微生物檢驗項目性能驗證課件

1、微生物檢驗項目性能驗證： 儀器設(shè)備性能驗證所有儀器和設(shè)備在安裝后以及重要維護(hù)保養(yǎng)服務(wù)后應(yīng)進(jìn)行性能驗證，以確保其可以按照預(yù)期運行。： . 維修或更換儀器，或者更換儀器關(guān)鍵部件后必須進(jìn)行性能驗證？：:新的鑒定系統(tǒng)使用前，應(yīng)查閱已發(fā)表的完整、科學(xué)的系統(tǒng)評估文獻(xiàn)作為性能驗證 的初級證據(jù)，再按優(yōu)先順序依次選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌株或其它已知菌株對商業(yè)鑒定 系統(tǒng)（包括自動、半自動、手工）每種板（條卡管）的鑒定藥敏結(jié)果的符合性進(jìn)行 驗證。：如果設(shè)備故障影響了方法學(xué)性能，在設(shè)備修復(fù)、校準(zhǔn)后，實驗室可通過檢測質(zhì)控 菌株或已知結(jié)果的樣品的方式進(jìn)行性能驗證。 ：臨床微生物檢驗程序驗證指南，在常規(guī)應(yīng)用前，應(yīng)由實驗室對未加

2、修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序進(jìn)行獨立驗證。實驗室應(yīng)從制造商或方法開發(fā)者獲得相關(guān)信息，以確定檢驗程序的性能特征。 微生物檢驗程序包括：顯微鏡檢查、分離培養(yǎng)和鑒定、藥物敏感試驗，血清學(xué)檢查，抗原檢查等各項檢驗活動，實驗室應(yīng)根據(jù)分析類型和用途進(jìn)行驗證程序的設(shè)計、驗證結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)分析、建立新檢驗程序的可接受性能標(biāo)準(zhǔn)。驗證結(jié)果應(yīng)證明該檢驗程序可用于檢測或準(zhǔn)確分析待測物的特點，通常驗證計劃和可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)在驗證開始前確定。 驗證計劃和可接受標(biāo) 準(zhǔn)應(yīng)與該分析物相關(guān)的國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)權(quán)威出版物等保持一致。定義可接受標(biāo)準(zhǔn)的方法之一是根據(jù)醫(yī)學(xué)和臨床要求確定總允許誤差，但通常應(yīng)用于定量檢測。定性檢測的可接受標(biāo)準(zhǔn)可以用一致

3、性（符合率）表達(dá)。 檢驗程序驗證所使用的標(biāo)本應(yīng)為合格的臨床標(biāo)本或從回顧性前瞻性臨床標(biāo)本中分離的菌株。標(biāo)本的采集應(yīng)符合國家、地區(qū)法規(guī)要求。已通過一種或多種方式確定性能的標(biāo)準(zhǔn)菌株或質(zhì)控品（如國家或地方臨床檢驗中心使用過的質(zhì)控菌株）也適用。 標(biāo)本 顯微鏡檢查 涂片制備染色鏡檢 染色方法包括手工染片和自動化儀器染片結(jié)果報告應(yīng)在檢驗項目開展前進(jìn)行性能驗證，并由有經(jīng)驗的實驗人員操作所有樣品及容器應(yīng)當(dāng)作具有傳染性的物質(zhì)，應(yīng)按照實驗室生物安全要求進(jìn)行操作。顯微鏡檢查 包括能力驗證實驗室間比對，實驗室內(nèi)人員比對,實驗室如果開展手工染片和自動化染片，應(yīng)該對兩種方法進(jìn)行實驗室內(nèi)比對。驗證要求 樣品數(shù)量.每項檢查至少

4、份樣本.需覆蓋全部樣本類型.無菌樣本類型應(yīng)包含陽性和陰性結(jié)果.應(yīng)優(yōu)先選擇使用已知結(jié)果的留樣 樣本，不可獲取時采用模擬樣本比對方案 按照臨床標(biāo)本常用檢驗方式處理，由工作人員進(jìn)行操作進(jìn)行手工染片和自動化儀器染片時涂片需同時制備兩份進(jìn)行實驗室間比對和能力驗證時，需由當(dāng)日在崗人員進(jìn)行涂片，染色，鏡檢，結(jié)果報告進(jìn)行實驗室內(nèi)人員比對時，由本崗位人員負(fù)責(zé)制片，染色，所有從事顯微鏡檢查的人員 進(jìn)行鏡檢，結(jié)果報告，由專人進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計。比對方案 結(jié)果報告 根據(jù)實驗室程序文件規(guī)定進(jìn)行結(jié)果報告。抗酸染色按照要求進(jìn)行分級報告。可接受標(biāo)準(zhǔn)每項檢查結(jié)果符合率。比對方案 菌株或標(biāo)本手工染色結(jié)果機染結(jié)果試驗符合情況標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸

5、埃希菌紅色紅色符合流感嗜血桿菌 紅色紅色符合金黃色葡萄球菌紫色紫色符合肺炎鏈球菌 紫色紫色符合白色念珠菌紫色紫色符合混合菌明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合臨床菌株糞腸球菌紫色紫色符合屎腸球菌紫色紫色符合金黃色葡萄球菌紫色紫色符合表皮葡萄球菌紫色紫色符合無乳鏈球菌紫色紫色符合陰溝腸桿菌紅色紅色符合鮑曼不動桿菌紅色紅色符合肺炎克雷伯菌紅色紅色符合銅綠假單胞菌紅色紅色符合嗜麥芽窄食單胞菌紅色紅色符合光滑念珠菌紫色紫色符合近平滑念珠菌紫色紫色符合熱帶念珠菌紫色紫色符合新型隱球菌紫色紫色符合白色念珠菌紫色紫色符合臨床標(biāo)本痰明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合痰明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合痰明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合痰明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合痰明顯區(qū)

6、分明顯區(qū)分符合血及無菌體液明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合血及無菌體液明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合血及無菌體液明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合血及無菌體液明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合血及無菌體液明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合分泌物明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合分泌物明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合分泌物明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合分泌物明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合分泌物明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合糞便明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合糞便明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合糞便明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合糞便明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合糞便明顯區(qū)分明顯區(qū)分符合一般培養(yǎng)（非血液標(biāo)本） 一般培養(yǎng)包括各類標(biāo)本的細(xì)菌、真菌、支原體的培養(yǎng)。標(biāo)本類型包括痰液、尿液、糞便、分泌物、組織等細(xì)菌包括厭氧菌和分枝桿菌等培養(yǎng)程序包括標(biāo)本處理、接種、培養(yǎng)基

7、選擇、培養(yǎng)條件選擇等一般培養(yǎng) 每項檢查，每種樣本至少份標(biāo)本無論商品化培養(yǎng)基還是自配培養(yǎng)基，都需要在使用前對培養(yǎng)基性能進(jìn)行驗證，驗證菌株可選擇質(zhì)控菌株或臨床菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株、能力驗證室間質(zhì)評活動使用的菌株、從臨床病人標(biāo)本分離的具有穩(wěn)定表型的菌株均可用做驗證菌株，實驗室對其生化特征及鑒定結(jié)果應(yīng)做好相關(guān)記錄。驗證要求 直接接種法按照實驗室細(xì)菌分離培養(yǎng)的，將待測標(biāo)本接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基上，觀察菌落生長情況。 注意：在直接接種法驗證不合格的情況下要采用標(biāo)準(zhǔn)化菌懸液進(jìn)行驗證。驗證方案 標(biāo)準(zhǔn)化菌懸液法.菌懸液制備）直接菌落法：挑取培養(yǎng)的菌落，在生理鹽水中制備成的菌懸液）生長法：從培養(yǎng)的培養(yǎng)物中挑取個菌落至無菌肉

8、湯中，孵育數(shù)小時使其達(dá)到 驗證方案 標(biāo)準(zhǔn)化菌懸液法.接種）驗證非選擇培養(yǎng)基 用無菌肉湯或生理鹽水將配置好的菌懸液進(jìn)行稀釋，每個平板接種，均勻涂布接種。如生長過密則進(jìn)行稀釋）驗證選擇性培養(yǎng)基 用無菌肉湯或生理鹽水將配置好的菌懸液進(jìn)行稀釋，每個平板接種，均勻涂布接種。如生長過密則進(jìn)行稀釋）驗證培養(yǎng)管 用未經(jīng)稀釋的菌懸液進(jìn)行接種。驗證方案 在選擇性培養(yǎng)基上驗證菌株長勢良好、菌落大小與預(yù)期相符、菌落形態(tài)典 型，并且能夠抑制特定微生物的生長，可判定性能符合要求，驗證合格。 在非選擇性培養(yǎng)基上驗證菌株長勢良好、菌落大小與預(yù)期相符、菌落形態(tài)典 型，血培養(yǎng)基上的溶血類型符合，可判定非選擇性培養(yǎng)基驗證合格?？山?/p>

9、受標(biāo)準(zhǔn) 血培養(yǎng) 臨床微生物室血培養(yǎng)系統(tǒng)驗證的目的是評估系統(tǒng)使用的培養(yǎng)基能否用于培養(yǎng)臨床常見微生物，以及儀器是否能及時檢測出血液中大部分的微生物。 血培養(yǎng)性能驗證常用留樣驗證和血培養(yǎng)系統(tǒng)平行比對兩種方法。本實驗室采用的是留樣驗證的方法，操作過程參照細(xì)菌室檢驗項目性能驗證 驗證應(yīng)覆蓋臨床常見微生物需氧成人兒童血培養(yǎng)瓶驗證菌株應(yīng)包括:需氧兼性 厭氧革蘭陽性菌、需氧兼性厭氧革蘭陰性菌、苛養(yǎng)菌（如：流感嗜血桿菌、肺炎鏈球 菌等）和真菌，厭氧血培養(yǎng)瓶驗證菌株應(yīng)包括兼性厭氧革蘭陽性菌、兼性厭氧革蘭陰 性菌、專性厭氧菌，其他特殊用途血培養(yǎng)瓶參照廠家要求選擇合適類型菌株進(jìn)行驗 證。驗證要求 每種類型至少株，總體

10、不少于 株。應(yīng)盡可能使用真實患者的臨床分離菌株 （性能驗證用臨床留樣菌株宜經(jīng)質(zhì)譜或 序列分析確認(rèn)）。對于特殊、苛養(yǎng)菌可使 用標(biāo)準(zhǔn)菌株或質(zhì)控菌株。某些特殊菌株需要在培養(yǎng)瓶中加入無菌、未使用抗生素的廠 家推薦血液標(biāo)本，如不加可能不生長，如流感嗜血桿菌。驗證要求 模擬臨床血流感染患者的細(xì)菌含量。若苛養(yǎng)菌需添加適量的新鮮無菌血液（成人瓶 ，兒童瓶 ）后置于血培養(yǎng)系統(tǒng)上進(jìn)行培養(yǎng)、檢測。 驗證方案 挑取培養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)物，在生理鹽水中調(diào)整為麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，然后倍比稀釋。如圖所示驗證方案 從號試管里取菌懸液注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，同時取菌懸液在平板上進(jìn)行涂布接種，確認(rèn)接種數(shù)量。將接種好的血培養(yǎng)瓶放入儀器進(jìn)行監(jiān)測，待

11、陽性報警后移種平板，涂片染色，確認(rèn)是否為接種菌驗證方案在廠家說明書規(guī)定時間內(nèi)檢測出所有菌株則該方法通過驗證。 天時間應(yīng)足以 檢測出至少 的臨床相關(guān)細(xì)菌，須具備苛養(yǎng)菌、真菌、厭氧菌等的檢出能力。若未能 檢出應(yīng)使用相同菌株進(jìn)行重復(fù)試驗來驗證。若仍不能檢測，實驗室和或制造商應(yīng)在臨 床使用該系統(tǒng)前采取糾正措施?？山邮軜?biāo)準(zhǔn) 如果血培養(yǎng)儀升級，原系統(tǒng)和新系統(tǒng)的差別不大，使用的培養(yǎng)瓶也沒有改變，那么由供應(yīng)商技術(shù)代表核查儀器性能即可，無需再次驗證。功能核 查將對孵育系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)以及軟件是否按照制造商規(guī)定運行進(jìn)行評價?？山邮軜?biāo)準(zhǔn) 菌株 時間差需氧培養(yǎng)瓶批號需氧培養(yǎng)瓶批號培養(yǎng)瓶條形碼報陽時間培養(yǎng)瓶條形碼報陽時間

12、白色念珠菌銅綠假單胞菌大腸埃希菌肺炎鏈球菌甲型副傷寒沙門菌金黃色葡萄球菌流感嗜血桿菌屎腸球菌表皮葡萄球菌肺炎克雷伯菌鮑曼不動桿菌咽峽炎鏈球菌腦膜炎奈瑟菌嗜麥芽窄食單胞菌新型隱球菌陰性對照微生物鑒定試驗 按優(yōu)先順序依次選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌株或其它已知菌株，試驗應(yīng)覆蓋實驗室使 用的全部卡片種類和或方法。驗證要求 菌株種類的選擇：首先參照廠商說明書，覆蓋革蘭陽性和革蘭陰性非苛養(yǎng)菌、苛養(yǎng)菌、 厭氧菌、念珠菌、隱球菌等。包括臨床留樣菌株和標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株。每種類型應(yīng)至少 株，總體不少于 株。參照實驗室規(guī)定對驗證菌株進(jìn)行檢測，一 般要求鑒定至種水平。對于特殊類型的微生物（如棒狀桿菌、厭氧菌，芽孢桿菌），可將鑒

13、定到屬的水平作為可以接受的性能標(biāo)準(zhǔn)。驗證方案 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株符合率應(yīng)為 ，臨床菌株的符合率應(yīng)在 以上?？山邮軜?biāo)準(zhǔn) 本實驗室采用了連續(xù)天檢測待測菌株的方法進(jìn)行了鑒定儀的性能驗證試驗。一共選取了株細(xì)菌和真菌，參照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程連續(xù)測試天。、：如果失控的生化鑒定項目個，可認(rèn)為性能好可接受；如果質(zhì)控檢測結(jié)果和目標(biāo)反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)誤差大于個，必須立即進(jìn)行查誤步驟，如誤差無法解決，則聯(lián)系生物梅里埃委托代理的技術(shù)代表。細(xì)菌名金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌鶉雞腸球菌肺炎鏈球菌群鏈球菌糞腸球菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌陰溝腸桿菌嗜麥芽窄食單胞菌肺炎克雷伯菌福氏志賀菌腸炎沙門菌鮑曼不動桿菌洋蔥伯克霍爾德菌粘質(zhì)

14、沙雷菌腦膜炎敗血性黃桿菌弗氏檸檬酸桿菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌光滑念珠菌葡萄牙假絲酵母都柏林白色念珠菌都柏林都柏林都柏林都柏林熱帶念珠菌白色念珠菌流感嗜血桿菌卡片種類實驗次數(shù)錯誤次數(shù)符合率血清學(xué)檢查血清學(xué)鑒定試驗包括沙門菌志賀菌致病大腸桿菌弧菌等的血清學(xué)分型。 沙門菌至少包括傷寒沙門菌甲型副傷寒沙門菌乙型副傷寒沙門菌丙型副傷寒 沙門菌；志賀菌包括福氏志賀菌、宋內(nèi)志賀菌、痢疾志賀菌和鮑氏志賀菌四種；致病大腸桿菌弧菌等根據(jù)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政管理和實驗室情況進(jìn)行選擇?；魜y弧菌每年由杭州市疾控中心進(jìn)行檢測驗證。優(yōu)先選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株和 質(zhì)控菌株，也可使用實驗室確認(rèn)過的留樣臨床分離株驗證要求 參照實驗室相關(guān)進(jìn)行沙門菌

15、屬、志賀菌屬檢驗群、群霍亂弧菌檢驗驗證方案要求準(zhǔn)確率 ?？山邮軜?biāo)準(zhǔn) 抗菌藥物敏感性試驗抗菌藥物敏感性試驗（藥敏試驗）可分為紙片法和最低抑菌濃度法（ 法）。 藥敏試驗方法的評估宜既保證藥敏試驗的準(zhǔn)確性，也要確保耐藥菌株的檢出靈敏性。藥敏卡的選擇應(yīng)遵循生產(chǎn)廠家 說明書要求，不應(yīng)超范圍使用。藥敏試驗性能驗證可使用藥敏質(zhì)控菌株。驗證要求 參考 細(xì)菌、真菌相關(guān)藥敏試驗操作及判斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇藥敏質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株和藥 物。連續(xù)檢測 天，每一組藥物細(xì)菌的抑菌圈直徑或最低抑菌濃度（）超出 參考范圍的頻率應(yīng)不超過（） 或 ；也可采用替代質(zhì)控方案，即連續(xù) 天， 每天對每一組藥物細(xì)菌重復(fù)測定 次，每次單獨制備接種物， 個數(shù)

16、據(jù)中超出參考范 圍（抑菌圈直徑或 ）的結(jié)果應(yīng)不超過（） 個，若失控結(jié)果為 個，則如前述， 再進(jìn)行 天，每天 次重復(fù)試驗， 個數(shù)據(jù)失控結(jié)果應(yīng)不超過（） 個。驗證方案 連續(xù)法應(yīng)計算基本符合率（， ）：用于連續(xù)法，設(shè)備得到的結(jié)果與參考方法確定的結(jié)果（或已知確認(rèn)結(jié)果）相差在正負(fù)一個倍比稀釋度內(nèi)的符合率。性能指標(biāo)實驗在已知參考的個倍比稀釋度內(nèi)的試驗數(shù)測試總數(shù) 分類符合率（， ）：用于非連續(xù)法和紙片法，驗證的藥敏試驗方法與參考方法或已確認(rèn)結(jié)果間判斷的一致性。性能指標(biāo)藥敏分類結(jié)果一致的試驗數(shù)測試的總數(shù)在新的藥敏試驗系統(tǒng)應(yīng)用于臨床前，須滿足上述質(zhì)控要求，通過后在日常檢測中 轉(zhuǎn)為室內(nèi)控制要求。應(yīng)對較大和重大偏差進(jìn)行分析，以確定特定細(xì)菌結(jié)果是否受影響 并要求限制該細(xì)菌和特定抗菌藥物在該設(shè)備的使用。 可接受標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)菌名天數(shù) 糞腸球菌細(xì)