六種常見(jiàn)口腔微生物培養(yǎng)

六種常見(jiàn)口腔微生物培養(yǎng)六種常見(jiàn)口腔微生物培養(yǎng)六種常見(jiàn)口腔微生物培養(yǎng)V:1.0精細(xì)整理，僅供參考六種常見(jiàn)口腔微生物培養(yǎng)日期：20xx年X月常見(jiàn)口腔微生物培養(yǎng)【摘要】變形鏈球菌、血鏈球菌、乳桿菌、粘性放線菌、中間普氏菌、白色念珠菌是常見(jiàn)的口腔致齲菌。本實(shí)驗(yàn)主要作為大實(shí)驗(yàn)的一部分，以標(biāo)準(zhǔn)株為培養(yǎng)對(duì)象，設(shè)置了各種細(xì)菌的普通培養(yǎng)法以及外加原卟啉的培養(yǎng)基培養(yǎng)法?！娟P(guān)鍵詞】變形鏈球菌血鏈球菌乳桿菌粘性放線菌中間普氏菌白色念珠菌培養(yǎng)1材料與儀器1.1菌株選擇變形鏈球菌ATCC25175血鏈球菌ATCC10556[1]嗜酸乳桿菌ATCC4356[1][3]粘性放線菌ATCC15987[2]中間普氏菌ATCC25611[2]白色念珠菌ATCC900381.2試劑與培養(yǎng)基1.2.1磷酸緩沖液PBS1.2.2無(wú)原卟啉培養(yǎng)液：BHI液體培養(yǎng)基：將3.65gBHI粉末溶于100ml純水中，待溶解后調(diào)pH7.0，高壓滅菌，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。[3]BHI平板：3.65gBHI粉末、2.0g瓊脂溶解于100ml純水中，待溶解后調(diào)pH7.0，高壓滅菌，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。MRS液體培養(yǎng)基：3.8gMRS粉末溶解于100ml純水中，調(diào)pH6.6，高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?。[3]MRS平板：3.8gMRS粉末溶解于100ml純水中，加入2g瓊脂，調(diào)pH6.6，高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?。SDA培養(yǎng)基：蛋白胨1g，葡萄糖4g，瓊脂2g加蒸餾水至100mL，調(diào)節(jié)至pH6.2左右，121℃高壓蒸汽滅菌15min，冷卻后加青霉素（50μg/ml），倒板，置4℃?zhèn)溆?。[4]YPD液體培養(yǎng)基：蛋白胨2g，葡萄糖2g，酵母粉1g加蒸餾水至100mL，調(diào)節(jié)至pH6.5，121℃高壓蒸汽滅菌15min，冷卻后加青霉素（50μg/ml），置4℃?zhèn)溆谩4]1.2.3加原卟啉培養(yǎng)液：1.2.3.1取0.5g原卟啉=9\*ROMANIX（亦可以換成鋅原卟啉或者原卟啉二鈉鹽等形式）[5][6]，加水定容到500ml，配制成1g/L的溶液1.2.3.2在以上各種液體培養(yǎng)基中再加入0.3ml，1g/L的原卟啉溶液配成約3μg/L的培養(yǎng)基?！咀ⅲ築HI配方表：每100ml水加入牛心浸出液25ml，牛腦浸出液20ml，胰蛋白胨1.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖0.2g，鹽酸半胱氨酸溶液0.4ml，VPI鹽液5.0ml，刃天青（0.1%）5.0ml。[2]MRS培養(yǎng)液配方：每100ml純水加入胰蛋白胨1.0g，牛肉膏1.0g，酵母提取物0.5g，檸檬酸銨0.2g，葡萄糖0.2g，醋酸鈉0.5g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.058g，硫酸錳0.025g，加入吐溫-80，0.1ml.[3]本實(shí)驗(yàn)采用簡(jiǎn)易的混合粉直接配制。】1.3培養(yǎng)環(huán)境無(wú)菌、厭氧（85%N2，10%H2、5%CO2）,37℃[1]1.4主要儀器厭氧培養(yǎng)箱（Bugboxdual，America）無(wú)菌操作臺(tái)2培養(yǎng)2.1變形鏈球菌培養(yǎng)2.1.1用固體培養(yǎng)基分離純化用接種環(huán)取變形鏈球菌ATCC25175接種于BHI固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。2.1.2擴(kuò)大培養(yǎng)挑取單菌種分別接種到無(wú)原卟啉的BHI液體培養(yǎng)基與含原卟啉的BHI液體培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)。2.2血鏈球菌培養(yǎng)分離提純并擴(kuò)大培養(yǎng)血鏈球菌ATCC10556，步驟同2.1。2.3粘性放線菌培養(yǎng)分離提純并擴(kuò)大培養(yǎng)粘性放線菌ATCC15987，步驟同2.1。2.4中間普氏菌培養(yǎng)分離提純并擴(kuò)大培養(yǎng)中間普氏菌ATCC25611，步驟同2.1。2.5乳桿菌培養(yǎng)2.5.1用固體培養(yǎng)基分離純化用接種環(huán)取。。2.5.2擴(kuò)大培養(yǎng)挑取單菌種分別接種到無(wú)原卟啉的MRS液體培養(yǎng)基與含原卟啉的MRS液體培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)。2.6白色念珠菌培養(yǎng)2.6.1用固體培養(yǎng)基分離純化用接種環(huán)取白色念珠菌ATCC90038接種于SDA固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。2.6.2擴(kuò)大培養(yǎng)挑取單菌種分別接種到無(wú)原卟啉的YPD液體培養(yǎng)基與含原卟啉的YPD液體培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]陶睿.Pleurocidin及其優(yōu)化多肽抑制常見(jiàn)致齲菌的研究[D].第四軍醫(yī)大學(xué),2012.[2]楊暤.茶多酚聯(lián)用奧硝唑?qū)ρ乐芸梢芍虏【捏w外抑菌活性研究[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2012.[3]王勤花.乳酸桿菌對(duì)變形鏈球菌體外作用研究[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2012.[4]鄭璐.白色念珠菌生物被膜體外模型的建立及分析[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2010.[5]王自明,張陽(yáng)德,何剪太,林伶.藥物誘導(dǎo)大鼠大腸癌組織原卟啉Ⅸ