遺傳實(shí)驗(yàn)人外周血培養(yǎng)與染色體制備課件

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)外周血淋巴細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的原理和方法；2.利用培養(yǎng)后進(jìn)行分裂的細(xì)胞制備人類染色體標(biāo)本；3.利用人類染色體核型分析軟件進(jìn)行核型分析。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)外周血淋巴細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的原理和方法；1二、實(shí)驗(yàn)原理：

1、植物血凝素的作用

外周血中的淋巴細(xì)胞幾乎都是處在G0或G1期，一般情況下是不分裂的。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入植物血凝素(PHA)時(shí)，這種小淋巴細(xì)胞受到刺激后轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)而開始進(jìn)行有絲分裂。二、實(shí)驗(yàn)原理：1、植物血凝素的作用2

2、秋水仙素的作用：

秋水仙素(colchicine)可以抑制細(xì)胞紡錘體的形成，使處在分裂的細(xì)胞停留在中期。因此利用秋水仙素處理可以獲得許多同步的中期分裂細(xì)胞。使用秋水仙素處理會(huì)引起染色體在一定程度上的收縮，因此在處理時(shí)間和濃度上要合適。2、秋水仙素的作用：3

3、低滲的原理：

徐道覺等于1952年發(fā)現(xiàn)在固定細(xì)胞之前使用低滲液進(jìn)行處理，可以使細(xì)胞的核膜吸水膨脹，滴片后細(xì)胞破裂，染色體分散開來(lái)，在顯微鏡下易于觀察和統(tǒng)計(jì)，染色效果也明顯提高。這種技術(shù)被廣泛采用后，使人類染色體分析技術(shù)得到了發(fā)展。3、低滲的原理：44、核型和帶型：核型(karyotype)：

是指染色體組在有絲分裂中期的表型,是染色體數(shù)目、大小、形態(tài)特征的總和。在對(duì)染色體進(jìn)行測(cè)量計(jì)算的基礎(chǔ)上,進(jìn)行分組、排隊(duì)、配對(duì),并進(jìn)行形態(tài)分析的過(guò)程叫核型分析。將一個(gè)染色體組的全部染色體逐條按其特征畫下來(lái)，再按長(zhǎng)短、形態(tài)等特征排列起來(lái)的圖稱為核型模式圖，它代表一個(gè)物種的核型模式。4、核型和帶型：核型(karyotype)：5帶型（bandingpattern）

即染色體帶型。借助細(xì)胞學(xué)的特殊處理程序，使染色體顯現(xiàn)出深淺不同的染色帶。染色帶的數(shù)目、部位、寬窄和著色深淺均具有相對(duì)穩(wěn)定性，所以每一條染色體都有固定的分帶模式，即稱帶型。常用的顯帶技術(shù)所顯示的帶有Q帶、G帶、C帶、R帶、T帶等。就每一種分帶技術(shù)而言，每一染色體的帶型是高度專一和恒定的。帶型（bandingpattern）6三、實(shí)驗(yàn)用具及試劑：實(shí)驗(yàn)儀器及用具：恒溫培養(yǎng)箱、離心機(jī)、恒溫水浴箱、冰箱、顯微鏡、顯微數(shù)碼攝像系統(tǒng)、染色體分析儀；培養(yǎng)瓶、注射器、微量移液器、槍頭、吸管、離心管(10ml)、載玻片、燒杯、量筒。.三、實(shí)驗(yàn)用具及試劑：實(shí)驗(yàn)儀器及用具：.72.實(shí)驗(yàn)試劑：

外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基

2%碘酒

75%酒精

20μg/ml秋水仙素

0.075mol/LKCl溶液甲醇冰醋酸

Giemsa原液

1/15mol/L磷酸緩沖液

2.實(shí)驗(yàn)試劑：外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基8四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、采血：將皮膚常規(guī)消毒后靜脈采血約0.5ml。2、種血及培養(yǎng)：將采到的血樣立即接種到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每個(gè)培養(yǎng)瓶接28或30滴（約0.5ml），輕輕搖勻后將培養(yǎng)瓶放在37℃溫箱中培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)過(guò)程中，每天應(yīng)輕輕搖動(dòng)兩次培養(yǎng)瓶。

3、秋水仙素處理：在終止培養(yǎng)前2-3小時(shí)，向培養(yǎng)瓶中加20μg/ml的秋水仙素3滴，輕輕搖勻后繼續(xù)培養(yǎng)到72小時(shí)。四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、采血：將皮膚常規(guī)消毒后靜脈采血約0.594、制片：（1）離心：從溫箱中取出培養(yǎng)瓶，用吸管將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入10ml的刻度離心管內(nèi)。2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。（2）低滲：棄去上清液。加入37℃預(yù)熱的0.075mol/LKCl低滲液8ml，用吸管輕輕吹打勻，放在37℃恒溫水浴中40分鐘。(此時(shí)配固定液：甲醇225ml+冰醋酸75ml)2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。（3）預(yù)固定：棄去上清液，在離心管中加入現(xiàn)配的預(yù)溫的甲醇-冰醋酸(3:1)固定液約1ml，輕輕混勻,室溫固定5分鐘。4、制片：10（4）再次離心：2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。（5）第一次固定：棄上清液，加入固定液約8ml，立即用吸管吹打使之成細(xì)胞懸液，室溫固定20分鐘。2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。（6）第二次固定：同第一次固定。（7）棄上清液，加入固定液0.5ml，用吸管吹打使均勻后制成細(xì)胞懸液。用封口膜封口，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

遺傳實(shí)驗(yàn)人外周血培養(yǎng)與染色體制備課件11【案例】5、因?yàn)闊o(wú)論是瓜還是果，它在生長(zhǎng)過(guò)程中，都離不開噴灑農(nóng)藥，而肥料和農(nóng)藥都含有對(duì)人體有害甚至有毒的物質(zhì)。(2)已經(jīng)起泡的不要將泡弄破，以免感染，可在光溜溜周圍用酒精涂擦，然后用布包上或干燥外露，不要隨便上消炎粉、黃醬等，避免到醫(yī)院時(shí)治療時(shí)造成困難。作為管理者，一個(gè)最重要的工作職責(zé)就是招聘新雇員。與候選人面對(duì)面的交流是檢驗(yàn)他們的能力經(jīng)歷，為單位和空缺崗位物色合適人選的最佳時(shí)機(jī)。崗位描述應(yīng)將工作頭銜和上下級(jí)關(guān)系包括在內(nèi)。描述主要職責(zé)時(shí)，將期望新雇員取得的成績(jī)具體化。描述日常工作時(shí)，盡量使用諸如“聯(lián)絡(luò)”或“發(fā)展”之類的動(dòng)詞，這樣新雇員就會(huì)清楚自己需要做什么。1.2.1界定職責(zé)（4）出外是認(rèn)識(shí)新朋友的好機(jī)會(huì)，新舊朋友多接觸，就能鍛煅自己的交際能力。（5）在做跳馬、跳箱等跨躍訓(xùn)練時(shí)，器械前要有跳板，器械后要有保護(hù)墊，同時(shí)要有老師和同學(xué)在器械旁站立保護(hù)。一是我國(guó)國(guó)內(nèi)目前的經(jīng)濟(jì)能力有限；第八部分飲食衛(wèi)生安全過(guò)程：１.值日或大掃除時(shí)，不用掃除工具亂扔亂打。做好充分的準(zhǔn)備之后，銷售人員就可以制定開發(fā)客戶的方案。制定方案時(shí)，目標(biāo)一定要明確，即明確要尋找的客戶。

（8）滴片：在30-40cm高處將細(xì)胞懸液滴在預(yù)冷的載玻片上，注意動(dòng)作應(yīng)迅速，避免載片升溫。（9）染色：用10%吉姆薩染液扣染30分鐘，染色結(jié)束后用清水將浮色沖去，干燥后即可進(jìn)行鏡檢。（10）照相：在顯微鏡下尋找分散較好的分裂相(核型)，再置于顯微照相儀下拍攝照片，并保存。（11）核型分析：應(yīng)用核型分析軟件，進(jìn)行染色體核型分析。【案例】（8）滴片：在30-40cm高處將細(xì)胞懸液滴在預(yù)12遺傳實(shí)驗(yàn)人外周血培養(yǎng)與染色體制備課件13核型分析儀及核型分析核型分析儀及核型分析14五、注意事項(xiàng):

1、秋水仙素處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，分裂細(xì)胞多，染色體短?。环粗?，則少而細(xì)長(zhǎng)。都不宜觀察形態(tài)及計(jì)數(shù)。故秋水仙素的濃度及時(shí)間要準(zhǔn)確掌握。

2、低滲使紅細(xì)胞膜破裂，淋巴細(xì)胞膨脹，低滲處理濃度及時(shí)間要適當(dāng)。且低滲后混勻細(xì)胞一定要輕，否則引起膜破裂、染色體散失。

3、離心前配平，離心速度過(guò)高，細(xì)胞團(tuán)不易打散；反之，細(xì)胞易丟失。

4、固定液應(yīng)在使用前臨時(shí)配制。

5、載玻片一定要潔凈，否則染色體分散不好。五、注意事項(xiàng):

1、秋水仙素處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，分裂細(xì)胞多15六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：

染色體核型分析：人類每個(gè)體細(xì)胞有46條染色體，22對(duì)常染色體和一對(duì)性染色體，男性為46，XY；女性為46，XX。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：染色體核型分析：人類每16A組（No.1～3）：是最大的一組染色體，它們的著絲粒在中部或幾乎在中部，為中部著絲粒染色體；B組（N0.4～5）：為兩對(duì)大的亞中部著絲粒染色體，它們有明顯的長(zhǎng)臂和短臂；C組（N0.6～12+X）：為中等大小的亞中部著絲粒染色體，它們大小相差不多，X染色體大小介于期間，一般難以區(qū)分；D組（N0.13～15）：為中等大小的近端著絲粒染色體，它們的一個(gè)重要形態(tài)特征是隨體，隨體是一對(duì)著色很深的小球，處于短臂的末斷，隨體與短臂之間的區(qū)域很少著色；

人類染色體分組A組（No.1～3）：是最大的一組染色體，它們的著絲粒在中17E組（N0.16～18）：包括一對(duì)中著絲粒染色體（16）和兩對(duì)亞中著絲粒染色體（17、18）；F組（N0.19～20）：為兩對(duì)小的中部著絲粒染色體；G組（N0.21～22+Y）：為最小的一組近端著絲粒染色體，在N0.21～22的短臂上可見隨體。Y染色體常呈現(xiàn)異固縮狀態(tài)，著色更深，可以識(shí)別。

人類染色體核型分析結(jié)果

E組（N0.16～18）：包括一對(duì)中著絲粒染色體（16）和兩18重要參數(shù)：（1）染色體的相對(duì)長(zhǎng)度（2）臂比率（3）著絲點(diǎn)指數(shù)重要參數(shù)：（1）染色體的相對(duì)長(zhǎng)度19遺傳實(shí)驗(yàn)人外周血培養(yǎng)與染色體制備課件20七、作業(yè)及思考題：1、將分散良好的標(biāo)本進(jìn)行顯微照相；2、觀察人類染色體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；3、對(duì)比男性和女性的染色體標(biāo)本，比較異同；4、總結(jié)做好本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵因素。七、作業(yè)及思考題：1、將分散良好的標(biāo)本進(jìn)行顯微照相；21八、參考文獻(xiàn)：醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基礎(chǔ)與臨床.程在玉，倫玉蘭.山東：青島出版社，1993.遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教程.王建波，方呈祥等編.武漢：武漢出版社，2004.外周血培養(yǎng)染色體失敗的原因分析.李慶，王秉儀，洪美玲等.解放軍醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào)，1999(1)：72.八、參考文獻(xiàn)：醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基礎(chǔ)與臨床.程在玉，倫玉蘭.山東：青22核型核型23帶型帶型243、過(guò)渡：為了保證交通安全，除了以上這些必要的交通措施外。國(guó)家還制定了相關(guān)的法律規(guī)定，這就是《中華人民共和國(guó)道路交通管理?xiàng)l例》。汽車銷售流程、汽車銷售業(yè)績(jī)的好壞直接決定著企業(yè)的利益。面對(duì)激烈的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)，銷售人員東一榔頭西一棒槌的不規(guī)范行為，會(huì)直接導(dǎo)致銷售業(yè)績(jī)不佳和客戶的流失。其中很多客戶是因?yàn)閷?duì)企業(yè)的銷售和服務(wù)不滿意而流失的。導(dǎo)水槽2、師小結(jié)并補(bǔ)充相關(guān)知識(shí)。1同學(xué)們，知道地震是一種怎樣的自然現(xiàn)象嗎？指名學(xué)生簡(jiǎn)單的說(shuō)說(shuō)自己所了解的地震。1.7.4確定面試名單1.9.1選擇面試地點(diǎn)（1）上衣、褲子口袋里不要裝鑰匙、小刀等堅(jiān)硬、尖銳鋒利的物品。2、用紅藥水涂傷口，用創(chuàng)口貼、干凈的布或手絹敷蓋，防止傷口感染。(3)經(jīng)口引起中毒者，在昏迷不清醒時(shí)不得引吐，如神志清醒者，應(yīng)及早引吐、洗胃、導(dǎo)泄或?qū)ΠY使用解毒劑。非正式面試：圍著一張大圓桌面試創(chuàng)造一種隨和的氛圍。返回3、過(guò)渡：為了保證交通安全，除了以上這些必要的交通措施外。國(guó)25

正常男性核型GABCDEF返回正常男性核型GABCDEF返回26二、實(shí)驗(yàn)原理：

1、植物血凝素的作用

外周血中的淋巴細(xì)胞幾乎都是處在G0或G1期，一般情況下是不分裂的。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入植物血凝素(PHA)時(shí)，這種小淋巴細(xì)胞受到刺激后轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)而開始進(jìn)行有絲分裂。二、實(shí)驗(yàn)原理：1、植物血凝素的作用27帶型（bandingpattern）

即染色體帶型。借助細(xì)胞學(xué)的特殊處理程序，使染色體顯現(xiàn)出深淺不同的染色帶。染色帶的數(shù)目、部位、寬窄和著色深淺均具有相對(duì)穩(wěn)定性，所以每一條染色體都有固定的分帶模式，即稱帶型。常用的顯帶技術(shù)所顯示的帶有Q帶、G帶、C帶、R帶、T帶等。就每一種分帶技術(shù)而言，每一染色體的帶型是高度專一和恒定的。帶型（bandingpattern）28四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、采血：將皮膚常規(guī)消毒后靜脈采血約0.5ml。2、種血及培養(yǎng)：將采到的血樣立即接種到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每個(gè)培養(yǎng)瓶接28或30滴（約0.5ml），輕輕搖勻后將培養(yǎng)瓶放在37℃溫箱中培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)過(guò)程中，每天應(yīng)輕輕搖動(dòng)兩次培養(yǎng)瓶。

3、秋水仙素處理：在終止培養(yǎng)前2-3小時(shí)，向培養(yǎng)瓶中加20μg/ml的秋水仙素3滴，輕輕搖勻后繼續(xù)培養(yǎng)到72小時(shí)。四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、采血：將皮膚常規(guī)消毒后靜脈采血約0.5294、制片：（1）離心：從溫箱中取出培養(yǎng)瓶，用吸管將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入10ml的刻度離心管內(nèi)。2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。（2）低滲：棄去上清液。加入37℃預(yù)熱的0.075mol/LKCl低滲液8ml，用吸管輕輕吹打勻，放在37℃恒溫水浴中40分鐘。(此時(shí)配固定液：甲醇225ml+冰醋酸75ml)2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。（3）預(yù)固定：棄去上清液，在離心管中加入現(xiàn)配的預(yù)溫的甲醇-冰醋酸(3:1)固定液約1ml，輕輕混勻,室溫固定5分鐘。4、制片：30核型分析儀及核型分析核型分析儀及核型分析31一、消防安全教育與培訓(xùn)由防火負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)組織，利用放錄像、板報(bào)、宣傳畫、標(biāo)語(yǔ)、授課等各種形式，根據(jù)不同季節(jié)、節(jié)假日的特點(diǎn)，結(jié)合各種火災(zāi)事故案例，積極主動(dòng)、深入持久地開展宣傳教育工作，使員工提高防火的警惕性，提高自防自救能力。7．班主任應(yīng)每日按時(shí)做好學(xué)生點(diǎn)名工作，了解學(xué)生出席情況。發(fā)現(xiàn)學(xué)生未按時(shí)到校，在第一時(shí)間通知其監(jiān)護(hù)人。1.供應(yīng)商簡(jiǎn)介。注明公司辦公地址、注冊(cè)資金、資產(chǎn)總額、職工人數(shù)、年銷售額以及公司優(yōu)勢(shì)等內(nèi)容。⑥液料中固含量對(duì)液滴尺寸的影響：固含量增加，顆粒尺寸隨之增加。新生入學(xué)應(yīng)當(dāng)提交體檢證明。學(xué)校建立學(xué)生健康檔案。（3）浸出成分?jǐn)U散階段⒈談判小組內(nèi)部討論的情況和意見必須保密，任何人不得以任何形式透露給供應(yīng)商或與談判有關(guān)的單位或個(gè)人。消防安全管理人職責(zé)為提高浸提效能，增加浸提成分的溶解度，增加制劑的穩(wěn)定性，以及去除或減少某些雜質(zhì)，特于浸提溶劑中加入浸提輔助劑。常用的浸提輔助劑有酸、堿、甘油及表面活性劑等。1、加熱：首先開啟離心機(jī)，然后開啟引風(fēng)機(jī)，15秒后開啟電加熱器，并檢查是否漏電（用電筆），如正常即進(jìn)行筒身預(yù)熱，因熱風(fēng)預(yù)熱決定干燥設(shè)備的蒸發(fā)能力，在不影響被干燥物料的質(zhì)量前提下，應(yīng)盡可能提高進(jìn)風(fēng)溫度，如為熱敏性物料或粘度較大熔點(diǎn)低物料應(yīng)適當(dāng)降低。一般預(yù)熱溫度250℃左右，此時(shí)貯料罐內(nèi)的物料也進(jìn)行預(yù)熱。預(yù)熱時(shí)，干燥室頂部安放噴霧頭處，干燥室底部接管處及旋風(fēng)分離器下料口處必須堵住，以免冷風(fēng)進(jìn)入干燥室，降低預(yù)熱效率。嚴(yán)格建立危險(xiǎn)化學(xué)品、放射物質(zhì)的購(gòu)買、保管、使用、登記、注銷等制度，保證將危險(xiǎn)化學(xué)品、放射物質(zhì)存放在安全地點(diǎn)。七、 消防安全管理人應(yīng)該報(bào)當(dāng)?shù)毓蚕揽剖覀浒浮Ｖ匾獏?shù)：（1）染色體的相對(duì)長(zhǎng)度（2）臂比率（3）著絲點(diǎn)指數(shù)一、消防安全教育與培訓(xùn)由防火負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)組織，利用放錄像、板報(bào)32一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)外周血淋巴細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的原理和方法；2.利用培養(yǎng)后進(jìn)行分裂的細(xì)胞制備人類染色體標(biāo)本；3.利用人類染色體核型分析軟件進(jìn)行核型分析。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)外周血淋巴細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的原理和方法；33二、實(shí)驗(yàn)原理：

1、植物血凝素的作用

外周血中的淋巴細(xì)胞幾乎都是處在G0或G1期，一般情況下是不分裂的。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入植物血凝素(PHA)時(shí)，這種小淋巴細(xì)胞受到刺激后轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)而開始進(jìn)行有絲分裂。二、實(shí)驗(yàn)原理：1、植物血凝素的作用34

2、秋水仙素的作用：

秋水仙素(colchicine)可以抑制細(xì)胞紡錘體的形成，使處在分裂的細(xì)胞停留在中期。因此利用秋水仙素處理可以獲得許多同步的中期分裂細(xì)胞。使用秋水仙素處理會(huì)引起染色體在一定程度上的收縮，因此在處理時(shí)間和濃度上要合適。2、秋水仙素的作用：35

3、低滲的原理：

徐道覺等于1952年發(fā)現(xiàn)在固定細(xì)胞之前使用低滲液進(jìn)行處理，可以使細(xì)胞的核膜吸水膨脹，滴片后細(xì)胞破裂，染色體分散開來(lái)，在顯微鏡下易于觀察和統(tǒng)計(jì)，染色效果也明顯提高。這種技術(shù)被廣泛采用后，使人類染色體分析技術(shù)得到了發(fā)展。3、低滲的原理：364、核型和帶型：核型(karyotype)：

是指染色體組在有絲分裂中期的表型,是染色體數(shù)目、大小、形態(tài)特征的總和。在對(duì)染色體進(jìn)行測(cè)量計(jì)算的基礎(chǔ)上,進(jìn)行分組、排隊(duì)、配對(duì),并進(jìn)行形態(tài)分析的過(guò)程叫核型分析。將一個(gè)染色體組的全部染色體逐條按其特征畫下來(lái)，再按長(zhǎng)短、形態(tài)等特征排列起來(lái)的圖稱為核型模式圖，它代表一個(gè)物種的核型模式。4、核型和帶型：核型(karyotype)：37帶型（bandingpattern）

即染色體帶型。借助細(xì)胞學(xué)的特殊處理程序，使染色體顯現(xiàn)出深淺不同的染色帶。染色帶的數(shù)目、部位、寬窄和著色深淺均具有相對(duì)穩(wěn)定性，所以每一條染色體都有固定的分帶模式，即稱帶型。常用的顯帶技術(shù)所顯示的帶有Q帶、G帶、C帶、R帶、T帶等。就每一種分帶技術(shù)而言，每一染色體的帶型是高度專一和恒定的。帶型（bandingpattern）38三、實(shí)驗(yàn)用具及試劑：實(shí)驗(yàn)儀器及用具：恒溫培養(yǎng)箱、離心機(jī)、恒溫水浴箱、冰箱、顯微鏡、顯微數(shù)碼攝像系統(tǒng)、染色體分析儀；培養(yǎng)瓶、注射器、微量移液器、槍頭、吸管、離心管(10ml)、載玻片、燒杯、量筒。.三、實(shí)驗(yàn)用具及試劑：實(shí)驗(yàn)儀器及用具：.392.實(shí)驗(yàn)試劑：

外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基

2%碘酒

75%酒精

20μg/ml秋水仙素

0.075mol/LKCl溶液甲醇冰醋酸

Giemsa原液

1/15mol/L磷酸緩沖液

2.實(shí)驗(yàn)試劑：外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基40四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、采血：將皮膚常規(guī)消毒后靜脈采血約0.5ml。2、種血及培養(yǎng)：將采到的血樣立即接種到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每個(gè)培養(yǎng)瓶接28或30滴（約0.5ml），輕輕搖勻后將培養(yǎng)瓶放在37℃溫箱中培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)過(guò)程中，每天應(yīng)輕輕搖動(dòng)兩次培養(yǎng)瓶。

3、秋水仙素處理：在終止培養(yǎng)前2-3小時(shí)，向培養(yǎng)瓶中加20μg/ml的秋水仙素3滴，輕輕搖勻后繼續(xù)培養(yǎng)到72小時(shí)。四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、采血：將皮膚常規(guī)消毒后靜脈采血約0.5414、制片：（1）離心：從溫箱中取出培養(yǎng)瓶，用吸管將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入10ml的刻度離心管內(nèi)。2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。（2）低滲：棄去上清液。加入37℃預(yù)熱的0.075mol/LKCl低滲液8ml，用吸管輕輕吹打勻，放在37℃恒溫水浴中40分鐘。(此時(shí)配固定液：甲醇225ml+冰醋酸75ml)2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。（3）預(yù)固定：棄去上清液，在離心管中加入現(xiàn)配的預(yù)溫的甲醇-冰醋酸(3:1)固定液約1ml，輕輕混勻,室溫固定5分鐘。4、制片：42（4）再次離心：2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。（5）第一次固定：棄上清液，加入固定液約8ml，立即用吸管吹打使之成細(xì)胞懸液，室溫固定20分鐘。2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。（6）第二次固定：同第一次固定。（7）棄上清液，加入固定液0.5ml，用吸管吹打使均勻后制成細(xì)胞懸液。用封口膜封口，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

遺傳實(shí)驗(yàn)人外周血培養(yǎng)與染色體制備課件43【案例】5、因?yàn)闊o(wú)論是瓜還是果，它在生長(zhǎng)過(guò)程中，都離不開噴灑農(nóng)藥，而肥料和農(nóng)藥都含有對(duì)人體有害甚至有毒的物質(zhì)。(2)已經(jīng)起泡的不要將泡弄破，以免感染，可在光溜溜周圍用酒精涂擦，然后用布包上或干燥外露，不要隨便上消炎粉、黃醬等，避免到醫(yī)院時(shí)治療時(shí)造成困難。作為管理者，一個(gè)最重要的工作職責(zé)就是招聘新雇員。與候選人面對(duì)面的交流是檢驗(yàn)他們的能力經(jīng)歷，為單位和空缺崗位物色合適人選的最佳時(shí)機(jī)。崗位描述應(yīng)將工作頭銜和上下級(jí)關(guān)系包括在內(nèi)。描述主要職責(zé)時(shí)，將期望新雇員取得的成績(jī)具體化。描述日常工作時(shí)，盡量使用諸如“聯(lián)絡(luò)”或“發(fā)展”之類的動(dòng)詞，這樣新雇員就會(huì)清楚自己需要做什么。1.2.1界定職責(zé)（4）出外是認(rèn)識(shí)新朋友的好機(jī)會(huì)，新舊朋友多接觸，就能鍛煅自己的交際能力。（5）在做跳馬、跳箱等跨躍訓(xùn)練時(shí)，器械前要有跳板，器械后要有保護(hù)墊，同時(shí)要有老師和同學(xué)在器械旁站立保護(hù)。一是我國(guó)國(guó)內(nèi)目前的經(jīng)濟(jì)能力有限；第八部分飲食衛(wèi)生安全過(guò)程：１.值日或大掃除時(shí)，不用掃除工具亂扔亂打。做好充分的準(zhǔn)備之后，銷售人員就可以制定開發(fā)客戶的方案。制定方案時(shí)，目標(biāo)一定要明確，即明確要尋找的客戶。

（8）滴片：在30-40cm高處將細(xì)胞懸液滴在預(yù)冷的載玻片上，注意動(dòng)作應(yīng)迅速，避免載片升溫。（9）染色：用10%吉姆薩染液扣染30分鐘，染色結(jié)束后用清水將浮色沖去，干燥后即可進(jìn)行鏡檢。（10）照相：在顯微鏡下尋找分散較好的分裂相(核型)，再置于顯微照相儀下拍攝照片，并保存。（11）核型分析：應(yīng)用核型分析軟件，進(jìn)行染色體核型分析?！景咐浚?）滴片：在30-40cm高處將細(xì)胞懸液滴在預(yù)44遺傳實(shí)驗(yàn)人外周血培養(yǎng)與染色體制備課件45核型分析儀及核型分析核型分析儀及核型分析46五、注意事項(xiàng):

1、秋水仙素處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，分裂細(xì)胞多，染色體短小；反之，則少而細(xì)長(zhǎng)。都不宜觀察形態(tài)及計(jì)數(shù)。故秋水仙素的濃度及時(shí)間要準(zhǔn)確掌握。

2、低滲使紅細(xì)胞膜破裂，淋巴細(xì)胞膨脹，低滲處理濃度及時(shí)間要適當(dāng)。且低滲后混勻細(xì)胞一定要輕，否則引起膜破裂、染色體散失。

3、離心前配平，離心速度過(guò)高，細(xì)胞團(tuán)不易打散；反之，細(xì)胞易丟失。

4、固定液應(yīng)在使用前臨時(shí)配制。

5、載玻片一定要潔凈，否則染色體分散不好。五、注意事項(xiàng):

1、秋水仙素處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，分裂細(xì)胞多47六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：

染色體核型分析：人類每個(gè)體細(xì)胞有46條染色體，22對(duì)常染色體和一對(duì)性染色體，男性為46，XY；女性為46，XX。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：染色體核型分析：人類每48A組（No.1～3）：是最大的一組染色體，它們的著絲粒在中部或幾乎在中部，為中部著絲粒染色體；B組（N0.4～5）：為兩對(duì)大的亞中部著絲粒染色體，它們有明顯的長(zhǎng)臂和短臂；C組（N0.6～12+X）：為中等大小的亞中部著絲粒染色體，它們大小相差不多，X染色體大小介于期間，一般難以區(qū)分；D組（N0.13～15）：為中等大小的近端著絲粒染色體，它們的一個(gè)重要形態(tài)特征是隨體，隨體是一對(duì)著色很深的小球，處于短臂的末斷，隨體與短臂之間的區(qū)域很少著色；

人類染色體分組A組（No.1～3）：是最大的一組染色體，它們的著絲粒在中49E組（N0.16～18）：包括一對(duì)中著絲粒染色體（16）和兩對(duì)亞中著絲粒染色體（17、18）；F組（N0.19～20）：為兩對(duì)小的中部著絲粒染色體；G組（N0.21～22+Y）：為最小的一組近端著絲粒染色體，在N0.21～22的短臂上可見隨體。Y染色體常呈現(xiàn)異固縮狀態(tài)，著色更深，可以識(shí)別。

人類染色體核型分析結(jié)果

E組（N0.16～18）：包括一對(duì)中著絲粒染色體（16）和兩50重要參數(shù)：（1）染色體的相對(duì)長(zhǎng)度（2）臂比率（3）著絲點(diǎn)指數(shù)重要參數(shù)：（1）染色體的相對(duì)長(zhǎng)度51遺傳實(shí)驗(yàn)人外周血培養(yǎng)與染色體制備課件52七、作業(yè)及思考題：1、將分散良好的標(biāo)本進(jìn)行顯微照相；2、觀察人類染色體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；3、對(duì)比男性和女性的染色體標(biāo)本，比較異同；4、總結(jié)做好本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵因素。七、作業(yè)及思考題：1、將分散良好的標(biāo)本進(jìn)行顯微照相；53八、參考文獻(xiàn)：醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基礎(chǔ)與臨床.程在玉，倫玉蘭.山東：青島出版社，1993.遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教程.王建波，方呈祥等編.武漢：武漢出版社，2004.外周血培養(yǎng)染色體失敗的原因分析.李慶，王秉儀，洪美玲等.解放軍醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào)，1999(1)：72.八、參考文獻(xiàn)：醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基礎(chǔ)與臨床.程在玉，倫玉蘭.山東：青54核型核型55帶型帶型563、過(guò)渡：為了保證交通安全，除了以上這些必要的交通措施外。國(guó)家還制定了相關(guān)的法律規(guī)定，這就是《中華人民共和國(guó)道路交通管理?xiàng)l例》。汽車銷售流程、汽車銷售業(yè)績(jī)的好壞直接決定著企業(yè)的利益。面對(duì)激烈的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)，銷售人員東一榔頭西一棒槌的不規(guī)范行為，會(huì)直接導(dǎo)致銷售業(yè)績(jī)不佳和客戶的流失。其中很多客戶是因?yàn)閷?duì)企業(yè)的銷售和服務(wù)不滿意而流失的。導(dǎo)水槽2、師小結(jié)并補(bǔ)充相關(guān)知識(shí)。1同學(xué)們，知道地震是一種怎樣的自然現(xiàn)象嗎？指名學(xué)生簡(jiǎn)單的說(shuō)說(shuō)自己所了解的地震。1.7.4確定面試名單1.9.1選擇面試地點(diǎn)（1）上衣、褲子口袋里不要裝鑰匙、小刀等堅(jiān)硬、尖銳鋒利的物品。2、用紅藥水涂傷口，用創(chuàng)口貼、干凈的布或手絹敷蓋，防止傷口感染。(3)經(jīng)口引起中毒者，在昏迷不清醒時(shí)不得引吐，如神志清醒者，應(yīng)及早引吐、洗胃、導(dǎo)泄或?qū)ΠY使用解毒劑。非正式面試：圍著一張大圓桌面試創(chuàng)造一種隨和的氛圍。返回3、過(guò)渡：為了保證交通安全，除了以上這些必要的交通措施外。國(guó)57

正常男性核型GABCDEF返回正常男性核型GABCDEF返回58二、實(shí)驗(yàn)原理：

1、植物血凝素的作用

外周血中的淋巴細(xì)胞幾乎都是處在G0或G1期，一般情況下是不分裂的。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入植物血凝素(PHA)時(shí)，這種小淋巴細(xì)胞受到刺激后轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)而開始進(jìn)行有絲分裂。二、實(shí)驗(yàn)原理：1、植物血凝素的作用59帶型（bandingpattern）

即染色體帶型。借助細(xì)胞學(xué)的特殊處理程序，使染色體顯現(xiàn)出深淺不同的染色帶。染色帶的數(shù)目、部位、寬窄和著色深淺均具有相對(duì)穩(wěn)定性，所以每一條染色體都有固定的分帶模式，即稱帶型。常用的顯帶技術(shù)所顯示的帶有Q帶、G帶、C帶、R帶、T帶等。就每一種分帶技術(shù)而言，每一染色體的帶型是高度專一和恒定的。帶型（bandingpattern）60四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、采血：將皮膚常規(guī)消毒后靜脈采血約