2022年醫(yī)學專題-細胞自噬介紹與相關(guān)研究

細胞(xìbāo)自噬介紹與相關(guān)研究——崔龍萍第一頁，共五十三頁。程序性死亡和非程序性死亡細胞凋亡(diāowánɡ)：稱為Ⅰ型程序性細胞死亡。細胞壞死：是細胞對外界損傷刺激的一種非程序性死亡方式。細胞自噬？細胞(xìbāo)死亡三者有什么(shénme)區(qū)別呢？第二頁，共五十三頁。凋亡：細胞皺縮、體積縮??；部分細胞器、核糖體和核碎片被細胞膜包裹形成凋亡小體，從細胞表面出芽脫落，最后被具有吞噬功能的細胞吞噬；磷脂酰絲氨酸外翻；細胞核染色質(zhì)濃縮、邊緣化、染色質(zhì)DNA斷裂。壞死：細胞脹大，胞膜破裂，細胞內(nèi)容物外溢，核變化較慢，DNA降解不充分，引起局部嚴重的炎癥反應(yīng)。自噬：部分細胞器腫大，在細胞質(zhì)中形成包裹細胞質(zhì)內(nèi)容物的雙層膜囊泡結(jié)構(gòu)，再與溶酶體結(jié)合(jiéhé)實現(xiàn)內(nèi)容物的降解。第三頁，共五十三頁。研究檢測方法信號通路分子調(diào)控形成過程分類生物學意義概念自噬目錄第四頁，共五十三頁。自噬（autophagy）：又叫做Ⅱ型程序性細胞死亡,是指細胞利用溶酶體降解、選擇性地清除自身受損、衰老或過剩的生物大分子和細胞器，釋放(shìfàng)出游離小分子供細胞回收利用的正常動態(tài)生命過程。被認為是機體的一種自我保護機制自噬概念(gàiniàn)第五頁，共五十三頁。1、應(yīng)激功能是細胞在饑餓條件下的一種存活機制2、防御功能當細胞受到致病性微生物感染時，可起到防御作用3、維持細胞穩(wěn)態(tài)在骨骼肌和心肌可幫助細胞漿成分進行更新4、延長壽命如果細胞自噬受損衰竭，細胞損傷就會堆積、累加，產(chǎn)生老化。長期適當減少熱量的攝入，可以延長壽命。5、控制細胞死亡及癌癥決定(juédìng)細胞自噬導致細胞死亡，還是維持細胞存活的因子尚不完全清楚。所以，細胞自噬與細胞死亡之間的因果關(guān)系還沒有最后定論。生物學意義(yìyì)第六頁，共五十三頁。1956年,Clark和Novikoff用電鏡在鼠腎組織中觀察到包含線粒體等胞質(zhì)結(jié)構(gòu)的膜性結(jié)構(gòu)。將其命名為致密小體，且在這個獨立的膜結(jié)構(gòu)中發(fā)現(xiàn)了溶酶體酶

1962年，Ashford和Porter在老鼠的肝細胞中，觀察到包含半消化的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的膜囊泡結(jié)構(gòu)，且在囊泡內(nèi)發(fā)現(xiàn)了胰高血糖素1963年，Duve將這種細胞中存在的包裹細胞質(zhì)的膜泡發(fā)生現(xiàn)象定義為自噬。并指出自噬發(fā)生在正常細胞內(nèi)且與溶酶體相關(guān)聯(lián)1997年，第一個酵母菌自噬基因被日本(rìběn)科學家克隆得到，命名為ATG11998年，第一個哺乳動物自噬基因被美國科學家克隆得到，命名為Beclin12007年，召開了第一次國際自噬會議2007-至今，隨著越來越多的自噬基因被克隆，對于自噬的研究報道也越來越多，尤其是在哺乳動物細胞自噬方面的研究自噬發(fā)展(fāzhǎn)第七頁，共五十三頁。分子伴侶介導自噬（CMA,chaperone-mediatedautophagy）——CMA不涉及囊泡的運輸，而是通過有著特異性肽鏈的細胞質(zhì)蛋白在分子伴侶復合物的作用下與溶酶體膜蛋白感受器Lamp2a結(jié)合后進入溶酶體腔，然后被溶酶體酶消化。小/微自噬（Microautophagy）——溶酶體/液泡表面的膜直接吞沒某些細胞器或者蛋白，然后膜內(nèi)陷、脫離(tuōlí)，最終形成一個包含了細胞質(zhì)內(nèi)容物的內(nèi)部囊泡。大/巨/宏自噬（Macroautophagy）——是我們平常所說的自噬，通過形成具有雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體包裹胞內(nèi)物質(zhì)，最后自噬體與溶酶體融合。包含杯狀體（Phagophore）、自噬體（Autophago-some）、自噬溶酶體（Autolysosome）的形成和囊泡內(nèi)含物的降解（Degradation）四個過程自噬分類(fēnlèi)第八頁，共五十三頁。形成(xíngchéng)過程第九頁，共五十三頁。

Atg1/ULK1激酶(jīméi)復合物

（自噬的誘導階段，受mTOR的調(diào)控）Atg1能與Atg13、Vac8、Atg17和Cvt9等蛋白形成Atg1復合物。營養(yǎng)(yíngyǎng)條件充足時，Atg13過度磷酸化，與Atg1的結(jié)合受阻，然后Atg13與Vac8結(jié)合，Atg1與Cvt9結(jié)合后一起調(diào)控Cvt途徑。相反，營養(yǎng)(yíngyǎng)不足時，Atg13部分去磷酸化形成Atg13-Atg1復合物，Atg17再與Atg1-Atg13復合物的Atg1結(jié)合形成復合物參與自噬。ULK1是Atg1在人類細胞中的同源物分子調(diào)控第十頁，共五十三頁。兩條泛素化系統(tǒng)

（自噬體的形成(xíngchéng)：囊泡的延伸和完成）

Atg12-Atg5?Atg16泛素激活酶E1（Atg7）的半胱氨酸殘基，在ATP的作用下，與Atg12碳末端的甘氨酸殘基之間形成(xíngchéng)硫酯鍵。泛素激活酶E2（Atg10）的半胱氨酸與Atg12碳末端的甘氨酸殘基形成新的硫脂鍵，釋放出Atg7。最終，Atg12碳末端的甘氨酸與Atg5的ε-賴氨酸氨基形成異肽鍵，釋放出Atg10，形成Atg12-Atg5復合物（不可逆）。Atg16碳末端的螺旋區(qū)寡聚化后與Atg12-Atg5復合物結(jié)合，形成一個350KDa大小的復合物（Atg12-Atg5?Atg16），Atg16僅僅與Atg5結(jié)合，并不結(jié)合Atg12。Atg12-Atg5?Atg16復合物對于隔離膜的延伸是必不可少的。分子調(diào)控第十一頁，共五十三頁。Atg8/LC3-PE(磷脂酰乙醇胺)復合物半胱氨酸蛋白酶Atg4作用于Atg8，Atg8失去一個精氨酸殘基，暴露出碳末端的甘氨酸殘基后，在ATP的作用下，被Atg7（E1）激活，然后再與Atg3（E2）結(jié)合，形成Atg8復合物。最后，Atg8不再與其它蛋白結(jié)合，而是與PE結(jié)合形成Atg8-PE復合物。Atg8與PE的酯化反應(yīng)，使Atg8的構(gòu)象(ɡòuxiànɡ)發(fā)生變化，參與自噬的膜動力學。Atg4可以破壞脂蛋白的連接，使Atg8-PE去結(jié)合，從而使胞漿中Atg8的量增加。Atg8-PE的結(jié)合與去結(jié)合之間的循環(huán)對于自噬的正常過程非常重要。LC3（微管相關(guān)蛋白）是Atg8在哺乳動物細胞中的同源物，因此，LC3可用來作為檢測哺乳動物細胞自噬的標志性蛋白。分子調(diào)控第十二頁，共五十三頁。

Vps34/PI3K–Atg6/beclin1

(自噬體形成(xíngchéng)的早期階段有著重要的作用)Vps34與蛋白激酶Vps15結(jié)合形成穩(wěn)定的Vps34-Vps15復合物，定位于細胞質(zhì)膜上。Vps34-Vps15復合物存在兩種形式，涉及多種細胞膜轉(zhuǎn)運途徑(tújìng)。Vps34-Vps15與Atg6和Atg14組成的I型復合物調(diào)控自噬。Vps34-Vps15與Atg6和Vps38組成參與PAS途徑(tújìng)的II型復合物。在哺乳動物細胞中，PI3K和beclin1分別是酵母菌Vps34和Atg6對應(yīng)的同源物。分子調(diào)控第十三頁，共五十三頁。信號通路第十四頁，共五十三頁。mTOR/TOR的介紹(jièshào)mTORC1信號(xìnhào)通路是多條信號(xìnhào)通路的匯聚點，通過對上、下游信號(xìnhào)的來傳導影響細胞自噬，是目前研究最多的信號(xìnhào)通路。信號通路mTORmLST8PRAS40RaptormTORC1mTORC2mTOR細胞生長細胞凋亡細胞自噬細胞骨架蛋白構(gòu)建

細胞存活自噬第十五頁，共五十三頁。PI3KⅠ/Akt/mTOR通路(tōnglù)激活的ClassⅠPI3K能在細胞中產(chǎn)生第二信使PIP3，PIP3在磷脂酰肌醇脂依賴性蛋白激酶1(PDK1)的協(xié)助(xiézhù)下，激活AKT。激活的AKT能夠抑制TSC1/2復合物，從而激活mTOR,抑制細胞自噬。胰島素樣生長因子IGF1就是通過PI3K/Akt/mTORC1通路調(diào)節(jié)細胞自噬水平的信號通路第十六頁，共五十三頁。AMPK通路(tōnglù)AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)是能量代謝變化的感受器,在自噬發(fā)生的調(diào)控中也發(fā)揮著重要的作用。低ATP水平狀態(tài)下(如饑餓或缺氧)AMPK能感受AMP的水平變化而激活,從而磷酸化TSC2,加劇TSC1/2對Rheb的抑制,最終使mTOR的活性被抑制,誘導細胞發(fā)生自噬AMPK還可以通過直接磷酸化Raptor，使Raptor脫離mTORC1復合體，進而抑制mTORCI的活性營養(yǎng)缺乏會促進AMPK與ULK1的PS結(jié)構(gòu)域結(jié)合，使ULK1的Ser/Thr豐富(fēngfù)區(qū)多位點磷酸化，從而激活ULK1，直接調(diào)節(jié)自噬。信號通路第十七頁，共五十三頁。p53通路(tōnglù)p53在細胞核中：(1)p53能通過sestrin1/2蛋白激活AMPK-mTORC1信號(xìnhào)通路，從而抑制mTORC1，上調(diào)細胞自噬水平。(2)p53能通過激活DAPK1，磷酸化Beclin-1,促進細胞自噬。(3)p53能通過激活抗凋亡蛋白BCL-2家族(Bad、PUMA、Bax、BNIP3)，解除Bcl-2/Bcl-xL與Beclin-1之間的抑制作用而上調(diào)細胞自噬(4)p53能激活DRAM1(損傷相關(guān)自噬調(diào)節(jié)因子)，通過編碼一種溶酶體蛋白，從而上調(diào)細胞的自噬水平p53在細胞質(zhì)中：p53缺失的癌細胞中，細胞自噬水平上調(diào)，且細胞質(zhì)中重新載入p53能下調(diào)細胞自噬水平。因此，p53在細胞質(zhì)中能夠發(fā)揮抑制細胞自噬水平的功能。信號通路p53是一種(yīzhǒnɡ)重要的抑癌基因，對自噬的調(diào)控作用是雙重的，取決于在細胞內(nèi)的定位，核內(nèi)p53促進自噬，胞漿內(nèi)p53抑制自噬。第十八頁，共五十三頁。AminoAcids通路(tōnglù)氨基酸代謝與mTORC1：氨基酸作為(zuòwéi)細胞自噬的終產(chǎn)物可負反饋調(diào)節(jié)細胞自噬，同時外源性的支鏈氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸)的攝入也能影響細胞自噬的水平。研究表明，當亮氨酸濃度升高時，能激活mTORC1，抑制細胞自噬信號通路第十九頁，共五十三頁。PI3KⅢ通路(tōnglù)Ⅲ型磷脂酞肌醇3磷酸激酶（PI3KⅢ)是一個正調(diào)控蛋白(dànbái)，它能夠磷酸化磷脂酞肌醇(PI),生成3-磷酸磷脂酞肌醇（PI3P)，而后PI3P利用胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)形成自噬體膜。PI3KⅢ也能與Beclin-1形成復合體，該復合物在自噬體形成的起始階段起重要作用。信號通路第二十頁，共五十三頁。形態(tài)學方法透射電鏡（鏈接）Monodansylcadaverine(MDC)染色（鏈接）Autophagy的特異(tèyì)標志物熒光定位（鏈接）LC3-II的檢測（鏈接）其它自噬調(diào)控物檢測方法第二十一頁，共五十三頁。透射電鏡細胞的自噬現(xiàn)象最初(zuìchū)也是通過電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)的。自噬體：由包裹未吞噬降解的胞漿物質(zhì)、細胞器的雙層膜結(jié)構(gòu)組成。自噬溶酶體：由單層膜結(jié)構(gòu)組成，其中包裹著處于不同降解階段的胞漿成分。檢測方法第二十二頁，共五十三頁。MDC

染色(rǎnsè)Monodansylcadaverine(MDC，單丹磺酰戊二胺)是一種熒光染料，被用作自噬泡的示蹤劑MDC陽性信號主要聚集于核周區(qū)域，而自噬體卻均勻分布于胞漿內(nèi)。MDC是嗜酸性染色劑,可能顯示晚期內(nèi)吞體，兩性體和溶酶體陣,而自噬體多呈中性，故自噬前體和有的自噬體可不(kěbù)被著色,故MDC染色的特異性不高檢測方法第二十三頁，共五十三頁。熒光(yíngguāng)定位

GFP-LC3

單熒光自噬指示體系：無自噬時，GFP-LC3融合蛋白彌散在胞漿中；自噬形成時，GFP-LC3融合蛋白轉(zhuǎn)位至自噬體膜，在熒光顯微鏡下形成多個明亮的綠色熒光斑點，一個斑點相當于一個自噬體，可以通過計數(shù)來評價自噬活性的高低。但是綠色斑點增多并不一定代表自噬活性增強，也有可能是自噬溶酶體降解途徑受阻。mRFP-GFP-LC3雙熒光自噬指示體系：GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是穩(wěn)定的熒光表達(biǎodá)基團，不受外界影響。由于自噬小體進入第二階段后，與溶酶體進行融合，形成自噬溶酶體。自噬溶酶體由于溶酶體內(nèi)部的酸性環(huán)境，可以導致PH下降，GFP淬滅，因此，GFP的減弱可指示自噬溶酶體形成的順利程度，GFP越少，則從自噬小體到自噬溶酶體階段流通得越順暢。反之，自噬小體和溶酶體融合被抑制，自噬溶酶體進程受阻。mRFP是一直穩(wěn)定表達的，因而可以通過GFP與mRFP的亮點比例來評價自噬流進程。檢測方法第二十四頁，共五十三頁。LC3-II的檢測(jiǎncè)（westernblot）

細胞中新合成的LC3經(jīng)過加工，成為胞漿可溶性LC3-I，后者經(jīng)泛素樣加工修飾過程，與自噬泡膜表面的磷脂酰乙醇胺（PE）結(jié)合，稱為LC3-II。LC3-II含量的多少在某種程度上反映了細胞的自噬活性。利用WesternBlot檢測LC3-II/I比值(bǐzhí)的變化以評價自噬形成。

檢測方法第二十五頁，共五十三頁。正常培養(yǎng)的細胞自噬活性很低，不適于觀察，因此，必須對自噬進行人工干預和調(diào)節(jié)誘導自噬：雷帕霉素或者饑餓抑制自噬：3-MA（3-Methyladenine，3-甲基腺嘌呤，是磷脂酰肌醇3激酶的抑制劑，可特異性阻斷Autophagy中自噬泡與溶酶體的融合）、CQ(chloroquine,氯喹，CQ處理后的細胞，其溶酶體中的PH升高，導致(dǎozhì)酸性水解酶的活性喪失。影響自噬體與溶酶體的融合或自噬體與溶酶體融合成自噬溶酶體后就得不到及時的降解，來阻斷自噬過程，因此，LC3Ⅱ得不到釋放，就會出現(xiàn)LC3Ⅱ的累積。)研究(yánjiū)方法第二十六頁，共五十三頁。自噬與惡性腫瘤(èxìngzhǒngliú)癌癥早期，腫瘤抑制作用；進展階段時，促進腫瘤細胞生長。在人乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌中觀察到高頻率的Beclin1單等位基因缺失。在人乳腺癌細胞系MCF-7中，Beclin1蛋白表達下降，幾乎檢測不到。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Beclin1促進了細胞的自噬活性，降低了其成瘤能力，這些均提示自噬活性與抑制細胞增殖有關(guān)。（LiangXH,JacksonS,SeamanMetal.(1999)InductionofautophagyandinhibitionoftumorigenesisbyBeclin1.Nature402:672-676.）乳腺癌治療(zhìliáo)藥物它莫西芬可通過激活細胞自噬，由神經(jīng)酰胺介導上調(diào)Beclin1表達發(fā)揮作用。（

ScarlattiF,BauvyC,VentrutiAetal.(2004)Ceramide-mediatedmacroautophagyinvolvesinhibitionofproteinkinaseBandup-regulationofBeclin1.JBiolChem279(18):18384-18391.）自噬研究第二十七頁，共五十三頁。自噬與腫瘤(zhǒngliú)治療抑制自噬—增強腫瘤放化療敏感性大量研究顯示，自噬抑制劑可以增強惡性膠質(zhì)瘤、多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、結(jié)直腸癌及前列腺癌等多種腫瘤對放化療的敏感性。因此，自噬抑制劑與常規(guī)治療的聯(lián)合應(yīng)用可能是提高療效的潛在(qiánzài)手段。誘導自噬—促進腫瘤細胞死亡現(xiàn)有證據(jù)表明，在某些腫瘤中自噬性死亡可能是腫瘤細胞死亡的重要方式。比如：三氧化二砷(As203)可以通過上調(diào)Beclin1的表達，誘導細胞自噬性死亡，從而緩解淋巴細胞性白血病和多發(fā)性骨髓瘤的病情；促自噬類藥物替莫唑胺，可以選擇性地殺滅具有凋亡抗性的惡性膠質(zhì)瘤細胞。表明：誘導腫瘤細胞過度自噬，也可能是抗腫瘤治療的重要思路。自噬研究第二十八頁，共五十三頁。自噬與肌病LAMP-2（2型溶酶體相關(guān)膜蛋白）缺陷(quēxiàn)小鼠出現(xiàn)多組織廣泛的自噬性空泡，其中包括骨骼肌和心肌。心肌超微結(jié)構(gòu)的異常使其收縮功能嚴重受損。（

LuzhengXue,GrahamCFletcherandAvivaMTolkovsky.(1999)Autophagyisactivatedbyapoptoticsignalinginsympatheticneurons:analternativemechanismofdeathexecution.MolCellNeurosci14:180-198.）人LAMP-2缺陷導致的Danon氏病和相關(guān)肌病的典型特征是胞漿中自噬溶酶體的大量聚集。（SugieK,NoguchiS,NishinoIetal.(2005)AutophagicvacuoleswithsarcolemmalfeaturesdelineateDanondiseaseandrelatedmyopathies.JNeuropatholExpNeurol64(6):513-522.）自噬研究第二十九頁，共五十三頁。自噬與神經(jīng)(shénjīng)變性性疾病在該疾病的早期階段自噬起保護性作用，激活自噬可加速變性蛋白的清除來阻止疾病的進一步發(fā)展。然而(ránér)，隨著疾病的進展，蛋白質(zhì)聚積物越來越多，對溶酶體蛋白酶降解的敏感性下降，自噬的持續(xù)性激活最終引發(fā)自噬性細胞死亡，這樣自噬又促進了神經(jīng)元的死亡。

（LarsenKE,SulzerD.Autophagyinneurons:areview.HistolHistopathol,2002,17(3):897-908）（WebbJL,RavikumarB,AtkinsJ,SkepperJN,RubinszteinDC.(2003)Alpha-synucleinisdegradedbybothautophagyandtheproteasome.JBiolChem278:25009-25013.）（RavikumarB,DudenRandRubinszteinDC.(2002)Aggregate-proneproteinswithpolyglutamineandpolyalanineexpansionsaredegradedbyautophayg.HumMolGenet11(9):1107-1117）自噬研究阿爾茨海默氏?。ˋlzheimer’s）、亨廷頓氏?。℉untington’s）和帕金森氏?。≒arkinson’s）等神經(jīng)變性性疾病兩個最主要的特征是：胞漿中蛋白聚集物的存在和大的蛋白裂解體系(tǐxì)活性的改變。第三十頁，共五十三頁。自噬與病原體感染(gǎnrǎn)細胞自噬機制的激活在清除病原體感染中也起重要作用。在對C.neoformans（新型隱球菌）感染的小鼠巨噬細胞轉(zhuǎn)錄特點的研究中發(fā)現(xiàn)，與自噬相關(guān)的基因被誘導表達。巨噬細胞以膽固醇依賴方式激活自噬，清除胞內(nèi)病原菌L.pneumophila

（嗜肺軍團菌）的感染。激活自噬不一定對病原體感染的細胞均起保護作用。例如激活Coxiella（柯克斯菌）感染的中國倉鼠卵巢細胞的自噬機制，會為細菌最初的存活和擴增提供有利條件。脊髓灰質(zhì)炎病毒和鼻病毒利用自噬機制促進病毒的復制和擴增。（據(jù)推測(tuīcè)其機制可能是自噬為病毒RNA復合物提供了膜性結(jié)構(gòu)的包裹，幫助病毒顆粒以非裂解方式從受感染的細胞中釋放出來）自噬研究第三十一頁，共五十三頁。自噬與衰老(shuāilǎo)KellerJN等人的綜述詳細探討了Autophagy與腦衰老的關(guān)系。（KellerJN,DimayugaE,ChenQ,ThorpeJ,GeeJ,DingQ.(2004)Autophagy,proteasomes,lipofuscin,andoxidativestressintheagingbrain.IntJBiochemCellBiol36(12):2376-2391.Review.

）有研究指出：周期性終生服用抗脂解藥物抑制胰島素的分泌與輕度節(jié)食共同發(fā)揮抗衰老作用，推測其機理可能為短暫的血漿低胰島素水平刺激了機體的抗衰老細胞(xìbāo)修復機制，這種機制就是細胞(xìbāo)的自噬。（DonatiA,CavalliniG,CarresiC,GoriZ,ParentiniI,BergaminiE.(2004)Anti-agingeffectsofanti-lipolyticdrugs.ExpGerontol39(7):1061-1067.）自噬研究第三十二頁，共五十三頁。透射電鏡觀察(guānchá)自噬體Ａ：ＮＤＶ感染(gǎnrǎn)細胞；Ｂ：陰性對照細胞；Ｃ：雷帕霉素處理細胞新城疫病毒第三十三頁，共五十三頁。GFP-LC3轉(zhuǎn)染細胞(xìbāo)檢測自噬體形成Ａ：陰性對照(duìzhào)細胞；Ｂ：雷帕霉素處理細胞；Ｃ：ＮＤＶ感染單個細胞；Ｄ：ＮＤＶ感染合胞體新城疫病毒第三十四頁，共五十三頁。LC3轉(zhuǎn)化(zhuǎnhuà)的Western-blot檢測（1、4、7、10、13），（2、5、8、11、14），（3、6、9、12、15）：依次(yīcì)為第6、12、18、24、36小時的陰性對照組；雷帕霉素處理組；Ｈｅｒｔｓ／３３毒株感染組6h12h18h24h36h新城疫病毒第三十五頁，共五十三頁。p62的Western-blot檢測(jiǎncè)１：陰性對照組；２～５：依次為NDV感染(gǎnrǎn)后第６、１２、２４、３６小時新城疫病毒第三十六頁，共五十三頁。GFP-LC3和Lyso-tracker共定位(dìngwèi)NDVHerts/33毒株感染CEF之后(zhīhòu)誘導GFP-LC3和Lyso-trackerRed的共定位新城疫病毒第三十七頁，共五十三頁。GFP-LC3和溶酶體(LAMP1)共定位(dìngwèi)新城疫病毒第三十八頁，共五十三頁。透射電鏡：大量單層和雙層膜性結(jié)構(gòu)熒光定位：GFP-LC3質(zhì)粒在病毒感染后呈現(xiàn)顯著的點狀分布Westernblot：病毒感染后期發(fā)生明顯的LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的轉(zhuǎn)化；NDV感染后p62蛋白的降解激光共定位：GFP-LC3在病毒感染中后期發(fā)生向溶酶體的轉(zhuǎn)移以上表明(biǎomíng)NDV感染能夠誘導完整自噬流新城疫病毒第三十九頁，共五十三頁。透射電鏡觀察(guānchá)自噬體豬圓環(huán)病毒第四十頁，共五十三頁。激光(jīguāng)共聚焦

未感染的細胞(xìbāo)中eGFP-LC3呈彌散分布，而PCV2感染和雷帕霉素（rapamycin)處理組eGFP-LC3呈點狀聚集。