DB37-T 3421-2018混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類(lèi)藥物的測(cè)定高效液相色譜法

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DB37山 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB37/T3421—2018混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類(lèi)藥物的測(cè)定高效液相色譜法Determinationoffluoroquinolonesinmixedfeedadditives-Highperformanceliquidchromatography2018-09-14發(fā)布 2018-10-14實(shí)施山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布DB37/T3421DB37/T3421—2018II前??言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張蕓、孫延軍、張瑋、宮玲玲、李俊玲。DB37/T3421DB37/T3421—2018PAGEPAGE5混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類(lèi)藥物的測(cè)定高效液相色譜法范圍丙沙星、甲磺酸達(dá)氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星的方法。（稻殼粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、桔梗、甘草、白術(shù)、赤藥、知母、茯苓等混合）合型飼料添加劑中氟喹諾酮類(lèi)藥物的測(cè)定。0.15mg/kg0.5mg/kgmg/kg0.15mg/kg規(guī)范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備原理試樣中的氟喹諾酮類(lèi)藥物用鹽酸甲醇溶液提取，高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有說(shuō)明，所有試劑均為分析純。水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。甲醇。乙腈：色譜純。乙腈水溶液：乙腈+水=1+9，V+V。鹽酸溶液：c（HCl）=0.1mol/L9mL1000mL鹽酸甲醇溶液：鹽酸溶液（4.4）+甲醇=8+2V+V。10.56g7.87g800mLpH4.0，1000mL0.22μm氫氧化鈉溶液：c（NaOH）=30mmol/L0.12g100mLCAS見(jiàn)附錄B。（110mg(0.0001g)10mL30mmol/L61mL10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容。2℃～86Ⅰ1mL10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容。2℃～8610mL0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL，5μg/mL?，F(xiàn)用現(xiàn)配。儀器設(shè)備高效液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。0.001g0.01mg旋渦混合器。5000r/min。微孔濾膜：0.22μm，水相。樣品按GB/T20195制備試樣，粉碎過(guò)0.45mm試驗(yàn)篩，充分混勻，裝入磨口瓶中備用。試驗(yàn)步驟提取準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣2精確至0.00150mL4.5)10mLmin5000r/min離心10min0.22μm濾膜，備用。測(cè)定高效液相色譜參考條件色譜柱：C18，150mm4.6mm2.7μm流動(dòng)相：檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（4.6）+乙腈（4.2），1；流速：0.7mL/mind)柱溫：50℃；進(jìn)樣量：20μL；278nm465nm表1梯度洗脫程序時(shí)間（min）乙腈（%）檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（%）09911299120208020.19010表1梯度洗脫程序 （續(xù)）時(shí)間（min）乙腈（%）檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（%）25901025.199130991定量測(cè)定按照7.2.1給出的色譜參考條件，分別上機(jī)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（從低濃度到高濃度進(jìn)樣）和試樣溶(4.5)適當(dāng)稀釋后再進(jìn)樣分析。甲磺酸達(dá)氟沙星線性范圍0.01μg/mL～1μg/mL，諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星和沙拉沙星線性范圍0.02μg/mL～5μg/mL。氟喹諾酮類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜參見(jiàn)附錄A。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中氟喹諾酮類(lèi)藥物的含量i，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，單位為毫克每千克(mg/kg)，按式（1）計(jì)算：XVn (1)i m式中：V—提取液體積，單位為毫升（mL)；ci—試樣中氟喹諾酮類(lèi)藥物峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL)；m—試樣質(zhì)量，單位為克(g)；n—稀釋倍數(shù)。測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于這兩個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的20%。附 錄 A（資料性附錄）氟喹諾酮類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖氟喹諾酮類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)圖A.1。注：1——諾氟沙星；2——氧氟沙星；3——環(huán)丙沙星；4——甲磺酸達(dá)氟沙星；5——恩諾沙星；6——沙拉沙星。圖A.1氟喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（1.0μg/mL）附 錄 B（資料性附錄）氟喹諾酮類(lèi)藥物的純度及CAS號(hào)氟喹諾酮類(lèi)藥物的純度及CAS號(hào)見(jiàn)表B.1。表B.1氟喹諾酮類(lèi)藥物的純度及CAS序號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品名稱(chēng)純度要求CAS號(hào)1諾氟沙星≥97%