土壤中分解尿素細菌的分離與計數(shù) 知識清單VIP

土壤中分解尿素細菌的分離與計數(shù)知識清單土壤中分解尿素細菌的分離與計數(shù)知識清單土壤中分解尿素細菌的分離與計數(shù)知識清單xxx公司土壤中分解尿素細菌的分離與計數(shù)知識清單文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準審核制定方案設(shè)計，管理制度第2課土壤中分解尿素細菌的分離與計數(shù)知識清單一、研究思路1．篩選菌株(1)實驗室中微生物篩選的原理人為提供有利于________________生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時________或________其他微生物生長。(2)選擇培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許__________種類的微生物生長，同時________或________其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。(3)分離分解尿素的細菌的選擇培養(yǎng)基①在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是____________，提供氮源的是________，瓊脂的作用是凝固劑。②該培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用。其選擇機制是________________________________才能在該培養(yǎng)基上生長。③土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們體內(nèi)能合成________，將尿素分解的反應(yīng)式是________________________________________________________。Taq細菌能忍受93℃左右的高溫，是在美國黃石國家公園的一個熱泉中發(fā)現(xiàn)的，這說明，在尋找目的菌株時，要根據(jù)____________________________________________。2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法(1)稀釋涂布平板法(也叫活菌計數(shù)法)①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的____________，通過統(tǒng)計平板上的________，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。______________是成功地統(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。②操作第一，設(shè)置__________組，增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇________稀釋度的菌液，分別取mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)并計算菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實值，可將同一稀釋度涂布到三個或三個以上的平板上，培養(yǎng)并計算出__________。第二，為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在________的平板進行計數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠，意味著操作有誤，需重新實驗。③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝×M，其中C代表___________________________，V代表________________________________(mL)，M代表____________。(2)設(shè)置重復(fù)和對照①設(shè)置重復(fù)：培養(yǎng)過程中應(yīng)設(shè)置重復(fù)組，同一稀釋度下應(yīng)涂布________個平板，才能增強實驗的說服力與準確性。②設(shè)置對照：實驗中應(yīng)設(shè)置對照，主要目的是排除________________________對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。如__________對照組，觀察培養(yǎng)物中是否有雜菌污染；設(shè)置________培養(yǎng)基，觀察選擇培養(yǎng)基是否具有________作用。二、實驗設(shè)計實驗步驟1．土壤取樣：從肥沃、濕潤的土壤中，用無菌小鐵鏟鏟去表層土3cm左右，迅速取土壤并裝入____________密封或事先準備好的________中。2．制備培養(yǎng)基：①制備________________培養(yǎng)基作為對照組，尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基作為________，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有____________。②放寬稀釋范圍，如稀釋倍數(shù)為103～107范圍內(nèi)的要分別涂布，而每個稀釋度下需要______個選擇培養(yǎng)基、________個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此需要15個選擇培養(yǎng)基和5個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。③兩種培養(yǎng)基應(yīng)各有一個作為________對照，此外還需準備8個滅菌的試管和1個滅菌的移液管。3．樣品的稀釋與涂布平板：參考下面的實驗流程示意圖，將10g土樣加入盛有90mL無菌生理鹽水的錐形瓶中(錐形瓶體積為250mL)，充分搖勻，吸取上清液1mL，轉(zhuǎn)移至盛有________mL生理鹽水的無菌大試管依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107～103稀釋度的順序分別吸取______mL進行平板涂布操作。按照濃度從_____到______的順序涂布平板，不必更換移液管。說明：圖中的1、2、3平板是____________，4為____________________作對照，判斷選擇培養(yǎng)基是否具篩選作用，還有兩個空白對照，即不涂布稀釋后菌液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，驗證培養(yǎng)基中是否____________。4．將涂布好的培養(yǎng)皿放在30℃溫度下培養(yǎng)，及時觀察和記錄。5．挑選選擇培養(yǎng)基上不同形態(tài)的菌落接入含____________培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生顏色反應(yīng)。6．細菌的計數(shù)當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在________的平板進行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求出____________，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。同時仔細觀察所分離到的菌落，并記錄菌落特征。7．統(tǒng)計表格注：一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時間)，____________表現(xiàn)出________的菌落特征。三、操作提示1．取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都要________。2．應(yīng)在________旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入________中，塞好棉塞。3．在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在________旁操作。4．實驗時要對________做好標記。注明________________________________________等。5．為了提高效率，在操作時更加有條不紊，應(yīng)當________________。四、結(jié)果分析與評價五、課題延伸在細菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細菌合成的________將尿素分解成了________。氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，________升高。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基____________來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入________指示劑，培養(yǎng)某種細菌后，如果pH升高，指示劑將________，這樣，我們就可以準確地鑒定該種細菌能夠分解尿素。知識清單一、1.(1)目的菌株抑制阻止(2)特定抑制阻止(3)①葡萄糖尿素②只有能夠以尿素作為氮源的微生物③脲酶CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找2．(1)①一個活菌菌落數(shù)恰當?shù)南♂尪娶谥貜?fù)三個菌落平均數(shù)30～300某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)涂布平板時所用的稀釋液的體積稀釋倍數(shù)(2)①至少3②實驗組中非測試因素空白完全篩選二、1.(1)無菌信封燒杯(2)①牛肉膏蛋白胨實驗組選擇作用②31③空白(3)9低高