微生物檢測(cè)培訓(xùn)-培養(yǎng)基課件

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-培養(yǎng)基和配制SummaryfromGlobalMicroTrai1學(xué)習(xí)目的Identifythedifferentcategoriesofmediausedinthelab/識(shí)別用于不同實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基Identifythespecificmediausedineachcategory/識(shí)別不同試驗(yàn)中的各種培養(yǎng)基Explainhowtypicalmediaaremade/學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的準(zhǔn)備方法Explainhowtostoremedia/學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的儲(chǔ)存學(xué)習(xí)目的Identifythedifferentcat2主要內(nèi)容介紹實(shí)驗(yàn)室使用的培養(yǎng)基一般培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的儲(chǔ)存主要內(nèi)容介紹3微生物實(shí)驗(yàn)的重要性充分理解哪些微生物會(huì)影響我們的產(chǎn)品只是我們保護(hù)我們產(chǎn)品和品牌的第一步;同時(shí),我們必須通過對(duì)我們的原料,半成品和最終產(chǎn)品的微生物檢測(cè)來確保符合公司有關(guān)質(zhì)量和安全的要求.進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)最重要的手段之一就是是微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基.我們會(huì)一一介紹可口可樂公司微生物實(shí)驗(yàn)室使用的各種不同種類的培養(yǎng)基,它們的配制和儲(chǔ)存,它們?nèi)绾问褂靡宰R(shí)別不同的微生物等等第一章微生物實(shí)驗(yàn)的重要性充分理解哪些微生物會(huì)影響我們的產(chǎn)品只是我們4培養(yǎng)基我們可能會(huì)肉眼看見或者直接聞到一些腐敗的現(xiàn)象,我們也可以在顯微鏡下識(shí)別一些微生物,然而,為了了解哪些微生物需要更復(fù)雜一些的實(shí)驗(yàn),我們還需要更大的樣本量.一般來說,我們通過營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基讓微生物在實(shí)驗(yàn)室

生長(zhǎng).簡(jiǎn)單來說,培養(yǎng)基就是一種物質(zhì),液態(tài)的或者固態(tài)的,包含一系列微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì).由于微生物種類繁多,我們有很多不同種類的培養(yǎng)基,每一種都有不同的混合的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或者化學(xué)品.培養(yǎng)基讓微生物學(xué)家能夠判斷特定微生物種群是否存在或者數(shù)量多少.營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基分為三個(gè)主要類型:一般培養(yǎng)基,選擇培養(yǎng)基,差異培養(yǎng)基第二章培養(yǎng)基我們可能會(huì)肉眼看見或者直接聞到一些腐敗的現(xiàn)象,我們也5培養(yǎng)基的分類按照培養(yǎng)基的用途分:普通培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基差異培養(yǎng)基氮源:肉湯提取物,

植物提取物,使微生物能獲得足夠的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)碳源:葡萄糖,用以合成所需要的有機(jī)物質(zhì)緩沖液:中和細(xì)菌產(chǎn)生的酸除了氮源,

碳源和緩沖液外,還包含一些能夠抑制某些生長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì).比如:1)Endo瓊脂中含有亞硫酸鈉可以抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的生長(zhǎng);2)酸化的橙血清瓊脂可以減緩非嗜酸細(xì)菌的生長(zhǎng)可以幫助超過一種目標(biāo)微生物生長(zhǎng).

微生物在這樣的培養(yǎng)基上的形態(tài)或者顏色是不一樣的.在日常操作中,普通培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基用的比較多按照培養(yǎng)基的形態(tài)分:肉湯:

常用于增加微生物的數(shù)量以達(dá)到可檢測(cè)的水平瓊脂(固態(tài))碳水化合物,維生素,礦物質(zhì),酸化劑等各種旨在促進(jìn)微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)加入了多聚糖(瓊脂).為不同需求而制備,

比如:1)商業(yè)無菌肉湯用于濃縮液廠來檢測(cè)主劑,這個(gè)配方抑制細(xì)菌而讓酵母菌正常生長(zhǎng);2)橙血清肉湯包含了橙的組分而使嗜酸的微生物能很好生長(zhǎng)瓊脂是理想的固化劑:1)大多數(shù)微生物不能消化;2)可以和許多營(yíng)養(yǎng)成分混合;3)也可以通過加入不同的原料滿足不同的測(cè)試需要第二章培養(yǎng)基的分類按照培養(yǎng)基的用途分:普通培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基差異培6普通培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基可以用于增菌和計(jì)數(shù)的檢測(cè).增菌是定性的,用于判斷微生物的存在與否;而計(jì)數(shù)則是定量的,可以得到存在微生物的數(shù)量.M-TGEandPCA:最常用的普通培養(yǎng)基,可通過薄膜過濾,傾倒平板,或者擴(kuò)散平板用于固態(tài)的瓊脂中以計(jì)數(shù).

pH值在7.0能使非嗜酸微生物很好的生長(zhǎng)第三章普通培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基可以用于增菌和計(jì)數(shù)的檢測(cè).增菌是定性的7TTC指示劑M-TGE和PCA都可以用于獲得瓶裝水中的異養(yǎng)菌和糖樣品中的總菌.需要的話,可以使用TTC指示劑,用來改變菌落顏色成紅色.

第三章TTC指示劑M-TGE和PCA都可以用于獲得瓶裝水中的異養(yǎng)菌8選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基能夠培養(yǎng)特定的微生物,舉例來說,當(dāng)需要得知酵母菌數(shù)量時(shí)候,可以選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基包含了營(yíng)養(yǎng)成分和其他某種”允許”生長(zhǎng)物質(zhì),可能包含一些抑制劑來防止可能影響實(shí)驗(yàn)的微生物的生長(zhǎng).選擇性培養(yǎng)基可以用來識(shí)別酵母菌和霉菌,嗜酸細(xì)菌,和其他細(xì)菌,比如大腸菌群.第四章選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基能夠培養(yǎng)特定的微生物,舉例來說,9霉菌和酵母菌M-Green:含有豐富的蛋白胨非常有利于微生物生長(zhǎng)

pH4.6抑制了大部分細(xì)菌的生長(zhǎng)溴甲酚綠(pH=3.8時(shí)呈黃色，pH=5.4時(shí)呈藍(lán)綠色，pH=4.5時(shí)開始有顏色的明顯變化)是指示劑,大部分菌落被里面的色素變成率綠色,酸性物質(zhì)擴(kuò)散到培養(yǎng)基把它變成黃色.第四章霉菌和酵母菌M-Green:第四章10霉菌和酵母菌培養(yǎng)基酸化培養(yǎng)基RBCA橙血清瓊脂(OSA),土豆葡萄糖瓊脂(PDA),麥芽提取物瓊脂(MEA)孟加拉紅氯霉素選擇性培養(yǎng)基是最常用的檢測(cè)果汁里的總嗜酸菌的培養(yǎng)基.pH5.5的OSA和5.6的PDA&MEA比較高,不能有效抑制大部分細(xì)菌,所以使用酸化的方法來有效的分析嗜酸菌一般酒石酸用來酸化OSA和PDA,而對(duì)于MEA,乳酸和酒石酸都可以用最終的pH為4.2-4.4僅限于霉菌測(cè)試,一般用于空氣樣品.含有氯霉素以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)孟加拉紅抑制霉菌的大小和擴(kuò)散,并且把菌落染成粉紅色第四章霉菌和酵母菌培養(yǎng)基酸化培養(yǎng)基RBCA橙血清瓊脂(OSA),11耐熱霉菌/耐熱細(xì)菌耐熱霉菌(HRM)耐熱細(xì)菌(TAB)一些霉菌孢子能夠抵抗巴氏滅菌過程而存活于飲料中.為了了解耐熱霉菌是否存在,我們需要取少量樣品到肉湯培養(yǎng)基并加熱滅活,通過一定的培養(yǎng)(時(shí)間溫度),觀察霉菌存在與否;需要計(jì)數(shù)的話,酸化的MEA,PDA,OSA都可以使用.有時(shí)候樣品中會(huì)存在耐熱細(xì)菌,一般稱為嗜熱嗜酸菌(TAB).根據(jù)樣品的不同,薄膜法或擴(kuò)散平板法都可以用來測(cè)試TAB.合適的培養(yǎng)基是BAT和YSGBAT:主要用來檢測(cè)脂環(huán)酸芽胞桿菌.

通過支持脂環(huán)酸芽胞桿菌的生長(zhǎng),低pH值和高的培養(yǎng)溫度有效抑制了其他細(xì)菌的生長(zhǎng)第四章耐熱霉菌/耐熱細(xì)菌耐熱霉菌(HRM)耐熱細(xì)菌(TAB12大腸菌群Endo,Tergitol-7,Chormocult,Colilert和Readycult都可以用來定性或定量地檢測(cè)大腸菌群.大腸菌群的存在表示了糟糕的衛(wèi)生情況,可能是由不充分的消毒或者沒有很好執(zhí)行GMP的要求.這些細(xì)菌有三個(gè)主要來源:水植物性物質(zhì)動(dòng)物動(dòng)物污染產(chǎn)生糞大腸,能出現(xiàn)在水體或者植物中如果數(shù)量較大,種類又特別,大腸菌群的存在可能會(huì)引起公共衛(wèi)生事件第四章大腸菌群Endo,Tergitol-7,Chormocu13大腸菌群的培養(yǎng)基-EndoEndo培養(yǎng)基使用乳糖作為碳源,硫酸品紅還區(qū)別不同的微生物,亞硫酸鈉和品紅來抑制其他微生物的生長(zhǎng).M-Endo則含有十二烷基硫酸鹽和脫氧膽鹽作為抑制劑.當(dāng)使用Endo培養(yǎng)基時(shí),菌落顯示帶有綠色金屬光澤的紅色.如果結(jié)果呈陽(yáng)性,則需要進(jìn)一步確定其存在和種類在一些情況下,在Endo培養(yǎng)基上會(huì)有假陽(yáng)性或者假陰性出現(xiàn).比如:陰溝腸桿菌

(Enterobactercloacae)在培養(yǎng)基上不會(huì)出現(xiàn)特征的金屬光澤(假陰性);而食酸叢毛單胞菌(Comamonasacidovorans)會(huì)發(fā)出金屬光澤

(假陽(yáng)性)第四章大腸菌群的培養(yǎng)基-EndoEndo培養(yǎng)基使用乳糖作為碳源14大腸菌群的培養(yǎng)基–Tergitol-7/Chromocult

Tergitol-7withTTCChromocult可用于定性或者定量實(shí)驗(yàn)碳源:

乳糖pH指示劑:溴百里酚藍(lán),pH6.0(黃)～7.6(藍(lán))抑制劑:Tergitol-7,

能夠減緩革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的生長(zhǎng)菌落呈現(xiàn)黃色,桔色或者磚紅,并在薄膜底部有黃色環(huán).如果是陽(yáng)性結(jié)果,需要進(jìn)一步確定其存在和種類可用于定性或者定量實(shí)驗(yàn)抑制劑:Tergitol-7,

能夠減緩革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的生長(zhǎng)差異試劑:半乳糖苷和葡糖苷酸大腸菌群存在時(shí)呈現(xiàn)紅色假如存在大腸埃希菌,則呈現(xiàn)深藍(lán)或者紫色如果是陽(yáng)性結(jié)果,需要進(jìn)一步確定其存在和種類第四章大腸菌群的培養(yǎng)基–Tergitol-7/Chromo15大腸菌群的培養(yǎng)基Colilert(R)Readycult定性試驗(yàn),用于水的測(cè)試可以用于同時(shí)檢測(cè)大腸菌群和大腸埃希氏菌差異試劑:?-D-半乳糖苷酶(galactosidase)and?-D-葡萄糖醛酸苷酶(glucuronidase)抑制劑:ONGP(o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside,鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷)和MUG(nitrophenylβ-D-glucuronide,(4-硝基苯基)-β-D-葡糖苷酸)大腸菌群生長(zhǎng)會(huì)把ONGP變成黃色,同時(shí),大腸埃希氏菌會(huì)代謝MUG產(chǎn)生熒光.定性試驗(yàn),用于水的測(cè)試可以發(fā)光/熒光物質(zhì)用于同時(shí)檢測(cè)大腸菌群和大腸埃希氏菌同樣的,差異試劑是?-D-半乳糖苷酶和?-D-葡萄糖醛酸苷酶抑制劑:X-GAL(5-Bromo-4-chloro-3-indolylβ-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolylβ-D-galactoside)和MUG總大腸菌群呈現(xiàn)藍(lán)綠色,而大腸埃希氏菌則呈現(xiàn)藍(lán)綠色并帶有熒光第四章大腸菌群的培養(yǎng)基Colilert(R)Readycult定16腸球菌腸球菌也是我們關(guān)心的一類微生物,常用來定性或者定量的培養(yǎng)基有:S&B(SlanetzandBartley),BEA(Bile-Esculin-Azide),和Enterolert(R)第四章S&BBEAEnterolert(R)抑制劑:

疊氮化鈉來抑制革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)差異試劑:TTC(氯化三苯基四氮唑)培養(yǎng)過程中,腸球菌會(huì)還原TTC成甲瓚(一種紫藍(lán)色結(jié)晶物)如果是陽(yáng)性結(jié)果,需要用BEA進(jìn)一步確定抑制劑:

膽汁來抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng),疊氮化鈉來抑制革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)差異試劑:七葉苷和檸檬酸鐵銨腸球菌能水解七葉苷為葡萄糖和七葉而七葉,能與三價(jià)鐵形成黃褐色或黑色的物質(zhì),從而在培養(yǎng)基上顯現(xiàn)含有?-葡萄糖苷酶,當(dāng)腸球菌存在時(shí),酶代謝成為4-甲基-傘形β-D-葡糖苷(4-methyl-umbelliferyl?-D-glucoside),并產(chǎn)生熒光對(duì)于原水,廠內(nèi)用水,瓶裝水中的腸球菌檢測(cè)非常有效腸球菌腸球菌也是我們關(guān)心的一類微生物,常用來定性或者定量的17乳酸桿菌MRSmediumRogosamedium全稱:de-Man,Rogosa,Sharpemedium抑制劑:乙酸鈉來抑制其他細(xì)菌的生長(zhǎng),但是有些乳桿菌目的細(xì)菌可能會(huì)生長(zhǎng)碳源/氮源:酵母肉湯提取物含有更高的醋酸含量以及低的pH值來壓制其他乳酸菌的生長(zhǎng)菌落呈現(xiàn)灰白色小點(diǎn),平滑或者突起,或光滑,或粗糙.第四章乳酸桿菌MRSmediumRogosamedium全稱18其他培養(yǎng)基Cetrimidemedium(溴棕三甲銨)tryptosesulfiteagar綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌(sulfite-reducingclostridia)抑制劑:西曲溴胺和酮酸菌株呈現(xiàn)藍(lán)綠色,

即綠膿菌素時(shí),綠膿桿菌存在的可能性為90%;而當(dāng)熒光存在時(shí),

有98%的可能性一般用來檢測(cè)天然礦泉水差異試劑:亞硫酸鹽和檸檬酸鐵銨梭狀芽胞桿菌產(chǎn)生硫化氫與亞硫酸鹽和鐵鹽反應(yīng),產(chǎn)生黑色的菌落并把菌落邊緣染成黑色第四章其他培養(yǎng)基Cetrimidemedium(溴棕三甲銨)t19培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基可以是實(shí)驗(yàn)室配制的也可以是市售的(放在培養(yǎng)皿中),后者使用方便但是價(jià)格比較高必須從有著良好聲譽(yù)的生產(chǎn)商采購(gòu)并且根據(jù)供應(yīng)商要求來儲(chǔ)存,使用和安全注意事項(xiàng)混合干粉培養(yǎng)基:使用去離子水或者蒸餾水配制并調(diào)節(jié)pH值,或者加入所需要的抑制劑.嚴(yán)格按照供應(yīng)商的說明來配制培養(yǎng)基,混合,滅菌(時(shí)間溫度)等,并編好批號(hào)以方便使用嚴(yán)格按照供應(yīng)商注明的規(guī)程使用,有些物質(zhì)有刺激性,需要防塵口罩和手套來防止吸入粉末以及皮膚接觸有效期:使用前,必須保證日期沒有超過瓶上注明的有效日期;一旦開瓶使用,建議6個(gè)月內(nèi)用完質(zhì)量管理:配置完成后,培養(yǎng)基批號(hào),配制日期必須要記錄,并且應(yīng)與樣品的分析相對(duì)應(yīng).另外,其他指標(biāo),比如pH,顏色,數(shù)量(體積)也應(yīng)該被記錄在案第五章培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基可以是實(shí)驗(yàn)室配制的也可以是市售的(放在培養(yǎng)20培養(yǎng)基的儲(chǔ)存培養(yǎng)基需要妥善保存以避免污染和失效,建議遵照供應(yīng)商的說明.吸濕的和對(duì)于光和熱敏感的培養(yǎng)基需要保持涼爽并避免接觸水分和光線采購(gòu)的培養(yǎng)基需要確認(rèn)過期日期并記錄實(shí)驗(yàn)室收貨日期,以杜絕過期培養(yǎng)基.按照批號(hào)順序使用并記錄開瓶日期舊瓶用完再開新瓶?jī)?chǔ)存于密閉容器,保持溫度在300C以下,液體培養(yǎng)基,通常需要冷藏儲(chǔ)存前,液體培養(yǎng)基需要冷卻并蓋緊瓶蓋,需要加入熱不穩(wěn)定的物質(zhì)時(shí),培養(yǎng)基需要冷卻到430Cto470C加入培養(yǎng)基不能自由流動(dòng)時(shí),應(yīng)拋棄不能使用固體培養(yǎng)基,配制完成應(yīng)盡快使用額外多配的培養(yǎng)基應(yīng)冷藏

(不能冷凍),使用前溶解.瓊脂培養(yǎng)基一般在密閉瓶中以避免水分流失,儲(chǔ)存于30Cto70C第六章培養(yǎng)基的儲(chǔ)存培養(yǎng)基需要妥善保存以避免污染和失效,建議遵照供21SummaryfromGlobalMicroTrainingMaterial

-培養(yǎng)基和配制SummaryfromGlobalMicroTrai22學(xué)習(xí)目的Identifythedifferentcategoriesofmediausedinthelab/識(shí)別用于不同實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基Identifythespecificmediausedineachcategory/識(shí)別不同試驗(yàn)中的各種培養(yǎng)基Explainhowtypicalmediaaremade/學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的準(zhǔn)備方法Explainhowtostoremedia/學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的儲(chǔ)存學(xué)習(xí)目的Identifythedifferentcat23主要內(nèi)容介紹實(shí)驗(yàn)室使用的培養(yǎng)基一般培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的儲(chǔ)存主要內(nèi)容介紹24微生物實(shí)驗(yàn)的重要性充分理解哪些微生物會(huì)影響我們的產(chǎn)品只是我們保護(hù)我們產(chǎn)品和品牌的第一步;同時(shí),我們必須通過對(duì)我們的原料,半成品和最終產(chǎn)品的微生物檢測(cè)來確保符合公司有關(guān)質(zhì)量和安全的要求.進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)最重要的手段之一就是是微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基.我們會(huì)一一介紹可口可樂公司微生物實(shí)驗(yàn)室使用的各種不同種類的培養(yǎng)基,它們的配制和儲(chǔ)存,它們?nèi)绾问褂靡宰R(shí)別不同的微生物等等第一章微生物實(shí)驗(yàn)的重要性充分理解哪些微生物會(huì)影響我們的產(chǎn)品只是我們25培養(yǎng)基我們可能會(huì)肉眼看見或者直接聞到一些腐敗的現(xiàn)象,我們也可以在顯微鏡下識(shí)別一些微生物,然而,為了了解哪些微生物需要更復(fù)雜一些的實(shí)驗(yàn),我們還需要更大的樣本量.一般來說,我們通過營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基讓微生物在實(shí)驗(yàn)室

生長(zhǎng).簡(jiǎn)單來說,培養(yǎng)基就是一種物質(zhì),液態(tài)的或者固態(tài)的,包含一系列微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì).由于微生物種類繁多,我們有很多不同種類的培養(yǎng)基,每一種都有不同的混合的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或者化學(xué)品.培養(yǎng)基讓微生物學(xué)家能夠判斷特定微生物種群是否存在或者數(shù)量多少.營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基分為三個(gè)主要類型:一般培養(yǎng)基,選擇培養(yǎng)基,差異培養(yǎng)基第二章培養(yǎng)基我們可能會(huì)肉眼看見或者直接聞到一些腐敗的現(xiàn)象,我們也26培養(yǎng)基的分類按照培養(yǎng)基的用途分:普通培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基差異培養(yǎng)基氮源:肉湯提取物,

植物提取物,使微生物能獲得足夠的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)碳源:葡萄糖,用以合成所需要的有機(jī)物質(zhì)緩沖液:中和細(xì)菌產(chǎn)生的酸除了氮源,

碳源和緩沖液外,還包含一些能夠抑制某些生長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì).比如:1)Endo瓊脂中含有亞硫酸鈉可以抑制革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的生長(zhǎng);2)酸化的橙血清瓊脂可以減緩非嗜酸細(xì)菌的生長(zhǎng)可以幫助超過一種目標(biāo)微生物生長(zhǎng).

微生物在這樣的培養(yǎng)基上的形態(tài)或者顏色是不一樣的.在日常操作中,普通培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基用的比較多按照培養(yǎng)基的形態(tài)分:肉湯:

常用于增加微生物的數(shù)量以達(dá)到可檢測(cè)的水平瓊脂(固態(tài))碳水化合物,維生素,礦物質(zhì),酸化劑等各種旨在促進(jìn)微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)加入了多聚糖(瓊脂).為不同需求而制備,

比如:1)商業(yè)無菌肉湯用于濃縮液廠來檢測(cè)主劑,這個(gè)配方抑制細(xì)菌而讓酵母菌正常生長(zhǎng);2)橙血清肉湯包含了橙的組分而使嗜酸的微生物能很好生長(zhǎng)瓊脂是理想的固化劑:1)大多數(shù)微生物不能消化;2)可以和許多營(yíng)養(yǎng)成分混合;3)也可以通過加入不同的原料滿足不同的測(cè)試需要第二章培養(yǎng)基的分類按照培養(yǎng)基的用途分:普通培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基差異培27普通培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基可以用于增菌和計(jì)數(shù)的檢測(cè).增菌是定性的,用于判斷微生物的存在與否;而計(jì)數(shù)則是定量的,可以得到存在微生物的數(shù)量.M-TGEandPCA:最常用的普通培養(yǎng)基,可通過薄膜過濾,傾倒平板,或者擴(kuò)散平板用于固態(tài)的瓊脂中以計(jì)數(shù).

pH值在7.0能使非嗜酸微生物很好的生長(zhǎng)第三章普通培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基可以用于增菌和計(jì)數(shù)的檢測(cè).增菌是定性的28TTC指示劑M-TGE和PCA都可以用于獲得瓶裝水中的異養(yǎng)菌和糖樣品中的總菌.需要的話,可以使用TTC指示劑,用來改變菌落顏色成紅色.

第三章TTC指示劑M-TGE和PCA都可以用于獲得瓶裝水中的異養(yǎng)菌29選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基能夠培養(yǎng)特定的微生物,舉例來說,當(dāng)需要得知酵母菌數(shù)量時(shí)候,可以選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基包含了營(yíng)養(yǎng)成分和其他某種”允許”生長(zhǎng)物質(zhì),可能包含一些抑制劑來防止可能影響實(shí)驗(yàn)的微生物的生長(zhǎng).選擇性培養(yǎng)基可以用來識(shí)別酵母菌和霉菌,嗜酸細(xì)菌,和其他細(xì)菌,比如大腸菌群.第四章選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基能夠培養(yǎng)特定的微生物,舉例來說,30霉菌和酵母菌M-Green:含有豐富的蛋白胨非常有利于微生物生長(zhǎng)

pH4.6抑制了大部分細(xì)菌的生長(zhǎng)溴甲酚綠(pH=3.8時(shí)呈黃色，pH=5.4時(shí)呈藍(lán)綠色，pH=4.5時(shí)開始有顏色的明顯變化)是指示劑,大部分菌落被里面的色素變成率綠色,酸性物質(zhì)擴(kuò)散到培養(yǎng)基把它變成黃色.第四章霉菌和酵母菌M-Green:第四章31霉菌和酵母菌培養(yǎng)基酸化培養(yǎng)基RBCA橙血清瓊脂(OSA),土豆葡萄糖瓊脂(PDA),麥芽提取物瓊脂(MEA)孟加拉紅氯霉素選擇性培養(yǎng)基是最常用的檢測(cè)果汁里的總嗜酸菌的培養(yǎng)基.pH5.5的OSA和5.6的PDA&MEA比較高,不能有效抑制大部分細(xì)菌,所以使用酸化的方法來有效的分析嗜酸菌一般酒石酸用來酸化OSA和PDA,而對(duì)于MEA,乳酸和酒石酸都可以用最終的pH為4.2-4.4僅限于霉菌測(cè)試,一般用于空氣樣品.含有氯霉素以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)孟加拉紅抑制霉菌的大小和擴(kuò)散,并且把菌落染成粉紅色第四章霉菌和酵母菌培養(yǎng)基酸化培養(yǎng)基RBCA橙血清瓊脂(OSA),32耐熱霉菌/耐熱細(xì)菌耐熱霉菌(HRM)耐熱細(xì)菌(TAB)一些霉菌孢子能夠抵抗巴氏滅菌過程而存活于飲料中.為了了解耐熱霉菌是否存在,我們需要取少量樣品到肉湯培養(yǎng)基并加熱滅活,通過一定的培養(yǎng)(時(shí)間溫度),觀察霉菌存在與否;需要計(jì)數(shù)的話,酸化的MEA,PDA,OSA都可以使用.有時(shí)候樣品中會(huì)存在耐熱細(xì)菌,一般稱為嗜熱嗜酸菌(TAB).根據(jù)樣品的不同,薄膜法或擴(kuò)散平板法都可以用來測(cè)試TAB.合適的培養(yǎng)基是BAT和YSGBAT:主要用來檢測(cè)脂環(huán)酸芽胞桿菌.

通過支持脂環(huán)酸芽胞桿菌的生長(zhǎng),低pH值和高的培養(yǎng)溫度有效抑制了其他細(xì)菌的生長(zhǎng)第四章耐熱霉菌/耐熱細(xì)菌耐熱霉菌(HRM)耐熱細(xì)菌(TAB33大腸菌群Endo,Tergitol-7,Chormocult,Colilert和Readycult都可以用來定性或定量地檢測(cè)大腸菌群.大腸菌群的存在表示了糟糕的衛(wèi)生情況,可能是由不充分的消毒或者沒有很好執(zhí)行GMP的要求.這些細(xì)菌有三個(gè)主要來源:水植物性物質(zhì)動(dòng)物動(dòng)物污染產(chǎn)生糞大腸,能出現(xiàn)在水體或者植物中如果數(shù)量較大,種類又特別,大腸菌群的存在可能會(huì)引起公共衛(wèi)生事件第四章大腸菌群Endo,Tergitol-7,Chormocu34大腸菌群的培養(yǎng)基-EndoEndo培養(yǎng)基使用乳糖作為碳源,硫酸品紅還區(qū)別不同的微生物,亞硫酸鈉和品紅來抑制其他微生物的生長(zhǎng).M-Endo則含有十二烷基硫酸鹽和脫氧膽鹽作為抑制劑.當(dāng)使用Endo培養(yǎng)基時(shí),菌落顯示帶有綠色金屬光澤的紅色.如果結(jié)果呈陽(yáng)性,則需要進(jìn)一步確定其存在和種類在一些情況下,在Endo培養(yǎng)基上會(huì)有假陽(yáng)性或者假陰性出現(xiàn).比如:陰溝腸桿菌

(Enterobactercloacae)在培養(yǎng)基上不會(huì)出現(xiàn)特征的金屬光澤(假陰性);而食酸叢毛單胞菌(Comamonasacidovorans)會(huì)發(fā)出金屬光澤

(假陽(yáng)性)第四章大腸菌群的培養(yǎng)基-EndoEndo培養(yǎng)基使用乳糖作為碳源35大腸菌群的培養(yǎng)基–Tergitol-7/Chromocult

Tergitol-7withTTCChromocult可用于定性或者定量實(shí)驗(yàn)碳源:

乳糖pH指示劑:溴百里酚藍(lán),pH6.0(黃)～7.6(藍(lán))抑制劑:Tergitol-7,

能夠減緩革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的生長(zhǎng)菌落呈現(xiàn)黃色,桔色或者磚紅,并在薄膜底部有黃色環(huán).如果是陽(yáng)性結(jié)果,需要進(jìn)一步確定其存在和種類可用于定性或者定量實(shí)驗(yàn)抑制劑:Tergitol-7,

能夠減緩革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的生長(zhǎng)差異試劑:半乳糖苷和葡糖苷酸大腸菌群存在時(shí)呈現(xiàn)紅色假如存在大腸埃希菌,則呈現(xiàn)深藍(lán)或者紫色如果是陽(yáng)性結(jié)果,需要進(jìn)一步確定其存在和種類第四章大腸菌群的培養(yǎng)基–Tergitol-7/Chromo36大腸菌群的培養(yǎng)基Colilert(R)Readycult定性試驗(yàn),用于水的測(cè)試可以用于同時(shí)檢測(cè)大腸菌群和大腸埃希氏菌差異試劑:?-D-半乳糖苷酶(galactosidase)and?-D-葡萄糖醛酸苷酶(glucuronidase)抑制劑:ONGP(o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside,鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷)和MUG(nitrophenylβ-D-glucuronide,(4-硝基苯基)-β-D-葡糖苷酸)大腸菌群生長(zhǎng)會(huì)把ONGP變成黃色,同時(shí),大腸埃希氏菌會(huì)代謝MUG產(chǎn)生熒光.定性試驗(yàn),用于水的測(cè)試可以發(fā)光/熒光物質(zhì)用于同時(shí)檢測(cè)大腸菌群和大腸埃希氏菌同樣的,差異試劑是?-D-半乳糖苷酶和?-D-葡萄糖醛酸苷酶抑制劑:X-GAL(5-Bromo-4-chloro-3-indolylβ-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolylβ-D-galactoside)和MUG總大腸菌群呈現(xiàn)藍(lán)綠色,而大腸埃希氏菌則呈現(xiàn)藍(lán)綠色并帶有熒光第四章大腸菌群的培養(yǎng)基Colilert(R)Readycult定37腸球菌腸球菌也是我們關(guān)心的一類微生物,常用來定性或者定量的培養(yǎng)基有:S&B(SlanetzandBartley),BEA(Bile-Esculin-Azide),和Enterolert(R)第四章S&BBEAEnterolert(R)抑制劑:

疊氮化鈉來抑制革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)差異試劑:TTC(氯化三苯基四氮唑)培養(yǎng)過程中,腸球菌會(huì)還原TTC成甲瓚(一種紫藍(lán)色結(jié)晶物)如果是陽(yáng)性結(jié)果,需要用BEA進(jìn)一步確定抑制劑:

膽汁來抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng),疊氮化鈉來抑制革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)差異試劑:七葉苷和檸檬酸鐵銨腸球菌能水解七葉苷為葡萄糖和七葉而七葉,能與三價(jià)鐵形成黃褐色或黑色的物質(zhì),從而在培養(yǎng)基上顯現(xiàn)含有?-葡萄糖苷酶,當(dāng)腸球菌存在時(shí),酶代謝成為4-甲基-傘形β-D-葡糖苷(4-methyl-umbelliferyl?-D-glucoside),并產(chǎn)生熒光對(duì)于原水,廠內(nèi)用水,瓶裝水中的腸球菌檢測(cè)非常有效腸球菌腸球菌也是我們關(guān)心的一類微生物,常用來定性或者定量的38乳酸桿菌MRSmediumRogosamedium全稱:de-Man,Rogosa,Sharpemedium抑制劑:乙酸鈉來抑制其他細(xì)菌的生長(zhǎng),