1 理論訓至少囊括1.1.1HIV在我國特別是本地區(qū)的流行狀況與流行特征。1.1.2HIV抗體快速檢測理論基礎及重要性。 1.1.3 HIV 抗體檢測的種類與方法。 1.1.4 HIV1.1.5HIV抗體快速檢測結(jié)果的判讀、解釋、實驗記錄、結(jié)果報告及保密、感染者轉(zhuǎn)介與咨詢。1.1.6HIV抗體快速檢測的質(zhì)量控制。1.1.7生物安全知識個人防護職業(yè)暴露預防與處理廢棄物處理。1.1.8 掌握告知相關(guān)的知識和技巧。1.2 實驗操作培訓至少囊括1.2.1 確理解試劑說明書掌握標準操作程序。1.2.2 樣本采集方法囊括指尖血和靜血采集。1.2.3 自靜脈血中分離血清/血漿。1.2.4依

8、照操作說明書獨力完成快 速檢測試驗至少檢測5-10份已知結(jié)果的盲樣。1.2.5 正確判讀教員已完成操作的陰性陽性結(jié)果的試劑條。1.2.6 正確記錄檢測結(jié)果。1.2.7 掌握質(zhì)量控制方1.3 1.4關(guān)于從事快速檢測的人員應根據(jù)需要進行再培訓。6 第二章檢測點的設置、要求管理 各省可根據(jù)艾滋病流行情況和防治工作整體需求統(tǒng)籌考慮檢測點設置有效開展快速檢測。2.1 檢測點設置2.1.1根據(jù)當?shù)匕滩×餍星闆r和實際需求可在有檢測需求、但不具備建立實驗室條件的地方設置檢測點。2.1.2 檢測點可由地艾滋病確證實驗室或篩查實驗室負責培訓、驗收衛(wèi)生行政部門負責審批在地衛(wèi)生行政部門與省艾滋病確證中心實驗室備案。

9、2.2 檢測點要求2.2.1 快速實驗所在房間溫度可控保證室內(nèi)溫度達到快速檢測試劑盒說明書要求的溫度有測工作臺光線充足可以消毒。2.2.2 需配備快速檢測所需物品至少囊括通冰箱、消毒與污物處理設備、一次性消耗品、安全防護用品和資料柜。2.2.3 展快速檢測時保證室內(nèi)溫度達到快速檢測試劑盒說明書的要求。2.2.4 嚴格依照快速檢測試劑說明書要求操作保存原始記錄及實驗結(jié)果。2.2.5 必需參加省或地、州市組織的快速檢測能力驗證。2.3 檢測點管理艾滋病確證中心實驗室負責本省HIV快速檢測的實施及其質(zhì)量保證。2.3.1各省統(tǒng)籌考慮檢測點的發(fā)展與計劃指導檢測點的建立與管理。2.3.2 關(guān)于已建立的檢測

10、點備案。2.3.3 定期行人員培訓必要時進行崗位再培訓。2.3.4 關(guān)于本省使用的快速試劑質(zhì)量進行評判。2.3.5 不定期抽檢快速試劑檢測為陰性的樣本使用酶聯(lián)試劑進行復檢發(fā)漏檢應即時處理并且上報國家參比實驗室。2.3.6 組織本省快速檢測能力驗證活動。也可分級實施由各地、州市艾滋病確證實驗室負責、縣級疾控中心艾病篩查實驗室協(xié)助關(guān)于HIV快速檢測點進行培訓和質(zhì)量管理。2.3.7 統(tǒng)籌考慮提供陰陽性外部質(zhì)控品開展室內(nèi)質(zhì)控。2.3.8 各級衛(wèi)生行政部門和疾病預防控制心應制訂切實可行的現(xiàn)場督導計7 劃確定督導內(nèi)容參考附表5。2.3.9不期組織人員關(guān)于檢測點進行督導。新建立的檢測點至少第一年應督導檢查一

11、次。2.3.10發(fā)生問題的檢測點應在現(xiàn)場提供培訓和技術(shù)支持。督導中可在現(xiàn)場關(guān)于檢測人員實驗操作進行考核觀察檢測人員的操作進程是否標準實驗結(jié)果的判定否正確實驗結(jié)果的記錄是否規(guī)矩等。8 第三章試劑選擇快速檢測是相關(guān)于于酶聯(lián)檢測獲得結(jié)果時間較短而言。與酶聯(lián)檢測相比快速檢測具有以下優(yōu)點可較快獲得檢測結(jié)果一般30分鐘內(nèi)可用全血 末梢血或靜脈血檢測樣本容采集只需較少的實驗設備可在邊遠和沒有實驗室條件的地區(qū)使用如農(nóng)村鄉(xiāng) 鎮(zhèn)衛(wèi)生院、社區(qū)衛(wèi)生服務中心、艾滋病自愿咨詢檢測點、醫(yī)療衛(wèi)生機的醫(yī)務人員主動提供艾滋病檢測咨詢點PITC、預防母嬰傳遞PMTCT等場所。接受相關(guān)培訓后基層衛(wèi)生人員能夠掌握可以直觀地判定和解釋結(jié)

12、果。3.1 快速檢測試劑分類HIV快速檢測試劑按原理不同分為以下三類3.1.1 免疫滲濾試驗以硝酸纖維膜為載體HIV 抗原點狀固定在膜上。加待檢樣本后陽 性 結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。有效試驗質(zhì)控點必需顯色。3.1.2 免疫層試驗以硝酸纖維膜為載體HIV抗原線狀固定在膜上加待檢樣本后陽 性 結(jié) 果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗的質(zhì)控帶必需顯色。3.1.3 明膠顆凝集試驗PA將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體 加待檢樣本后。當待檢樣本含有HIV抗體時 明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反映根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。PA 試劑有兩種:同時檢測和抗體以及訣別檢測和抗體。有效試驗必需有陰性和陽性質(zhì)控。3

13、.2 快速檢測試劑使用要求3.2.1 必需使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準的快速試劑。 目前經(jīng)過國家食品藥品監(jiān)督管理SFA批準的快速檢測試劑有20余種詳細信息可登錄國家藥品食品管理局 網(wǎng)站 HYPERLINK / /查詢。3.2.2 試劑必需在有效期內(nèi)使用。3.2.3 根據(jù)檢測目的選擇試劑。初篩選擇敏感性高的試劑 復檢選擇特異性高的試劑。3.2.4 1 國疾病預防控制中心網(wǎng)站 HYPERLINK / 9 4.1 采樣前準備 根據(jù)檢測項目的具體要求 確定采集樣本的種類及樣本處理、保存和運輸?shù)臅r限和方法依照臨床采血技術(shù)規(guī)矩的要求操作遵守生物安全要求檢查所需物品是否備齊是否在有效期內(nèi)有無破損是否

14、足量特別應檢查受者信息與樣本收集試管表面的標記是否一致注明樣本采集時間。選擇合適的室外采血空間受檢者坐臥于合適的位置準備采血用具、皮膚消毒用品、 采血管及試管架、廢棄物容器等。4.2 樣本采集樣本應按試劑盒說明書的要求確定是采集末梢血或靜脈血。采血時要注意安全應用一次性采血針和一次性真空血管采血部位要嚴格消毒謹慎操作防止刺傷皮膚和造成外界污染。4.2.1 梢全血通常為指尖血采集消毒局部皮膚成人和1歲以上兒童可選擇耳垂中指、無名指或食指。用采血針刺破皮膚用無菌紗布擦掉第一滴血。收集滴的血液備用見圖4.1。4.2.2 靜脈全血采集消毒局部皮膚用未加或加ETA抗凝劑的真空采血管抽取適量靜脈血備用。見

15、圖4.24.2.3 血清將上述未加抗凝劑的真空采血管所收集到的靜脈血室溫下自然放置12小時待血液凝固、血塊收縮后吸出血清置于合適的無菌保存管中備用。4.2.4 血漿上述加抗凝劑的真空采血管所收集到的靜脈血15003000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘上層即為血漿 吸出置于合適的無菌保存管中 備用。 4.3 樣本轉(zhuǎn)運 4.3.1 不在現(xiàn)場檢測的樣本 通常采集 5 毫升靜脈血 現(xiàn)場分離血清或血漿后直接送到相關(guān)的檢測點或篩查實驗室。 4.3.2 檢測點使用指尖血檢測時 應填寫快速檢測記錄本 記錄受檢者的詳細信息 見附表 3 關(guān)于于陽性反映者 應重新采集全血分離血清或血漿 填寫樣本送檢單 見附表 2 連同樣本一

16、同轉(zhuǎn)送到上級實驗室 如果路程較遠或氣候 10 11 炎熱時 裝有樣本的容器可加冰運送。 4.4 樣本保存 用于抗體檢測的血清或血漿樣本 短期 1 周 內(nèi)進行檢測的可存放于 2 8 一周以上應存放于-20以下。 圖 4.1 末梢采血流程圖 1. 準備用品 2. 確定采血位置 3. 采用正確姿勢 4. 關(guān)于采血部位消毒 5. 針頭關(guān)于準采血位置 6. 扎針 7. 棄去第一滴血 8.收集樣本9. 包好傷口10. 將一切的廢棄物棄入污物桶特別注意將用過的針頭放4.2 1. 準備用品2. 關(guān)于收集樣本的管進行標記3.在手肘上方扎好止血帶. 4. 讓其采血關(guān)于象緊握拳 5. 由內(nèi)向外進行消毒. 6. 取出

17、采血器具7. 檢查針頭是否完好8. 抽出針頭9. 用大母指按壓著待進針血管下方10.針頭輕輕扎入血管11. 讓血液緩緩流入針管12. 解開止血帶13. 讓血液流滿針管.14. 用紗布蓋住針頭處抽出針頭.15. 輕輕用紗布壓著采血部位.16. 包扎采血位17. 將一切的用品棄入污物桶中將用過的針頭放入硬質(zhì)容器中12 第五章測策略及流程HIV快速檢測策略根據(jù)檢測點現(xiàn)場條件可分為以下二類。5.1當檢測點上有兩種快速檢測試劑時5.1.1常規(guī)檢測 初篩試驗用敏感性高快速檢測試劑結(jié)果為陰性則報告陰性結(jié)果為陽性反映則進入復檢試驗。復檢試驗在同一檢測點用第一種快速試劑加上第二種快速試劑進行復檢。兩種快速試劑復

18、檢結(jié)果均為陰性則報告陰性。如一陰一陽或兩種均為陽性則按全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)矩要求送艾滋病確證實驗室進行確證試驗。根據(jù)檢測結(jié)果進行咨詢檢測結(jié)果為陰性的按陰性咨詢關(guān)于兩種快速檢測果均為陽性反映或一陰一陽反映的依照疑似陽性咨詢流程圖5.1建議盡快 進行確證試驗。樣本5.1.2應急檢測: 在一些特殊情況下如職業(yè)暴露、孕婦產(chǎn) 時和手術(shù)前等建議應用兩種快速檢快檢試劑1初篩試驗陰性反映陽性反映快檢試劑1快檢試劑2 復檢試驗均陽性反映一陰一陽均陰性反映送確證試驗室做確證試驗報告陰性按疑似陽性咨詢告知按陰性咨詢并且告知圖5.1HIV抗體快速檢測流程圖13 測試劑同時檢測如兩種試劑檢測結(jié)果均為陰性則報告陰性。如一

19、陰陽或兩種均為陽性反映則按全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)矩要求送艾滋病確證實室進行確證試驗。同時關(guān)于檢測結(jié)果為陰性的按陰性咨詢檢測結(jié)果為一陰一陽兩種均為陽性反映的依照疑似陽性咨詢流程圖5.2均陽性反映 一陰一陽均陰性反送確證試驗室做確證試驗按陰性咨詢并且告知按疑似陽性咨詢告知 報告陰性兩種快檢試劑同時檢測樣本圖5.2HIV抗體快速檢測流程圖5.2 當檢測點上只有一種快速檢測試劑時 用該種快速檢測試劑進行初篩試驗檢測結(jié)果為陰性則報告陰性。檢測結(jié)果為陽性反映則直接送樣至艾滋病篩查實驗室進行復檢試驗流程圖5.3。篩查實驗室按全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)矩要求的程序關(guān)于樣本進行檢測與報告。 陽性反映陰性反映復檢試驗將樣

20、本轉(zhuǎn)送篩查實驗室 均陽性反映一一陽均陰性反映送確證試驗室做確證試驗 報告陰性按陰性咨詢并且告知按疑似陽性咨詢告知快檢試劑初篩試驗樣本圖5.3HIV抗體快速檢測流程圖14 第六章實驗記錄 由于快速檢測結(jié)果難以進行電子化記錄且檢測條無法作為原始記錄長期保存因此現(xiàn)場檢測數(shù)據(jù)的記錄和管理就變得十分重要?？梢允褂米詣訖z測/記錄儀也可用數(shù)碼相機拍照保存或人工登記和記錄。真實和準確的原始記錄是審檢測結(jié)果報告的唯一基礎性數(shù)據(jù)。從現(xiàn)場收集到的記錄無論是影像資料還是文記錄均應保留在現(xiàn)場所屬的基層單位備查。該單位有責任遵循國家檔案管理有關(guān)秘密級檔案管理規(guī)則保存相關(guān)資料。 檢測后的快速試紙條不能作為原始資料保存必需遵

21、照國家傳染性實驗材料生物安全管理規(guī)則實施消毒和處理。6.1 實驗記錄 快速檢測記錄本用于登記日?？焖贆z測結(jié)果應該囊括的基本內(nèi)容有檢測序列號人群來源術(shù)前檢測性病門診婚檢人員或孕產(chǎn)婦檢測咨詢樂場所人員MSM人群等受檢者姓名年齡性別檢測日期檢測試劑盒的名稱批號有效期及檢測日期檢測結(jié)果與檢測人等見附表3。應記錄檢測點房間內(nèi)溫度嚴格依照試劑說明書要求的反映時間觀察結(jié)果。6.2 快速檢測陽性反映樣本送檢單 關(guān)于快速檢測呈陽性反映的就診者要收集個人的真實信息這些信息應準確翔實關(guān)于家庭住址為農(nóng)村的要求具體登記到村、組關(guān)于家庭址為城市的要求具體登記到街道門牌號或工作單位。登記身份證號碼或新農(nóng)合號。關(guān)于流動人群應記錄現(xiàn)住址和戶籍同時聯(lián)系方式囊括移動電話和座機號也要一并且記錄見附表2。6.3 樣本數(shù)據(jù)資料主要有樣本送