用：細胞融合課件

動物細胞工程一、回顧舊知整體感知：1.我們已經(jīng)學(xué)習(xí)了哪兩種動物細胞工程的技術(shù)手段？

動物細胞培養(yǎng)動物細胞核移植一、回顧舊知整體感知：2.動物細胞培養(yǎng)的原理和目的是什么？主要應(yīng)用在哪些方面？應(yīng)用之一：生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：

病毒疫苗、干擾素、抗體等原理：

動物細胞增殖怎樣得到能分裂又能產(chǎn)生所需蛋白的細胞呢？動物細胞融合想一想，動物細胞能不能融合在一起呢？原理是什么？受精作用原理：細胞膜具有流動性植物細胞的原生質(zhì)體融合1970年，有兩位科學(xué)家做了一個著名的實驗：人—鼠細胞融合的實驗，動物細胞融合技術(shù)二、深入探究掌握規(guī)律：閱讀課本P52，了解動物細胞融合的概念、操作方法和步驟概念：

動物細胞融合（細胞雜交），是指兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程動物細胞融合物理法化學(xué)法生物法：滅活的病毒動物細胞A動物細胞B雜交細胞﹡離心法振動法電激法聚乙二醇（PEG）當(dāng)病毒作用于細胞時會使細胞相互凝聚，由于細胞膜具有一定的流動性，而使不同的細胞發(fā)生融合當(dāng)病毒作為細胞促融劑時，必需先進行滅活處理動物細胞融合過程誘導(dǎo)細胞膜融合細胞核融合分散為單個細胞比較項目細胞融合的原理融合前處理誘導(dǎo)方法結(jié)果植物體細胞雜交細胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶去除細胞壁離心、電刺激、振動、聚乙二醇獲得雜種植株動物細胞融合用胰蛋白酶使細胞分散除應(yīng)用植物細胞雜交手段外，還有滅活病毒獲得雜交細胞;制備單克隆抗體植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較動物細胞融合與單克隆抗體一、回顧舊知整體感知：1.什么是抗體？抗體是由什么細胞產(chǎn)生的？抗體：

是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。效應(yīng)B細胞（漿細胞）能產(chǎn)生抗體抗體可應(yīng)用免疫預(yù)防和免疫治療傳統(tǒng)抗體的制備方法抗原反復(fù)注射動物從動物的血清中分離抗體產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低效應(yīng)B細胞能產(chǎn)生一種抗體，但已高度分化，失去了細胞分裂能力，且壽命很短

想一想，單個的效應(yīng)B細胞能通過動物細胞培養(yǎng)技術(shù)進行克隆嗎？為什么？怎樣得到既能進行旺盛和細胞分裂，又能產(chǎn)生抗體的細胞呢？小鼠的骨髓瘤細胞能進行旺盛的有絲分裂但不能產(chǎn)生抗體二、深入探究掌握規(guī)律：閱讀課本P53-54，結(jié)合圖2-24，了解單克隆抗體的制備過程。二、深入探究掌握規(guī)律：單克隆抗體的制備過程獲取用于融合的細胞第一步：想一想，怎樣獲得效應(yīng)B細胞？

注射抗原

產(chǎn)生相應(yīng)的效應(yīng)B細胞從融合細胞中篩選出雜交瘤細胞第三步：思考怎樣從多種細胞中篩選出雜交瘤細胞呢？根據(jù)雜交細胞的特性配制選擇培養(yǎng)基，使其它細胞不能生長，只有雜交細胞能生長例：細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人B淋巴細胞中有D、S兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞只有D途徑?jīng)]有S途徑，但能不斷分裂增殖。分析：B-BB在加入氨基嘌呤的培養(yǎng)基上能正常生長瘤瘤-瘤任何培養(yǎng)基上都不能正常生長B-瘤在加入氨基嘌呤的培養(yǎng)基上不能正常生長思考根據(jù)這一特點，怎樣將雜交瘤細胞從多種細胞中篩選出來呢？將這些細胞接種在含氨基嘌呤的培養(yǎng)基上氨基嘌呤培養(yǎng)基氨基嘌呤培養(yǎng)基氨基嘌呤培養(yǎng)基雜交瘤細胞第五步：將篩選出的雜交瘤細胞克隆化培養(yǎng)，使其大量增殖動物細胞培養(yǎng)技術(shù)注射到小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)第六步：從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取抗體由單個雜交瘤細胞克隆后產(chǎn)生的抗體1化學(xué)性質(zhì)單一，純度高2單克隆抗體：優(yōu)點：特異性強、靈敏度高免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合骨髓瘤細胞B淋巴細胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞

單克隆抗體制備過程示意圖多種雜交細胞小結(jié)：雜交瘤細胞的特性單抗制備過程中2種篩選的目的分別是什么？單抗制備中使用了哪些動物工程技術(shù)？單抗的優(yōu)點單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為體外診斷試劑：

用于多種人類及動植物病害的診斷和病原體的鑒定具有準確、高效、簡易、快速的特點（2）用于治療疾病和運載藥物：治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療運載藥物：可以和同位素、毒素、藥物結(jié)合例：新型抗癌藥物——生物導(dǎo)彈單克隆抗體+

抗癌藥物瞄準裝置彈頭優(yōu)點：療效高、毒副作用小教學(xué)反饋1.動物細胞融合技術(shù)最重要的用途是A.克服遠源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細胞B2.單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的

A.B淋巴細胞B.T淋巴細胞C.骨髓瘤細胞D.雜交瘤細胞

D3.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是①淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞A.②④B.①③⑤

C.①②③④

D.②③C4.動物細胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于A.細胞膜的流動性B．細胞膜的選擇透過性

C.細胞質(zhì)的流動性D．細胞質(zhì)酶的活性A5.“生物導(dǎo)彈”是指 A.單克隆抗體B.雜交瘤細胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物D6.只能使動物細胞融合的常用誘導(dǎo)方法是A．PEGB．滅活的病毒C．電刺激D．離心B二.簡答題1.淋巴細胞是由動物體----------------中的---------------細胞分化發(fā)育而來的。2.雜交瘤細胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是---------------------骨髓造血干主動運輸

2、該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細