SEBIA凝膠電泳的臨床應(yīng)用課件

臨床應(yīng)用

儀器介紹Sebia

全自動(dòng)凝膠電泳儀TECHNIQUESHYDRASYS

全自動(dòng)凝膠電泳臨床應(yīng)用血清蛋白電泳

免疫固定電泳非濃縮尿蛋白電泳PROTEINESSERIQUES

血清蛋白電泳血清蛋白質(zhì)白蛋白α1區(qū)帶球蛋白α2區(qū)帶球蛋白β區(qū)帶蛋白γ區(qū)帶球蛋白白蛋白由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，占血漿總蛋白的40-60%。其濃度可以受飲食中蛋白質(zhì)攝入的影響，在一定程度上可作為個(gè)體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，有廣泛的載體功能。低白蛋白血癥，可見于以下幾種原因：

1.白蛋白合成減少，常見于急性或慢性肝病。

2.營(yíng)養(yǎng)不良或吸收不良，常見于消化道疾病。

3.遺傳性缺陷：先天性無白蛋白血癥。

4.組織損傷（外科手術(shù)或創(chuàng)傷）或炎癥（感染性疾病）引起的白蛋白分解增加。

5.白蛋白異常丟失

6.白蛋白分布異常：如門脈高壓時(shí)，大量蛋白質(zhì)從血管內(nèi)滲入腹腔。白蛋白增高較少見。α2區(qū)帶球蛋白

結(jié)合珠蛋白（HP）在血漿中與游離的血紅蛋白結(jié)合，是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，電泳位于α2區(qū)帶。急性時(shí)相反應(yīng)中血漿HP增加，當(dāng)燒傷和腎病綜合征引起大量白蛋白丟失的情況下亦可見增加。血管內(nèi)溶血和溶血性貧血、輸血反應(yīng)時(shí)含量明顯下降。此外嚴(yán)重肝病患者HP的合成降低。α2區(qū)帶巨球蛋白（AMG）是血漿中分子量最大的蛋白質(zhì)，是由肝細(xì)胞與單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)中合成。在低蛋白血癥時(shí)，AMG含量可增高，可能系一種代償機(jī)制以保持血漿膠體滲透壓。銅藍(lán)蛋白（CER）也屬于一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。在感染、創(chuàng)傷和腫瘤時(shí)血漿CER增加，在營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝病及腎病綜合征時(shí)CER往往下降。該蛋白最特殊作用在于協(xié)助Wilson病的診斷，即患者血漿CER含量明顯下降，而伴有血漿可透析的銅含量增加。

β區(qū)帶蛋白

轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF）

是血漿中主要的含鐵蛋白質(zhì)。血漿中TRF水平可用于貧血的診斷和對(duì)治療的監(jiān)測(cè)，在缺鐵性的低色素貧血中TRF的水平增高，但其鐵的飽和度很低，相反如果貧血是由于紅細(xì)胞對(duì)鐵的利用障礙，則血漿中TRF正常或低下，但鐵的飽和度增高。TRF在急性時(shí)相反應(yīng)中往往降低。因此在炎癥惡性病變時(shí)常隨著白蛋白和前白蛋白同時(shí)下降，在慢性肝病及營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)亦下降，因此可作為營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的一項(xiàng)指標(biāo)。妊娠及口服避孕藥或雌激素注射可使血漿TRF升高。血紅素結(jié)合蛋白（HPX）

和游離血紅素有特異結(jié)合能力，可配合結(jié)合珠蛋白對(duì)血紅蛋白進(jìn)行處理。當(dāng)廣泛溶血時(shí)，血漿結(jié)合珠蛋白耗竭，循環(huán)中游離的血紅蛋白可降解為珠蛋白和血紅素，HPX可與血紅素可逆結(jié)合，而在血循環(huán)中反復(fù)利用，這是機(jī)體有效地保存鐵的又一種方式。β脂蛋白主要功能脂類的運(yùn)輸。腎病患者或某些腸道疾病患者，常導(dǎo)致血漿蛋白丟失，由于肝細(xì)胞補(bǔ)償性的合成增加，β脂蛋白可有增加。C3、C4補(bǔ)體成分

屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在炎癥、創(chuàng)傷、心肌梗死、感染、腫瘤等情況下可見增高。肝臟疾病時(shí)由于肝細(xì)胞損害而偏低。纖維蛋白原（FIB）也是急性時(shí)相反應(yīng)蛋白之一，當(dāng)機(jī)體處于炎癥或損傷狀態(tài)時(shí)FIB可見增高。

β2微球蛋白（BMG）在腎功能衰竭、炎癥及腫瘤時(shí)，血漿濃度可升高。

血清蛋白電泳的正常參考值

組分

濃度Alb(Albumin)

60.0-71.0α1區(qū)帶球蛋白1.4-2.9α2區(qū)帶球蛋白7.0-11.0β區(qū)帶蛋白8.0-13.0γ區(qū)帶球蛋白9.0-16.0某些異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征

血清蛋白質(zhì)的圖譜類型

總蛋白Albα1

α2βγ1.

低蛋白血癥2.

腎病型3

肝硬化型4.

急性炎癥或急性時(shí)相反應(yīng)癥5.

慢性炎癥型6.

彌漫性肝損害型7.

彌漫寬γ球蛋白血癥型8.

M蛋白血癥型9.

高α2（β）球蛋白血癥10.

妊娠型（高α型）蛋白質(zhì)缺陷型

↓↓↓↓N↑N↓N↑↓↓

↓↓↑↑↑不定↓N↑↓↓

N↓N↓βγ(融合）N↓N↑↑N↓↑↑↑↓N↓↓

↓

↑↑↑↓N

↑在α,γ曲帶中出現(xiàn)M蛋白峰↓↑↑↑

↓N↓↑

↑N

個(gè)別曲帶出現(xiàn)特征性缺乏54人份瓊脂糖凝膠片血清蛋白電泳正常血清蛋白電泳圖譜纖維蛋白原（血漿標(biāo)本）先天性白蛋白缺乏癥α1抗胰蛋白酶缺乏癥急性感染綜合征溶血腎病綜合征貧血之高轉(zhuǎn)鐵蛋白位于β區(qū)的單克隆IgA輕鏈病免疫球蛋白增高老年性單克隆帶寡克隆圖案單克隆帶位于α2區(qū)單克隆帶IMMUNOFIXATION

免疫固定電泳檢測(cè)原理將待測(cè)血清或其他標(biāo)本在瓊脂平板上作區(qū)帶電泳，分離后于其上覆蓋含抗κ或λ輕鏈或各類重鏈的抗血清濾紙，當(dāng)抗體與某區(qū)帶中的單克隆免疫球蛋白結(jié)合后，便形成復(fù)合物而沉淀下來，再通過漂洗與染色，呈現(xiàn)濃而狹窄的著色區(qū)帶，即可判斷單克隆丙種球蛋白的輕鏈和重鏈型別。臨床意義對(duì)多發(fā)性骨髓瘤、Waldenstrom巨球蛋白血癥、分泌型骨髓瘤、輕鏈病、重鏈病等研究有重大意義。出現(xiàn)一條單克隆帶（副蛋白或一種單克隆γ球蛋白?。?。雙克隆γ球蛋白?。ɑ螂p球蛋白障礙血癥）或呈單體及多聚體狀態(tài)的異常蛋白。出現(xiàn)了一種完整的異常蛋白，伴隨過量的游離輕鏈。4人份瓊脂糖凝膠固定免疫電泳9人份瓊脂糖凝膠固定免疫電泳正常血漿免疫固定電泳IgM重鏈及κ輕鏈λ輕鏈型IgG并其他Ig缺乏κ輕鏈型IgG并其他Ig缺乏κ輕鏈型IgA并其他Ig缺乏λ輕鏈型IgA并其他Ig缺乏位于γ區(qū)的κ輕鏈型IgDλ輕鏈及游離λ輕鏈寡克隆帶移植病人之寡克隆帶移植病人之寡克隆帶艾滋病人之寡克隆帶位于β區(qū)的λ輕鏈型IgE雙克隆免疫球蛋白游離λ輕鏈Electrophoreticexplorationofproteinuria非濃縮尿蛋白電泳

臨床應(yīng)用腎單位生理及與血漿蛋白質(zhì)關(guān)系腎臟近二百萬個(gè)腎單位每天過濾1600升血液并產(chǎn)生180升原尿，經(jīng)腎小管重吸收后最終排出約1.5升終尿。白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白微蛋白白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白微蛋白腎小球?yàn)V過膜腎小管重吸收微蛋白腎小管分泌(Thamm-Horsfall蛋白)終尿中白蛋白占1/3，球蛋白占2/3。尿蛋白定義生理性尿蛋白為50—150毫克／天(大約100毫克／升以下)

主要成分為白蛋白(30毫克／天以下)病理性尿蛋白為超過1８0毫克／天

蛋白質(zhì)成分復(fù)雜多樣尿蛋白增加的原因生理性：間歇性(體位,高蛋白飲食,劇烈運(yùn)動(dòng)后,精神壓力大)腎前性：高血壓，高熱，心臟或肝臟衰竭,…

血中蛋白濃度過高(溢出性蛋白尿)腎性：腎小球或腎小管損害(或兩著均有)腎后性：泌尿生殖道損害十二烷基磺酸鈉-瓊脂糖凝膠電泳（SDS-AGE）技術(shù)的分析原理

SDS（SodiumDodecysulphate）是一種陰離子型表面活性劑，當(dāng)其濃度達(dá)蛋白質(zhì)的5-10倍時(shí)，與還原劑共同作用，能使蛋白質(zhì)分子內(nèi)的氫建和二硫鍵斷裂，解離成單獨(dú)的亞基與SDS充分結(jié)合形成帶負(fù)電荷的亞基-SDS膠束，所帶電荷量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，從而消除了不同分子之間的原有電荷差異。根據(jù)流體動(dòng)力學(xué)的研究證明，這種復(fù)合物是橢圓形，短軸約為1.8A，但長(zhǎng)軸的長(zhǎng)度與亞基分子量的大小呈正比，加之瓊脂膠的分子篩作用，使電泳的遷移率與摩擦系數(shù)的反比關(guān)系只表現(xiàn)在蛋白質(zhì)分子量大小上，因此尿蛋白各組分便可按分子量的大小順序排列在瓊脂糖凝膠上。>70kDa<70kDa腎單位生理結(jié)構(gòu)腎小球?yàn)V過膜腎小管重吸收SDS-agarosegelelectrophoresis十二烷基磺酸鈉SDSSDS+-尿蛋白電泳以分子量排列原理SDSSDS+-分子量標(biāo)記(kDa)14.430436794低分子量

(<70kDa)高分子量

(>70kDa)白蛋白Hydragel尿蛋白電泳結(jié)果解釋分子量標(biāo)記(kDa)14.430436794白蛋白腎小管標(biāo)記腎小球標(biāo)記Hydragel尿蛋白電泳144002000030000430006700094000130000溶菌酶視黃醇結(jié)合蛋白輕鏈白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白?2-微球蛋白微球蛋白SerSerPMSerSer腎小球?yàn)V過功能低分子量蛋白質(zhì)，小于70

kDa,可被濾過。其他影響每種蛋白質(zhì)濾過的因數(shù)：形狀，所帶電荷，血漿濃度。濾過取決于腎動(dòng)力參數(shù)。腎小球?yàn)V過膜的損害可導(dǎo)致大分子量的蛋白質(zhì)(超過70

kDa)漏出。腎小球性蛋白尿產(chǎn)生原因主要是腎小球受到炎癥，毒素等的損害，引起腎小球毛細(xì)血管壁通透性增加，濾出較多的血漿蛋白，超過了腎小管重吸收能力所形成的蛋白尿。

頻發(fā)于成人及嬰幼兒，一般尿蛋白總量常大于1000mg/天。

常見于腎小球疾病如急性腎小球腎炎，某些繼發(fā)性腎臟病變?nèi)缣悄虿∧I病，免疫復(fù)合物病如紅斑狼瘡性腎病等。

腎小球損害>70kDa<70kDa白蛋白<70kDa>70kDaSer電泳圖譜表現(xiàn)表現(xiàn)為漏出性蛋白尿，出現(xiàn)白蛋白及分子量更大的轉(zhuǎn)鐵蛋白，免疫球蛋白，有時(shí)甚至出現(xiàn)α2-巨球蛋白。

分子量越大損傷越嚴(yán)重，這里可以初步估計(jì)出蛋白尿的選擇性，作為判斷腎小球損傷嚴(yán)重程度及腎小球病變預(yù)后評(píng)價(jià)的一個(gè)重要指標(biāo)。腎小管重吸收腎小管可重吸收被腎小球?yàn)V出的低分子量蛋白質(zhì)(<70

kDa)。(activeendocytosis)

99%被腎小球?yàn)V出的蛋白質(zhì)可被腎小管重吸收，例如，白蛋白每天可被濾出18

g，但在生理性終末尿中僅30

mg/天。腎小管損害可減弱對(duì)低分子量蛋白質(zhì)(<70

kDa)的重吸收。當(dāng)血漿濃度增加超過腎小管重吸收閾值時(shí)，亦可出現(xiàn)低分子量蛋白質(zhì)。

腎小管性蛋白尿產(chǎn)生原因主要是由于炎癥或中毒等因素引起的近曲小管對(duì)低分子量蛋白質(zhì)重吸收功能減退而出現(xiàn)以低分子量蛋白質(zhì)為主的蛋白尿。

一般尿蛋白總量小于500mg/天，持續(xù)時(shí)間短。

常見于腎盂腎炎，間質(zhì)性腎炎，腎小管性酸中毒，重金屬（汞，鎘，鉍）中毒，應(yīng)用慶大霉素，多粘菌素B及腎移植術(shù)后等。

腎小管損害>70kDa<70kDa白蛋白<70kDa>70kDaSer混合損害，以腎小管為主電泳圖譜表現(xiàn)出現(xiàn)較多的輕鏈二聚體，微球蛋白，游離輕鏈，視黃醇結(jié)合蛋白，溶菌酶，β2微球蛋白等低分子量蛋白質(zhì)，且各蛋白組分所占比例較均一。

其所含濃度越大提示腎小管損傷越嚴(yán)重。嬰幼兒腎小管性蛋白尿以視黃醇結(jié)合蛋白為主，而且尿視黃醇結(jié)合蛋白排泄量升高是較敏感的腎近曲小管損傷的診斷指標(biāo)。

混合損害>70kDa<70kDa白蛋白<70kDa>70kDa腎前性蛋白尿主要是由于高血壓，高熱，心臟或肝臟衰竭等造成血中蛋白濃度病理性升高，超過腎小管重吸收能力時(shí)所排出的包含各種特殊蛋白成分。原因游離輕鏈，見于多發(fā)性骨髓瘤?2微球蛋白，見于淋巴組織增生綜合征溶菌酶，見于部分急性粒細(xì)胞白血病血紅蛋白，見于溶血性疾病α1酸性糖蛋白,見于支氣管肺癌肌紅蛋白，見于橫紋肌分解這些原因亦可導(dǎo)致腎臟病變

(有游離輕鏈時(shí)，可見特征性Bence-Jones[本-周氏]蛋白)腎前性蛋白尿（溢出性蛋白尿）>70kDa<70kDa白蛋白<70kDa>70kDa2號(hào)標(biāo)本經(jīng)BME處理后圖譜表現(xiàn)在電泳圖譜中表現(xiàn)為溢出性蛋白尿，可在小分子區(qū)發(fā)現(xiàn)少量的深染條帶注意要與腎小管損傷性蛋白尿區(qū)分。如多發(fā)性骨髓瘤、瓦爾登斯特倫病及其他原因?qū)е碌牧馨拖到y(tǒng)病理性增殖，其電泳圖譜與腎小管損傷性蛋白尿的主要區(qū)別在于本周氏蛋白譜帶單一，各帶含量大小很不均勻，自由輕鏈或輕鏈二聚體所占比例大于總量的30%；而腎小管損傷性蛋白尿，分子量小于白蛋白的各小分子量蛋白帶出現(xiàn)較多，且各蛋白組分所占比例較均一。溢出性血（?。┘t蛋白尿與腎小管損傷性蛋白尿的鑒別與本周氏蛋白尿相似，只是具體譜帶位置不一樣而已。腎后性蛋白尿非腎損傷性情況下終尿中混入腎以下泌尿、生殖系血液成分、細(xì)菌菌體蛋白和毒素等蛋白質(zhì)而引起的蛋白尿。常見于腎