Engineered mTgase定點(diǎn)偶聯(lián)課件

1、Engineered mTgase定點(diǎn)偶聯(lián)提綱1.Tgase定點(diǎn)偶聯(lián)的作用機(jī)理2.不同來源的Tgase作用底物廣泛性不同。3.目前Tgase進(jìn)行定點(diǎn)偶聯(lián)的應(yīng)用4.石藥集團(tuán)Engineered mTgase技術(shù)及該定點(diǎn)偶聯(lián)方法應(yīng)用效果。5.各種定點(diǎn)偶聯(lián)方法的比較。6.總結(jié)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（Tgase）的催化作用機(jī)理圖mTGase起催化作用的三聯(lián)體：由在溝里的Cys64,Asp255和His274組成，因此需要其作用底物Gln和Lys（NH2-）需在物質(zhì)的表面的靈活變動(dòng)區(qū)。鏈不同來源的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(Tgase)在作用底物的廣泛性上差異選擇哪種酶？所選擇的該種屬的酶是否作用于我們的目標(biāo)物？hGhGCSF

2、IFN a2bEPOEPO+DTTDMC+DTThGhGCSFIFN a2bEPOEPO+DTTDMC+DTTmTgaseG-Tgase考馬斯亮藍(lán)染色熒光成像圖目前Tgase在抗體定點(diǎn)偶聯(lián)藥物方面的應(yīng)用1、野生型Tgase作用于去糖基化的抗體的Q295。2、Innate Pharm的技術(shù)：對(duì)抗體Asn297進(jìn)行突變，而產(chǎn)生突變的去糖基化抗體(鏈接)將該五肽插入到抗體的90個(gè)位點(diǎn)，有12個(gè)位點(diǎn)偶聯(lián)效果好4、石藥選擇不改變抗體，而改變Tgase(Engineered mTgase)。使Tgase能作用于所有IgG1/2/4 Fc的Gln(Methods to make homogenous ant

3、ibody drug conjugates) Dophen Biomed對(duì)bacterial transglutaminase (BTG或mTgase)進(jìn)行改造，主要加大了BTG活性部位蛋白袋結(jié)構(gòu) 的開口，使得抗體表面的谷氨酰胺能夠靠 近到BTG酶起催化作用的半胱氨酸殘基部位，這樣就能讓酶發(fā)揮催化作用而使藥物定點(diǎn)偶聯(lián)到抗體恒定區(qū)表面的谷氨酰胺殘基Q295上。mTgase催化蛋白上的Gln位點(diǎn)越少，則此mTgase的選擇性越高。這篇文章中提到，提高mTgase的選擇性方法：1.通過在mTgase的 N-末端的增Met,Ala_Pro或Gly_Pro2.突變氨基酸（G250S或G250T）上表看出

4、不同來源的Tgase通過突變或增加N-末端氨基酸所帶來的選擇性提高程度不一樣。綜上推測(cè)：石藥對(duì)mTgase的改造應(yīng)該是通過突變或序列的增減實(shí)現(xiàn)。一步法將酶和linker毒素同時(shí)與抗體混合，需要抗體濃度20mg/ml以上Engineered mTgase 催化抗體偶聯(lián)藥物：一步法兩步法先用酶處理抗體，后進(jìn)行偶聯(lián)，對(duì)抗體濃度要求低化學(xué)選擇性配對(duì)Engineered mTgase 催化抗體偶聯(lián)藥物：二步法Engineered mTgase與其它偶聯(lián)技術(shù)的比較除Engineered mTgase技術(shù)外其它定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)無法利用現(xiàn)有抗體不同偶聯(lián)技術(shù)的穩(wěn)定性比較其它定點(diǎn)偶聯(lián)技術(shù)比Engineered mTgase技術(shù)的穩(wěn)定性差結(jié)論改造工具酶而不是抗體，能節(jié)省項(xiàng)目至少