腎上腺皮質激素與性激素

關于腎上腺皮質激素與性激素第1頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五基本結構：環(huán)戊烷駢多氫菲ABCD12345678910111213141516171819第一節(jié)基本結構和分類一、母核第2頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五環(huán)上雙鍵的表示方法：雙鍵位置4

1,4

5

5(10)

第3頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五二、分類：甾體激素腎上腺皮質激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素第4頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五1．腎上腺皮質激素皮質酮的衍生物

Δ4-3-酮基：UV、與羰基試劑反應C17位有α-酮醇基：還原性11C11位有-OH或=O母核含有21個C第5頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五代表藥物：

可的松氫化可的松第6頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五人工合成藥物：地塞米松氫化可的松結構的基礎上1，2位間引入一個雙鍵，9位上引入-F，16位上引入-CH3

在氫化可的松結構的基礎上1，2位間引入一個雙鍵

12氫化潑尼松12916第7頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五結構特點：ⅰ．含有21個Cⅱ．A環(huán)：4-3-酮結構（,-不飽和酮）ⅲ．17位：-醇酮基，有還原性。

人工合成品：1、2位間有雙鍵，6位，9位引入鹵素，16位或16位引入甲基，16位引入羥基等。第8頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五2．雄性激素及蛋白同化激素睪丸素的衍生物

結構特點：(1)母核含有19個C(2)A環(huán)的4-3-酮(3)17位羥基\甲基\酯蛋白同化激素在C10位上一般無角甲基第9頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五代表藥物：甲基睪丸素丙酸睪丸素苯丙酸諾龍第10頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五3．孕激素黃體酮結構特點：(1)含有21個C(2)A環(huán)的4-3-酮(3)17位甲酮基與亞硝基鐵氰化鈉反應第11頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五4．雌激素—雌二醇、炔雌醇及衍生物炔雌醇

雌二醇雌酮(1)母核含有18個C(2)A環(huán)：苯環(huán)，3位Ar-OH

10位無甲基(3)17位：羥基、乙炔基結構特點：第12頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五口服避孕藥炔諾酮異炔諾酮安宮黃體酮第13頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五小結甾體激素碳原子數(shù)A環(huán)17位取代基腎上腺皮質激素214-3-酮-醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯環(huán)C3-酚OH-OH-C≡CH第14頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五第二節(jié)鑒別試驗一、化學鑒別法(一)母核反應H2SO4,H3PO4,HClO4,HCl甾體激素類藥物呈色如：第15頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五(二)官能團的反應1、C17

–

α–醇酮基強還原性TTC——氯化三苯四氮唑(又叫紅四氮唑－RT)BT——藍四氮唑（堿性酒石酸酮）沉淀反應呈色反應第16頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五C3–酮基和C20–酮基:甾酮類激素類藥物呈色羰基試劑＃常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼,異煙肼,硫酸苯肼,氨基脲,苯肼異煙腙（黃色）第17頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五2NCONHNH2HCl黃體酮異煙雙腙（黃色）第18頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物呈色①亞硝基鐵氰化鈉②間二硝基酚③芳香醛3.甲酮基孕激素特征反應。第19頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五黃體酮藍紫色H2O2+-4Fe5CNNOCHCOO黃體酮藍紫色亞硝基鐵氰化鈉其他甾體淡橙色如：第20頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五第21頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五活潑次甲基反應（Zimmermann反應）羰基鄰位的次甲基叫活潑次甲基。羰基C3、C11、C20次甲基C2、C12、C21羰基C17次甲基C16可的松雌酮212211716第22頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸4.酚羥基含炔基的甾體激素銀鹽沉淀AgNO35.乙炔基第23頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五有機氟Fˉ有機破壞有機氯Clˉ6.有機鹵素茜素氟藍—硝酸亞鈰HNO3—AgNO3AgCl↓呈色第24頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五茜素氟藍藍紫色F-第25頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五香7.水解產(chǎn)物的反應第26頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五特臭特臭第27頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（二）制備衍生物測定熔點（三）紫外分光光度法（四）紅外光譜法（特征性強）

中國藥典上收載的甾體激素類藥物均有紅外光譜圖。（五）薄層色譜法（六）HPLC第28頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五第三節(jié)特殊雜質檢查

有關物質、硒、殘留溶劑、游離磷酸鹽（一）有關物質1、來源:原料,中間體,異構體,降解產(chǎn)物2、方法:（具有一定分離能力）TLC法（高低濃度對比法）HPLC法（類似高低濃度對比法）第29頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（1）TLC法（高低濃度對比法）判定方法：規(guī)定雜質斑點數(shù)目規(guī)定雜質斑點顏色（2）HPLC法（高低濃度對比法）

判定方法：規(guī)定雜質峰數(shù)目規(guī)定雜質峰面積第30頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五醋酸氟輕松檢查其他甾體取本品加氯仿-甲醇(9:1)制成3.0mg/ml作為供試液，精密量取適量，加氯仿-甲醇(9:1)稀釋成0.06mg/ml作為對照液；照薄層色譜法，各取5μl，分別點于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇（97:3）為展開劑，展開后晾干，在105℃干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍試液，立即檢視，供試品溶液如顯雜質斑點，不得多于2個，其顏色與對照液的主斑點比較，不得更深。12第31頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五

取本品適量，精密稱定，以無水乙醇為溶劑，配制成每1ml含2mg的溶液（1）與每1ml含0.04mg的溶液（2），用含量測定項下的方法和溶液(0.16mg/ml)，取10μl注入液相色譜儀，調整儀器靈敏度，使主成分峰高度達記錄儀的滿量程。再分別取溶液（1）和溶液（2）各10μl，進樣。記錄至主成分峰保留時間的2倍。溶液（1）顯示的雜質峰數(shù)不得超過4個，各雜質峰面積及其總和分別不得大于溶液（2）主峰面積的1/2和3/4。醋酸甲地孕酮檢查其他甾體第32頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五二、硒1、來源：合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫劇毒2、原理3、方法第33頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五對照品溶液的制備：精密量取標準砷溶液（每1mL相當于1μg的Se）5mL,置100mL燒杯中，加硝酸溶液(1→30)25mL和水10mL,即得。供試品溶液的制備：取本品50mg，照氧瓶燃燒法進行破壞后，將吸收液轉移至100ml燒杯中，用水15ml沖洗燃燒瓶及鉑絲，并入吸收液中，即得。檢查法：將上述硒對照品溶液和供試品溶液分別用氨試液調節(jié)pH值至2.0±0.2后，轉移至分液漏斗中，用水少量分次洗滌燒杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加鹽酸羥胺溶液（1→2）1ml，搖勻后，立即精密加二氨基奈試液5ml，搖勻，在室溫下放置100分鐘，精密加環(huán)己烷5ml，強烈振搖2′，靜置分層，取環(huán)己烷脫水后，測A378nm。規(guī)定A供＜A對。醋酸氟輕松檢查硒第34頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五第35頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五三、有機溶劑殘留（甲醇和丙酮）甲醇：0.3%丙酮：≤0.5%（g/g)GC法第36頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五地塞米松磷酸鈉檢查甲醇和丙酮

精密稱取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加內(nèi)標溶液2ml，加水稀釋至刻度，作為供試液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)與丙酮100μl(≈79mg)置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，精密量取1mL，置10mL量瓶中，精密加內(nèi)標溶液2ml,加水至刻度，作為對照液。取對照品溶液和供試品溶液，照殘留溶劑測定法測定，應符合規(guī)定。第37頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五四、游離磷酸對照品法1、原理：地塞米松磷酸鈉氫化可的松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉氫化潑尼松磷酸鈉第38頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五檢查游離磷酸地塞米松磷酸鈉

精密稱取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加鉬酸銨硫酸試液2.5ml與1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，搖勻，在20℃放置30～50分鐘，照分光光度法，在740nm處測定吸收度，與對照液4.0ml同法處理的吸收度比較，不得更大。（對照液

0.0035%KH2PO4）第39頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（對照液

0.0035%KH2PO4）第40頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五第四節(jié)含量測定一、HPLC,USP、BP、JP均采用,RP－

HPLC（大多內(nèi)標法）（甾體激素類藥物常含有結構相似的其他甾體雜質，對利用結構特征設計的比色法有干擾）特點:用樣量少，靈敏度高，分離效果好第41頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五黃體酮注射液的含量測定取本品適量乙醚50mL量瓶精密量取5.0mL揮散乙醚殘渣甲醇振蕩提取10min/次/4次離心上清液內(nèi)標溶液5.0mL甲醇25mL量瓶供試品溶液的制備對照品溶液的制備15min黃體酮約25mg甲醇25mL量瓶精密量取5.0mL內(nèi)標溶液5.0mL25mL量瓶第42頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五測定與計算供試品溶液5μL對照品溶液5μLHPLCAi供，As供Ai對，As對第43頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（1）專屬性——“干擾”方法學驗證對照品色譜圖陰性對照溶液色譜圖缺黃體酮的模擬注射液供試品溶液的制備(不加內(nèi)標)陰性對照溶液供試品溶液色譜圖第44頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（2）儀器精密度（3）方法重復性——儀器穩(wěn)定性（同一溶液6次測定的RSD）——供試品制備工藝的穩(wěn)定性（同一工藝下平行制備6份供試液測定值的RSD）（4）標準曲線及線性范圍X：Ci（黃體酮）y：Ai/As（待測物與內(nèi)標物的峰面積比值）（5）回收率試驗——方法的準確度→發(fā)現(xiàn)量與加入量的接近程度→R=發(fā)現(xiàn)量/加入量≈1（6）耐受性第45頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五二、UV法△４-3-酮240nm(±)腎上腺皮質激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯環(huán)280nm(±)雌激素①

適用于原料藥。②樣品中“其它甾體”不合格時，不適用。第46頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五三、比色法（一）異煙肼比色法（二）四氮唑比色法（三）kober反應比色法——對照品比較法第47頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（一）異煙肼比色法1．原理

C3—酮基及某些其他位置上的酮基能與羰基試劑異煙肼在酸性條件下形成黃色異煙腙，在一定波長下具有最大吸收，可用于定量第48頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五2、反應條件（1）溶劑：無水乙醇，無水甲醇（2）酸的種類、濃度及異煙肼的濃度

常用HCl

HCl：異煙肼=2M:1M時，獲最大吸收度。

第49頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（3）水分、O2、光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓O2與光線無影響（4）反應的專屬性

反應條件下，△4-3-酮具有一定專屬性

C20—酮基反應慢，

C17—酮基反應慢；

C11—酮基不反應△4-3-酮—室溫下，不到1h反應完全第50頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五倍他米松磷酸鈉的含量測定取本品適量λ=420nm50mL量瓶精密量取1.0mL異煙肼溶液20mL60℃水浴,1h甲醇25mL量瓶供試液：對照液：取倍他米松磷酸鈉適量搖勻冷卻甲醇Ai第51頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五

腎上腺皮質激素類C17-α-醇酮基強還原性1、原理（二）四氮唑比色法（1）紅四氮唑（縮寫TTC或RT）

2、四氮唑鹽的種類：（2）藍四氮唑：BP；ChPUSP第52頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五不溶于水的三苯甲瓚↓深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）第53頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五藍四氮唑（BT）雙甲瓚（暗藍）第54頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五4、討論

結構、反應溫度和時間、水分、堿濃度、空氣中氧、試劑類別和濃度等，對反應速度，呈色強度和穩(wěn)定性有影響。（1）官能團位置的影響

①C11:V11C=O>V11C-OH可的松>氫化可的松第55頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五B：V簡單酯>V復雜酯

醋酸酯>磷酸酯>琥珀酸酯>三甲基醋酸酯（1）官能團位置的影響

②C21：α-羥基（C21-OH）A:21-OH酯化后較母體羥基反應速度慢

即：V游離體>V酯類如：可的松>醋酸可的松第56頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（2）溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→幾無反應—無醛無水乙醇醛→A↑—無水乙醇第57頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五采用氫氧化四甲基銨能得到滿意結果。（3）堿的種類及加入順序的影響

加入順序：先加TTC或BT，后加(CH3)4N+OH-原因：皮質激素與(CH3)4N+OH-長時間接觸，有部分分解。第58頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（4）O2與光線的影響反應過程反應產(chǎn)物怕光→避光、快速O2影響顏色強度和穩(wěn)定性隔絕空氣—充N2快速第59頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五（5）溫度與時間t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑→%↓ChP25℃40～45′BP30℃1h第60頁，共68頁，2022年，5月20日，22點14分，星期五1.原理λmax=465λmax=5