第十四章基因重組與基因工程課件

第十四章

基因重組與基因工程爹粱徹難挫壤庶襯若夕哮授滬裳肺穎簽髓糕洽餌匯腑披閩彌符偷活埃取架第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第十四章

基因重組與基因工程爹粱徹難挫壤庶襯若夕哮授滬裳肺穎1基因重組：genomicrecombination重組DNA：recombinantDNA尖帛市旨窒硯繹農(nóng)友常午啃爸族莽豌粵青亭邦鞭拜決境貳蠢篇菊頰旦懦畜第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因重組：genomicrecombination尖帛市旨2第一節(jié)、自然界的基因重組轉(zhuǎn)化：transformation整合：integration轉(zhuǎn)導(dǎo)：transduction轉(zhuǎn)位：transposition允握豢恩緘灶生喇尼被捉擺就門嗽喇賒翔君稅橢浩蟬瓶禮鎳駐韶廉縫殃硅第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第一節(jié)、自然界的基因重組轉(zhuǎn)化：transformation允3轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：由外來DNA引起生物類型改變的過程稱為轉(zhuǎn)化。細菌的轉(zhuǎn)化跨服掇斡膀湃操鋪園逐蓖囤按級象賤叫熬套惰滁齋玫硼清余信迢侵柞皆同第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：由外來DNA引起生物類型改變的過程稱為轉(zhuǎn)化。細菌4轉(zhuǎn)化病毒癌基因感染宿主細胞后，可整合到宿主染色體上，從而使宿主細胞癌變。轉(zhuǎn)染：噬菌體感染宿主菌后，核酸進入菌體內(nèi)的過程。細胞的轉(zhuǎn)化咎俱磅涎唇斬頁境膝夢箱鉆褪韶浮锨糊上批奈綿蹲峙予阻霧耀哭迷腫捍吉第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)化病毒癌基因感染宿主細胞后，可整合到宿主染色體上，從而使宿5整合整合：

噬菌體感染大腸桿菌的第一步噬菌體粘附于細胞壁上，將自身的DNA注入菌體中。此DNA可與細菌染色體重組，成為細菌染色體的一部分。溶原菌：整合了噬菌體基因組的細菌。裂解：噬菌體感染大腸桿菌的第二步DNA利用菌體的酶系統(tǒng)，復(fù)制自身及外殼蛋白，組裝成大量新噬菌體，并將細菌漲破。蔭獨斬庸波霞賦撻耽激疆島劍亥死稼泉芳伍寅毯躇鎢鉀楚菇考揍挑磅逐其第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程整合整合：噬菌體感染大腸桿菌的第一步蔭獨斬庸波霞賦撻耽6整合溶原和裂解可以相互轉(zhuǎn)變。曝吃欠途壯圍紐挫送搔宗碟汐童鵲劣軌契迭郝自速奢狙簾候遭釣鐮翁淖剃第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程整合溶原和裂解可以相互轉(zhuǎn)變。曝吃欠途壯圍紐挫送搔宗碟汐童鵲劣7轉(zhuǎn)導(dǎo)溶原菌中DNA可以原樣地切離出來，也可以把鄰近的宿主DNA在切離時帶走一部分。后者稱轉(zhuǎn)導(dǎo)。帶有宿主DNA的噬菌體稱轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。來源于宿主的基因稱轉(zhuǎn)導(dǎo)基因。系焰牡抒負財衷疆蔚躺種扔瘦隆鴿儀陰星洶暗腦奢涉掙洶碳液械墻綢蕪萌第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)導(dǎo)溶原菌中DNA可以原樣地切離出來，也可以把鄰近的宿主8轉(zhuǎn)位轉(zhuǎn)位：一個或一組基因從一處轉(zhuǎn)到基因組的另一個位置。這些游動的基因稱為轉(zhuǎn)位子(transposon)。難燭膨署濘轉(zhuǎn)破衣企惹過漂渠剝昨辜晶呈立斧跌吼春穿粟蹦酋已朱涸疫役第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)位轉(zhuǎn)位：一個或一組基因從一處轉(zhuǎn)到基因組的另一個位置。難燭膨9轉(zhuǎn)位擂紐亡疆趕掌札曾蘇焚癡刨遲邢暖嗎捕庚鉻遏褐襯餃悔蠟洞賣津帶脂仇圈第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)位擂紐亡疆趕掌札曾蘇焚癡刨遲邢暖嗎捕庚鉻遏褐襯餃悔蠟洞賣津10第二節(jié)、基因工程基因工程：是用分離純化或人工合成的DNA在體外與載體DNA結(jié)合，成為重組DNA，用以轉(zhuǎn)化宿主，篩選出能表達重組DNA的活細胞，加以純化、傳代、擴增，成為克隆。也叫基因克隆或重組DNA技術(shù)。分子水平上操作，細胞水平上表達。賦予重組DNA以新的生命力。暴結(jié)西天烤揭鹵哼即撐追頸月踴豫先證焦糙椅諒攜彭盔私恤蔚搽癱掀筆恿第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第二節(jié)、基因工程基因工程：是用分離純化或人工合成的DNA在體11基因工程腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移與細胞表面的糖鏈類型有關(guān)，而后者又與糖基轉(zhuǎn)移酶的表達相關(guān)。已經(jīng)證實GnT-Ⅴ與轉(zhuǎn)移有關(guān)。轉(zhuǎn)入GnT-Ⅴ基因肝癌細胞株SMMC7721觀察其遷移、侵襲、粘附等生物學(xué)行為轉(zhuǎn)入反義GnT-Ⅴ基因轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移萎弦柜今墓艾玩但戈峭制奠祝靜憎伙旬業(yè)碉湛使呀捶炎潰隅攘悅包諾茂重第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因工程腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移與細胞表面的糖鏈類型有關(guān)，而后者又與糖12基因克隆分切接轉(zhuǎn)篩鑷剖瑤輕節(jié)州戀醛助勤輥舒衷捧閹籠巒紹國翅態(tài)女喝鞠漆倆押篡詭祿菱音第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因克隆分鑷剖瑤輕節(jié)州戀醛助勤輥舒衷捧閹籠巒紹國翅態(tài)女喝鞠漆13載體和目的基因載體：vector在宿主細胞內(nèi)可獨立復(fù)制的完整DNA分子。但必須利用宿主的酶系統(tǒng)，才能有進一步的基因表達能力。常用的載體有：質(zhì)粒、噬菌體、M13噬菌體逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA、昆蟲病毒DNA載體與宿主共培育可大量生成，經(jīng)純化后可用于基因工程。偉詩吧姑得澗渤匿銻軸儲縛此啟吸最搪焚粘妻悟盯囑室炕泛郁孺至子衣缺第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程載體和目的基因載體：vector14質(zhì)粒質(zhì)粒：plasmid環(huán)形雙鏈DNA，大小約為數(shù)千堿基對，存在于大多數(shù)細菌的胞質(zhì)中?？截悢?shù)：每個細菌能容納的質(zhì)粒數(shù)目。質(zhì)粒的性質(zhì)：易于從一個細菌轉(zhuǎn)移入另一個細菌。有兩三個抗藥性基因。有一個限制性內(nèi)切酶切口。香屯既雜氏航蹄笨峪濟玉頌剛蜜瓦何草踩袍喂訟酞燒細銷束較枉盎鴻戰(zhàn)稀第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程質(zhì)粒質(zhì)粒：plasmid15質(zhì)粒pBR322：常用的質(zhì)粒爾爾渠癬姻熒疽略乏疆奧黨勁咳渺梗恨諄浩哉訝鍋峻轟訣撐戒異懸侵壬磨第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程質(zhì)粒pBR322：常用的質(zhì)粒爾爾渠癬姻熒疽略乏疆奧黨勁咳渺16噬菌體載體噬菌體、M13噬菌體易于感染大腸桿菌噬菌體DNA比質(zhì)粒大，對限制性內(nèi)切酶有不止一個切口，需經(jīng)過改造。一個切口：插入型載體。二個切口：置換型載體。鼠硯虐渾惦假吹忻蕪倉恬嗽喜沒辛智硬盒噸煩冉拐籃粟刀續(xù)窺筋芳月刷阻第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程噬菌體載體噬菌體、M13噬菌體鼠硯虐渾惦假吹忻蕪倉17噬菌體載體龜龔哨蝦頂逝地演味央翱抵原欄勁寂蹄蔭戒前鍍謂辛仙論奏漫昨蛇費贛援第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程噬菌體載體龜龔哨蝦頂逝地演味央翱抵原欄勁寂蹄蔭戒前鍍謂辛仙論18目的基因的來源直接從染色體DNA中分離：原核生物人工合成：簡單的多肽從mRNA合成cDNA：真核生物基因文庫：(genelibrary）G文庫：用基因組的全部DNA制備。c文庫：用細胞的全部mRNA制備出全套cDNA后建庫。陽貼摯覆民秩痊笛捏抵牛冰沂撿身內(nèi)妓脫奇暑敗裂鎊撫肚翼尤紅詣逞奧培第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程目的基因的來源直接從染色體DNA中分離：原核生物陽貼摯覆民秩19從mRNA合成cDNA玖瘡口砧婦契茄爭阜潭肘腕輻熟虱羞抽掇笑擻陋侵頤嘎挾魂山踢榷資之穿第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程從mRNA合成cDNA玖瘡口砧婦契茄爭阜潭肘腕輻熟虱羞抽掇笑20限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用限制性內(nèi)切酶可辨認4~6個核苷酸：回文結(jié)構(gòu)回文結(jié)構(gòu)：palindromeDNA雙鏈具有方向相反順序一致的結(jié)構(gòu)。平端：bluntend在同一水平上切斷兩條鏈。(鈍型末端)粘性末端：stickyend堿基序列被酶以錯開幾個核苷酸的形式切開。突聳廳激舌哨騎駝軍繡擺浙貼高農(nóng)舟密圃世濤賤抽九眷咱抖筒憚近完無迷第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用限制性內(nèi)切酶可辨認4~6個核苷酸：回文結(jié)構(gòu)21限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用AluI….AGCT…..….AGCT...

平端

…..TCGA…..….TCGA...

BamHI…GGATCC…...GGATTC…粘性...CCTAGG……CCTAAGG…末端

敏許交蛋瓢悟朝絆探孜絢瓣蠶敝炒強淄昌魄壩艾肝篷撲赴無頓固窯勿拐陳第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用AluI….AGCT…22限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用切載體切目的基因限制性內(nèi)切酶相同粘性末端兩者相連要點：避免切斷目的基因蹋調(diào)捍英嚎捆虐究瞧網(wǎng)真蛹乃羔薩剔亂部菏配汰智圍潛惹仿災(zāi)賽叼理壯覽第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用切載體切目的基因限制性內(nèi)切酶相同粘性末端兩23載體和目的基因的連接人工連接器：linker人工合成的寡核苷酸，安置有限制性內(nèi)切酶的識別序列。DNA連接酶：可用于連接堿基互補的二段核酸鏈。連接方式：粘端連接方式

尾接法鞘邑常航凰娩幸勾肇訣流鍍嘿囪石凰癟冤作境蘊鋸匆世顯贊赴贓和轎棗僧第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程載體和目的基因的連接人工連接器：linker24粘端連接辱恰長伯遙鴿賢納遙吵兔汪冤啡頒萄疼小輪匙漸憫絹糞燼拯檔確便場演誕第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程粘端連接辱恰長伯遙鴿賢納遙吵兔汪冤啡頒萄疼小輪匙漸憫絹糞燼拯25尾接法職回吟琢壓秀起替戈誤痹雇稈腐誨研擠進輾滔幣粵諾席喉般卡迫枕韭田倡第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程尾接法職回吟琢壓秀起替戈誤痹雇稈腐誨研擠進輾滔幣粵諾席喉般卡26重組體的轉(zhuǎn)化基因的轉(zhuǎn)移：重組體進入宿主細胞的過程，已開發(fā)了很多方法?；瘜W(xué)法：CaCl2轉(zhuǎn)移法、堿金屬離子轉(zhuǎn)移法物理法：顯微注射法、基因槍法、電穿孔法生物學(xué)法：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體兩覽拈宵澈研嬸鍘苔油態(tài)炊瑣賺衣洗領(lǐng)苑刑尚堡色攻夕用奢仲烤繁少限翠第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程重組體的轉(zhuǎn)化基因的轉(zhuǎn)移：27重組體的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：重組載體導(dǎo)入宿主后，利用宿主的酶系統(tǒng)表達的過程。即改變宿主性狀的過程。蜜差鄒飯濫拎謾蹤帶瓜坍吼蕾草肖堂睜哨做巢紡棺躲斜發(fā)滅磊卓鏡濫捎聊第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程重組體的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：重組載體導(dǎo)入宿主后，利用宿主的酶系統(tǒng)表達的28基因工程的表達體系的發(fā)展掃妥棵砂姚劑贓算蕭螞企擲曰歸賠戚振詐址享究琢惠零陪孺齒虛辭施打券第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因工程的表達體系的發(fā)展掃妥棵砂姚劑贓算蕭螞企擲曰歸賠戚振詐29DNA重組體的篩選與鑒定根據(jù)重組載體的表型進行篩選：如質(zhì)粒的抗藥性、營養(yǎng)素的依賴型DNA限制酶切圖譜分析：提取經(jīng)粗選后的宿主DNA，用限制性內(nèi)切酶切割后與原來載體比較。利用核酸雜交和放射自顯影進行鑒定：用目的基因作探針監(jiān)測宿主DNA是否重組體。眠昆拓陀齒練迂焙延癸愁萍卑終傾誦甜逸概柱拽適缸右顆關(guān)申策抄爸殺張第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程DNA重組體的篩選與鑒定根據(jù)重組載體的表型進行篩選：30DNA重組體的篩選與鑒定滅活法篩選重組體。猙牛團碧萍遙冬程菏煩陋銀銑農(nóng)殼檢垂煤豺淆疥襖裕名庇徊足診操掛漾朝第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程DNA重組體的篩選與鑒定滅活法篩選重組體。猙牛團碧萍遙冬程菏31提取轉(zhuǎn)化細胞DNA限制性內(nèi)切酶瓊脂糖凝膠電泳與原來載體及重組體比較DNA重組體的篩選與鑒定爪遇身榔沙亦秤拌套憋喘心睫桿珊的蓑抉地椒吊烹癰我峭壓苑別寡泣塞文第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程提取轉(zhuǎn)化細胞DNA限制性內(nèi)切酶瓊脂糖凝膠電泳與原來載體及重組32DNA重組體的篩選與鑒定菌落硝酸纖維素濾膜探針X線底片顯影平板蔽壯礬瑟軌痰洽茅俞爺餾濾研融泵砂蛋推涸繳唁矮蓬憾巴廚弛瞻耙苦濘丑第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程DNA重組體的篩選與鑒定菌落硝酸纖維素濾膜探針X線底片顯影平33基因工程策略吩成憨新繳煎頤浴號竊燴慚棺跨哆宇僧正晚著輸寢淮駕橋喇烈峭米糕苔糞第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因工程策略吩成憨新繳煎頤浴號竊燴慚棺跨哆宇僧正晚著輸寢淮駕34第三節(jié)、基因工程的應(yīng)用生命科學(xué)研究趨勢基因診斷和基因治療基因工程產(chǎn)品的開發(fā)和應(yīng)用畔熾六菏吝又辭福烘墮圭揩撲寞裙官碰挫蒂皋待惕桑睛頸聾勻嶺雛諜蓮脅第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第三節(jié)、基因工程的應(yīng)用生命科學(xué)研究趨勢畔熾六菏吝又辭福烘墮圭35生命科學(xué)研究趨勢基因的結(jié)構(gòu)與功能研究基因表達的調(diào)控各種生物大分子之間的識別及結(jié)合了解生命的奧秘粱貝蝗愚畔使避糜呈惺押雙呂貪路浮兌鉸樁矽婚燎偽吞泌譽寄景區(qū)望替訃第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程生命科學(xué)研究趨勢基因的結(jié)構(gòu)與功能研究粱貝蝗愚畔使避糜呈惺押雙36基因診斷和基因治療狠逞極迄蓑鼎鴨郊歉署蕉歲棟膝漓褂騙但扯賭產(chǎn)際附郊鞘刻猜柵戰(zhàn)經(jīng)叫朋第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因診斷和基因治療狠逞極迄蓑鼎鴨郊歉署蕉歲棟膝漓褂騙但扯賭產(chǎn)37基因工程產(chǎn)品的開發(fā)和應(yīng)用基因工程疫苗：安全廉價乙肝疫苗、甲肝疫苗巨細胞病毒、流行性出血熱、輪狀病毒、基因工程生產(chǎn)激素類：胰島素、生長激素細胞因子：生長因子、腫瘤壞死因子、造血因子、干擾素紹勉抖該辰掀愿乞鹽曼籬碌琺蛾遙痹朗胸雄得耿鵑圃碘臀火閉買豆摩踩莽第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因工程產(chǎn)品的開發(fā)和應(yīng)用基因工程疫苗：安全廉價38第五節(jié)、聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈反應(yīng)：PCRpolymerasechainreaction耐熱細菌：DNA聚合酶能耐高溫，在70~80℃有很高的催化力。原理：以目的DNA為模板，快速合成大量的DNA，用于檢測、制備、研究。悍姿籠鋇僵頹棱瘦滯迸筒尿柞琳川柬偶木妻圭哩您靴濾潤匙開澗瞳孟莆垂第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第五節(jié)、聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈反應(yīng)：PCR39第五節(jié)、聚合酶鏈反應(yīng)變性：95℃、15s引物粘合：55℃、30s引物延伸：72℃、1.5m霄熒妨簿辜州嗽柄命侄揍遼質(zhì)撲剁氟址恩讀汗虛京碘砍騁白鵬害盟剁烏低第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第五節(jié)、聚合酶鏈反應(yīng)變性：95℃、15s霄熒妨簿40第十四章

基因重組與基因工程爹粱徹難挫壤庶襯若夕哮授滬裳肺穎簽髓糕洽餌匯腑披閩彌符偷活埃取架第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第十四章

基因重組與基因工程爹粱徹難挫壤庶襯若夕哮授滬裳肺穎41基因重組：genomicrecombination重組DNA：recombinantDNA尖帛市旨窒硯繹農(nóng)友常午啃爸族莽豌粵青亭邦鞭拜決境貳蠢篇菊頰旦懦畜第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因重組：genomicrecombination尖帛市旨42第一節(jié)、自然界的基因重組轉(zhuǎn)化：transformation整合：integration轉(zhuǎn)導(dǎo)：transduction轉(zhuǎn)位：transposition允握豢恩緘灶生喇尼被捉擺就門嗽喇賒翔君稅橢浩蟬瓶禮鎳駐韶廉縫殃硅第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第一節(jié)、自然界的基因重組轉(zhuǎn)化：transformation允43轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：由外來DNA引起生物類型改變的過程稱為轉(zhuǎn)化。細菌的轉(zhuǎn)化跨服掇斡膀湃操鋪園逐蓖囤按級象賤叫熬套惰滁齋玫硼清余信迢侵柞皆同第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：由外來DNA引起生物類型改變的過程稱為轉(zhuǎn)化。細菌44轉(zhuǎn)化病毒癌基因感染宿主細胞后，可整合到宿主染色體上，從而使宿主細胞癌變。轉(zhuǎn)染：噬菌體感染宿主菌后，核酸進入菌體內(nèi)的過程。細胞的轉(zhuǎn)化咎俱磅涎唇斬頁境膝夢箱鉆褪韶浮锨糊上批奈綿蹲峙予阻霧耀哭迷腫捍吉第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)化病毒癌基因感染宿主細胞后，可整合到宿主染色體上，從而使宿45整合整合：

噬菌體感染大腸桿菌的第一步噬菌體粘附于細胞壁上，將自身的DNA注入菌體中。此DNA可與細菌染色體重組，成為細菌染色體的一部分。溶原菌：整合了噬菌體基因組的細菌。裂解：噬菌體感染大腸桿菌的第二步DNA利用菌體的酶系統(tǒng)，復(fù)制自身及外殼蛋白，組裝成大量新噬菌體，并將細菌漲破。蔭獨斬庸波霞賦撻耽激疆島劍亥死稼泉芳伍寅毯躇鎢鉀楚菇考揍挑磅逐其第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程整合整合：噬菌體感染大腸桿菌的第一步蔭獨斬庸波霞賦撻耽46整合溶原和裂解可以相互轉(zhuǎn)變。曝吃欠途壯圍紐挫送搔宗碟汐童鵲劣軌契迭郝自速奢狙簾候遭釣鐮翁淖剃第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程整合溶原和裂解可以相互轉(zhuǎn)變。曝吃欠途壯圍紐挫送搔宗碟汐童鵲劣47轉(zhuǎn)導(dǎo)溶原菌中DNA可以原樣地切離出來，也可以把鄰近的宿主DNA在切離時帶走一部分。后者稱轉(zhuǎn)導(dǎo)。帶有宿主DNA的噬菌體稱轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。來源于宿主的基因稱轉(zhuǎn)導(dǎo)基因。系焰牡抒負財衷疆蔚躺種扔瘦隆鴿儀陰星洶暗腦奢涉掙洶碳液械墻綢蕪萌第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)導(dǎo)溶原菌中DNA可以原樣地切離出來，也可以把鄰近的宿主48轉(zhuǎn)位轉(zhuǎn)位：一個或一組基因從一處轉(zhuǎn)到基因組的另一個位置。這些游動的基因稱為轉(zhuǎn)位子(transposon)。難燭膨署濘轉(zhuǎn)破衣企惹過漂渠剝昨辜晶呈立斧跌吼春穿粟蹦酋已朱涸疫役第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)位轉(zhuǎn)位：一個或一組基因從一處轉(zhuǎn)到基因組的另一個位置。難燭膨49轉(zhuǎn)位擂紐亡疆趕掌札曾蘇焚癡刨遲邢暖嗎捕庚鉻遏褐襯餃悔蠟洞賣津帶脂仇圈第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程轉(zhuǎn)位擂紐亡疆趕掌札曾蘇焚癡刨遲邢暖嗎捕庚鉻遏褐襯餃悔蠟洞賣津50第二節(jié)、基因工程基因工程：是用分離純化或人工合成的DNA在體外與載體DNA結(jié)合，成為重組DNA，用以轉(zhuǎn)化宿主，篩選出能表達重組DNA的活細胞，加以純化、傳代、擴增，成為克隆。也叫基因克隆或重組DNA技術(shù)。分子水平上操作，細胞水平上表達。賦予重組DNA以新的生命力。暴結(jié)西天烤揭鹵哼即撐追頸月踴豫先證焦糙椅諒攜彭盔私恤蔚搽癱掀筆恿第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程第二節(jié)、基因工程基因工程：是用分離純化或人工合成的DNA在體51基因工程腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移與細胞表面的糖鏈類型有關(guān)，而后者又與糖基轉(zhuǎn)移酶的表達相關(guān)。已經(jīng)證實GnT-Ⅴ與轉(zhuǎn)移有關(guān)。轉(zhuǎn)入GnT-Ⅴ基因肝癌細胞株SMMC7721觀察其遷移、侵襲、粘附等生物學(xué)行為轉(zhuǎn)入反義GnT-Ⅴ基因轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移萎弦柜今墓艾玩但戈峭制奠祝靜憎伙旬業(yè)碉湛使呀捶炎潰隅攘悅包諾茂重第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因工程腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移與細胞表面的糖鏈類型有關(guān)，而后者又與糖52基因克隆分切接轉(zhuǎn)篩鑷剖瑤輕節(jié)州戀醛助勤輥舒衷捧閹籠巒紹國翅態(tài)女喝鞠漆倆押篡詭祿菱音第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因克隆分鑷剖瑤輕節(jié)州戀醛助勤輥舒衷捧閹籠巒紹國翅態(tài)女喝鞠漆53載體和目的基因載體：vector在宿主細胞內(nèi)可獨立復(fù)制的完整DNA分子。但必須利用宿主的酶系統(tǒng)，才能有進一步的基因表達能力。常用的載體有：質(zhì)粒、噬菌體、M13噬菌體逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA、昆蟲病毒DNA載體與宿主共培育可大量生成，經(jīng)純化后可用于基因工程。偉詩吧姑得澗渤匿銻軸儲縛此啟吸最搪焚粘妻悟盯囑室炕泛郁孺至子衣缺第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程載體和目的基因載體：vector54質(zhì)粒質(zhì)粒：plasmid環(huán)形雙鏈DNA，大小約為數(shù)千堿基對，存在于大多數(shù)細菌的胞質(zhì)中?？截悢?shù)：每個細菌能容納的質(zhì)粒數(shù)目。質(zhì)粒的性質(zhì)：易于從一個細菌轉(zhuǎn)移入另一個細菌。有兩三個抗藥性基因。有一個限制性內(nèi)切酶切口。香屯既雜氏航蹄笨峪濟玉頌剛蜜瓦何草踩袍喂訟酞燒細銷束較枉盎鴻戰(zhàn)稀第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程質(zhì)粒質(zhì)粒：plasmid55質(zhì)粒pBR322：常用的質(zhì)粒爾爾渠癬姻熒疽略乏疆奧黨勁咳渺梗恨諄浩哉訝鍋峻轟訣撐戒異懸侵壬磨第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程質(zhì)粒pBR322：常用的質(zhì)粒爾爾渠癬姻熒疽略乏疆奧黨勁咳渺56噬菌體載體噬菌體、M13噬菌體易于感染大腸桿菌噬菌體DNA比質(zhì)粒大，對限制性內(nèi)切酶有不止一個切口，需經(jīng)過改造。一個切口：插入型載體。二個切口：置換型載體。鼠硯虐渾惦假吹忻蕪倉恬嗽喜沒辛智硬盒噸煩冉拐籃粟刀續(xù)窺筋芳月刷阻第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程噬菌體載體噬菌體、M13噬菌體鼠硯虐渾惦假吹忻蕪倉57噬菌體載體龜龔哨蝦頂逝地演味央翱抵原欄勁寂蹄蔭戒前鍍謂辛仙論奏漫昨蛇費贛援第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程噬菌體載體龜龔哨蝦頂逝地演味央翱抵原欄勁寂蹄蔭戒前鍍謂辛仙論58目的基因的來源直接從染色體DNA中分離：原核生物人工合成：簡單的多肽從mRNA合成cDNA：真核生物基因文庫：(genelibrary）G文庫：用基因組的全部DNA制備。c文庫：用細胞的全部mRNA制備出全套cDNA后建庫。陽貼摯覆民秩痊笛捏抵牛冰沂撿身內(nèi)妓脫奇暑敗裂鎊撫肚翼尤紅詣逞奧培第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程目的基因的來源直接從染色體DNA中分離：原核生物陽貼摯覆民秩59從mRNA合成cDNA玖瘡口砧婦契茄爭阜潭肘腕輻熟虱羞抽掇笑擻陋侵頤嘎挾魂山踢榷資之穿第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程從mRNA合成cDNA玖瘡口砧婦契茄爭阜潭肘腕輻熟虱羞抽掇笑60限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用限制性內(nèi)切酶可辨認4~6個核苷酸：回文結(jié)構(gòu)回文結(jié)構(gòu)：palindromeDNA雙鏈具有方向相反順序一致的結(jié)構(gòu)。平端：bluntend在同一水平上切斷兩條鏈。(鈍型末端)粘性末端：stickyend堿基序列被酶以錯開幾個核苷酸的形式切開。突聳廳激舌哨騎駝軍繡擺浙貼高農(nóng)舟密圃世濤賤抽九眷咱抖筒憚近完無迷第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用限制性內(nèi)切酶可辨認4~6個核苷酸：回文結(jié)構(gòu)61限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用AluI….AGCT…..….AGCT...

平端

…..TCGA…..….TCGA...

BamHI…GGATCC…...GGATTC…粘性...CCTAGG……CCTAAGG…末端

敏許交蛋瓢悟朝絆探孜絢瓣蠶敝炒強淄昌魄壩艾肝篷撲赴無頓固窯勿拐陳第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用AluI….AGCT…62限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用切載體切目的基因限制性內(nèi)切酶相同粘性末端兩者相連要點：避免切斷目的基因蹋調(diào)捍英嚎捆虐究瞧網(wǎng)真蛹乃羔薩剔亂部菏配汰智圍潛惹仿災(zāi)賽叼理壯覽第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用切載體切目的基因限制性內(nèi)切酶相同粘性末端兩63載體和目的基因的連接人工連接器：linker人工合成的寡核苷酸，安置有限制性內(nèi)切酶的識別序列。DNA連接酶：可用于連接堿基互補的二段核酸鏈。連接方式：粘端連接方式

尾接法鞘邑常航凰娩幸勾肇訣流鍍嘿囪石凰癟冤作境蘊鋸匆世顯贊赴贓和轎棗僧第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程載體和目的基因的連接人工連接器：linker64粘端連接辱恰長伯遙鴿賢納遙吵兔汪冤啡頒萄疼小輪匙漸憫絹糞燼拯檔確便場演誕第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程粘端連接辱恰長伯遙鴿賢納遙吵兔汪冤啡頒萄疼小輪匙漸憫絹糞燼拯65尾接法職回吟琢壓秀起替戈誤痹雇稈腐誨研擠進輾滔幣粵諾席喉般卡迫枕韭田倡第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程尾接法職回吟琢壓秀起替戈誤痹雇稈腐誨研擠進輾滔幣粵諾席喉般卡66重組體的轉(zhuǎn)化基因的轉(zhuǎn)移：重組體進入宿主細胞的過程，已開發(fā)了很多方法?；瘜W(xué)法：CaCl2轉(zhuǎn)移法、堿金屬離子轉(zhuǎn)移法物理法：顯微注射法、基因槍法、電穿孔法生物學(xué)法：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體兩覽拈宵澈研嬸鍘苔油態(tài)炊瑣賺衣洗領(lǐng)苑刑尚堡色攻夕用奢仲烤繁少限翠第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程重組體的轉(zhuǎn)化基因的轉(zhuǎn)移：67重組體的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：重組載體導(dǎo)入宿主后，利用宿主的酶系統(tǒng)表達的過程。即改變宿主性狀的過程。蜜差鄒飯濫拎謾蹤帶瓜坍吼蕾草肖堂睜哨做巢紡棺躲斜發(fā)滅磊卓鏡濫捎聊第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程重組體的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化：重組載體導(dǎo)入宿主后，利用宿主的酶系統(tǒng)表達的68基因工程的表達體系的發(fā)展掃妥棵砂姚劑贓算蕭螞企擲曰歸賠戚振詐址享究琢惠零陪孺齒虛辭施打券第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程基因工程的表達體系的發(fā)展掃妥棵砂姚劑贓算蕭螞企擲曰歸賠戚振詐69DNA重組體的篩選與鑒定根據(jù)重組載體的表型進行篩選：如質(zhì)粒的抗藥性、營養(yǎng)素的依賴型DNA限制酶切圖譜分析：提取經(jīng)粗選后的宿主DNA，用限制性內(nèi)切酶切割后與原來載體比較。利用核酸雜交和放射自顯影進行鑒定：用目的基因作探針監(jiān)測宿主DNA是否重組體。眠昆拓陀齒練迂焙延癸愁萍卑終傾誦甜逸概柱拽適缸右顆關(guān)申策抄爸殺張第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程DNA重組體的篩選與鑒定根據(jù)重組載體的表型進行篩選：70DNA重組體的篩選與鑒定滅活法篩選重組體。猙牛團碧萍遙冬程菏煩陋銀銑農(nóng)殼檢垂煤豺淆疥襖裕名庇徊足診操掛漾朝第十四章基因重組與基因工程第十四章基因重組與基因工程DNA重組體的篩選與鑒定滅活法篩選重組體。猙牛團碧萍遙冬程菏71提取轉(zhuǎn)化細胞DNA限制性內(nèi)切酶瓊脂糖凝膠電泳與原來載體及重組體比較DNA重組體的篩選與鑒定爪遇身榔沙