非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型

1、非酒精ttl肝動(dòng)物模型目錄 TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark14 o Current Document 1、飲食誘導(dǎo)模型2 HYPERLINK l bookmark18 o Current Document 2、化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)模型2 HYPERLINK l bookmark22 o Current Document 3、基因編輯模型3 HYPERLINK l bookmark26 o Current Document 4、復(fù)合模型.4 HYPERLINK l bookmark30 o Current Document 最常用的復(fù)合模型：4非酒精性脂肪性肝?。∟

2、AFLD ）是一種無酒精濫用的肝病綜合征，包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纖維化和肝硬變。可從單純性脂肪肝經(jīng)非酒精性脂肪性肝炎（NASH）發(fā)展為肝纖維化，甚至導(dǎo)致肝硬化、肝細(xì)胞癌（HCC）或肝功能衰竭等終末期肝病。根據(jù)Younossi等人的研究，NAFLD是世界范圍內(nèi)肝臟疾病最重要的原因之一，并且很可能在未來幾十年成為終末期肝病的主要原因，這種疾病會(huì)影響成人和兒童。8.帶18.帶1炒睥*LWirr&l vwriklr圖1.全球NAFLD大概的患病率和PNPLA3基因型的分布NASH診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是肝臟活組織檢查，但是這種方法非常具有侵入性。NAFLD患者的肝酶有時(shí)是正常的。雖然超聲波可以檢

3、測(cè)到脂肪肝，但它無法檢測(cè)纖維化或炎癥。目前還沒有 針對(duì)NAFLD的批準(zhǔn)治療方法，因此研究不僅針對(duì)NASH治療藥物的開發(fā)，還針對(duì)新的診斷方 法，制藥和生物技術(shù)公司正在大力投資NAFLD / NASH研究。動(dòng)物模型在闡明非酒精性脂肪肝的病理生理機(jī)制以及新藥的開發(fā)中起著重要的作用。臨床 前研究需要根據(jù)研究的特定NAFLD表型使用不同的動(dòng)物模型。NAFLD和NASH的臨床前動(dòng) 物模型可分為四類：飲食誘導(dǎo)模型、化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)模型、基因編輯模型、復(fù)合模型。飲食誘導(dǎo)模型給予動(dòng)物高脂、高糖飼料喂養(yǎng)建立的脂肪肝模型，其主要發(fā)病機(jī)制是營(yíng)養(yǎng)過剩，食物中脂 類、膽固醇和（或）糖類過量，無法完全吸收利用，脂類堆積于肝而引

4、發(fā)脂肪肝，進(jìn)一步出現(xiàn) 肝炎性改變及纖維化。該模型與人類NAFLD相似，是最常見的NAFLD動(dòng)物模型。不同的飲 食誘導(dǎo)模型具有不同的特點(diǎn)。飲食誘導(dǎo)模型的一個(gè)挑戰(zhàn)可能是在開始研究之前需要較長(zhǎng)的時(shí)間 造模。桿由相*性Yb1V占幃Hit段要北鼠YKY大V1li51：Yb111克祺（Umk峨壬機(jī)重I弋TT表1.不同的飲食誘導(dǎo)模型的特點(diǎn)化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)模型小劑量鏈脲佐菌素結(jié)合高脂飲食，已被用于制備小鼠的NAFLD，可導(dǎo)致脂肪變性，炎癥， 纖維化甚至肝細(xì)胞癌。四氯化碳（CCl4）可造成肝損傷，可單獨(dú)施用或配合高脂飲食來誘發(fā)脂 肪肝或肝纖維化。其機(jī)制主要是CCl4誘導(dǎo)肝臟發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致有害的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)

5、過氧化產(chǎn)物不斷產(chǎn)生和積累，并發(fā)生嚴(yán)重的壞死反應(yīng)，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能破壞。這種 方法造模時(shí)間較短，但是發(fā)病機(jī)制、病程變化及組織學(xué)形態(tài)與人類脂肪肝存在較大差異，并且藥物毒性強(qiáng)，易致動(dòng)物死亡?；蚓庉嬆Ｐ透渭?xì)胞脂肪的生成與清除受多種基因的調(diào)控，其突變、缺失、過度表達(dá)或修飾都可能影響脂肪的代謝，從而形成脂肪肝，對(duì)動(dòng)物的基因進(jìn)行人為干預(yù)，就可改造出NAFLD動(dòng)物模型。如用座摑li敢北離FF9i9G1t1：n泌雄se遭礙性癥*缺關(guān)卑童春成位H眼堂VhYK1Vh號(hào)再在指的芯p-H化部5.小W根皇NN*ihWE葡除橫咆H3YX既H除K!U%VhK他遭皆橫型Vh心）小成檢中NYK%Nh仗甘丘好除快曳Y口過

6、定達(dá)料版因槌MNVY表2.不同的基因編輯NAFLD模型的特點(diǎn)對(duì)于NAFLD的發(fā)病機(jī)制，二次打擊學(xué)說是一種得到廣泛接受的理論。其中第一次 打擊是指胰島素抵抗導(dǎo)致的肝脂肪變性，第二次打擊是指氧化應(yīng)激、炎癥因子和內(nèi)毒素 等因素。ob/ob小鼠存在ob（ Lepo）純合突變，發(fā)生肥胖和脂肪變性；db/db小鼠或Zucker大 鼠則由于db基因或fa基因（瘦素受體編碼基因）突變，導(dǎo)致瘦素受體喪失功能，引起瘦素抵 抗出現(xiàn)與ob/ob小鼠相似的遺傳表型。但是這些模型無法從肝脂肪變性自發(fā)過渡到脂肪性肝 炎，需要結(jié)合飲食或化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)進(jìn)行二次打擊以進(jìn)展到NASH表型。PTEN是一種參與肝細(xì)胞脂肪酸p氧化和甘油三

7、酯合成的脂質(zhì)磷酸酶，在細(xì)胞凋亡、細(xì)胞 增殖分化、腫瘤形成等信號(hào)通路中為負(fù)調(diào)節(jié)因子Sato W等發(fā)現(xiàn)肝特異性PTEN基因敲除小 鼠可出現(xiàn)與人NASH相似的肝損傷，這類小鼠在出生10周后可相繼發(fā)生脂肪性肝炎、肝纖維 化以及肝腺瘤，最后66%的小鼠并發(fā)HCC。PPAR-a是肝內(nèi)參與調(diào)節(jié)線粒體和過氧化酶體p- 氧化基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)ATP的產(chǎn)生。MTP是線粒體脂肪酸p-氧化的關(guān)鍵酶。AOX 是過氧化物酶體長(zhǎng)鏈脂肪酸阡氧化的限速酶，并能產(chǎn)生過氧化氫。對(duì)這些基因進(jìn)行改造均可影 響脂肪酸6-氧化來制備NAFLD模型。甲硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶1A（MAT-1A）是肝臟特異性的甲硫氨酸代謝的限速酶，能催化肝臟

8、中 主要的甲基供體S-腺苷甲硫氨酸的形成。MAT-1A敲除小鼠體內(nèi)的抗氧化物（如谷胱甘肽）減少， 參與肝臟脂質(zhì)氧化的基因表達(dá)下調(diào)。通常用于動(dòng)脈粥樣硬化研究的Apoe基因敲除小鼠在喂食高脂肪，高膽固醇飲食時(shí)可以產(chǎn) 生NASH表型，如脂肪變性，炎癥和纖維化。基因編輯和化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的方法可以更快地造模，但是模型可能與疾病誘導(dǎo)機(jī)制無關(guān)。4、復(fù)合模型前面三種模型均不能完全模擬人類NAFLD的發(fā)病機(jī)制其表型與人類NAFLD存在差異。 許多學(xué)者把基因編輯模型與飲食或藥物誘導(dǎo)相結(jié)合產(chǎn)生復(fù)合模型，使復(fù)合模型的表型和發(fā)病機(jī) 制與人類NAFLD更接近，并能反映疾病從單純性脂肪肝向NASH進(jìn)展，NASH向肝纖維化進(jìn)

9、展的過程。最常用的復(fù)合模型：ob/ob小鼠+蛋氨酸膽堿缺乏飲食（MCD） ,db/db小鼠+蛋氨酸膽堿缺乏（MCD）飲食， Zucker大鼠+蛋氨酸膽堿缺乏（MCD ）飲食/高脂飲食。這些模型均能形成典型的NAFLD組 織學(xué)改變。db/db小鼠+MCD飲食模型比ob/ob小鼠+ MCD飲食模型炎癥及細(xì)胞周圍纖維化更嚴(yán) 重，且建模周期明顯縮短，所以db/db小鼠+MCD飲食模型應(yīng)用較多。復(fù)合模型可最大程度地模擬人類的NAFLD，病理變化顯著，但是建模過程稍復(fù)雜。不同的方法制備的脂肪肝動(dòng)物模型的表型和形成機(jī)制各異，按照研究的目標(biāo)選擇最適合的動(dòng)物模型，并將該NAFLD模型的并發(fā)癥等考慮在內(nèi)，就不會(huì)影

10、響動(dòng)物模型的使用。盡量選擇 與人類NAFLD相似、方法簡(jiǎn)單、成功率高、動(dòng)物死亡率低、造模時(shí)間短和重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)?zāi)?型。文中提到的NAFLD / NASH模型并非詳盡無遺，如果您的研究需要用到基因編輯鼠，歡 迎咨詢我們。參考文獻(xiàn):馬富超漲泉洋，王帥，吳崇明，郭鵬.非酒精性脂肪性肝病動(dòng)物模型研究進(jìn)展J.國(guó)際藥學(xué)研 究雜志,2017,44(05):409-414.劉革新,肖新華.非酒精性脂肪性肝病的動(dòng)物模型及其選擇J.中國(guó)社區(qū)醫(yī)師,2015,31(26):5+9.Younossi,乙 Anstee, Q. M.; Marietti, M.; Hardy, T.; Henry, L.; Eslam,

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