研究生分子生物學(xué)復(fù)習(xí)思考題總結(jié)(校對版)

2021級研究生分子生物學(xué)復(fù)習(xí)思考題總結(jié)目錄(本學(xué)期共15次課有思考題)第一次總論人的基因組TOC\o"1-3"\u1.舉例說明人的基因組成或結(jié)構(gòu)變化引起的相關(guān)疾病……………2 2.從哪些方面進(jìn)行疾病相關(guān)基因的功能研究？ 23.以你的觀點(diǎn)，你認(rèn)為基因組醫(yī)學(xué)給我們帶來了什么？ 2第二次基因1.什么是基因表達(dá)?試述基因表達(dá)變化的特點(diǎn)及其調(diào)控對生物體的重要性。 32.真核生物中，基因的表達(dá)受不同水平的調(diào)控，請列舉其中三種。 33舉例說明DNA甲基化與腫瘤的關(guān)系 4第三次基因工程1.什么是基因工程(上游研究〕？它包括哪幾個(gè)主要步驟？ 42.什么是限制性核酸內(nèi)切酶？舉例說明。 53.什么是質(zhì)粒？理想質(zhì)粒載體應(yīng)具備什么條件？ 5第四次基因表達(dá)產(chǎn)物純化及活性測定1.試述外源基因在原核體系中的表達(dá)需要具備的條件，及影響外源基因表達(dá)的因素 52.蛋白質(zhì)的別離純化技術(shù)依據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)分為哪幾大類，請列舉其中的一類，談?wù)勊脑砑皯?yīng)用。第五次組織工程 61.組織工程的三個(gè)重要組成局部以及它們的作用是什么？ 62.種子細(xì)胞類型及其各自的優(yōu)點(diǎn)是什么？ 73.舉例說明組織工程技術(shù)可用于那些組織修復(fù)〔要求簡述構(gòu)建過程〕？ 7第六次干細(xì)胞1.干細(xì)胞應(yīng)具備哪些生物學(xué)特點(diǎn)？ 82.干細(xì)胞的不對稱分裂 83.細(xì)胞全能性定義 94.證明分化成熟體細(xì)胞的全能性 9第七次信號轉(zhuǎn)導(dǎo)1.什么是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)？其根本途徑如何 92.肝細(xì)胞對胰高血糖素或腎上腺素的反響 91.什么是表觀遺傳學(xué)？它主要研究什么內(nèi)容？ 112.什么是甲基化，在調(diào)控基因表達(dá)過程中起什么作用？ 113.什么是基因印記？它的主要特征是什么？ 11第八次ＲＮＡ干擾機(jī)制及其應(yīng)用1.siRNA: 112.MiRNA 123.Dicerprotein 124.RISC: 125.PTGS 126.分析SuGuo的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 127.說明RNAi的作用機(jī)制 12第九次基因打靶和遺傳修飾動(dòng)物模型1. 與構(gòu)建質(zhì)粒載體相比，為什么重組胚胎干細(xì)胞要經(jīng)歷陰性篩選過程。簡述更昔洛韋〔ganciclovir〕的作用機(jī)制？ 13第十次腫瘤的基因診斷及治療1.原癌基因活化的機(jī)制 142.p53基因的作用機(jī)制 153.腫瘤基因診斷的根本策略 154.基因治療的根本程序 16第十一次細(xì)胞凋亡1.什么是凋亡？ 162.細(xì)胞凋亡有哪兩條主要途徑？ 16Bcl-2家族的分類和結(jié)構(gòu)特征 164：P53基因在細(xì)胞DNA損傷中的作用 17第1２次線粒體醫(yī)學(xué)1.簡述線粒體與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 182. 簡述線粒體遺傳的特點(diǎn) 18第十三次蛋白質(zhì)分子建模1. 簡述蛋白質(zhì)分子設(shè)計(jì)原理 182. 簡述蛋白質(zhì)分子設(shè)計(jì)原那么 19第十四次組學(xué)〔轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)〕191.選擇一種自己所感興趣的疾病類型，并運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，自選角度進(jìn)行研究，闡述該研究的目的、研究過程及意義。2.總結(jié)真核細(xì)胞中非編碼RNA的種類和各自的特點(diǎn)以及它們在基因表達(dá)調(diào)控中所承當(dāng)?shù)墓δ堋５谑宕握n表觀遺傳學(xué)20什么是表觀遺傳學(xué)。它主要研究的內(nèi)容是什么？什么是甲基化？在調(diào)控基因表達(dá)過程中起什么作用？什么是基因印記？它的主要特征是什么？W3a總論1舉例說明人的基因組成或結(jié)構(gòu)變化引起的相關(guān)疾病(要求：1.特定某個(gè)基因名稱、定位、大小及組成等根本特征。2.基因組成或結(jié)構(gòu)變化的過程、結(jié)果和表型)。疾?。簢?yán)重復(fù)合免疫缺陷病〔XL-SCID〕名稱：受體γ鏈(γc)基因突變引起。定位：編碼基因位于Xq12～13.1組成：γc基因8個(gè)外顯子的135種基因突變，其中5個(gè)突變熱點(diǎn);最常見的突變類型是單個(gè)堿基置換(錯(cuò)義突變和無義突變)，其次為剪接部位突變、缺失和插入突變結(jié)果：該基因編碼的產(chǎn)物為白介素〔如IL-4，IL-21〕。這些白介素和受體涉及了很多T,B細(xì)胞的分化和常熟。當(dāng)基因突變時(shí)，無功能蛋白質(zhì)產(chǎn)物生成，導(dǎo)致白介素信號的廣泛缺失，進(jìn)而引起免疫系統(tǒng)功能的喪失。2.從哪些方面進(jìn)行疾病相關(guān)基因的功能研究？在確定了相關(guān)基因時(shí)可以從基因轉(zhuǎn)錄，翻譯及調(diào)控等方面對其功能進(jìn)行研究。功能基因組學(xué)是利用結(jié)構(gòu)基因組所提供的信息，開展和應(yīng)用新的實(shí)驗(yàn)手段，通過在基因組水平上全面分析基因的功能，使得生物學(xué)研究從對單一基因轉(zhuǎn)向多個(gè)基因或蛋白質(zhì)的研究同時(shí)進(jìn)行系統(tǒng)研究的科學(xué)。比方有基因治療，基因工程藥物開發(fā)。藥物靶標(biāo)研究及化學(xué)新藥方面。基因功能研究的主要方法：1通過動(dòng)物模型研究人類基因的功能；2通過蛋白質(zhì)相互作用研究基因的功能；3通過定點(diǎn)突變技術(shù)研究基因的功能；4通過基因表達(dá)譜和表型變化研究基因的功能3.以你的觀點(diǎn)，你認(rèn)為基因組醫(yī)學(xué)給我們帶來了什么？10多年前開始的人類基因組方案將改變生物學(xué)的歷史。它使人們了解基因在人類疾病中的作用,研究出合理的方案預(yù)防這種疾病或?qū)⒓膊p至最輕。從它的開始至今,基因圖譜分析日益詳細(xì)、質(zhì)量日益提高,尋找一個(gè)基因所需時(shí)間從數(shù)年縮至數(shù)月甚至數(shù)周,基因組的研究者們處于跨學(xué)科技術(shù)的前沿,他們不僅分析一個(gè)個(gè)基因,還分析整個(gè)基因組?；蚪M圖譜分析、測序資料以及各種分析方法,為下世紀(jì)生物醫(yī)學(xué)科研提供了堅(jiān)實(shí)的根底。這些高新技術(shù)將提供意想不到的機(jī)遇,以全新方法研究人類生物學(xué)和疾病?；蚪M學(xué)是人類基因組圖譜完成后，在2003年，紀(jì)念DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)50年時(shí)，由世界上600多名著名科學(xué)家提出的一個(gè)醫(yī)學(xué)研究新概念，它以人類基因組為根底，將生命醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)整合在一起，使基因組的研究成果迅速高效轉(zhuǎn)交應(yīng)用于臨床實(shí)際，在實(shí)現(xiàn)預(yù)測疾病預(yù)防疾病和實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療方面取得更大的突破?；蚪M技術(shù)由實(shí)驗(yàn)室進(jìn)而用于防、治時(shí),新的方法就可以使人“閱讀〞藏在個(gè)體DNA的信息,預(yù)告日后可能發(fā)生的疾病,使病人及其醫(yī)生能夠及早預(yù)防。但另一面這些信息又會(huì)泄露個(gè)人的隱私,所以在這方面需要研究立法。識別出人體基因的變異,醫(yī)生們就能夠?qū)⒓膊≡敿?xì)地分為更精確的亞類,據(jù)此因人而異地治療病人。同一種疾病的患者,不同病人對藥物的療效不同、毒性反響不同(因?yàn)樗拗鞯囊恍┮蜃邮芷渚幋a基因的影響),這就形成了根據(jù)基因變異預(yù)告藥物治療應(yīng)答的遺傳藥理學(xué)。基因組醫(yī)學(xué)將可能影響的重大醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有:診斷學(xué),/惡性腫瘤,,器官移植,精神疾病,心血管疾病.心血管疾病制藥學(xué)醫(yī)學(xué)倫理學(xué).治療學(xué)…W3b基因表達(dá)調(diào)控1.什么是基因表達(dá)?試述基因表達(dá)變化的特點(diǎn)及其調(diào)控對生物體的重要性。基因表達(dá)的定義：基因表達(dá)是指從DNA到蛋白質(zhì)的過程。對這個(gè)過程的調(diào)稱為基因表達(dá)的調(diào)控?！布?xì)胞在生命過程中，把存儲在DNA順序中的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子〕。特點(diǎn)：1〕.組織特異性〔tissuespecificity〕——不同組織細(xì)胞中不僅表達(dá)的基因數(shù)量不同，而且基因表達(dá)的強(qiáng)度和種類也各不相同；2〕.階段特異性〔stagespecificity〕細(xì)胞分化發(fā)育的不同時(shí)期，基因表達(dá)的情況不同；3〕.與環(huán)境相適應(yīng)當(dāng)周圍的營養(yǎng)、濕度、酸度及個(gè)體條件變化時(shí)，生物體就要改變自身的基因表達(dá)狀況，以調(diào)整體內(nèi)執(zhí)行和相應(yīng)功能的蛋白質(zhì)的種類、數(shù)量，從而改變自身的代謝活動(dòng)度以適應(yīng)環(huán)境。對生物體的重要性：適應(yīng)環(huán)境、維持生長、增殖和維持個(gè)體發(fā)育與分化。生物的基因表達(dá)不是雜亂無章的，而是受著精密精確調(diào)控的。生命的遺傳信息是生物生存所必須的，而且遺傳信息的表達(dá)調(diào)控也是生命本質(zhì)所在。2.真核生物中，基因的表達(dá)受不同水平的調(diào)控，請列舉其中三種。A.轉(zhuǎn)錄前調(diào)控：基因喪失；〔原生動(dòng)物、線蟲、昆蟲和甲殼類動(dòng)物〕轉(zhuǎn)錄前調(diào)控，非洲爪蟾的卵母細(xì)胞中原有的rRNA基因約500bp，卵裂期和胚胎期需要大量的rRNA，基因會(huì)大量復(fù)制rRNA，使拷貝數(shù)到達(dá)200萬倍，擴(kuò)增約4000倍?；驍U(kuò)增〔geneamplification〕；基因重排〔generearrangement〕。DNA的甲基化〔DNAmethylation〕組蛋白修飾〔Histonemodification〕/及組蛋白的修飾。B轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控：轉(zhuǎn)錄調(diào)控是通過各種調(diào)控元件相互作用來實(shí)現(xiàn)的，調(diào)控元件主要包括順式作用元件和反式作用因子。C轉(zhuǎn)錄后調(diào)控：hnRNA的選擇性加工運(yùn)輸；mRNA前體的選擇性剪接RNA編輯；RNAiD.翻譯調(diào)控：翻譯因子的磷酸化調(diào)控；mRNA穩(wěn)定性調(diào)控E.翻譯后調(diào)控－蛋白質(zhì)修飾2為什么說轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控是基因表達(dá)調(diào)控的中心環(huán)節(jié)?因?yàn)榛虮磉_(dá)是通過轉(zhuǎn)錄和翻譯，將DNA上的遺傳信息轉(zhuǎn)變?yōu)镽NA和蛋白質(zhì)的過程，所以轉(zhuǎn)錄是基因表達(dá)的第一步，尤其是轉(zhuǎn)錄起始階段。轉(zhuǎn)錄起始受到嚴(yán)格的控制，轉(zhuǎn)錄起始的重要元件是啟動(dòng)子，，它必須與RNA聚合酶準(zhǔn)確地結(jié)合才有活性。此處，順勢作用元件和反式作用因子，這個(gè)過程還將受到一系列轉(zhuǎn)錄因子的相互作用，這些轉(zhuǎn)錄因子決定著靶因基因轉(zhuǎn)錄的速度和數(shù)量。因?yàn)槭潜磉_(dá)的初始階段，可以防止那些不需要的轉(zhuǎn)錄所造成的資源浪費(fèi)。3舉例說明DNA甲基化與腫瘤的關(guān)系通常DNA的正常甲基化與正常胚胎發(fā)育生長等有關(guān)，影響基因表達(dá)，調(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，與DNA損傷和修復(fù)過程有密切的關(guān)系。還參與了DNA復(fù)制和包裝及DNA片段的轉(zhuǎn)移等。腫瘤的甲基化狀態(tài)改變包括基因組整體甲基化水平降低、正常非甲基化CpG島的高甲基化和維持甲基化模式酶的調(diào)節(jié)失控。DNA的甲基化修飾通過改變基因的表達(dá)，參與了細(xì)胞的生長、發(fā)育過程及X染色體失活等的調(diào)控。在細(xì)胞正常發(fā)育基因表達(dá)模式以及基因組穩(wěn)定性中起著至關(guān)重要的作用。一旦異常，在胚胎時(shí)期，基因組范圍的DNA甲基化模式異常會(huì)導(dǎo)致胚胎死亡。而在成體中異常甲基化那么意味著疾病，辭別是腫瘤的發(fā)生。癌基因甲基化被激活，抑癌基因高甲基化被沉默。W4a基因工程1.什么是基因工程(上游研究〕？它包括哪幾個(gè)主要步驟？定義：將不同生物體的核酸分子在體外經(jīng)過酶切、連接，構(gòu)建成重組的核酸分子，再把它導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)，使外源基因在受體細(xì)胞中表達(dá)步驟：1〕獲取基因：從復(fù)雜的生物有機(jī)體基因中，經(jīng)過酶切消化或PCR擴(kuò)增等方法，別離出帶有目的基因的DNA片段。2〕克隆載體構(gòu)建：在體外，將帶有目的基因的外源DNA片段連接到能夠自我復(fù)制，并帶有選擇標(biāo)記的載體分子上，形成重組DNA分子－－克隆載體?？寺≥d體轉(zhuǎn)化：將克隆載體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，并與之一起增殖。4〕克隆載體篩選：從大量的細(xì)胞繁殖群體中，篩選出獲得了克隆載體的受體細(xì)胞克隆。5〕克隆載體鑒定：從這些篩選出來的受體細(xì)胞克隆中提取已經(jīng)得到擴(kuò)增的目的基因，并做酶切、序列分析等鑒定。6〕表達(dá)載體構(gòu)建和表達(dá)：將目的基因克隆到表達(dá)載體上，導(dǎo)入宿主細(xì)胞，使之在新的遺傳背景下實(shí)現(xiàn)功能表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的物質(zhì)。2.什么是限制性核酸內(nèi)切酶？舉例說明。又稱為限制性內(nèi)切酶或限制酶。是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割雙鏈DNA的酶。(如：BamH，EcoRI和EcoRII，HindII和HindIII)。通常所指限制性內(nèi)切酶即Ⅱ型。1〕限制性內(nèi)切酶Ⅰ特異識別，隨機(jī)切割；2〕限制性內(nèi)切酶Ⅱ特異識別，定點(diǎn)切割；3〕限制性內(nèi)切酶Ⅲ特異識別，定點(diǎn)切割如限制酶AluⅠ能專一地識別DNA的特定的堿基順序并將DNA切斷的內(nèi)切酶，識別序列的特點(diǎn)，AG↓CT并在箭頭處將其切開。EcoiⅠ切割G↓AATTC的G后酶切位點(diǎn)。特點(diǎn)：1專一；2常由4-6個(gè)堿基組成；3具有回文序列。經(jīng)切割可以生成平頭末端或粘性末端?？梢援a(chǎn)生相同的粘性末端的的不同限制酶稱作同尾酶。3.什么是質(zhì)粒？理想質(zhì)粒載體應(yīng)具備什么條件？A定義：染色體外，能獨(dú)立復(fù)制，能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子B理想質(zhì)粒的條件：.質(zhì)粒較小〔3—5Kb)：小質(zhì)粒通?？截悢?shù)較多，外源DNA容量較大,容易轉(zhuǎn)化，容易別離，不易斷裂，容易鑒定帶選擇標(biāo)記：對抗菌素的抗性，Amp,Tet,Kana,Neo,互補(bǔ)有單一限制性酶切位點(diǎn)：(多克隆位點(diǎn)MCS〕單一的限制性酶切位點(diǎn)可供外源DNA定點(diǎn)插入。多個(gè)不同的單一限制性酶切位點(diǎn)，可有選擇地供帶有不同末端的外源基因插入。具有復(fù)制起始點(diǎn)〔Ori)：質(zhì)粒DNA增殖所必不可少的結(jié)構(gòu)。作為表達(dá)載體，還要有啟動(dòng)子和終止子序列有一定的非必要區(qū)：插入外源DNA不影響復(fù)制拷貝數(shù)高，抗剪切力強(qiáng)W4b基因的表達(dá)及蛋白質(zhì)純化試述外源基因在原核體系中的表達(dá)需要具備的條件，及影響外源基因表達(dá)的因素外源基因應(yīng)具備的條件：1〕編碼區(qū)不含插入序列，〔mRNA-cDNA〕；2〕位于啟動(dòng)子下游，方向一致，原有的讀碼框不變；；3〕含起始密碼子〔AUG〕、終止密碼子〔TAA〕；4〕轉(zhuǎn)錄出的mRNA必須有SD序列，調(diào)整SD序列與第一個(gè)AUG間的距離〔因?yàn)闀?huì)對轉(zhuǎn)譯效率有影響〕；5〕增強(qiáng)產(chǎn)物的穩(wěn)定性〔如：融合蛋白、信號肽〕；6〕選擇系統(tǒng)偏好的簡并密碼。B.影響因素：1)啟動(dòng)子的強(qiáng)弱〔主要因素〕；2)基因的劑量；3)RNA轉(zhuǎn)譯效率〔SD互補(bǔ)、AUG-SD距離及序列、AUG前后核苷酸序列的適宜性〕；4)密碼子；5)表達(dá)產(chǎn)物的大??；6)產(chǎn)物的穩(wěn)定性2.蛋白質(zhì)的別離純化技術(shù)依據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)分為哪幾大類，請列舉其中的一類，談?wù)勊脑砑皯?yīng)用。A分類：溶解度差異：硫酸銨沉淀法、鹽析、鹽滲；分子大小不同：透析；超過濾；離心；凝膠過濾〔分子篩層析〕；蛋白質(zhì)分子帶電性質(zhì)不同：電泳；離子交換層析；蛋白質(zhì)吸附性質(zhì)不同：吸附柱層析；吸附薄層層析；蛋白質(zhì)的特異性配體：親和層析。B舉例電泳原理：在一定PH值下，細(xì)胞外表帶有凈的正或負(fù)電荷，能在外加電場的作用下發(fā)生泳動(dòng)，向正級或負(fù)極移動(dòng)。各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種蛋白所帶電荷的電量不同，故在一定的電場中的泳動(dòng)速度也不同?！灿绊戭w粒電泳遷移率的因素：緩沖液，電場，支持介質(zhì)〕類型：SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，等電點(diǎn)聚集電泳，毛細(xì)管電泳。應(yīng)用：電泳的類型很多，應(yīng)用范圍也很廣，如SDS,常用于蛋白質(zhì)分子量的測定。目前，雙向凝膠電泳已成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。離子交換層析a原理：離子交換以一種不溶的惰性物質(zhì)為支持物，通過化學(xué)反響〔酯化、氧化和醚化等〕共價(jià)引入帶電基團(tuán)。引入正電基團(tuán)的離子交換劑為陰離子交換劑；而引入負(fù)電基團(tuán)的離子交換劑為陽離子交換劑。(pH<pI+,陽離子交換劑;pH>pI-,陰離子交換劑)b支持物:樹脂、纖維素、葡聚糖凝膠C應(yīng)用：別離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)，也可用于別離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子W5a組織工程及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用組織工程的三個(gè)重要組成局部以及它們的作用是什么？生物材料性質(zhì)：良好的生物相容性和生物降解性、三維多孔立體結(jié)構(gòu)、可加工性和一定的機(jī)械強(qiáng)度、良好的材料-細(xì)胞界面、良好的消毒性能分類：天然材料〔膠原、糖胺聚糖、甲殼素、海藻酸鹽、蠶絲等〕人工合成材料〔聚乳酸〔PLA〕、聚羥基乙酸〔PGA〕等〕作用：與正常具有特定生物活性的細(xì)胞相結(jié)合，形成細(xì)胞攀附生長的支架種子細(xì)胞分類：干細(xì)胞〔胚胎干細(xì)胞;成體干細(xì)胞〕構(gòu)建出在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上與正常組織來源相似的組織3〕構(gòu)建環(huán)境〔體內(nèi)構(gòu)建，體外構(gòu)建，體外+體內(nèi)構(gòu)建〕提供組織形成與材料降解的場所。種子細(xì)胞類型及其各自的優(yōu)點(diǎn)是什么？胚胎干細(xì)胞：優(yōu)點(diǎn)：全能性缺點(diǎn)：平安性？倫理性？；成體干細(xì)胞：優(yōu)點(diǎn)：獲取相對容易；源于患者自身的成體干細(xì)胞防止了移植排斥反響和使用免疫抑制劑；理論上，成體干細(xì)胞致瘤風(fēng)險(xiǎn)低，而且所受倫理學(xué)爭議較少；具有多向分化潛能。缺點(diǎn)：無法迅速大量增殖，受成體細(xì)胞組織制約組織來源的細(xì)胞:優(yōu)點(diǎn)：構(gòu)建出的組織在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上與正常組織比擬接近缺點(diǎn)：體外培養(yǎng)易老化、不易擴(kuò)增，會(huì)造成供區(qū)部位的組織缺損和功能障礙舉例說明組織工程技術(shù)可用于那些組織修復(fù)〔要求簡述構(gòu)建過程〕？有如膀胱、氣管、皮膚、軟骨等。人耳鼠的制備流程：首先獲取軟骨細(xì)胞并在體外培養(yǎng)擴(kuò)增，同時(shí)用PGA或其他材料制備外耳型的支架。當(dāng)軟骨細(xì)胞擴(kuò)增到一定數(shù)量后就種到支架上，再在體外繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間后，植入祼鼠背部皮下。組織工程耳軟骨這種方法相對于傳統(tǒng)手術(shù)而言，可能只需要兩次手術(shù)，取材除了軟骨外，還可以抽取骨髓或脂肪在體外誘導(dǎo)成為軟骨細(xì)胞，就防止了手術(shù)取軟骨對病人造成的痛苦。這一流程事實(shí)上也是眾多組織構(gòu)建的根本流程。也就是說，如果建骨，那么就要取細(xì)胞接種在支架上，體外培養(yǎng)一段時(shí)間后植入體內(nèi)缺損處。用途：燒傷皮膚的修復(fù)〔Integra、Dermagraft、Apligraf、安體膚等〕過程：Dermagraft:新生兒包皮成纖維細(xì)胞+PLA/PGA↓培養(yǎng)14-17天成纖維細(xì)胞大量增殖并分泌膠原、纖維黏連蛋白、蛋白聚糖、生長因子等↓形成由成纖維細(xì)胞、ECM和可降解生物材料構(gòu)成的人工真皮W5b干細(xì)胞干細(xì)胞應(yīng)具備哪些生物學(xué)特點(diǎn)？干細(xì)胞是人體內(nèi)最原始的細(xì)胞，具有很強(qiáng)的再生能力，在干細(xì)胞因子和多種白細(xì)胞介素的聯(lián)合作用下，可誘導(dǎo)分化出各種類型的細(xì)胞。干細(xì)胞是具有自我更新能力、高度增殖和多向分化潛能的細(xì)胞。A：自我更新能力：干細(xì)胞可不對稱分裂為1個(gè)子代干細(xì)胞和1個(gè)功能細(xì)胞，從而使組織和器官保持生長和衰退的動(dòng)態(tài)平衡，但干細(xì)胞的分裂實(shí)際是相對不對稱的，干細(xì)胞在其發(fā)育期間也能夠?qū)ΨQ性地分裂以擴(kuò)增它們的數(shù)量。B：高度增殖能力：因干細(xì)胞數(shù)量不多，所以其高度增殖的生物學(xué)特性有其重要意義：體內(nèi)：如造血干細(xì)胞通過高度擴(kuò)增，可補(bǔ)充由于細(xì)胞正常衰老死亡而喪失的血細(xì)胞。體外：體外擴(kuò)增干細(xì)胞是干細(xì)胞研究和應(yīng)用的前提和關(guān)鍵。因此，高度擴(kuò)增的生物學(xué)特性不但對干細(xì)胞的研究和應(yīng)用有重要作用，而且對機(jī)體正常功能的維持也起著重要作用。C：多能性或全能性－分化：干細(xì)胞具有分化為多種細(xì)胞類型的潛能，但不同干細(xì)胞的分化潛能有所不同?！才咛ジ杉?xì)胞：全能性神經(jīng)干細(xì)胞：多能性〕干細(xì)胞的不對稱分裂：一種細(xì)胞分裂的方式，就是指分裂的方式是不對稱性質(zhì)的，母細(xì)胞產(chǎn)生的兩個(gè)子細(xì)胞的類型各不相同〔產(chǎn)生一個(gè)子代干細(xì)胞和一個(gè)功能細(xì)胞〕。W5b細(xì)胞分化1.定義：指個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞后代之間在形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化組成和功能上向?qū)Ｒ恍院吞禺愋苑较蜷_展，逐漸產(chǎn)生穩(wěn)定性差異的過程。2細(xì)胞分化被稱為基因選擇性表達(dá)的原因：細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因選擇性表達(dá)，即奢侈基因的表達(dá)使細(xì)胞合成特異蛋白質(zhì)?！渤旨一颍褐笇?dǎo)合成細(xì)胞維持生存所必須的根底蛋白質(zhì)的基因。如合成組蛋白、膜蛋白、核糖體蛋白、細(xì)胞周期蛋白等的基因。奢侈基因：指導(dǎo)合成細(xì)胞分化的各種特異蛋白質(zhì)的基因。如合成肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白、角蛋白、血紅蛋白等的基因。)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)主要表現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平上，其中以轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)更為重要。A：轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)：〔1〕DNA甲基化：DNA甲基化與基因轉(zhuǎn)錄抑制密切相關(guān)〔2〕活化染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的特異調(diào)控區(qū)：Dnasel敏感位點(diǎn)常是轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合部位，與基因轉(zhuǎn)錄活性密切相關(guān)〔3〕各種調(diào)控元件調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的各種調(diào)控原件包括順式調(diào)控原件啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子等和參與啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子等DNA結(jié)合的反式調(diào)控因子〔各種轉(zhuǎn)錄因子〕?！?〕核內(nèi)RNA〔nRNA〕及選擇加工轉(zhuǎn)錄后形成的核轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為核RNAnRNA〕即不均一RNA(hnRNA)，長度和種類都大于mRNA，僅有10％～20％的nRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，成為成熟的mRNA。還有5’戴帽和3’加尾的修飾方也是細(xì)胞分化的重要機(jī)制〔5〕專一mRNA的降解mRNA的專一性降解也是轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)的一條途徑。例如哺乳動(dòng)物成紅細(xì)胞的分化過程中，早期細(xì)胞合成假設(shè)干種mRNA，但最后幾次細(xì)胞分裂時(shí)，只有珠蛋白mRNA被保存下來。B：翻譯水平的調(diào)節(jié)與轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)不同，細(xì)胞不具備專門翻譯某種mRNA而不翻譯其它mRNA的調(diào)節(jié)機(jī)制。翻譯調(diào)控通常是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的整體翻譯水平來實(shí)現(xiàn)的。細(xì)胞全能性定義：(totipotency)單個(gè)細(xì)胞在一定條件下可分化發(fā)育為完整個(gè)體的分化潛能稱為全能性。證明分化成熟體細(xì)胞的全能性：由于DNA的半保存復(fù)制和細(xì)胞的有絲分裂，從而使生物體的任何體細(xì)胞都具有了與原始的受精卵〔有性生殖過程中〕或起始細(xì)胞〔無性生殖過程中〕相同的一整套基因。受精卵或起始細(xì)胞依然可以發(fā)育成一個(gè)新的整體，那么受精卵或起始細(xì)胞具有相同的一整套基因的體細(xì)胞也就應(yīng)該能發(fā)育成為一個(gè)完整的個(gè)體即分化成熟的體細(xì)胞也是全能的。體細(xì)胞的核移植到受精卵的胞質(zhì)中時(shí)，這個(gè)具在新核的細(xì)胞可以發(fā)育為一個(gè)新的個(gè)體。這說明分化成熟的體細(xì)胞仍然保持完整的，在一定條件下的細(xì)胞全能性。多利羊的產(chǎn)生，是由分化成熟的乳腺細(xì)胞核與去核卵融合發(fā)育來的，含有乳腺細(xì)胞的遺傳物質(zhì)。W6a細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)什么是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)？其根本途徑如何？信號轉(zhuǎn)導(dǎo)定義：細(xì)胞特異識別外來信號分子，并轉(zhuǎn)化為細(xì)胞可識別的信號，經(jīng)系列級聯(lián)反響，最終引起特異生物學(xué)效應(yīng)的過程，稱為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(signaltransduction)。根本途徑：細(xì)胞內(nèi)受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)&細(xì)胞內(nèi)受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)1.離子通道受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；G蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；單次跨膜受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。2.肝細(xì)胞對胰高血糖素或腎上腺素的反響以高血糖素或腎上腺素同肝細(xì)胞外表受體特異性結(jié)合；通過激活G蛋白活化腺苷酸環(huán)化酶；激活腺苷酸環(huán)化酶催化ATP生成cAMP；cAMP同蛋白激酶A的調(diào)節(jié)亞基的別構(gòu)位點(diǎn)結(jié)合，將PKA激活；活化的PKA使糖原合成酶磷酸化從而抑制葡萄糖合成糖原；同時(shí)PKA可使磷酸化酶激酶磷酸化而促進(jìn)糖原分解為1-磷酸葡萄糖，最后生成葡萄糖進(jìn)入血液循環(huán)；CAMP反響元件結(jié)合蛋白CAMP反響元件CAMP反響元件結(jié)合蛋白CAMP反響元件W7a表觀遺傳學(xué)什么是表觀遺傳學(xué)？它主要研究什么內(nèi)容？定義：基因的DNA序列不發(fā)生改變的情況下，基因的表達(dá)水平與功能發(fā)生改變，并產(chǎn)生可遺傳的表型。不依賴于DNA序列的遺傳現(xiàn)象研究內(nèi)容：DNA甲基化修飾：基因選擇性轉(zhuǎn)錄表達(dá)的調(diào)控。主要表現(xiàn)為基因組DNA上的胞嘧啶第5位碳原子和甲基間的共價(jià)結(jié)合，胞嘧啶由此被修飾為5-甲基胞嘧啶。非編碼RNA的調(diào)控作用：基因轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控。miRNA調(diào)節(jié)大約30%的人類基因表達(dá)。miRNA可以通過靶向DNA或組蛋白修飾酶等表觀遺傳復(fù)合物而實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)作用。siRNA通過誘導(dǎo)染色質(zhì)的形成來實(shí)現(xiàn)對基因表達(dá)的調(diào)控。piRNA主要表現(xiàn)為在配子形成過程中對轉(zhuǎn)座子元件的沉默作用。是生殖細(xì)胞發(fā)育所必須的。組蛋白修飾：蛋白質(zhì)的翻譯后修飾。構(gòu)成核小體的組蛋白氨基端可以補(bǔ)多種酶進(jìn)行各種修飾，如磷酸化，乙?；谆头核鼗?。組蛋白的這類修飾可以改變DNA-組蛋白的相互作用，使染色的構(gòu)型發(fā)生改變，稱為染色質(zhì)構(gòu)型重塑。什么是甲基化，在調(diào)控基因表達(dá)過程中起什么作用？定義：在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG兩個(gè)核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基基團(tuán)的化學(xué)修飾現(xiàn)象。通常發(fā)生在5′胞嘧啶位置上作用：具有調(diào)節(jié)基因表達(dá)和保護(hù)DNA該位點(diǎn)不受特定限制酶降解的作用。什么是基因印記？它的主要特征是什么？定義：由于源自某一親本的等位基因或它所在染色體發(fā)生了表觀遺傳修飾，導(dǎo)致不同親本來源的兩個(gè)等位基因在子代細(xì)胞中表達(dá)不同。在基因組中的這類現(xiàn)象就是基因組印記。特征：1〕每一個(gè)印記基因簇由一個(gè)印記控制元件(imprintcontrolelement,ICE)所調(diào)控2.〕也稱為印記控制區(qū)域(imprintcontrolregion,ICR)或者印記中心(imprintingcentre,IC)3〕絕大多數(shù)都有CpGislands，能夠發(fā)生DNA甲基化4〕在CpGislands內(nèi)或附近通常有成簇的、有向的重復(fù)片段W7BRNAisiRNA:是一種小RNA分子〔21~25核苷酸〕，由Dicer〔RNAaseⅢ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶〕加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發(fā)與之互補(bǔ)的目標(biāo)mRNA的沉默MiRNA:大小約21～23個(gè)堿基的ssRNA,,由具有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的約70～90個(gè)堿基的ssRNA前體經(jīng)Dicer酶加工而成，具有高度的保守性，時(shí)序性和組織特異性。是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA，其大小長約20~25個(gè)核苷酸。成熟的miRNAs是由較長的初級轉(zhuǎn)錄物經(jīng)過一系列核酸酶的剪切加工而產(chǎn)生的，隨后組裝進(jìn)RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體，通過堿基互補(bǔ)配對的方式識別靶mRNA，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。最近的研究表miRNA參與各種各樣的調(diào)節(jié)途徑，包括發(fā)育、病毒防御、造血過程、器官形成、細(xì)胞增殖和凋亡、脂肪代謝等等Dicerprotein:RNaseIII家族成員之一，可特異識別dsRNA，依賴ATP逐步切割由外源導(dǎo)入或者由轉(zhuǎn)基因，病毒感染等各種方式引入的dsRNA(或pri-miRNA),將RNA降解為3’端有2個(gè)堿基突出的19-23bp的dsRNAs(siRNAs)RISC:一種RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物，通過與目標(biāo)mRNA完全或者局部的互補(bǔ)配對來實(shí)施切割或者翻譯抑制功能。siRNA組裝siRISC，miRNA組裝miRISC。RISCs包括兩種類型：切割型和不切割型,這由RISC當(dāng)中的AGO蛋白決定PTGS:Post-transcriptionalGeneSilencing:(PTGS,轉(zhuǎn)錄后基因沉默)在基因轉(zhuǎn)錄后的水平上通過對靶ＲＮＡ進(jìn)行特異性降解而使其失活。SuGuo的實(shí)驗(yàn)說明了,她將反義par-1RNA注入美麗線蟲體內(nèi)以研究該基因功能，得到子預(yù)期的結(jié)果-胚胎死亡。然后將通常用作對照的有義RNA處理完全相同的表型，有義或反義RNA單獨(dú)應(yīng)用均可以抑制基因表達(dá)，將這種dsDNA抑制基因表達(dá)現(xiàn)象稱為RNAi。SuGuo等發(fā)現(xiàn)的正義RNA抑制同源基因表達(dá)的現(xiàn)象是由于體外轉(zhuǎn)錄制備的RNA中污染子微量dsRNA而引起發(fā)。RNAi即與靶基因同源的雙鏈RNA誘導(dǎo)的特異轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象。其作用機(jī)制是雙鏈RNA被特異的核酸酶降解，產(chǎn)生干擾小RNA〔iRNA〕,這些siRNA與同源的靶RNA互補(bǔ)結(jié)合，特異性酶降解RNA，從而抑制、下調(diào)基因表達(dá)。已經(jīng)開展成為基因治療、基因結(jié)構(gòu)功能研究的快速而有效的方法：她的實(shí)驗(yàn)觀察到：senseorantisenseRNA導(dǎo)入C.Elegantworm都獲得了特定基因的沉默。說明起到直接作用的并不是senseorantisenseRNA。RNAi的作用機(jī)制：病毒基因、人工轉(zhuǎn)入基因、轉(zhuǎn)座子等外源性基因隨機(jī)整合到宿主細(xì)胞基因組內(nèi)，并利用宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄時(shí)，常產(chǎn)生一些dsRNA。宿主細(xì)胞對這些dsRNA迅即產(chǎn)生反響，其胞質(zhì)中的核酸內(nèi)切酶Dicer將dsRNA切割成多個(gè)具有特定長度和結(jié)構(gòu)的小片段RNA〔大約21～23bp〕，即siRNA。siRNA在細(xì)胞內(nèi)RNA解旋酶的作用下解鏈成正義鏈和反義鏈。繼之由反義siRNA再與體內(nèi)一些酶(包括內(nèi)切酶、外切酶、解旋酶等)結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RNA-inducedsilencingcomplex，RISC)。RISC與外源性基因表達(dá)的mRNA的同源區(qū)進(jìn)行特異性結(jié)合，RISC具有核酸酶的功能，在結(jié)合部位切割mRNA，切割位點(diǎn)即是與siRNA中反義鏈互補(bǔ)結(jié)合的兩端。被切割后的斷裂mRNA隨即降解，從而誘發(fā)宿主細(xì)胞針對這些mRNA的降解反響。W8a基因打靶和遺傳修飾動(dòng)物模型與構(gòu)建質(zhì)粒載體相比，為什么重組胚胎干細(xì)胞要經(jīng)歷陰性篩選過程。簡述更昔洛韋〔ganciclovir〕的作用機(jī)制？根本的原理

1需要被基因工程載體所替代的靶基因圖譜。編碼序列由方框標(biāo)出，其上下游側(cè)翼DNA序列也被標(biāo)明。由靶基因向兩側(cè)延伸的箭頭代表染色體上其他的連續(xù)DNA序列。接下來的步驟就是設(shè)計(jì)并構(gòu)建DNA載體，用以插入并替代染色體上的等位基因。這一載體可以包含你所選擇的任何DNA序列，用來將不同的等位基因，即研究者所要插入的目標(biāo)序列〔編碼區(qū)或非編碼區(qū)均可〕或報(bào)告基因〔例如：抗生素抗性基因或綠色熒光蛋白〕插入基因組中。但不管插入哪種序列，都需要包含一些與靶基因上下游側(cè)翼序列一致的DNA序列.除了陽性篩選標(biāo)記〔例如抗生素抗性基因〕，通常還需要在載體中參加陰性篩選標(biāo)記〔例如胸苷激酶，tk〕。通常陰性標(biāo)記位于載體上與靶基因同源的序列之外。2用于同源重組的基因工程載體圖譜。取代序列的上下游側(cè)翼序列與靶基因的上下游側(cè)翼序列一致。陰性篩選標(biāo)記tk位于載體上與靶基因同源的序列下游?；蚬こ梯d體被參加到包含靶基因的細(xì)胞中。其替代等位基因的機(jī)理還不完全清楚，但是與細(xì)胞減數(shù)分裂和有絲分裂中同源染色體在細(xì)胞板處聯(lián)會(huì)非常相似，基因工程載體能夠找到靶基因并在與之相同的DNA序列處發(fā)生同源重組〔如圖3〕。這種重組可能發(fā)生在二者相同側(cè)翼序列的任何位置，但具體位置那么由細(xì)胞本身決定，而不是人工能夠控制的。3同源重組發(fā)生前的載體與靶基因。令人驚奇的是，載體自身能夠進(jìn)入細(xì)胞核并與靶基因并排排列。這種排列的機(jī)制尚不清楚，但是在某些物種中，這種排列確實(shí)比其他物種中的更完美，酵母就是其中之一。小鼠是用于同源重組的較好的哺乳動(dòng)物系統(tǒng)，但是其中重組發(fā)生的效率不如人類細(xì)胞高。細(xì)胞發(fā)生同源重組后，新的DNA片段即目標(biāo)序列被插入了基因組中。其中只是靶基因及其上下游的一些側(cè)翼序列被載體中同源的局部所取代，基因組的其他局部并不受到影響〔如圖4〕。在載體與靶基因發(fā)生重組后，最初的靶基因序列被交換到了載體上。由于載體不能夠在細(xì)胞核中獨(dú)立地進(jìn)行復(fù)制，因此隨著細(xì)胞的分裂很快就喪失了。而被替代后的基因組那么忠實(shí)地進(jìn)行自我復(fù)制，此時(shí)新插入的目標(biāo)序列也就得以復(fù)制了。發(fā)生了同源重組的細(xì)胞〔帶有陽性篩選標(biāo)記〕可以用參加了特定抗生素的培養(yǎng)基篩選出來。需要注意的是，陰性篩選標(biāo)記并沒有通過同源重組整合到染色體中。4同源重組發(fā)生后的產(chǎn)物。此時(shí)染色體上的靶基因被載體攜帶的目標(biāo)序列所取代，同時(shí)還包括一些與載體一致的側(cè)翼序列。而靶基因那么被交換到載體上，隨著細(xì)胞的分裂而喪失。自此，插入到基因組中的目標(biāo)序列就會(huì)像其他所有序列一樣，隨著基因組的復(fù)制而被忠實(shí)地復(fù)制。如果載體與基因組上的非同源區(qū)域并排排列，就可能發(fā)生任意的非同源重組，此時(shí)載體上攜帶的陰性選擇標(biāo)記就會(huì)被整合到基因組中5非同源重組發(fā)生前的載體與靶基因。此時(shí)發(fā)生的重組是任意的。需要注意的是，在這種情況下，陰性篩選標(biāo)記被整合到了基因組中。發(fā)生了非同源重組的細(xì)胞〔如圖6〕在陽性篩選標(biāo)記的特定抗性培養(yǎng)基中能夠存活。但是，有一種藥物叫做更昔韋洛〔gancyclovir〕，能夠殺死任何攜帶有tk基因的細(xì)胞。因此，發(fā)生了同源重組的細(xì)胞就可以在抗生素與更昔韋洛同時(shí)存在的培養(yǎng)基中存活，而發(fā)生了非同源重組的細(xì)胞那么會(huì)被更昔韋洛殺死。6非同源重組發(fā)生后的產(chǎn)物。陽性和陰性篩選標(biāo)記同時(shí)進(jìn)入細(xì)胞染色體，因此更昔韋洛能夠殺死發(fā)生了非同源重組的細(xì)胞。W8b腫瘤的基因診斷和基因治療1.原癌基因活化的機(jī)制原癌基因被激活為癌基因，其激活方式多種多樣，無非是基因本身或其調(diào)控區(qū)發(fā)生子變異，導(dǎo)致基因的過度表達(dá)，或使表達(dá)產(chǎn)物活性增強(qiáng)，從而使細(xì)胞癌變。原癌基因的活化機(jī)制包括：點(diǎn)突變，在紫外線，粒子性射線，化學(xué)致癌物質(zhì)等因素的作用下，原癌基因通過點(diǎn)突變發(fā)生活化；DNA重排，包括原癌基因之間，原癌基因和非原癌基因之間的重排；LTR插入，LTR是逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組兩端的長末端重復(fù)序列，含有強(qiáng)啟動(dòng)子序列，當(dāng)它插入原癌基因啟動(dòng)子區(qū)域或鄰近部位后，可改變原癌基因的正常調(diào)控規(guī)律，導(dǎo)致原癌基因的過表達(dá)；基因擴(kuò)增，在腫瘤細(xì)胞中，原癌基因拷貝數(shù)增多，從而直接增加可用的轉(zhuǎn)錄模板數(shù)以增加基因表達(dá)。還有基因缺失，基因偶聯(lián)，甲基化水平降低?；罨?，基因編碼產(chǎn)物結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化和〔或〕表達(dá)的量增加導(dǎo)致細(xì)胞增殖信號增強(qiáng)。2.p53基因的作用機(jī)制它位于染色體17p13.1上，編碼53KD的核磷酸蛋白，此蛋白通過p21蛋白參與細(xì)胞周期的調(diào)控，對細(xì)胞的分裂和增殖起負(fù)調(diào)節(jié)作用。假設(shè)突變，那么最終使細(xì)胞生長和分化的調(diào)節(jié)失控，導(dǎo)致細(xì)胞的持續(xù)分裂和癌變。在許多惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)有p53基因的異常，提示p53基因的異?？赡芘c腺瘤的癌變有關(guān)。3.腫瘤基因診斷的根本策略策略一、淋巴造血系統(tǒng)腫瘤中,染色體異位和重排發(fā)生較為普遍。臨床上出現(xiàn)的炎癥性淋巴結(jié)腫大與淋巴瘤腫大的鑒定:在淋巴瘤細(xì)胞中，T細(xì)胞受體〔TCR〕基因和IgH基因發(fā)生重排，原來相隔數(shù)百個(gè)堿基的IgH基因和TCR基因的V區(qū)和J區(qū)基因就會(huì)靠近在一起，而炎癥增生性細(xì)胞內(nèi)就不會(huì)發(fā)生基因重排，故通過PCR擴(kuò)增可以鑒定之。檢測方法-熒光原位雜交〔FISH〕、RT-PCR等；策略二、癌基因的激活及抑癌基因的失活與腫瘤發(fā)生開展關(guān)系密切。多數(shù)腫瘤組織或腫瘤細(xì)胞中都檢測到癌基因與抑癌基因的突變。用基因診斷方法：實(shí)時(shí)PCR、印跡技術(shù)、PCR-SSCP等檢測。如ras癌基因，其激活的分子機(jī)制主要是點(diǎn)突變，因此可通過PCR-ASO、PCR-SSCP等方法。P53基因是抑癌基因，在腫瘤組織中其常發(fā)生突變而失活。因此可通過PCR-SSCP、DNA測序分析等，可檢測P53基因的突變；策略三、通過檢測腫瘤相關(guān)病毒診斷腫瘤檢測方法-核酸分子雜交、RT-PCR等檢測腫瘤標(biāo)記物診斷腫瘤；策略四、腫瘤標(biāo)記物是腫瘤組織中產(chǎn)生的與腫瘤發(fā)生開展過程相關(guān)的物質(zhì)。如腫瘤抗原、激素、酶等。肝癌—甲胎蛋白〔AFP〕結(jié)腸癌—癌胚抗原〔CEA〕檢測方法-核酸分子雜交、Westernblotting等基因治療的根本程序基因治療是在基因工程根底上開展起來的分子生物學(xué)技術(shù),基因治療的實(shí)施主要包括以下步驟：一、選擇用于治療疾病的目的基因；二、基因載體的選擇,目前應(yīng)用于基因治療的載體主要有病毒載體和非病毒載體兩種；三、靶細(xì)胞的選擇,目前應(yīng)用于基因治療的細(xì)胞僅限于人的體細(xì)胞.用于基因治療的靶細(xì)胞必須取材方便，易于在體外人工培養(yǎng)，而且細(xì)胞的壽命足夠長；四、基因轉(zhuǎn)移,在基因治療中迄今所應(yīng)用的基因轉(zhuǎn)移方法可分為兩大類：病毒方法和非病毒方法，非病毒載體主要有直接注射、磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體法和生物化學(xué)法等；五、外源基因的篩檢,可以利用基因表達(dá)產(chǎn)物的篩檢方法,也可以利用分子生物學(xué)方法篩檢外源基因；六、將目的基因?qū)塍w內(nèi),直接轉(zhuǎn)導(dǎo)入人體的靶器官的靶細(xì)胞中,取出患者體細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，將治療性基因通過病毒載體或非病毒載體轉(zhuǎn)染后，再移植到患者的特定部位和導(dǎo)入體內(nèi)。W9b細(xì)胞凋亡1.什么是凋亡？定義：細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序死亡。2.細(xì)胞凋亡有哪兩條主要途徑？細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的兩大途徑A：由死亡受體(Fas、TNFR〕介導(dǎo)的外源途徑。在這條途徑中，啟始caspase-8首先被激活B:線粒體介導(dǎo)的內(nèi)源途徑。在這條途徑中，啟始caspase-9首先被激活。Bcl-2家族的分類和結(jié)構(gòu)特征Bcl-2家族成員分為兩類A：抗細(xì)胞凋亡，如Bcl-2、Bcl-xL、Al、Bcl-w、Mcl-1。在這類分子中，都有Bcl-2同源區(qū)1-4(Bcl-2homologydomains，BH1-BH4)的結(jié)構(gòu)B：促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在這類分子中，又分為兩個(gè)亞族：①Bax亞族，如Bax、Bak、Bok，有BH1、BH2和BH3的結(jié)構(gòu)；②BH3-only亞族，如Bik、Bad、Bid、Bim，只有BH3的結(jié)構(gòu)。1988，Vaux等在依賴IL-3的B淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染Bcl-2基因能夠阻止剝奪了IL-3的B細(xì)胞的凋亡。因而，Bcl-2是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的靠阻止細(xì)胞死亡而非促進(jìn)細(xì)胞增殖起作用的癌基因。Bcl-2抗凋亡作用的機(jī)制：通過與促凋亡蛋白相互作用而抑制細(xì)胞凋亡。Bax是細(xì)胞凋亡促進(jìn)因子。Bax自身可以組成同二聚體，也可以與Bcl-2構(gòu)成異二聚體。Bcl-2與Bax蛋白量的比率決定異二聚體〔Bcl-2/Bax〕與同二聚體〔Bax/Bax〕的比值。這對決定細(xì)胞凋亡的易感性起關(guān)鍵作用。如果Bcl-2的過度表達(dá)，與BAX形成異二聚體而阻抑細(xì)胞凋亡。Bad是細(xì)胞凋亡促進(jìn)因子。Bad可以置換Bcl-2/Bax異二聚體中的Bax，使Bax游離而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Bad缺乏典型的C端跨膜結(jié)構(gòu)，說明它并非一完整膜蛋白。4：P53基因在細(xì)胞DNA損傷中的作用p53并非為所有細(xì)胞的凋亡過程所必需，但對DNA損傷而誘發(fā)的細(xì)胞凋亡卻是必不可少的。p53的兩大功能：A：使細(xì)胞在G1期停滯。當(dāng)DNA損傷后，p53首先誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入G1期，抑制細(xì)胞增殖，直至損傷的DNA修復(fù)。B:一旦DNA不能被修復(fù)，p53就會(huì)活化那些誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的基因轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞發(fā)生凋亡。W10a線粒體醫(yī)學(xué)1.簡述線粒體與醫(yī)學(xué)的關(guān)系線粒體異常與遺傳異質(zhì)的眾多疾病相關(guān)聯(lián)，累及各種器官系統(tǒng)，各個(gè)年齡段，幾乎覆蓋整個(gè)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。線粒體與自由基損傷、細(xì)胞死亡、衰老、代謝病、神經(jīng)肌肉退行、心血管病、創(chuàng)傷、腫瘤、肥胖、糖尿病等的關(guān)系已成為研究熱點(diǎn)。線粒體失調(diào)與氧化損傷、代謝病和老年病密切相關(guān)，天然線粒體營養(yǎng)素和藥物可有效發(fā)揮預(yù)防和治療作用。線粒體保存的少量細(xì)菌和病毒祖先成分對抗生素敏感〔如線粒體翻譯對氨基糖甙類和四環(huán)素敏感〕。線粒體與運(yùn)動(dòng)、營養(yǎng)和藥物的更多關(guān)系還有待深入研究。簡述線粒體遺傳的特點(diǎn)每個(gè)細(xì)胞中線粒體DNA拷貝數(shù)目可多達(dá)數(shù)千，因此，mtDNA突變所引起的細(xì)胞病變就不可能像核DNA突變引起的細(xì)胞病變那么簡單。缺失多發(fā)生于體細(xì)胞中，引起的疾病常為散發(fā)，無家族史，突變mtDNA隨年齡增長在組織細(xì)胞中逐漸積累，故誘發(fā)的疾病在一定的年齡階段表現(xiàn)并進(jìn)行性加重，缺失的大小、位置與疾病的生化表現(xiàn)和嚴(yán)重程度是否相關(guān)尚無定論；發(fā)生在生殖細(xì)胞中的mtDNA突變引起母系家族性疾病。在精卵結(jié)合時(shí)，卵母細(xì)胞擁有上百萬拷貝的mtDNA，而精子中只有很少的線粒體，受精時(shí)幾乎不進(jìn)入受精卵，因此，受精卵中的線粒體DNA幾乎全都來自于卵子，來源于精子的mtDNA對表型無明顯作用，這種雙親信息的不等量表現(xiàn)決定了線粒體遺傳病的傳遞方式不符合孟德爾遺傳，而是表現(xiàn)為母系遺傳〔maternalinheritance〕，即母親將mtDNA傳遞給她的兒子和女兒，但只有女兒能將其mtDNA傳遞給下一代，即母系遺傳。W10b蛋白質(zhì)分子建模與設(shè)計(jì)簡述蛋白質(zhì)分子設(shè)計(jì)原理。1.內(nèi)核假設(shè)。蛋白質(zhì)的獨(dú)特的折疊形