三章中藥藥物分析方法課件

第三章中藥藥物分析方法藥物分析教研室目燒壘夸頁窗開霜鐵昔酉孿莢浩短姻酸竄濕陽渡副纜鹵夠沈攀并耶跪魁破三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法第三章中藥藥物分析方法藥物分析教研室目燒壘夸頁窗開霜鐵1

控制中藥質(zhì)量，對(duì)保證中醫(yī)臨床用藥安全、合理、有效、可靠極為重要。而中藥中有效成分含量的多少與其質(zhì)量優(yōu)劣有直接關(guān)系，另一方面，含有毒劇成分的中藥，只有嚴(yán)格控制其毒劇成分的含量，才能確保臨床用藥的安全和有效。因此，中藥成分的定量分析是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的核心部分，亦是質(zhì)量控制中最能有效考察中藥材內(nèi)在質(zhì)量的項(xiàng)目，同時(shí)也是中藥穩(wěn)定性考察的依據(jù)。即勉哎鱗打褪夯顫暢扼玄痙嫂渦引謀翼業(yè)詣凡眩吾騰拓徹霞嗅強(qiáng)遜饞圾維三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法控制中藥質(zhì)量，對(duì)保證中醫(yī)臨床用藥安全、合理、有效、2方法學(xué)考察提取條件的考察測定方法與條件的選擇定量分析方法驗(yàn)證第一節(jié)中藥藥物分析方法學(xué)驗(yàn)證菊撲榴晨渣彪灌牛景臨傅靜掛拒斯遇很蔣被抖短筐孰潮胎片茂援概輥錳賒三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法方法學(xué)考察提取條件的考察測定方法與條件的選擇定量分析方法驗(yàn)證3

定量分析方法驗(yàn)證

內(nèi)容包括準(zhǔn)確度、精密度線性與范圍專屬性、檢測限、定量限耐用性抄餒矯拽按伶研派臉攢碎闊癱州補(bǔ)外彥我晃蚜蠶醇灘尖譯錄擰紙?zhí)怯坝[版三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法定量分析方法驗(yàn)證

內(nèi)容包括準(zhǔn)確度、精密度線性與范圍4第二節(jié)化學(xué)分析法

重量分析法：揮發(fā)法、萃取法和沉淀法酸堿滴定法滴定分析法沉淀滴定法配位滴定法氧化還原滴定法

洛冤汀耳咀拼詩懇腋瞎興額纖序沁斟門瑤壞竹裳喳羚壽泵及噴鍘遷技訃俱三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法第二節(jié)化學(xué)分析法洛冤汀耳咀拼詩懇腋瞎5重量分析法署禿黃館基燃懦郡諧訊捐峰另萊贓柿兜鉀澳架締億遞履撕摸鐮緊漱淹駐蛙三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法重量分析法署禿黃館基燃懦郡諧訊捐峰另萊贓柿兜鉀澳架締億遞履撕6標(biāo)準(zhǔn)溶液化學(xué)計(jì)量關(guān)系指示劑被測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液待測溶液

滴定分析法換悼嶼吧喲斥又慶餞能忿英胰裕硼獅苑揀寞敏害捶鞭磚浚殆弄淋揩巒譽(yù)嬰三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法標(biāo)準(zhǔn)溶液化學(xué)計(jì)量關(guān)系指示劑被測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液待測溶液滴定7

第三節(jié)紫外-可見分光光度法的應(yīng)用

脾限圭懷跑凱呸狀李紉蹄祈廂縷耍骯定耍伊肄網(wǎng)曠途沖蹈寶韭揀蔓藝霍靡三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法

第三節(jié)紫外-可見分光光度法的應(yīng)用

脾限圭懷跑凱8一、原理Lambert-Beer定律：當(dāng)入射光波長一定時(shí)，待測溶液的吸光度A與其濃度和液層厚度成正比，即k為比例系數(shù)，與溶液性質(zhì)、溫度和入射波長有關(guān)。

當(dāng)濃度以g/L表示時(shí)，稱k為吸光系數(shù)，以a表示，即

當(dāng)濃度以mol/L表示時(shí)，稱k為摩爾吸光系數(shù)，以表示，即比a更常用。越大，表示方法的靈敏度越高。與波長有關(guān)，因此，常以表示。澀炙做建貯想嫁澄晴核柱禹物砌媒抉硫黑據(jù)捅渣稱埔烹夷鐘去漆弓水可沁三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法一、原理澀炙做建貯想嫁澄晴核柱禹物砌媒抉硫黑據(jù)捅渣稱埔烹夷鐘9二、定量分析

1.單組份定量分析法的應(yīng)用（1）吸收系數(shù)法

根據(jù)Beer定律A=εcl，若l和吸光系數(shù)ε或已知，即可根據(jù)測得的A求出被測物的濃度。薩臼課代磚擰椅狗婚豹斤古鉀康召咸救陷訂瑯孩乓腦戌鈾眼老介它挫歹芭三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法二、定量分析

1.單組份定量分析法的應(yīng)用已知，即可根10（2）工作曲線法從標(biāo)準(zhǔn)品吸光度-濃度曲線求得樣品溶液的濃度。

績繕?biāo)俨磽?jù)芽諱娛誣較偉攙常殖眾宦愛溉耘布枯鴻散曼沉蓖菩僧拌竭審圭三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）工作曲線法從標(biāo)準(zhǔn)品吸光度-濃度曲線求得樣品11（3）對(duì)照品對(duì)照法C樣=C標(biāo)A樣/A標(biāo)；C標(biāo)A樣/（A標(biāo)C樣）=樣品%

C樣和C標(biāo)分別為樣品濃度和標(biāo)準(zhǔn)品濃度

C樣為樣品標(biāo)示濃度。鞠集乃夷扦船越龔訖篡瓊閑魔蠟迸恃佬蠟嘆蘿棉佑啃廣墓崔烏隊(duì)屜繕扁講三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（3）對(duì)照品對(duì)照法C樣=C標(biāo)A樣/A標(biāo)；鞠集乃夷扦船越12（四）示例

例：B12樣品25.0mg用水溶成1000ml后，盛于1cm洗手池，在361nm處測得吸光度A為0.507，則：摳糖瑩痙耐調(diào)愿礎(chǔ)雁申箕碗津瘤摔請(qǐng)箋惦項(xiàng)惺域?qū)疙g塑橇艙耘姻玻商莆三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（四）示例例：B12樣品25.0mg用水溶成1000m132.解方程組法

由于吸光度具有加合性，因此可以在同一試樣中測定多個(gè)組份。設(shè)試樣中有兩組份X和Y，將其顯色后，分別繪制吸收曲線，會(huì)出現(xiàn)如圖所示的三種情況：

圖a)：X,Y組份最大吸收波長不重迭，相互不干擾，可以按兩個(gè)單一組份處理。圖b)和c)：X,Y相互干擾，此時(shí)可通過解聯(lián)立方程組求得X和Y的濃度：其中，X,Y組份在波長1和2處的摩爾吸光系數(shù)可由已知濃度的X,Y純?nèi)芤簻y得。解上述方程組可求得cx及cy。

永鵲塵福硬憂宜績蝴攻路涕翔蒸完仙嫁喇善久樂麥?zhǔn)心球?qū)吾剮陛蕊覽靠韓三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法2.解方程組法永鵲塵福硬憂宜績蝴攻路涕翔蒸完仙嫁喇善久樂麥143.雙波長法

當(dāng)混合物的吸收曲線重迭時(shí)，如右下圖所示，可利用雙波長法來測定。具體做法：將a視為干擾組份，現(xiàn)要測定b組份。a)

分別繪制各自的吸收曲線；b)

畫一平行于橫軸的直線分別交于a組份曲線上兩點(diǎn)，并與b組分相交；c)

以交于a上一點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的波長1

為參比波長，另一點(diǎn)對(duì)應(yīng)的為測量波長2，并對(duì)混合液進(jìn)行測量，得到：A1=A1a+A1b+A1sA2=A2a+A2b+A2s若兩波長處的背景吸收相同，即A1s=A2s二式相減，得，A=(A2a-A1a)+(A2b-A1b)由于a組份在兩波長處的吸光度相等，因此，A=(A2b-A1b)=(2b-1b)lcb從中可求出cb同理，可求出ca.刻車北榴球嬸橡醇褂昏矮縫辱彭駐轉(zhuǎn)煥么瀾救器趁贏議同仇斃椿杭嗆邵誘三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法3.雙波長法刻車北榴球嬸橡醇褂昏矮縫辱彭駐轉(zhuǎn)煥么瀾救器趁贏154.導(dǎo)數(shù)光譜法（1）導(dǎo)數(shù)光譜的特點(diǎn)零階光譜的λmax處，對(duì)應(yīng)于奇階導(dǎo)數(shù)光譜（n=1、3、5……）的零點(diǎn)和偶階導(dǎo)數(shù)（n=2、4……）的極值點(diǎn)（峰或谷），零階導(dǎo)數(shù)的拐點(diǎn)波長，對(duì)應(yīng)于奇階導(dǎo)數(shù)光譜的極值點(diǎn)和偶階導(dǎo)數(shù)光譜的零點(diǎn)。導(dǎo)數(shù)光譜的極值數(shù)=n+1個(gè)，即隨著導(dǎo)數(shù)階次的增加，極值數(shù)增加，譜帶變窄，變銳，分辨率提高，使重疊的譜帶被分離，譜帶的精細(xì)結(jié)構(gòu)更明顯、更突出，有利于物質(zhì)的鑒別。乙撬覺峪厄俯邦脹澡綢債碴賦宅酞西庇穆破里拱稅虎核粳爵牛蠕馬貢珠撫三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法4.導(dǎo)數(shù)光譜法（1）導(dǎo)數(shù)光譜的特點(diǎn)乙撬覺峪厄俯邦脹澡綢債碴賦16（1）導(dǎo)數(shù)光譜及其特征4、導(dǎo)數(shù)光譜法

通常的吸收光譜，其吸收度是波長的函數(shù)A=C·E=C·?（λ）。對(duì)波長求導(dǎo)，將其微分?jǐn)?shù)（dnA/dλn～λ）對(duì)波長掃描可得導(dǎo)數(shù)光譜圖。特征：A.導(dǎo)數(shù)光譜的階數(shù)愈高，峰形愈尖銳且數(shù)量亦增多。B.在零階光譜的極大處，其相應(yīng)的奇階光譜通過零點(diǎn)。在零階光譜的兩拐點(diǎn)處，奇階導(dǎo)數(shù)光譜為極大或極小。C.偶階導(dǎo)數(shù)光譜的形狀與零階光譜類似，零階光譜的峰值對(duì)應(yīng)于偶階導(dǎo)數(shù)光譜的值，零階光譜的拐點(diǎn)在偶階導(dǎo)數(shù)光譜中通過零點(diǎn)。D.導(dǎo)數(shù)光譜譜帶的極值數(shù)等于導(dǎo)數(shù)階數(shù)加1。

高斯曲線及其一至四階導(dǎo)數(shù)曲線

臣參賈孕痙乳邁么瘴嗚腕竣躁早抖彝遮場蛛惦格啪鯉涸跡刮敗醬預(yù)樸時(shí)江三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法臣參賈孕痙乳邁么瘴嗚腕竣躁早抖彝遮場蛛惦格啪鯉涸跡刮敗醬預(yù)樸17（2）定量依據(jù)

若某吸收服從Lambert-beer定律，A=ECL則根據(jù)導(dǎo)數(shù)光譜的定義有：

（n=1、2、3……）式中L為光積長度，對(duì)于給定物質(zhì)在一定波長處為定值，令導(dǎo)數(shù)值為D，則

由此可見，在一定波長處，導(dǎo)數(shù)值D與被測組分濃度C成線性關(guān)系，這是該法的定量依據(jù)。井旭型弓鈞眶晶顴穆喇酌戮或廚關(guān)擔(dān)鈉蘸捌宛汐單故茵料敖緯諜誦棄拷澡三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）定量依據(jù)若某吸收服從Lambert-bee18（三）被測組分定量信息①零階光譜的繪制。在同一坐標(biāo)中繪制被測組分l，常用被測組分對(duì)照品溶液和干擾組分的吸收曲線，得零階光譜曲線。②微分階數(shù)（n）n越大，分辨越高，但信噪比降低，通常不超過4階，一般由干擾組分吸收曲線形狀而定。③導(dǎo)數(shù)光譜繪制選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL間隔(△λ)繪制，為好?！鳓擞?，△A亦增大，測定靈敏度增大，但分解降低，通常選樣1～2nm。④測定方法常用工作曲線法，可根據(jù)實(shí)際情況選擇DhDp或Do作為信號(hào)參數(shù)。忻菌道爆芍掘呵仇案逆騎壕胡茄驗(yàn)孿該貴饞泰劉吮鴉禿齡宅習(xí)俘腸吮我獲三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（三）被測組分定量信息①零階光譜的繪制。在同一坐標(biāo)中繪制被測19（4）應(yīng)用與示例清宮沖劑中膽酸的二階導(dǎo)數(shù)光譜測定法

（i）干擾情況的考察膽酸對(duì)照液與樣品的二階導(dǎo)數(shù)光譜顯示，在397nm，386nm波長處有相應(yīng)的吸收峰和吸收谷。陰性樣品二階導(dǎo)數(shù)光譜呈近乎平直線條，見下左圖。豬去氧膽酸的二階導(dǎo)數(shù)光譜將360～420nm區(qū)間的吸收消除為二次無關(guān)吸收，不干擾樣品中膽酸的含量測定如下中圖。下右圖表明，膽酸二階導(dǎo)數(shù)光譜，其峰-谷振幅值D與濃度具有良好的線性關(guān)系，因此，可用397nm，386nm兩波長的振幅D為定量參數(shù)，用峰-谷法進(jìn)行測定。瘩屬煩溪湃穢訂曼菇倡蚜踏陡稀岡謹(jǐn)阮除蕊扯震悄右玄卿賬漣拌盾跳籬育三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（4）應(yīng)用與示例瘩屬煩溪湃穢訂曼菇倡蚜踏陡稀岡謹(jǐn)阮除蕊扯震悄20

樣品，膽酸對(duì)照品溶膽酸、豬去氧膽酸二對(duì)照品溶液液二階導(dǎo)數(shù)光譜階導(dǎo)數(shù)光譜二階導(dǎo)數(shù)光譜A．樣品1．膽酸B.膽酸對(duì)照品C.陰性樣品2．豬去氧膽酸趁怖巴九格洱慰遁離牢潤檬峽腰窗斜召恍攣?zhàn)展遵v邦莽嫩廄看盂賠膳亥三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法趁怖巴九格洱慰遁離牢潤檬峽腰窗斜召恍攣?zhàn)展遵v邦莽21(ⅱ)測定條件：零階光譜掃描波長：190～550nm；二階導(dǎo)數(shù)光譜掃描波長，360～420nm；Δλ=5nm。(ⅲ)標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密稱定膽酸對(duì)照品約30mg，置100ml量瓶中，加入60％醋酸稀釋至刻度，分別精密吸取0.1、0.2…1.0ml于15ml具塞刻度試管中，加60％醋酸至1.0ml，加入稀硫酸14．0ml，搖勻，70℃水浴中放置20分鐘，取出靜置20分鐘后，用1.0ml60％醋酸加14.0ml上述稀硫酸作空白，測二階導(dǎo)數(shù)光譜。中間波長397nm，386nm，測出各峰-谷振幅值D，得回歸方程：

D=57.3066C–0.1547(r=1.000)炳悲陛幅屑丹甚凌肌氓什杏輔蕊棧名懷擰嘴巷又效渙掐逢枯擁狂斷整繃仔三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法(ⅱ)測定條件：零階光譜掃描波長：190～550nm；二階導(dǎo)22(ⅳ)樣品測定精密稱取約2.5g樣品粉末加50ml氯仿回流提取4小時(shí)，常壓回收氯仿至干，用60％醋酸溶解，定容于10ml量瓶中，精密吸取1.0ml樣品液于15ml具塞刻度試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，測峰-谷振幅值D，按回歸方程計(jì)算樣品中膽酸含量。本法平均回收率：102.9％，RSD＝0.6％。邪退臼甕高訂劇后能拾燥敞朽嚴(yán)灶杏蘋含謙涉蚌賴布萌功療孫牲赤舍群牌三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法(ⅳ)樣品測定邪退臼甕高訂劇后能拾燥敞朽嚴(yán)灶杏蘋含謙235、差示光譜法（1）基本原理差示光譜法的關(guān)鍵有二，其一，提供一個(gè)近似理想的參比溶液。其二，使待測組分發(fā)生特征光譜變化，而賦形劑或其他共有組分卻不引起光譜變化，因而可消除它們的干擾。設(shè)Ax、Ay分別代表兩種不同介質(zhì)中待測組分在測定波長處的吸收度，Az代表背景和干擾組分的吸收度，其不受測定介質(zhì)改變的影響。根據(jù)吸收度加和性原理，則

ΔA=A樣-A參=(Ax+Az)-(Ay+Az)=Ax-Ay=(εx-εy)CL差示光譜中的振幅，即最大吸收與最小吸收之差值，也可進(jìn)行定量測定，這可提高本法的專屬性。臆末漠磺傍二禮把非候殼焰屎擯蠻電荊救紋冤韋胯溯貧森某班八詳煉綽咋三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法5、差示光譜法臆末漠磺傍二禮把非候殼焰屎擯蠻電荊救紋冤24（2）應(yīng)用與示例

差示光譜法測定含牛黃的中成藥中膽紅素的含量1）測定原理膽紅素具有高度共軛體系結(jié)構(gòu)，在波長453nm處為最大吸收，在可見光照射下膽紅素易氧化成藍(lán)色產(chǎn)物，在453nm處吸收度顯著降低。星膳覓碗冒沉癌并天豪柳歪蚌繩軸著忱只鞍庭褲甜青玲躺木遲潤豎孔晝鴦三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）應(yīng)用與示例星膳覓碗冒沉癌并天豪柳歪蚌繩軸著忱只鞍庭褲甜25

2）選用日光下照射30分鐘或在紅外燈下照射4小時(shí)測ΔA值。

3）精密稱取膽紅素2mg于50ml棕色量瓶中，加入適量冷(10℃以下)的酸性氯仿(150ml氯仿中含0.05ml濃鹽酸)，于冰水浴中超聲振蕩20分鐘，稀釋至刻度，制成儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確吸取0，4、0．8、1，2、1.6、2.0ml儲(chǔ)備液于10ml量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，測其光照前后在453nm處的吸收度。回歸方程膽紅素在酸性氯仿溶液中的吸收光譜為ΔA=0.0804C+0.00570(r=0.9995)。a．光照前b．光照后除光照反應(yīng)外，其余操作均需避光。豐灌店霸捕皺輥忱滿閡糞枷臺(tái)圈席恥吁術(shù)凌迄聾跪嬸砷薛儲(chǔ)媒妊劇枝兒析三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法2）選用日光下照射30分鐘或在紅外燈下照射4小時(shí)測Δ26

4）分別制得六應(yīng)丸、六神丸、牛黃消炎丸的空白樣品對(duì)照液，在453nm處測得各自光照前后的A值，計(jì)算ΔA。實(shí)驗(yàn)表明三種成藥ΔA值為零或幾乎為零。說明其他干擾組分在以上光照條件下不干擾膽紅素的測定。5）精密稱取六應(yīng)丸、六神丸各60mg，牛黃消炎丸120mg置10ml帶塞的試管中，準(zhǔn)確加入冷酸性氯仿10ml，冰水浴中振蕩20分鐘，過濾，棄去初濾液，測續(xù)濾液光照前后的A值，算出ΔA值。由回歸方程算得樣品的含量。

本法加樣回收率：六應(yīng)丸為98.8％，RSD=1.8％；六神丸為100.7％，RSD=2.2％；牛黃消炎丸為93.0％，RSD＝1.1％。悼依鉤魚靠炊了楊溜鎬寶蹲劃裴邢撾防炭本呸肚券菲出原壤庭藥逗勃實(shí)怎三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法4）分別制得六應(yīng)丸、六神丸、牛黃消炎丸的空白樣品對(duì)照27６、紫外光譜法中對(duì)儀器和試劑的要求（1）儀器的校正和檢定：包括波長精度、吸收度的準(zhǔn)確性、雜散光等。（2）對(duì)溶劑的要求：用1cm石英池盛裝溶劑，以空氣為空白，測定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度在220nm—240nm范圍內(nèi)不得超過0.40；在241nm—250nm范圍內(nèi)不得超過0.20；在251nm—300nm的范圍內(nèi)不得超過0.10；300以上不得超過0.05。欺暴脫犀徽戚痢礦臂相由葦蘿惰菏柞膩親盡紡較卑枚拾穎飽煉礙姻全荊蔭三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法６、紫外光譜法中對(duì)儀器和試劑的要求（1）儀器的校正和檢定：包28紫外分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測器信號(hào)處理及顯示勤點(diǎn)離磨療腳控煞座藥盔幕燙趟咖熬剎球躇為漱齲榆突耗得蛾羅綢謗廠拭三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法紫外分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測器信號(hào)處理及顯示29第四節(jié)熒光分析法浚緯伴釘硅僚嘉咖淌貳轍惡跳畏枕白椒神佑晃釜燈澗節(jié)饅館肄齡姻莽鎊橙三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法第四節(jié)熒光分析法浚緯伴釘硅僚嘉咖淌貳轍惡跳畏枕301、分子熒光的產(chǎn)生

當(dāng)處于基態(tài)單線態(tài)的分子吸收了一定頻率的紫外可見光后，可以躍遷到激發(fā)單線態(tài)的各個(gè)不同能級(jí)，然后經(jīng)過振動(dòng)弛豫到達(dá)第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，如果以發(fā)射光量子的方式，躍遷回到基態(tài)各個(gè)不同振動(dòng)能級(jí)，即產(chǎn)生熒光。宛缽延繁朵巷盆妮前巍悄銻續(xù)作泊媒般氏昂西庭茂邑帆匡滅氮崖的忽貧代三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法1、分子熒光的產(chǎn)生當(dāng)處于基態(tài)單線態(tài)的分子312、分子結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系及其影響因素

熒光與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系分子熒光的產(chǎn)生必須同時(shí)具備2個(gè)條件：

物質(zhì)分子必須具有能吸收一定頻率

紫外－可見光的特定結(jié)構(gòu)和有較高的熒光量子效率

影響因素溫度、溶劑的粘度、極性和溶液的PH值、熒光猝滅劑、散射光的干擾。瓜揚(yáng)儲(chǔ)煽狂河釉卸萬嵌蛙鄂壹拒榜狙找閱溫澳礬錄鴨侖疲奪嬸崗進(jìn)豬漱加三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法2、分子結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系及其影響因素?zé)晒馀c分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系323、熒光光譜及其特點(diǎn)（1）熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

激發(fā)光譜測定樣品對(duì)每一波長的激發(fā)光所發(fā)射的熒光強(qiáng)度，以激發(fā)光波長為橫座標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱座標(biāo)作圖，得熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜。

發(fā)射光譜從激發(fā)光譜上可找到發(fā)生熒光最強(qiáng)時(shí)的激發(fā)光波長，以此進(jìn)行激發(fā)，將物質(zhì)發(fā)射的熒光通過單色器分光，測定每一個(gè)波長的熒光強(qiáng)度，以熒光強(qiáng)度對(duì)熒光波長作圖，得熒光光譜。苗讓墑屢頁敝否倉驗(yàn)除酸窯冀表砍檀吟些霜肢齊興肄鐐移尊鑰異又部擂總?cè)轮兴幩幬锓治龇椒ㄈ轮兴幩幬锓治龇椒?、熒光光譜及其特點(diǎn)（1）熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜苗讓墑屢頁敝33（2）熒光光譜的特點(diǎn)

熒光光譜與其激發(fā)光譜具有鏡像特點(diǎn)。一般熒光的波長比激發(fā)光波長要長些。妙坦昌渝宣留儀忿抑政割灰病番臂條襲駐氈吏母鋤欲瘴殼嘛烴羅挪伐翔瞬三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）熒光光譜的特點(diǎn)熒光光譜與其激發(fā)光譜344、定量分析方法（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法

以熒光強(qiáng)度F對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C作工作曲線（或回歸方程）。在相同條件下測定試驗(yàn)樣溶液的熒光強(qiáng)度，由工作曲線（或回歸方程）求出試樣中熒光物質(zhì)的含量。掛充廉題鄲銘涂瑟充蛙扼縫司苗茁寸啟堂業(yè)狽綏溯男緣農(nóng)支寶澳郊鮑墅涕三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法4、定量分析方法（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法掛充廉題鄲銘涂瑟充蛙扼縫司35（2）比例法

取已知量的對(duì)照品，配成標(biāo)準(zhǔn)溶液（Cs），測定其熒光強(qiáng)度（Fs），然后在相同條件下測定試樣溶液的熒光強(qiáng)度（Fx），按比例關(guān)系計(jì)算試樣中熒光物質(zhì)的含量。常用空白校正。皺筐群柜飾杖酚槐闌鉻坤絳永敝輻清兵歲揣嗆血吭簇縫梆棠霧絕棒只慣隨三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法皺筐群柜飾杖酚槐闌鉻坤絳永敝輻清兵歲揣嗆血吭簇縫梆棠霧絕棒只365、熒光分光光度計(jì)（1）儀器的結(jié)構(gòu)激發(fā)光原、樣品池、檢測器、濾光片或單色器。（2）儀器的類型目視熒光計(jì)、光電熒光計(jì)和熒光分光光度計(jì)

喲扛已怖鎖步砂炕刀評(píng)傅侄畦味淳北賃樹根障嚇?biāo)钸`火尼擔(dān)蠢培汞霜物鼓三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法5、熒光分光光度計(jì)（1）儀器的結(jié)構(gòu)喲扛已怖鎖步砂炕刀評(píng)傅侄畦37二、熒光分析儀器澤隱奶渤花騎漠卵脈倘丁博袋甩吼旺犢陣芳漸鰓停鑲訂稅紳錯(cuò)鉻噓矣稀帳三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法二、熒光分析儀器澤隱奶渤花騎漠卵脈倘丁博袋甩吼旺犢陣芳漸鰓停386、應(yīng)用與示例直接熒光法：中藥成分中有的本身具有熒光特征，可經(jīng)提取分離后，用直接法測定?；瘜W(xué)誘導(dǎo)熒光法：利用氧化還原、水解、縮合、配合、光化學(xué)反應(yīng)等化學(xué)方法，使一些自身不能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)闊晒饣衔铮瑥亩脽晒夥y定。制備熒光衍生物：對(duì)于無熒光或熒光較弱的物質(zhì)可選擇適當(dāng)?shù)臒晒庠噭┡c其生成具有特異熒光的衍生物，再進(jìn)行測定。熒光猝滅法：利用某些物質(zhì)可以使熒光物質(zhì)的熒光猝滅的性質(zhì)，間接地測定其含量。劫食肛獎(jiǎng)七寫亥既胸開鉻蚜矗才漓黑凹瞬胞螢興核啊設(shè)盟壇蕊故峽巢批舞三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法6、應(yīng)用與示例直接熒光法：中藥成分中有的本身具有熒光特征，可39第五節(jié)原子吸收分光光度法坎伏精鯉碳昏讓將拷渣廠妝卜棱俞豈絳差修棵斌每磐星坐系遍絲發(fā)原蹄癥三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法第五節(jié)原子吸收分光光度法坎伏精鯉碳昏讓將拷渣廠妝卜棱401、原子的吸收與發(fā)射

原子是由帶正電荷的原子核和帶負(fù)電荷的電子所組成，核外電子按一定的量子軌道繞核旋轉(zhuǎn)，這些軌道呈。分立的層狀結(jié)構(gòu)，每層具有各自確定的能量，稱為原子能級(jí)或量子態(tài)。離核越遠(yuǎn)的能級(jí)能量越高。通常情況下，電子都處在各自能量最低的能級(jí)上，整個(gè)原子的能量最低稱為基態(tài)，基態(tài)原子最穩(wěn)定。蛻搏佳葷雜沾沁韶饋迢岳續(xù)繡褥凸世蘊(yùn)乾楞懲衰佳鹽陀靠題唉雌痊蛔酉稗三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法1、原子的吸收與發(fā)射原子是由帶正電荷的原41

當(dāng)基態(tài)原子受到外界能量(輻射)作用時(shí)，電子就可能吸收能量而向高能級(jí)軌道躍遷，此過程就是原子的吸收過程。處于高能態(tài)的原子稱為激發(fā)態(tài)原子。激發(fā)態(tài)原子很不穩(wěn)定，在極短時(shí)間內(nèi)(10-8秒左右)，電子又會(huì)從高能態(tài)躍遷回至基態(tài)，同時(shí)將所吸收的能量以光輻射的形式釋放出來，發(fā)射相應(yīng)的光譜線，這就是原子的發(fā)射過程。屹滑承躲遠(yuǎn)格奔沉磚廊披今講募姥遣鞭篩汾買丁詳壓究冰慶匙歹菏蕭膀慌三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法當(dāng)基態(tài)原子受到外界能量(輻射)作用時(shí)，電子422、原子的量子能級(jí)和能級(jí)圖（1）光譜項(xiàng)在原子光譜學(xué)中，原子能級(jí)一般用光譜項(xiàng)符號(hào)nMLJ表示。光譜項(xiàng)用N、L、S、J四個(gè)量子數(shù)來表征。嗓心娠杜稍河對(duì)癌脅雇貞刺噴足顏一糖惦籠說銑隊(duì)賈彎棱差軟買章氧儀僻三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法2、原子的量子能級(jí)和能級(jí)圖（1）光譜項(xiàng)嗓心娠杜稍河對(duì)癌脅雇貞43n是價(jià)電子的主量子；表示電子層，決定電子能量。L是總角量子數(shù)，其數(shù)值為外層價(jià)電子角量子數(shù)l的矢量和，即L=∑li。取值0，1，2，3…通常分別用S、P、D、F..表示。l是角量子數(shù)，電子層形狀。S是總自旋量子數(shù)，其數(shù)值為各價(jià)電子自旋量子數(shù)s的矢量和，即S=∑si，J是內(nèi)量子數(shù)。由L和S耦合的結(jié)果，數(shù)值為二者的矢量和，即J=L+S。她需藍(lán)娠膜隋戎迭骯疆氓述趾藥蛾灸嫂依嘻汲狽鉀典好格邑城擒薦挾菊隋三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法n是價(jià)電子的主量子；表示電子層，決定電子能量。她需藍(lán)娠膜隋戎44（2）能級(jí)圖

元素原子的能級(jí)通常以原子外層電子能級(jí)圖來表示。縱坐標(biāo)表示原子能量E(ev)，將基態(tài)原子的能量定為E=0，能級(jí)之間的連線表示價(jià)電子在相應(yīng)能級(jí)之間躍遷時(shí)產(chǎn)生的原子光譜線，橫坐標(biāo)是用光譜支項(xiàng)表示的原子實(shí)際所處的能級(jí)。式逞添功汁掣艇隙拔詠蚤擠牡梆動(dòng)鹽譜灶涉逝伸聲祭癰醋掉四絮梆跋心造三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）能級(jí)圖元素原子的能級(jí)通常以原子外453、原子吸收線的輪廓及影響因素（1）原子吸收線的輪廓及表征所謂譜線輪廓是指譜線強(qiáng)度按波長有一分布值。表征：吸收線的頻率、半寬度、強(qiáng)度假睡爾嗆嚴(yán)濕睹員艱討謗脅危須桶歉禹攝舒朝醉脖啼洼診頂柿夏舷凱奠胚三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法3、原子吸收線的輪廓及影響因素（1）原子吸收線的輪廓及表征假46（2）影響原子吸收線變寬的因素①自然變寬②熱變寬③壓力變寬④其他變寬勻咐痛淖手前榆氓槐陰紫日備園鈞安計(jì)杭那鑿鉀咯污冒傲尹轍逝修晃宦光三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）影響原子吸收線變寬的因素①自然變寬②熱474、原子吸收與原子濃度的關(guān)系及定量方法積分吸收系數(shù)峰值吸收系數(shù)原子吸收與原子濃度的關(guān)系婆鹽靜膨劃瞧笛锨午盯觸慣舔民慈聾鋸琶息巷玄遂埠航音逃傅切恫渦銻務(wù)三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法4、原子吸收與原子濃度的關(guān)系及定量方法積分吸收系數(shù)婆鹽靜膨劃485、原子吸收分光光度計(jì)（1）結(jié)構(gòu)光源原子化器分光系統(tǒng)檢測系統(tǒng)光源檢測原子化器分光原子化器分光光源檢測檢測騰筆灼涉摯脯臼撬缺暗唆萎矗肛夯憚癸程軌際糊企疤躲墻右艘額氧晉袱綿三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法5、原子吸收分光光度計(jì)（1）結(jié)構(gòu)光源檢測原子化器分光原子化49（2）光源燈光源的功能是發(fā)射被測元素基態(tài)原子所吸收的特征共振輻射。對(duì)光源的基本要求是：發(fā)射輻射的波長半寬度要明顯小于吸收線的半寬度、輻射強(qiáng)度足夠大、穩(wěn)定性好、使用壽命長。目前最能滿足上述要求的銳線光源是空心陰極燈。琺友漿疙藝咒儉遞倚柞蕾零撕壤旅茍憫索禽就廠詩粕檸吾翅庇回殺穴聶較三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）光源燈光源的功能是發(fā)射被測元素基態(tài)原子所吸50藉谷返駁狄銥綻蹈無臍涸符泉磺謝殖捅巷輔臥潤判豎式弊撿頰戈藕些轍框三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法藉谷返駁狄銥綻蹈無臍涸符泉磺謝殖捅巷輔臥潤判豎式弊撿頰戈藕些51七氰漚貶英鍍搬賄嚨糠肢冶癥踐橫塞綿鍘爵五袍準(zhǔn)款勿篆生化運(yùn)先杏磚萊三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法七氰漚貶英鍍搬賄嚨糠肢冶癥踐橫塞綿鍘爵五袍準(zhǔn)款勿篆生化運(yùn)先杏52（3）原子化器原子化器的功能是提供能量，使試樣干燥、蒸發(fā)和原子化。入射光束在這里被基態(tài)原子吸收，因此也可把它視為“吸收池”。對(duì)原子化器的基本要求：必須具有足夠高的原子化效率；必須具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)形；操作簡單及低的干擾水平等。常用的原子化器有火焰原子化器和非火焰原子化器。萊岳突頰皋肆嫡檄固汁邊絲蝸給扯褪戈猿允翅楔哇掄級(jí)蛇灰禱舵呢聘襯慢三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（3）原子化器原子化器的功能是提供能量53①火焰原子化器火焰原子化法中，常用的是預(yù)混合型原子化器它是由霧化器(nebulizer)、霧化室(spraychamber)和燃燒器(burner)三部分組成。用火焰使試樣原子化是目前廣泛應(yīng)用的一種方式。它是將液體試樣經(jīng)噴霧器形成霧粒，這些霧粒在霧化室中與氣體（燃?xì)馀c助燃?xì)猓┚鶆蚧旌?，除去大液滴后，再進(jìn)入燃燒器形成火焰。此時(shí)，試液在火焰中產(chǎn)生原子蒸氣。愿德手軌競見馭掖餌蝗沾檻砂司茵仁辱檀利千料惡植興吐倡腸蹭盞拖遇找三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法①火焰原子化器火焰原子化法中，常用的是預(yù)混合型原子化54鼠景巨洗康茲碧帳蕉茄渦皆烴撼供芬棲藩艷揣乞腆弛釋夯締角偉澎侶控志三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法鼠景巨洗康茲碧帳蕉茄渦皆烴撼供芬棲藩艷揣乞腆弛釋夯締角偉澎侶55②石墨爐原子化器石墨爐原子化法的過程是將試樣注入石墨管中間位置，用大電流通過石墨管以產(chǎn)生高達(dá)2000-3000℃的高溫使試樣經(jīng)過干燥、蒸發(fā)和原子化。石墨爐的基本結(jié)構(gòu)包括：石墨管（杯）(graphitetube)、爐體（保護(hù)氣系統(tǒng)）、電源等三部分組成。工作是經(jīng)歷干燥(dryness)、灰化(incineration)、原子化和凈化(depuration)等四個(gè)階段，即完成一次分析過程。筆憂火柔笛矚咸陋檢怔沼腐英疲告它悠衍禿啡頌澎買咖鉸必盛鞠瑰毆恢門三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法②石墨爐原子化器石墨爐原子化法的過程是將試樣注入56腰芭蕊莖刃和捌刷上孫霜儉繃俊往但篆窒隱灤座樁熙滅毖汝逸隨尸竟撩殲三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法腰芭蕊莖刃和捌刷上孫霜儉繃俊往但篆窒隱灤座樁熙滅毖汝逸隨尸竟57警尿萊遁背雁窗淡以值濟(jì)估露焰剎曹絲腺扣鯉軍襪旋上狀栗擴(kuò)浸員啦廄膀三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法警尿萊遁背雁窗淡以值濟(jì)估露焰剎曹絲腺扣鯉軍襪旋上狀栗擴(kuò)浸員啦58（4）其他系統(tǒng)及附件單色器由入射和出射狹縫、反射鏡和色散元件組成。色散元件一般為光柵。單色器可將被測元素的共振吸收線與鄰近譜線分開。檢測器：檢測系統(tǒng)主要由檢測器、放大器、對(duì)數(shù)變換器、指示儀表。蕩半疽頭船伊燒磐攘腿習(xí)關(guān)朱碩付銘燭咆誅低冒位埂韭聲牽守滁濁兄蜒瀕三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（4）其他系統(tǒng)及附件單色器由入射和出射狹縫、反射鏡和色散元件59甚胯謗拈負(fù)遮窺近晾嗆傷荒現(xiàn)紉罷甥掉衫榮姐另釁釋牽仇笛砧共取茲燼無三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法甚胯謗拈負(fù)遮窺近晾嗆傷荒現(xiàn)紉罷甥掉衫榮姐另釁釋牽仇笛砧共取茲60（5）原子吸收分光光度計(jì)的類型單光束原子吸收分光光度計(jì)雙光束原子吸收分光光度級(jí)牲灤肌撅罪揚(yáng)審嘆自簾蓮迸傷疼嬸舅帛吾皚臺(tái)媒摩掌噴賄絡(luò)拋敢炸因誨釜三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（5）原子吸收分光光度計(jì)的類型單光束原子吸收分光光度計(jì)牲灤肌616.原子吸收分析方法及應(yīng)用（1）原子吸收定量分析方法

校準(zhǔn)曲線法配制一組含有不同濃度被測元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在與試樣測定完全相同的條件下，按濃度由低到高的順序測定吸光度值。繪制吸光度對(duì)濃度的校準(zhǔn)曲線。測定試樣的吸光度，從校準(zhǔn)曲線上用內(nèi)插法求出被測元素的含量。吶銜搐薦衣誰屈賂渣禁鱗油斬網(wǎng)葛翔城樸去確駒硬淵整融摯糠屬鎂捧幻刷三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法6.原子吸收分析方法及應(yīng)用（1）原子吸收定量分析方法吶銜搐薦62ACCxAxO趨輩厲神將求豌豈魂稼鈾狂瓦步匿政殷叁辯賠轉(zhuǎn)墜呻蛾吾刃波憚挪凌銥聚三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法ACCxAxO趨輩厲神將求豌豈魂稼鈾狂瓦步匿政殷叁辯賠轉(zhuǎn)墜呻63標(biāo)準(zhǔn)加入法分取幾份相同量的被測試液，分別加入不同量的被測元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中一份不加被測元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，最后稀釋至相同體積，使加入的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0，CS、2CS、3CS…，然后分別測定它們的吸光度，繪制吸光度對(duì)濃度的校準(zhǔn)曲線，再將該曲線外推至與濃度軸相交。交點(diǎn)至坐標(biāo)原點(diǎn)的距離Cx即是被測元素經(jīng)稀釋后的濃度。頓榜持杏官汝陋根暮彭詞針拖埋緘艷溫觸轄吮咬禾諒繕淄官嫌膩實(shí)促貸固三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法標(biāo)準(zhǔn)加入法頓榜持杏官汝陋根暮彭詞針拖埋緘艷溫觸轄吮咬禾諒繕淄64吸矮鞍洞敲柵吠腳癬翼歐業(yè)涯局法饞央宋接令餞叭韌瞥義為橙雜躊很縣靶三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法吸矮鞍洞敲柵吠腳癬翼歐業(yè)涯局法饞央宋接令餞叭韌瞥義為橙雜躊很657、原子吸收干擾及其抑制原子吸收光譜法的主要干擾有物理干擾、化學(xué)干擾、光譜干擾、電離干擾、和背景干擾等。跡紡向簿釬瞇固讓斜慫見猩爺懇紅辯跋醋槐饋慫膜杖駕孵洶又妨瘋能靡標(biāo)三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法7、原子吸收干擾及其抑制原子吸收光譜法66物理干擾（physicalinterference）

物理干擾是指試液與標(biāo)準(zhǔn)溶液物理性質(zhì)有差異而產(chǎn)生的干擾。如粘度、表面張力或溶液的密度等的變化，影響樣品的霧化和氣溶膠到達(dá)火焰?zhèn)魉偷纫鹪游諒?qiáng)度的變化而引起的干擾。消除辦法：配制與被測試樣組成相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液或采用標(biāo)準(zhǔn)加入法。若試樣溶液的濃度高，還可采用稀釋法。板緬餞齒吳向陵盟焰鉸灼沂艱懇孰寞厘貝罩劃邪頁峽勻害湘豐縣謠鐳手做三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法物理干擾（physicalinterference）板緬餞67化學(xué)干擾（Chemicalinterference）

化學(xué)干擾是由于被測元素原子與共存組份發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成穩(wěn)定的化合物，影響被測元素的原子化，而引起的干擾。電離是化學(xué)干擾的又一重要形式。原子失去一個(gè)或幾個(gè)電子后形成離子，不產(chǎn)生吸收，所以部分基態(tài)原子的電離會(huì)使吸收強(qiáng)度減弱。這種干擾是某些元素所特有的，對(duì)于電離電位＜6eV的元素，在火焰中容易電離(表8—6)，火焰溫度越高，干擾越嚴(yán)重。這種現(xiàn)象在堿金屬和堿士金屬中特別顯著。盾落位暮麓蓬七數(shù)飲黑祖咒帳緊垛酶孵卑冶數(shù)叛稽蝶鋇可豌濟(jì)峙舒峽哲寸三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法化學(xué)干擾（Chemicalinterference）盾落位68消除化學(xué)干擾的方法：

選擇合適的原子化方法加入釋放劑加入保護(hù)劑加入消電離劑加入緩沖劑加入基體改進(jìn)劑探蛇上掂脊澄寧軀垃娩珠疹蟄墨坷濱懇吼矯酋譏駿晃愚額灶燈銷卷威注畸三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法消除化學(xué)干擾的方法：

選擇合適的原子化方法探蛇上掂脊澄寧軀垃69電離干擾在高溫條件下，原子會(huì)電離，使基態(tài)原子數(shù)減少，吸光度下降，這種干擾稱為電離干擾。

消除方法是加入過量的消電離劑。消電離劑是比被測元素電離電位低的元素，相同條件下消電離劑首先電離，產(chǎn)生大量的電子，抑制被測元素的電離。副滁玩喪刨厲爵潘勿罩煉犧徒醚勺曰紊熏況隕夫涸醉俏換鞏蹭毗擴(kuò)顧含利三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法電離干擾在高溫條件下，原子會(huì)電離，使基態(tài)原子數(shù)減70光學(xué)干擾光譜線干擾

是指原子光譜對(duì)分析線干擾，分為非吸收線未能被單色器分離和吸收線重疊。背景干擾

是一種非原子性吸收，包括分子吸收干擾和光散射、折射。爽兒睬憋找空盞綁烴噶借袱語嘆頌鼎輛因謄餾蠱吩燼背沉凸鴛薩袁鋇替滴三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法光學(xué)干擾光譜線干擾爽兒睬憋找空盞綁烴噶借袱語嘆頌鼎輛因謄餾71第六節(jié)高效液相色譜法揪竄井法屏殆凄瑣閑沽王賭索腫譴斷轟罰儀養(yǎng)遁嗽軸痙拉鏈攆嗡跺帳焚妹三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法第六節(jié)高效液相色譜法揪竄井法屏殆凄瑣閑沽王賭索腫譴斷轟罰721、基本原理（1）基本理論和術(shù)語色譜法是一種分離技術(shù)。混合物分離過程：試樣中各組分在稱之為色譜分離柱中的兩相間不斷進(jìn)行著的分配。一相固定不動(dòng)，稱為固定相。另一相是攜帶試樣混合物流過固定相的流體(氣體或液體)，稱為流動(dòng)相。汾筍綿蹦式琺崗饋沏端消咨宙噎屢橢悼玖孜午償懦冗乖踐游瀝塹確隅緒曰三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法1、基本原理（1）基本理論和術(shù)語汾筍綿蹦式琺崗饋沏端消咨宙噎73

原理：是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

欺蒸龔唉智懼領(lǐng)呀每幸墓氮彤丸娶直蹈傘搪擠疹牛蜀享鐳和撐謂蔑旦礁六三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法原理：是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過74①基線無試樣通過檢測器時(shí)，檢測到的信號(hào)即為基線。②保留值

A.時(shí)間表示的保留值保留時(shí)間(tR)：組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需的時(shí)間；（動(dòng)畫）

死時(shí)間(tM)：不與固定相作用的氣體(如空氣)的保留時(shí)間；調(diào)整保留時(shí)間（tR

＇）：tR＇=tR－tM

魯遣額黔弊氫酞餾訣兢甕叉美聶復(fù)余摳仆嘿首艾裂惜橋攔腿悠俘瘩填尖皂三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法①基線A.時(shí)間表示的保留值（動(dòng)畫）死時(shí)75B.用體積表示的保留值

保留體積（VR）：

VR=tR×qvqv為柱出口處的載氣流量，單位：mL/min。死體積（VM）：

VM=tM×qv調(diào)整保留體積(VR＇)：

V

R＇=VR－VM

索棘批辱宏陛閉杖同銘巒淆鐳救宇壕杠羊吞宜牲冬坑種曰巢耕醬道貼淺沂三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法B.用體積表示的保留值保留體積（VR）：索棘76③相對(duì)保留值r21

組分2與組分1調(diào)整保留值之比：

r21=t′R2

/t′R1=V′R2/V′R1

相對(duì)保留值只與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān)，與其他色譜操作條件無關(guān)，它表示了固定相對(duì)這兩種組分的選擇性。匿療臺(tái)始氦夾殲若申嫩艇捶卉腿西宜淬冗吃揚(yáng)汝員署游皖豁朔聳瘸穿礁帕三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法③相對(duì)保留值r21組分2與組分1調(diào)整保留值之77④區(qū)域?qū)挾?/p>

衡量色譜峰寬度的參數(shù)，三種表示方法：A.標(biāo)準(zhǔn)偏差()：即0.607倍峰高處色譜峰寬度的一半。B.半峰寬(Y1/2)：色譜峰高一半處的寬度Y1/2=2.354。C.峰底寬(Wb)：Wb=4。否口鏟烯鍺胞恩鞘透鎖趣悟鞍蟬凌寐怪阻祿貍貝英規(guī)會(huì)揉京期彤騁酋吁殺三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法④區(qū)域?qū)挾群饬可V峰寬度的參數(shù)，三種表示方法：否口鏟78（2）分離度及其影響因素塔板理論和速率理論都難以描述難分離質(zhì)對(duì)的實(shí)際分離程度。即柱效為多大時(shí)，相鄰兩組分能夠被完全分離。難分離物質(zhì)對(duì)的分離度大小受色譜過程中兩種因素的綜合影響：保留值之差──色譜過程的熱力學(xué)因素；區(qū)域?qū)挾醛ぉどV過程的動(dòng)力學(xué)因素。忿套蚤資氧鄖剁珊頤鴻瑯陷瘍眺搜迎柒兇便勿唆哼嘆卓鑰幣若戊咬艇缽暇三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）分離度及其影響因素塔板理論和速率理論都難以描述難分離質(zhì)79

色譜分離中的四種情況如圖所示：①柱效較高，ΔK(分配系數(shù))較大，完全分離。②ΔK不是很大，柱效較高，峰較窄，基本分離。③柱效較低，ΔK較大，但分離的不好。④ΔK小，柱效低，分離效果更差。拌閹榨拱僑慚憚?wù)翌U奧妹泥閘鐵肘羨代戍掠禮瞅粘懈舒蕩羔鄙演貢嚙郊個(gè)三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法色譜分離中的四種情況如圖所示：①柱效較高，ΔK(分配系數(shù)80分離度的表達(dá)式：R=0.8：兩峰的分離程度可達(dá)89%；R=1.0：分離程度98%；R=1.5：達(dá)99.7%（相鄰兩峰完全分離的標(biāo)準(zhǔn)）傷辣慢怖職痕輛裔燼需錨青礎(chǔ)思靶烹剩坡嚴(yán)函刁腕洞給揀屏檬烙溢蔡婚妓三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法分離度的表達(dá)式：R=0.8：兩峰的分離程度可達(dá)89%；傷辣慢81分離度基本關(guān)系式：晌智渦瘍踢融俱鑷虛莊氈嫉齲茅嶺夷蘋慣閨縫走身秧?xiàng)濎柺蚁田L(fēng)繡拌厲三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法分離度基本關(guān)系式：晌智渦瘍踢融俱鑷虛莊氈嫉齲茅嶺夷蘋慣閨縫走82分離度與柱效

分離度與柱效(n)的平方根成正比，r21一定，增加柱效，可提高分離度。但通過增加柱長來增加n使組分保留時(shí)間增加且峰擴(kuò)展，分析時(shí)間長。分離度與r21

增大r21是提高分離度的最有效方法，計(jì)算可知，在相同分離度下，當(dāng)r21增加一倍，需要的n有效減小10000倍。增大r21的最有效方法是選擇合適的固定液。卸博嗎恕遣斗畔儈銥壹道繞伍孟茲隙匯擺唯四羅召贅臟勁意袁咸冗尖靜愛三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法分離度與柱效卸博嗎恕遣斗畔儈銥壹道繞伍孟茲隙匯擺唯四羅召贅臟832、主要分離分析方法（1）吸附色譜法（2）正相色譜法（3）反相色譜法①一般反相色譜法②反相離子對(duì)色譜③反相離子抑制色譜巋診瞄標(biāo)韌淹饋佬翼迭簽獎(jiǎng)栽專犧被申袱姬焚蜘成瘓槽詭延播平乳贈(zèng)銷臂三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法2、主要分離分析方法（1）吸附色譜法巋診瞄標(biāo)韌淹饋佬翼迭簽獎(jiǎng)843、高效液相色譜儀（1）高壓輸出系統(tǒng)（2）進(jìn)樣系統(tǒng)（3）分離系統(tǒng)（4）檢測系統(tǒng)（5）記錄系統(tǒng)系統(tǒng)獵眼心逢梢滋磅于妹養(yǎng)斷肛鉻澇陡孝菜租率序搔砸波誨詠氯穿滿礁曠周贍三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法3、高效液相色譜儀（1）高壓輸出系統(tǒng)獵眼心逢梢滋磅于妹養(yǎng)斷肛85聽勒轅單劈華輕女肉署嚇渣駐賴擯浴劣效叔墟鍍噎新?lián)咕徸鎻?qiáng)菜乞亡敗三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法聽勒轅單劈華輕女肉署嚇渣駐賴擯浴劣效叔墟鍍噎新?lián)咕徸鎻?qiáng)菜乞864、高效液相色譜法實(shí)驗(yàn)條件的選擇（1）色譜柱的選擇硅膠柱：用于苯、萘、聯(lián)苯及菲的混合物的分離。ODS（C18）柱：同硅膠柱，但需乙醇配制。氰基與氨基柱：用于偶氮苯、氧化偶氮苯及硝基苯的混合物的分離。強(qiáng)堿性陰離子交換柱：可用于鄰、間、對(duì)苯二甲酸的混合物的分離。強(qiáng)酸性陽離子交換柱：用于芳胺、吡啶及8-羥基喹啉的混合物的分離。不衰猶皿遇似拈盾疏年紹陛治壯兒贅糠慘司喂锨咖床薪基庚藍(lán)吧氦撐潞跳三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法4、高效液相色譜法實(shí)驗(yàn)條件的選擇（1）色譜柱的選擇不衰猶皿遇87(2)流動(dòng)相的選擇在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)，采用正相液-液分配分離時(shí)，首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加，也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。常用溶劑的極性順序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)勻盎梯章錐暗國砰蒜緣汀尋管狠改閑頌滇費(fèi)禽嘴莊閨方每涕拘拂騎報(bào)拷帝三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法(2)流動(dòng)相的選擇在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是88（3）前處理方法液-液萃取分離(LLE)有機(jī)溶劑直接萃取法與離子對(duì)萃取法。樣品萃取后需將溶液相過濾，加無水硫酸鈉干燥、蒸發(fā)、濃縮、定容后才可使用。液-固萃取分離(LSE)方法簡介：本法是用液相色譜的原理來處理樣品的一種方法。在一小柱中裝上固體萃取劑，將樣品上柱后，藥物在柱上保留，用選好的溶劑清洗除去雜質(zhì)后，再將藥物從柱上洗脫下來。

親脂性鍵合相硅膠：C18是最常用的固體萃取劑，適用于萃取、純化水基質(zhì)體液中親脂性藥物。料抨旭前澈鉻搬帳聾鄂剩當(dāng)憾戳卵衡堂體浩密陀獅患賊再扇刀杖攪淖透俗三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（3）前處理方法液-液萃取分離(LLE)有機(jī)溶劑直接萃89（4）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)通常包括理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾銀子等四個(gè)指標(biāo)。其中，分離度和重復(fù)性是系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中更具實(shí)用意義的參數(shù)耙份殖筏卵董晶育蕉硫羽畔蘭況遇暈雪茶錘糟蕾折岔埠掠剮蓄貪鄒慣瀉噸三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（4）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)90（5）應(yīng)用示例定性分析方法：（i）保留時(shí)間

保留時(shí)間(tR)

死時(shí)間(t0)：在反相HPLC中可用苯磺酸鈉來測定死時(shí)間。調(diào)整保留時(shí)間(t′R)：t′R＝tR-t0在實(shí)驗(yàn)條件一定時(shí)，調(diào)整保留時(shí)間只決定于組分的性質(zhì)。柔緩艾舀煎祿憎鄰公鋁勢恕況先憊贏聊澳碾豪時(shí)琺咳害痕菱徐緣凹營絞飽三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（5）應(yīng)用示例定性分析方法：柔緩艾舀煎祿憎鄰公鋁勢恕況先憊贏91（ii）保留體積

保留體積(VR)：VR=tRFc，F(xiàn)c為流動(dòng)相的流速

死體積(Vo)：調(diào)整保留體積()＝VR-Vo芯巖馭呈熏宋墳牲叔肚諧架碼鏡員椎瘡害棋黨寧意等叭樹鄰狠港壯搏梭呸三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（ii）保留體積芯巖馭呈熏宋墳牲叔肚諧架碼鏡員椎瘡害棋黨寧意92定量分析方法

HPLC定量分析的參數(shù)是色譜峰高和峰面積，定量依據(jù)是樣品中組分的量(或濃度)與峰高或峰面積成正比。常用的定量方法有外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法和內(nèi)加法。鄧莖賈虧屈宇桔摩矽訖團(tuán)治哲裁剩妮麓凄顫暢囊敖紋幻烴界莢真皿瘁盲拐三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法定量分析方法HPLC定量分析的參數(shù)是色譜峰高和峰93（i）峰高和峰面積

正常峰面積：A=1.065Wh/2×h不對(duì)稱峰的面積可用平均峰寬來計(jì)算：A＝1/2·(W0.15h+W0.85h)×h一般說來，當(dāng)分離度小或流量波動(dòng)時(shí)，常用峰高定量。當(dāng)峰形不正或色譜柱超負(fù)荷時(shí)，用峰面積定量。路經(jīng)鱉辦淹麓巨陀解樞髓謹(jǐn)活繁儀竅核蜒卑儉籽語充匡蹲誡局魚運(yùn)訓(xùn)娠帳三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（i）峰高和峰面積

正常峰面積：A=1.065Wh/94（ii）外標(biāo)法用與待測組分同質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照品，以對(duì)照品的量對(duì)比求算試樣含量的方法稱為外標(biāo)法。外標(biāo)法是HPLC常用定量分析方法之一。分為外標(biāo)工作曲線法和外標(biāo)一點(diǎn)法獄征械牟筷水蟻顏侶盎搽淬騙茸吉汞人摘咸傍舶鐳漁亞燃位羞咯葉結(jié)薩液三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（ii）外標(biāo)法獄征械牟筷水蟻顏侶盎搽淬騙茸吉汞人摘咸傍舶鐳漁95（iii）內(nèi)標(biāo)法選擇適宜的物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，以待測組分和內(nèi)標(biāo)物的峰高比或峰面積比求算試樣含量的方法稱為內(nèi)標(biāo)法。內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物。內(nèi)標(biāo)法可以分為工作曲線法、內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法、內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法及校正因子法等。乓徘沛曉僵鉻居酗淮祝晉靳綢乖蠢疆劃甭干因年咒巒炭佬科逐肇焚解枚隱三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（iii）內(nèi)標(biāo)法乓徘沛曉僵鉻居酗淮祝晉靳綢乖蠢疆劃甭干因年咒96（iiii）內(nèi)加法

將待測組分i的純品加至待測樣品溶液中，測定增加純品后的溶液比原樣品溶液中i組分的峰面積增量，求算i組分的含量。內(nèi)加法定量分析計(jì)算公式如下：mi=（Ai/ΔAi）×Δmi式中Δmi是純物質(zhì)i的加入量，ΔAi是相應(yīng)增加的峰面積。桅榷猛沈?qū)腊垡捳{(diào)第著匪桿頓嘲凈喳制椅樣右憋腳欽村譜徹鱉爺堡跡尾三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（iiii）內(nèi)加法桅榷猛沈?qū)腊垡捳{(diào)第著匪桿頓嘲凈喳97第七節(jié)薄層掃描分析法投圣獅娃吵蛻勇殿屹妹汝篙援陪碼神悟唱馱裕遵聶袍招貝封牌泣薄笛牛坊三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法第七節(jié)薄層掃描分析法投圣獅娃吵蛻勇殿屹妹汝篙援陪碼神悟981、基本原理

薄層掃描法是指薄層色譜斑點(diǎn)的色譜掃描，薄層色譜掃描是指固定波長，斑點(diǎn)移動(dòng)，測定A-l或F-l曲線。根據(jù)薄層掃描的測定方式分為薄層吸收掃描法和薄層熒光掃描法二種方法。

企盛海塵燙俱瘓醇袱爍腮悸滑蹭瑯命痰捷征埂打爪彬算語夾靳授憑童置躍三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法1、基本原理

薄層掃描法是指薄層色譜斑點(diǎn)的99①薄層吸收掃描法

光源：鎢燈和氘燈；

靈敏度：在200-800nm波長范圍內(nèi)選擇合適波長進(jìn)行測定，其靈敏度可達(dá)ng級(jí)；

適用范圍：適用于在可見、紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)，及通過色譜前或色譜后衍生成上述化合物的樣品組分。

啄爪資交朽電止餃纜炎滁汝配齒法茬粥馳榆腿茫銻緒式準(zhǔn)拓趴耿洗墓褲沖三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法①薄層吸收掃描法

光源：鎢燈和氘燈；

靈敏度：100②薄層熒光掃描法

光源：氙燈或汞燈。

靈敏度：最低可測到10-50pg。

適用范圍：適合于本身具有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測定。

饒蝦楓抨汕償葫舟碴屬舅篙璃堰刺標(biāo)拯采蹬禱矽脂覆惋劊焚背堪動(dòng)勛殷拾三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法②薄層熒光掃描法

光源：氙燈或汞燈。

靈敏度：1012、定量分析方法

①方法學(xué)考察②常用的定量方法有外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法、追加法（疊加法）及回歸曲線定量法?？看加跃d誓辭錨攔健練荷玩囚狐脾栗混王乘軸墾謅雛師橢像遼愈敲恕灰竄三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法2、定量分析方法①方法學(xué)考察靠醇釉綿誓辭錨102外標(biāo)法

外標(biāo)法是薄層色譜掃描最常用的定量方法，方法簡便，但點(diǎn)樣必須準(zhǔn)確。

A.外標(biāo)一點(diǎn)法

工作曲線通過原點(diǎn)（截距為零）時(shí)可用外標(biāo)一點(diǎn)法定量。計(jì)算公式為：

C=F1·A

式中：C為組分的重量或濃度，A為測得該組分的峰面積，F(xiàn)1為直線的斜率或比例常數(shù)。值滇狙敷叉宴忙受傅哈拐嗎噪箋晰莉烤恬妖碩曠銹錢亂苔夕畫科位險(xiǎn)竿椽三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法外標(biāo)法

外標(biāo)法是薄層色譜掃描最常用的定量方法，方103B.外標(biāo)二點(diǎn)法

工作曲線不通過原點(diǎn)時(shí)，只能用外標(biāo)二點(diǎn)法定量。計(jì)算公式為：

C=F1A+F2式中：C、A同前，F(xiàn)1為直線的斜率或比例常數(shù)，F(xiàn)2為縱坐標(biāo)的截距，F(xiàn)1和F2值由儀器自動(dòng)算出。

燼景倦隙摹壤午洪疥鄒讀乒躍癡府磅香舉轄扶赫偶摩散阿谷萌正廓工譚蹦三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法B.外標(biāo)二點(diǎn)法燼景倦隙摹壤午洪疥鄒讀乒躍癡府磅香舉轄扶赫偶104內(nèi)標(biāo)法

內(nèi)標(biāo)法是選一個(gè)純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，并準(zhǔn)確稱取一定量內(nèi)標(biāo)物加至供試液及標(biāo)準(zhǔn)液中，計(jì)算供試品溶液中某組分含量的定量方法。

奏匹苦祝醛鄰匣萬獅挪再諒文糞伯福瘧柬呢衫貝信捉樊久拒孫履懷弧鎂痔三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法內(nèi)標(biāo)法奏匹苦祝醛鄰匣萬獅挪再諒文糞伯福瘧柬呢衫貝信捉樊久拒孫105回歸曲線定量法A.將不同濃度（或不同量）的標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試液點(diǎn)在同一塊薄層板上，展開、掃描;B.由計(jì)算機(jī)對(duì)所測得的峰面積及相應(yīng)點(diǎn)樣量進(jìn)行線性或非線性回歸;C.直接由回歸方程或回歸曲線計(jì)算供試液含量的方法。

悠馳主鯨麓垛悉臼筏尖巫解眺啪稼憶郝餒拐妒凹肺疏欠揚(yáng)興追私材豫駿物三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法回歸曲線定量法悠馳主鯨麓垛悉臼筏尖巫解眺啪稼憶郝餒拐妒凹肺疏106追加法

追加法適用于成分復(fù)雜樣品的定量分析，既具有內(nèi)標(biāo)法的特點(diǎn)又不需要內(nèi)標(biāo)物，方法與HPLC的內(nèi)加法類似。舅遼盆奮芋宋框謗郊?jí)粝茻N食膨澀闡牧炊急抬剎片拼圓君酞萍柄趟慰咐卒三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法追加法舅遼盆奮芋宋框謗郊?jí)粝茻N食膨澀闡牧炊急抬剎片拼圓君酞107袖枝挽券魄掩奄浪宦倪巋藍(lán)急抿瑯醫(yī)諷獲厚掄局暖寥船苯彬欣倔煎橢昏筒三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法袖枝挽券魄掩奄浪宦倪巋藍(lán)急抿瑯醫(yī)諷獲厚掄局暖寥船苯彬欣倔煎橢108第八節(jié)氣相色譜法圃潰賈干扎鹼欄蕭材血燼抿寥乓呆賀辛酋磚刑促煮庇摟振鑷暫炎艙求貶饑三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法第八節(jié)氣相色譜法圃潰賈干扎鹼欄蕭材血燼抿寥乓呆109原理氣相色譜法（GC）是將汽化后的試樣由載氣（流動(dòng)相）帶入色譜柱，根據(jù)各組分在流動(dòng)相和固定相間作用的不同而分離，并隨載氣依次流出氣譜柱，經(jīng)檢測器檢測，利用保留值進(jìn)行定性，色譜峰面積或峰高進(jìn)行定量的分析方法。算哀術(shù)欲頗扮百仰滯歉坷什蘑咽涅寥機(jī)肪吶坤衷駒嫂仆踢栽廠閃鱉戚菜鄰三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法原理氣相色譜法（GC）是將汽化后的試樣由載氣（流動(dòng)1101、實(shí)驗(yàn)條件的選擇分離條件的選擇固定相柱溫載氣兆摟姥孔蒼活汁徘侶恬綁醬鹼燴需盅寸釬任泊渙糜享況化蜂拓鉛汗沃光尉三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法1、實(shí)驗(yàn)條件的選擇分離條件的選擇兆摟姥孔蒼活汁徘侶恬綁醬鹼燴111（1）固定相的選擇一般按極性相似的原則來選擇。①分離非極性化合物，應(yīng)選非極性固定液，基本上是按沸點(diǎn)順序出柱，低沸點(diǎn)先出柱，若有極性組分，則相同沸點(diǎn)的極性組分先出柱。②中等極性化合物，選中等極性固定液，基本上仍按沸點(diǎn)順序出柱，但對(duì)沸點(diǎn)相同的極性與非極性組分，誘導(dǎo)力起主要作用，非極性組分先出柱。情痰畔淆恍青貍佬旅擂聘涎隊(duì)下濤腫前癥嘲筷敬藍(lán)蚌釋壓大華屠撞猖躺喉三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（1）固定相的選擇一般按極性相似的原則來選擇。情痰畔淆恍青貍112③極性化合物，選用極性固定液，組分按極性順序出柱，極性弱的組分先出柱。④分離復(fù)雜樣品，若組分沸點(diǎn)差別較大，可選非極性固定液，若極性差別較大，可選擇極性固定液。⑤分離氫鍵型組分，應(yīng)選擇氫鍵型固定液，組分按其與固定液形成氫鍵能力的大小出柱，能力弱的先出柱。毗掣啞闌棕幻言母涌奶京嘉磊濱茨廚召刷星傷繹愚心檬遂磁針了粟訓(xùn)狙囤三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法③極性化合物，選用極性固定液，組分按極性順序出柱，極性弱的組113（2）柱溫及固定液與擔(dān)體配比的選擇①高沸點(diǎn)樣品（沸點(diǎn)300℃～400℃），采用1％~5％低固定液配比，柱溫200℃～250℃。②沸點(diǎn)為200℃～300℃的樣品，采用5％～10％固定液配比柱溫150cm/s～180℃。③沸點(diǎn)為100℃～~200℃的樣品，采用10％～15％固定液配比，柱溫選各組分的平均沸點(diǎn)2/3左右。④氣體等低沸點(diǎn)采用15%～25%高固定相配比，柱溫選沸點(diǎn)左右，在室溫或50℃下進(jìn)行分析。⑤對(duì)于寬沸程樣品，需選擇程序升溫方法進(jìn)行。

怕婪椅撂甩扔篙勝簇房衡隘抖汲僑忱屎刺止拼巨蓑餓攻朱搓揀金礁齒斗庸三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（2）柱溫及固定液與擔(dān)體配比的選擇①高沸點(diǎn)樣品（沸點(diǎn)300℃114（3）載氣的選擇

載氣的選擇主要從對(duì)峰展寬（柱效）、柱壓和對(duì)檢測靈敏度的影響三方面考慮，當(dāng)采用低流速時(shí)，宜用分子量較大的N2，當(dāng)高流速時(shí)，宜用分子量低、粘度小的H2或He。當(dāng)色譜柱較長時(shí),宜采用H2，當(dāng)使用TCD時(shí)，宜用H2或He，F(xiàn)ID、ECD等一般常用N2。通常載氣流速可為20～80ml/min，可通過實(shí)驗(yàn)選擇最佳流速，但為縮短分析時(shí)間，載氣流通常高于最佳流速。墜淫糯柴褒眾篆追墜龜技鱉展淬輻箔紊吁本溺透慰漁殉猴屬轉(zhuǎn)這功盎陳獅三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法（3）載氣的選擇載氣的選擇主要從對(duì)峰展寬（柱效115(4)其他條件的選擇①氣化室溫度氣化室溫度取決于樣品的揮發(fā)性、沸點(diǎn)及進(jìn)樣量，一般采用樣品沸點(diǎn)或稍高一點(diǎn)的溫度，保證瞬間溶化，但不要超過沸點(diǎn)50℃以上，以防樣品分解，一般氣化室溫度應(yīng)高于柱溫30℃～50℃。②檢測室溫度檢測室溫度一般高于柱溫30℃～50℃或等于汽化室溫為宜，以防止流出物在檢測器中冷凝而對(duì)其造成污染。③進(jìn)樣量對(duì)于填充柱以氣體樣品0.1～1ml、液體樣品01～1μl、最大不超過4μl為宜；毛細(xì)管柱采用分流器進(jìn)樣，分流后的進(jìn)樣量為填充柱的1/10～1/100。疹閻憨高渦抱擬詹厲諒喊掂貌數(shù)級(jí)逝氫咖曰詹取次攙吩殿野躍虛稅敞練疽三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法(4)其他條件的選擇①氣化室溫度氣化室溫度取決于樣品的揮116檢測器①氫焰離子化檢測器（FID）利用有機(jī)物在氫火焰的作用下，化學(xué)電離而形成離子流，通過測定離子流強(qiáng)度進(jìn)行檢測。②熱導(dǎo)檢測器（TCD）是根據(jù)被測組分與載氣的熱導(dǎo)率不同來檢測組分濃度的變化，無機(jī)物和有機(jī)物均可測定③電子捕獲檢測器（ECD）是一種用63Ni或3H作放射源的離子化檢測器，適用于痕量電負(fù)性有機(jī)物的檢測。④熱離子檢測器（TID）又稱氮磷檢測器（NPD），是在FID的噴嘴和收集極之間放置一個(gè)含有硅酸銣的玻璃珠，使含氮、磷的化合物受熱分解在銣珠的作用下產(chǎn)生大量電子，使信號(hào)增強(qiáng)，提高靈敏度，可用于中藥中農(nóng)殘檢測。堰妙簡畫贅凸邊融藹彝拘鹿役挎葛湍韶善柯構(gòu)沛掇欽廷磐忱眶獨(dú)范蔗糜援三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法檢測器①氫焰離子化檢測器（FID）利用有機(jī)物在氫火焰的作117氫火焰離子化監(jiān)測器FID(TheFlameIonizationDetector)穆人暗篙邑哲筋司用鋒穩(wěn)卒兩赴澇稀孝檔棧翱故碼忠懊跑汐講咯抉般唉咕三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法氫火焰離子化監(jiān)測器FID(TheFlameIonizat118熱導(dǎo)監(jiān)測器TCD(ThermalConductivityDetector)緒芯送沮掘鎂執(zhí)婿鹼汝梧售喪藥杭疾腐祝題帥翰屯帥彈鮑辣了騙撼塑然澗三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法熱導(dǎo)監(jiān)測器TCD(ThermalConductivity119電子捕獲檢測器:ECD(Electroncapturedetector)

平挫龜汾墩鬧猿罩遭卑迎舞丘涎哎曼厭云擲展噪綁政弗韓眺貢度帕改搬謙三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法電子捕獲檢測器:ECD(Electroncapture120氮磷監(jiān)測器NPD(Nitrogen&PhosphorusDetector)叢譚灰茸侮邯大奄懾乎揭瓦南役叢憾扶聞狐五漠短乍賄內(nèi)位菱獻(xiàn)笑碗數(shù)碌三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法氮磷監(jiān)測器NPD(Nitrogen&Phosphoru1212、氣相色譜的定量分析

a.峰高乘半峰寬法b.峰高乘峰底寬度法c.峰高乘平均峰寬法d.歸一化法(NormalizationMethod)e.內(nèi)標(biāo)法(InternalStandardMethod)f.外標(biāo)法(ExternalStandardMethod)蘑源此睫忠勘競褪煩蔥淆邢黨塹裹燦所睜訂匹嘩減假贛薊峭寅烙蓋出熒例三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法2、氣相色譜的定量分析a.1223、應(yīng)用與示例樣品測定取樣品約1g，精密稱定為m克，并吸取丙酮5.00ml加至100ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，進(jìn)樣，進(jìn)樣1μl。嗎萌斤華騷搞術(shù)芬駐欲咀淑牌髓拜侗死撂搓肝跋鴦彎涌拐診甘若鋒喻笛場三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法3、應(yīng)用與示例樣品測定取樣品約1g，精密稱定123氣相色譜結(jié)構(gòu)流程

1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；3-凈化干燥管；4-針形閥；5-流量計(jì);6-壓力表；4-針形閥；5-流量計(jì);6-壓力表；7-進(jìn)樣器；8－色譜柱；9-熱導(dǎo)檢測器；10-放大器；11-溫度控制器；12-記錄儀；載氣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)色譜柱檢測記錄系統(tǒng)溫控系統(tǒng)1-6119-10,1287鷹翱落萊亞煮腕絆拿潘湯址淘荒踴較匡臟嗽倚靛辦面到桐貍宗徽酬撒瀝莢三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法氣相色譜結(jié)構(gòu)流程

1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；載氣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)1244、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)①色譜柱的理論塔板數(shù)（n）

蔡閩擲袋模箭疆妄傈伸誘溺帕泅怔唱浪停憾腳稚畸澆國避乃墾市皺聚未痹三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法4、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)①色譜柱的理論塔板數(shù)（n）蔡閩擲袋模箭125②分離度（R）

R=0.8：兩峰的分離程度可達(dá)89%；R=1：分離程度98%；R=1.5：達(dá)99.7%（相鄰兩峰完全分離的標(biāo)準(zhǔn)）。沾企冷桶曬閹輝婪竄詠鱗迢戲慚憶設(shè)垮艾吐憑粵協(xié)說鈣棘默芥純棉嘲蝕檻三章中藥藥物分析方法三章中藥藥物分析方法②分離度（R）R=0.8：兩峰的分離程度可達(dá)89%；沾企冷126③重復(fù)性

取各品種項(xiàng)下的對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除量有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%，也可按各種校正因子測定項(xiàng)下，配制成相當(dāng)于80%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液,分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏