植物快速繁殖技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

植物快速繁殖技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)植物快速繁殖技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)植物快速繁殖技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)xxx公司植物快速繁殖技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)文件編號(hào)：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計(jì)，管理制度《植物快速繁殖技術(shù)》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)李國(guó)平編生態(tài)與資源工程系2014年1月8日目錄TOC\o"1-3"\p""\h\z\u前言III學(xué)生實(shí)驗(yàn)守則IV實(shí)驗(yàn)一觀賞植物種子無(wú)菌萌發(fā)與試管開花技術(shù)1實(shí)驗(yàn)二金線蓮的快速繁殖技術(shù)3實(shí)驗(yàn)三鐵皮石斛的快速繁殖技術(shù)5實(shí)驗(yàn)四一種植物的組織培養(yǎng)與快速繁殖8前言植物組織培養(yǎng)即植物無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)，又稱離體培養(yǎng)，是根據(jù)植物細(xì)胞具有全能性的理論，利用植物體離體的器官(如根、莖、葉、莖尖、花、果實(shí)等）、組織（如形成層、表皮、皮層、髓部細(xì)胞、胚乳等）或細(xì)胞（如大孢子、小孢子、體細(xì)胞等）以及原生質(zhì)體,在無(wú)菌和適宜的人工培養(yǎng)基及溫度等人工條件下，能誘導(dǎo)出愈傷組織、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的學(xué)科。近40年以來(lái)，植物組培技術(shù)已滲透到植物生理學(xué)、病理學(xué)、遺傳學(xué)、藥學(xué)、育種以及生物化學(xué)等各個(gè)研究領(lǐng)域，為快速繁育優(yōu)良品種，培育無(wú)毒苗木，進(jìn)行突變篩選培育，藥用植物工廠化生產(chǎn)，種質(zhì)保存和基因庫(kù)建立等方面開辟了新途徑，成為生物學(xué)科中的重要研究技術(shù)和手段之一?，F(xiàn)如今，植物組織培養(yǎng)技術(shù)具有保持花卉優(yōu)良性狀、培育脫毒苗木、保存種質(zhì)資源等優(yōu)勢(shì)，根據(jù)這些優(yōu)勢(shì)，植物栽培技術(shù)也被廣泛應(yīng)用于花卉的種苗繁殖與生產(chǎn)之中。學(xué)生實(shí)驗(yàn)守則一、自覺(jué)遵守紀(jì)律和各項(xiàng)規(guī)章制度，保持室內(nèi)安靜，注意環(huán)境衛(wèi)生，不吸煙、不隨地吐痰、不亂扔紙屑雜物，愛(ài)護(hù)公務(wù)。二、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)肅認(rèn)真，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。貴重、精密儀器的使用須在專人指導(dǎo)下進(jìn)行。三、愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備，厲行節(jié)約。儀器若有損壞，應(yīng)如實(shí)報(bào)告，填寫登記表。凡損壞、丟失的儀器設(shè)備，均應(yīng)查清原因，按儀器設(shè)備損壞、丟失賠償制度處理。四、實(shí)驗(yàn)物品不得隨意翻動(dòng)，嚴(yán)禁攜出室外。若需借用應(yīng)辦理借物手續(xù)。五、注意實(shí)驗(yàn)室安全，易燃易爆品的操作應(yīng)遠(yuǎn)離火源。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)束，由實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教師和管理人員檢查清點(diǎn)儀器設(shè)備，學(xué)生應(yīng)辦好交接手續(xù)，做好清潔衛(wèi)生，及時(shí)關(guān)好水電閥門，保持實(shí)驗(yàn)室和儀器的清潔整齊。實(shí)驗(yàn)一觀賞植物種子無(wú)菌萌發(fā)與試管開花技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆绽梅N子作為外植體進(jìn)行快速繁殖的方法；掌握試管花卉的培養(yǎng)技術(shù)；了解植物開花的影響因素。二、實(shí)驗(yàn)原理試管開花是指用組織培養(yǎng)的方法，使植物開花的過(guò)程在培養(yǎng)容器中完成。一般情況下，植物必須達(dá)到某種成熟階段時(shí)才能開花。自1946年羅士韋在對(duì)菟絲子莖尖培養(yǎng)時(shí)發(fā)現(xiàn)了花器官的形成后，植物組織培養(yǎng)技術(shù)已用于植物離體開花的研究。影響試管開花的因素主要有外植體，外源植物激素，營(yíng)養(yǎng)水平和環(huán)境因素等4個(gè)方面。通過(guò)改變培養(yǎng)基中外源植物激素、營(yíng)養(yǎng)水平和培養(yǎng)環(huán)境條件，可以誘導(dǎo)培養(yǎng)物在試管內(nèi)開花。試管花卉作為高新技術(shù)與工藝生產(chǎn)相結(jié)合的新生物,不僅在理論研究上有重要作用,而且可以利用成花決定因素的研究來(lái)培養(yǎng)能迅速進(jìn)入生殖階段的試管苗或有觀賞價(jià)值的試管花卉,并將這一技術(shù)直接應(yīng)用于花卉生產(chǎn)。試管花卉有較大市場(chǎng)前景,目前可以做成試管花卉的植物有石斛蘭、龍角、波露、短葉蘆薈、美麗十二卷、雞冠花、玫瑰、紅蓮、鳳梨、大花蕙蘭、狼牙掌、燕尾蘆薈、非洲紫羅蘭、下城蘆薈、金線蓮、迎春、六月雪、紅葉李、無(wú)刺火棘、紫薇、情人草、康乃馨、幸運(yùn)草、草莓、非洲菊、文心蘭等。三、實(shí)驗(yàn)器具與藥品①器材：電子天平、托盤天平、燒杯（50ml,100ml,500ml,1000ml）、量筒（1000ml,100ml,25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、藥勺、稱量紙、玻璃棒、滴管、電爐、冰箱、移液槍、pH計(jì)、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、鑷子、酒精燈、棉球、三角瓶、培養(yǎng)皿。②試劑：MS培養(yǎng)基各種母液、PP333、KT、6-BA、NAA、IAA、蔗糖、瓊脂、酒精、升汞。=3\*GB3③以矮生雞冠花品系的種子為試材。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作步驟1、培養(yǎng)基的配制①種子萌發(fā)培養(yǎng)基：ＭＳ基本培養(yǎng)基②增殖培養(yǎng)基：MS+NAA·L-1+6-BA·L-1+蔗糖20g·L-1+瓊脂10g·L-1=3\*GB3③試管開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+PP333·L-1+NAA·L-1+蔗糖20g·L-1+瓊脂10g·L-12、種子滅菌先用洗潔精洗凈種子，用自來(lái)水流水沖洗干凈；再用%HgCl2浸泡10min，最后用無(wú)菌水反復(fù)沖洗5遍。在超凈工作臺(tái)上將滅菌后的種子接種到MS培養(yǎng)基上，每三角瓶接種5-10個(gè)外植體。培養(yǎng)室條件為：光照12h·d-1、光照強(qiáng)度1500Lx、溫度25～26℃。14d后統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽率和污染率。3、增殖培養(yǎng)當(dāng)無(wú)菌苗長(zhǎng)到約2cm時(shí)，取其中約1cm芽段，接種到②增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)26d后統(tǒng)計(jì)其增殖倍數(shù)。4、開花誘導(dǎo)將高約２～３ｃｍ的試管苗，轉(zhuǎn)到=3\*GB3③試管開花誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件：日溫（２５±２）℃，夜溫（２０±２）℃，光照強(qiáng)度１５００～3０００ｌｘ，光照時(shí)間１２ｈ／ｄ，接種30d后觀察統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)開花情況。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察試驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告種子發(fā)芽率和污染率、增殖倍數(shù)和試管開花情況。六、思考題：什么是試管花卉有何開發(fā)價(jià)值影響試管開花的主要因素有哪些？

實(shí)驗(yàn)二金線蓮的快速繁殖技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆绽媒M織培養(yǎng)方法進(jìn)行金線蓮快速繁殖的技術(shù)；了解影響金線蓮快速繁殖的各種因素。二、實(shí)驗(yàn)原理金線蓮為蘭科開唇蘭屬花葉開唇蘭((Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl.)，又名金線蘭、金絲草。主要種植于我國(guó)福建、臺(tái)灣、廣東等亞熱帶及熱帶地區(qū)，素有“金草”、“神藥”等美稱。金線蓮喜歡生長(zhǎng)在潮濕、陰涼的環(huán)境中，溫度需要控制在20～28℃之間，喜散射光，最忌陽(yáng)光直射，對(duì)環(huán)境的要求比較嚴(yán)格。近年來(lái)，由于其藥用價(jià)值不斷被發(fā)掘，金線蓮人工環(huán)境中的量產(chǎn)也逐步實(shí)現(xiàn)。特別是在福建、廣東等華南地區(qū)，應(yīng)用金線蓮組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)商品金線蓮的模式不斷興起。野生金線蓮自然繁殖是用種子繁殖的，其人工繁育技術(shù)難度較大。應(yīng)用組培繁殖可大大縮短金線蓮成苗時(shí)間，顯著提高培養(yǎng)效率，降低育苗成本，是金線蓮種苗生產(chǎn)的重要方法。三、實(shí)驗(yàn)器具與藥品①器材：電子天平、托盤天平、燒杯（50ml,100ml,500ml,1000ml）、量筒（1000ml,100ml,25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、藥勺、稱量紙、玻璃棒、滴管、電爐、冰箱、移液槍、pH計(jì)、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、鑷子、酒精燈、棉球、三角瓶、培養(yǎng)皿。②試劑：MS培養(yǎng)基各種母液、KT、6-BA、NAA、IAA、蔗糖、瓊脂、酒精、升汞、香蕉汁、活性炭等。=3\*GB3③金線蓮野生種苗或試管苗。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作步驟1、培養(yǎng)基的配制①莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+BA+NAA0.5+香蕉汁100g/L②繼代增殖培養(yǎng)基：12MS+BA+NAA+香蕉汁100g/L+AC%;=3\*GB3③生根培養(yǎng)基:12MS+IBA+NAA+AC%2、莖段誘導(dǎo)將帶芽的金線蓮莖段剪成2～3cm長(zhǎng)的莖段用自來(lái)水沖洗，置飽和漂白粉上清液中浸泡15min，并用軟毛刷輕輕刷洗，沖洗干凈;在自來(lái)水下滴沖1～2h，雙蒸水沖洗2～3次，置超凈工作臺(tái)用75%酒精消毒30s，0.1%氯化汞溶液消毒10～13min，無(wú)菌水沖洗3～5次;取出要接種的材料放在滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿上，用手術(shù)刀切掉與氯化汞接觸的切口，然后將材料平放在誘導(dǎo)培養(yǎng)基面上進(jìn)行誘導(dǎo)。每瓶接種帶側(cè)芽的莖段數(shù)5個(gè)，每隔一周觀察污染情況和記錄側(cè)芽發(fā)芽狀況，30d后記錄發(fā)芽個(gè)數(shù)，并算出側(cè)芽的出芽率。3、叢生芽的增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)產(chǎn)生的高1.0～1.5cm的叢生芽從瓶中取出，切去葉片和基部褐化部分，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，每瓶接種3-5個(gè)不定芽，每隔一周觀察其污染情況及記錄增殖培養(yǎng)過(guò)程中叢生芽的增殖狀況，50d后記錄增加的不定芽的個(gè)數(shù)，計(jì)算增殖倍數(shù)。4、生根培養(yǎng)當(dāng)叢生芽長(zhǎng)至1.5～3.0cm高，2～3片葉時(shí)，將其分成單個(gè)植株，接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根。每瓶培養(yǎng)基接種5株，每隔一周觀察其污染情況及記錄叢生芽的生根狀況，30d后記錄生根株數(shù)及每株的生根數(shù)，并計(jì)算生根培養(yǎng)基下幼苗的生根率及平均生根數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察試驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告?zhèn)妊空T導(dǎo)率和污染率、叢生芽增殖倍數(shù)、試管苗生根率及平均生根數(shù)；總結(jié)金線蓮的工廠化育苗技術(shù)。六、思考題：闡述金線蓮的生物學(xué)特性、價(jià)值和育苗技術(shù)。實(shí)驗(yàn)三鐵皮石斛的快速繁殖技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆绽媒M織培養(yǎng)方法進(jìn)行鐵皮石斛快速繁殖的技術(shù)；了解影響鐵皮石斛快速繁殖的各種因素。二、實(shí)驗(yàn)原理鐵皮石斛（Dendrobiumofficinale）是一種生長(zhǎng)緩慢、自然繁殖率很低的蘭科附生植物,具有很高的藥用價(jià)值,為傳統(tǒng)名貴中藥,有“救命仙草”、“藥中黃金”之美稱。自然資源將近枯竭,已列入瀕危保護(hù)植物。鐵皮石斛種質(zhì)資源的保護(hù)和開發(fā)離不開植物組織培養(yǎng)技術(shù),組培工廠化生產(chǎn)是鐵皮石斛種植規(guī)?；幕A(chǔ)。鐵皮石斛目前關(guān)于其組織培養(yǎng)及快速繁殖的研究頗多,用于外植體的有種子、無(wú)菌苗幼苗莖段、原球莖及人工種子等;再生植株的獲得途徑主要有種子→原球莖→小植株,種子→原球莖→無(wú)菌苗莖段→小植株,種子→愈傷組織→原球莖→小植株等。由于鐵皮石斛組培周期長(zhǎng),如何有效解決快繁中存在的組培苗生產(chǎn)成本高、移栽苗成活率低、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)程度低等問(wèn)題是維持鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的基石，是開發(fā)利用鐵皮石斛資源的一個(gè)重要方面。三、實(shí)驗(yàn)器具與藥品①器材：電子天平、托盤天平、燒杯（50ml,100ml,500ml,1000ml）、量筒（1000ml,100ml,25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、藥勺、稱量紙、玻璃棒、滴管、電爐、冰箱、移液槍、pH計(jì)、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、鑷子、酒精燈、棉球、三角瓶、培養(yǎng)皿。②試劑：MS培養(yǎng)基各種母液、KT、6-BA、NAA、IAA、蔗糖、瓊脂、酒精、升汞、香蕉汁、活性炭等。=3\*GB3③鐵皮石斛野生種苗或試管苗。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作步驟1、培養(yǎng)基的配制①莖段啟動(dòng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:(1)MS+6BAL，單位下同)+NAA+2g/L活性碳；(2)MS+6BA1.0+NAA0.1+2g/L活性碳。②石斛繼代增殖培養(yǎng)基為:(3)3g/L花寶3號(hào)+6-BA+NAA+2g/L活性碳；(4)3g/L花寶3號(hào)+6-BA2.5+NAA+2g/L活性碳。=3\*GB3③生根培養(yǎng)基為:(5)1/2MS+IBA0.5+2g/L活性碳。以上培養(yǎng)基均加%蔗糖,%瓊脂,~5.4,培養(yǎng)溫度(25±2℃),光照度1500~2000lx,光照時(shí)間12h/d。2、無(wú)菌材料的處理從植株上切下長(zhǎng)2~5cm的幼嫩莖段,在流水下沖洗,用刷子蘸少許洗衣粉水輕輕刷洗,并經(jīng)自來(lái)水充分洗凈。在超凈工作臺(tái)上將莖段放置在75%的酒精中消毒30s后,再用0.1%的升汞水溶液浸泡8~10min,無(wú)菌水沖洗5~6次。3、原球莖的誘導(dǎo)用解剖刀將鐵皮石斛的幼嫩莖段切下,接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基(1)中培養(yǎng)，每瓶接種帶側(cè)芽的莖段數(shù)5個(gè)，每隔一周觀察污染情況和記錄原球莖誘導(dǎo)狀況。15~20d后,外植體開始萌動(dòng),莖段膨大,切面及頂部組織形成疏松組織。繼續(xù)培養(yǎng)20d后,轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基(2)中,切面及頂部膨大組織的表面形成凹凸不平的顆粒物,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),顆粒物長(zhǎng)大形成直徑約1~2mm的原球莖顆粒物，30d后記錄原球莖個(gè)數(shù)，并算出原球莖誘導(dǎo)率。4、原球莖的增殖將培養(yǎng)基(2)中形成的原球莖轉(zhuǎn)入到培養(yǎng)基(3)、(4)中,30d后記錄原球莖個(gè)數(shù)，并算出原球莖增殖率。原球莖在培養(yǎng)基(3)、(4)中都有增殖,培養(yǎng)基(4)增殖速度很快,增殖倍數(shù)可達(dá)3~4倍,同時(shí),部分原球莖開始分化出芽點(diǎn)并長(zhǎng)出1~2片小葉,原球莖的增殖與芽分化同時(shí)進(jìn)行,表明高濃度的激素組合可促進(jìn)原球莖的增殖與分化。待芽數(shù)量較多時(shí),將高1~2cm、帶有2~3片葉的小芽切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基(5)上進(jìn)行生根培養(yǎng)。5、生根與移栽小苗在生根培養(yǎng)基(5)進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)。培養(yǎng)30d左右,基部開始出現(xiàn)2~3條約1cm長(zhǎng)的白色根,隨后逐漸伸長(zhǎng),45d統(tǒng)計(jì)生根率當(dāng)苗高3cm以上、具3~4片葉時(shí),便可出瓶移栽。移栽前,將生根瓶苗打開瓶蓋,移至常溫下煉苗7d,然后,將瓶苗取出,洗去附著在根部的培養(yǎng)基,用0.01%的高錳酸鉀溶液浸泡8~10min,栽種于已滅菌的碎樹皮基質(zhì)中(移栽前澆透水),放置在遮光度50%~60%、濕度達(dá)80%以上的溫室中,2個(gè)月