臨床檢驗(yàn)技士-臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn)講義19

第十九章補(bǔ)體檢測(cè)及應(yīng)用第一節(jié)概述補(bǔ)體是一組存在于人和脊椎動(dòng)物血淸、組織液或某些細(xì)胞膜上的具有酶樣活性、不耐熱的糖蛋白。一、補(bǔ)體成分的含楚與理化特性C89C3含量最高。匕特性：補(bǔ)體的性質(zhì)不穩(wěn)泄，易受各種理化因素的影響，加熱、紫外線照射、機(jī)械振活性保持?4加熱56C30分鐘滅活（滅能）,故補(bǔ)體活性檢測(cè)應(yīng)盡快進(jìn)行。標(biāo)本保存應(yīng)置于-20°C以下。成分以肝臟、脾臟、小腸等組織和巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞、血小板等細(xì)胞為主。二、補(bǔ)體的活化途徑1?經(jīng)典途徑：以抗原-抗體復(fù)合物接合Clq啟動(dòng)激活，是抗體介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答的主要效應(yīng)方式。途徑：是甘需聚糖接合凝集素）應(yīng)急性期時(shí)相性蛋白產(chǎn)生的CC1途徑。C3開始，由B徑、旁路途徑。這種激活方式不依賴于特異性抗體的形成，在感染早期可為機(jī)體提供有效的防御機(jī)制。在機(jī)體抗感染進(jìn)程中，首先活化和發(fā)揮作用的補(bǔ)體途徑，是不依賴抗體的旁路途徑性抗體產(chǎn)生時(shí)，經(jīng)典途徑方可發(fā)揮作用。第二節(jié)補(bǔ)體總活性測(cè)定血淸補(bǔ)體總活性的測(cè)立，是關(guān)于激活后補(bǔ)體最終效應(yīng)的檢測(cè)方法，可借此反映補(bǔ)體的整體功能以紅細(xì)胞的溶解為指示，以溶血為判斷終點(diǎn)，故稱:鑒于經(jīng)典途徑的和應(yīng)用于C3旁路檢測(cè)的CH50。CP-CH50是臨床常規(guī)進(jìn)行的補(bǔ)體總活性檢測(cè)項(xiàng)目。通常述及的CH50系指CP-CH50.一、CH50測(cè)定法的原理特異性抗體與紅細(xì)胞接合后可激活補(bǔ)體，導(dǎo)致溶血。補(bǔ)體溶血程度與補(bǔ)體的活性相關(guān)，但非直線關(guān)系。溶血反映關(guān)于補(bǔ)體的劑量依賴呈一特殊的S形曲線。以溶血百分率為縱坐標(biāo)，相應(yīng)血淸量為橫坐標(biāo)。S形曲線在-$溶血作為終點(diǎn)指標(biāo)，它溶血實(shí)驗(yàn)，即。二、CH50測(cè)定方法紅細(xì)胞濃度的調(diào)整溶血素滴定稀釋緩沖液：磷酸緩沖液或巴比妥緩沖液等均可用于溶血試驗(yàn)。溶血標(biāo)準(zhǔn)管：做試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)同時(shí)配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管。溶血總補(bǔ)體值的計(jì)算三、方法評(píng)判與臨床意義該法主要檢測(cè)的是補(bǔ)體經(jīng)典途徑的溶血活性，所得結(jié)果反映補(bǔ)體C1?C9等9種成分的綜合水平。如果、C3C5是否因某一成分缺乏所致，以便做出確切的實(shí)驗(yàn)室診斷。嚴(yán)重肝病或營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)，由于蛋白合成障礙，引起血清補(bǔ)體水平的下降在細(xì)菌感染，特別是革蘭陰性細(xì)菌感染時(shí)，常因補(bǔ)體旁路途徑的活化而引起血淸補(bǔ)體水平的過(guò)度降:而心肌梗死、甲狀腺炎、大葉性肺炎、糖尿病、妊?等情況下，血淸補(bǔ)體水平常見升高。第三節(jié)單個(gè)補(bǔ)體成分的測(cè)定C3、C4、Clq、B因子和Cl酯酶克制物等，常被作為單個(gè)補(bǔ)體成分的檢測(cè)指標(biāo)。常用免疫溶血法檢測(cè)單個(gè)補(bǔ)體成分的活性：鑒于抗原抗體反映的血淸學(xué)法（免疫化學(xué)法）測(cè)定其含量。目前應(yīng)用自動(dòng)化免疫散射比濁法可準(zhǔn)確測(cè)定體液中C3、C4等多個(gè)單一的補(bǔ)體成分。一、免疫溶血法該方法中抗原為

體為兔或馬抗SRBC的抗體（IgG、IgM型），即溶血素。試驗(yàn)中有兩組補(bǔ)體參與，一組缺少待測(cè)成分的試劑試劑）。加入致敏檢測(cè)經(jīng)典途徑補(bǔ)體成分用）檢測(cè)替代途徑補(bǔ)體成分用）該法不是檢測(cè)某補(bǔ)體成分的具體含量，而是檢測(cè)其活性。二、免疫化學(xué)法分為單向免疫擴(kuò)散、火箭免疫電泳、透射比濁法和散射比濁法。后兩種方法可經(jīng)過(guò)儀器關(guān)于補(bǔ)體BC4成分，經(jīng)適當(dāng)稀釋后與相應(yīng)抗體反映形成復(fù)合物，反映介質(zhì)中的該法是借助補(bǔ)體的抗原性和與相應(yīng)抗體反映的前帶原理建立的補(bǔ)體單個(gè)成分左量檢測(cè)法。利用前帶原理必需以過(guò)量的抗補(bǔ)體抗體保證準(zhǔn)確測(cè)泄的質(zhì)量。英簡(jiǎn)單、特異、反復(fù)性好、自動(dòng)化程度高。自動(dòng)免疫比濁法可反映所測(cè)補(bǔ)體成分的絕關(guān)于量，并且能進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化流程管理與質(zhì)量控制，是目前國(guó)內(nèi)外臨床免疫檢測(cè)中的主要檢測(cè)方法。第四節(jié)補(bǔ)體接合試驗(yàn)（CFT）將免疫溶血作為指示系統(tǒng)，用以檢測(cè)另一反映系統(tǒng)中抗原或抗體。該方法并且非用于補(bǔ)體的檢測(cè)，而是利用補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用進(jìn)行各種物理狀態(tài)的抗原抗體測(cè)定。一、試驗(yàn)原理囊括：①反映系統(tǒng)：已知抗原（或抗體）與待測(cè)抗體（或抗原）；②補(bǔ)體系統(tǒng)：③指示系統(tǒng)：SRBC與相應(yīng)溶血素預(yù)先接合，成為致敏綿羊紅細(xì)胞。反映分兩步進(jìn)行。首先反映系統(tǒng)與補(bǔ)體作用：第二步：指示系統(tǒng)利用剩余補(bǔ)體反映。如反映系統(tǒng)中有抗體不溶血為補(bǔ)體接合試驗(yàn)陽(yáng)性。二、試驗(yàn)方法（-）試劑的準(zhǔn)備

SRBS指示系統(tǒng)無(wú)多余補(bǔ)體可利用，則無(wú)溶抗原或抗體采用豚鼠血清為補(bǔ)體。待測(cè)標(biāo)本：即時(shí)分離血淸用于檢測(cè)-保存?zhèn)溆?。試?yàn)前，應(yīng)先將血加熱分鐘（3分鐘）以滅活補(bǔ)體。血淸標(biāo)本遇有抗補(bǔ)體現(xiàn)象時(shí)，可作下列處理：①加熱滅活時(shí)提高12eC：②-20C凍融后離心去沉淀：③以3mmol/L鹽酸處理；④加入少量補(bǔ)體后再行滅活；⑤以白陶土處理:⑥通入⑦以小白鼠肝粉處理：⑧用含10%新鮮雞蛋淸的生理鹽水稀釋血淸。（二）正式試驗(yàn)：小量法較為常用。三、方法評(píng)判補(bǔ)體接合試驗(yàn)是一經(jīng)典的免疫技術(shù)，具有靈敏度高、可檢測(cè)的抗原或抗體范圍廣泛等優(yōu)點(diǎn)。該方法無(wú)需特殊設(shè)備，結(jié)果容易觀察，試驗(yàn)條件要求不高，一般醫(yī)院均具備開展的條件。第五節(jié)補(bǔ)體受體的測(cè)定C3C3第六節(jié)補(bǔ)體測(cè)定的應(yīng)用業(yè)已開展或曾經(jīng)應(yīng)用的病原體檢測(cè)用于診斷梅毒螺旋體感染的華氏反映（已淘汰）。試驗(yàn)。用于檢測(cè)補(bǔ)體單個(gè)成分及英裂解產(chǎn)物q、B因子等）和補(bǔ)體受體的溶血試驗(yàn)、免疫化學(xué)試驗(yàn)和免疫熒光技術(shù)等。與補(bǔ)體含量和活性相關(guān)的疾病主要囊括：免疫相關(guān)性疾病與補(bǔ)體有關(guān)的遺傳性疾病、、C4肌梗死、糖尿病甚至正常妊?時(shí)，也可觀察到補(bǔ)體值的增髙。（4）補(bǔ)體含量顯著降低的疾?。豪^發(fā)性補(bǔ)體降低常見于下列情況：①消耗增多，如免疫復(fù)合物形成，消耗補(bǔ)體：②補(bǔ)體的大量丟失，主要見于大而積燒傷患者、失血及腎臟病患者；③補(bǔ)體合成不足，常見于肝臟疾病想者或營(yíng)養(yǎng)不良的患者。此外，細(xì)菌（代途徑的活化使補(bǔ)體水平暫時(shí)降低。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的血淸補(bǔ)體變化情況是,,

病情穩(wěn)左期補(bǔ)體水平升高病情穩(wěn)左期補(bǔ)體水平下降整個(gè)疾病進(jìn)程中補(bǔ)體水平均下降『正確答案」B『答案解析」系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎等自身免疫病患者，疾病活動(dòng)期補(bǔ)體度，血淸補(bǔ)體因消耗增加而水平下降；病情穩(wěn)定后補(bǔ)體水平又反映性增髙。補(bǔ)體總活性測(cè)立采用凝集法沉淀法溶血法電泳法標(biāo)記法『正確答案」C『答案解析」補(bǔ)體總活性測(cè)左常采用的是CH50試驗(yàn)。補(bǔ)體接合試驗(yàn)的指示系統(tǒng)是特異性抗體和補(bǔ)體特異性抗原和補(bǔ)體紅細(xì)胞和溶血素加熱火活的患者血淸補(bǔ)體和溶血素『正確答案」C『答案解析」補(bǔ)體接合試驗(yàn)試驗(yàn)原理：囊括①反映系統(tǒng)：已知抗原（或抗體）與待測(cè)抗體（或抗原與相應(yīng)溶血素預(yù)先接合，成為致敏綿羊紅細(xì)胞。下列物質(zhì)中，不參與溶血反映的是羊紅細(xì)胞抗紅細(xì)胞抗體補(bǔ)體溶血素抗補(bǔ)體抗體『正確答