細(xì)胞培養(yǎng)中霉菌污染問題

細(xì)胞培養(yǎng)中霉菌污染問題Julius：我的細(xì)胞被污染了，表現(xiàn)為培養(yǎng)液內(nèi)有渾濁，可見很多白色粉末的東西懸浮，之前發(fā)現(xiàn)一瓶有，就丟了，剩下的及時換液，清洗，可在傳代后的第二天就又見渾濁，仍有部分細(xì)胞是貼壁的，可以看到很多”細(xì)胞“首尾相連成一條條的線狀，可細(xì)胞怎會是線狀生長呢？（抱歉沒有拍下照片）請問是霉菌還是細(xì)菌污染呢？如何區(qū)分細(xì)菌，霉菌及真菌的污染?，F(xiàn)在如何處理呢？污染控制區(qū)大家所說的用甲醛熏蒸，碘伏擦拭，或75%酒精擦拭，是用那種呢？時間要多長呢？因培養(yǎng)箱內(nèi)還有別人的細(xì)胞，現(xiàn)在消毒處理時剩余的細(xì)胞該怎么辦呀？還應(yīng)注意什么呢？liyq_1：應(yīng)該是霉菌污染.其特點正是肉眼可見白色懸浮,形態(tài)呈線狀.qxlbljys：1.細(xì)菌污染液體混濁，霉菌污染可看見霉苔但液體不混，所以你的細(xì)菌和霉菌同時污染處理:扔掉，以免污染其他細(xì)胞2.你說的線狀生長實際上細(xì)胞已經(jīng)接近死亡3.可以將培養(yǎng)箱用75%的酒精擦拭，并停止細(xì)胞培養(yǎng),然后用紫外消毒房間sunandsuny：由于細(xì)菌的生長分裂呈指數(shù)級的生長方式，所以細(xì)菌污染后，培養(yǎng)瓶很快就是渾濁的了，但一般不像霉菌污染,霉菌有菌絲往往呈絮狀漂浮，甚至有絲狀突起.因此霉菌污染和細(xì)菌污染在肉眼上有時可以大體上區(qū)分，這只是一些常規(guī)的經(jīng)驗，如果要具體確定，還要通過涂片染色，看看是球菌或桿菌或是弧菌.葉知秋：原代培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞，貼壁良好，長勢旺盛，可霉菌悄然而至，大有瘋長之勢。不想放棄，該如何處理，敬請指點。ratman：配制以下5X抗生素培養(yǎng)液：AMP:100ug/ml,gentamycin100ug/ml,兩性霉素B2ug/ml,制霉菌素1.5ug/ml,脫氧膽酸鈉10ug/ml,進(jìn)行沖擊，培養(yǎng)時間為8小時后換液，改用1X抗生素培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，以上配方為1x配方。每天換液。icesugar75：別救了。霉菌是抗拒不了地，別讓這瓶細(xì)胞把其它的污染了最重要。eming43：同意樓上的，如果細(xì)胞不是珍貴的沒有了，最好是放棄。你在救細(xì)胞上花的功夫還不如重新養(yǎng)，霉菌真的不好處理，況且放在培養(yǎng)箱里還有可能污染其他的細(xì)胞，更可怕的是換液時把培養(yǎng)基也污染了，那你就等著更多的麻煩吧！dongshiwu：照著二樓的方法有效，我曾經(jīng)僅用二性霉素就將霉菌污染的293細(xì)胞救回來過.linbmm：細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常有意想不到的狀況發(fā)生。昨天觀察我的細(xì)胞時，發(fā)現(xiàn)皿中有黃色斑點形成，斑點邊緣不是很清楚，培養(yǎng)液未發(fā)生變化，細(xì)胞形態(tài)也沒受影響。其實這就是霉菌污染的早期現(xiàn)象。今天再觀察時，斑點已擴(kuò)散，而且皿中斑點數(shù)量也增多了。大家遇到過這種情況嗎？怎樣消除霉菌污染現(xiàn)象？juju：如果發(fā)現(xiàn)霉菌污染，盡早把細(xì)胞扔了，如果是細(xì)胞培養(yǎng)板一孔或幾孔污染，小心吸除后加高濃度氫氧化鈉封閉。避免污染擴(kuò)大，害及其他孔或培養(yǎng)瓶中細(xì)胞。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)污染再加兩性霉素是沒有用的。供參考。jzyxynwm：霉菌污染不要吝惜細(xì)胞，堅決丟棄,復(fù)蘇凍存細(xì)胞，還要注意要把孵箱和整個培養(yǎng)間做徹底消毒用甲醛熏蒸，孵箱用苯酚徹底搽凈!!對于兩性霉素等藥物的挽救措施建議你不要采用，因為任何一種外來藥物對細(xì)胞都會產(chǎn)生不良，甚至未知的影響，包者對實驗嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度，一切從新開始!!!做細(xì)胞培養(yǎng)要抱著平和的心態(tài)去做，不可急功近利，這樣往往事半功倍!!!！soso_fan：一般出現(xiàn)霉菌污染，如果不是非常珍貴的細(xì)胞一般都是扔掉，而且連相關(guān)的容器都要做嚴(yán)格的處理。兩性霉素B可以起到抑制霉菌的作用，一般只是培養(yǎng)前把標(biāo)本短時間的浸泡，培養(yǎng)液里一般不加，因為抗真菌藥物的細(xì)胞毒性還是比較大的，一旦出現(xiàn)了污染還是早點扔掉為好，以免污染其他細(xì)胞造成更大的損失。即使用高濃度的抗真菌藥物處理過，細(xì)胞估計也不會好到哪里了。drhl：我的細(xì)胞最近也出現(xiàn)了霉菌污染，不知道怎么回事。以前是偶爾有一瓶污染，現(xiàn)在卻是大批量的污染。我初步估計實驗時吸管不干凈，因為那批吸管沒有泡酸就高壓了。maokai123：酶菌厲害得原因是霉菌會產(chǎn)生抱子，抱子空氣傳播，比一般接觸傳播的細(xì)菌厲害的多，樓上同學(xué)的吸管我想不是問題，霉菌一般是人帶到細(xì)胞房的，到細(xì)胞房最好換衣服換鞋。污染發(fā)生了除了常規(guī)的處理以外，一定要徹底處理污染材料，焚燒，不要留在實驗室，不然容易重復(fù)污染，空氣要甲醛熏蒸消毒。抱子對紫外的抗性很強(qiáng)。人員的個人衛(wèi)生也重要，試驗服洗洗曬曬吧，不留長發(fā)，常洗澡zhizuchangle：我們是采用在水盤里加硫酸銅來預(yù)防霉菌!wangzhua：我們幾乎所有細(xì)胞均有如圖片中的污染存在,開始時只有較少小黑點粘附在部分細(xì)胞上，后來幾乎所有細(xì)胞身上都長滿了如此的小黑點，這個周期要三兩個月的時間，小黑點長得不是很快，好象開始時對細(xì)胞狀態(tài)也沒有太大影響，但傳代時可見瓶底有很多細(xì)胞碎片似的東西，這個東西多了以后，細(xì)胞長勢緩慢.心疼啊，哪位高手有好的辦法？前兩在清理培養(yǎng)箱，發(fā)現(xiàn)箱體上有霉菌斑,送檢以后說是毛霉菌，如何解決？有時候消化細(xì)胞的時候可見到這些小東西從細(xì)胞的殘骸里跑出來很恐怖，但活動不是很劇烈，只在原位振動,這也是它長得慢的原因吧。所有照片在Nikon倒置相差顯微鏡40倍物鏡下用數(shù)碼相機(jī)拍攝，放大倍數(shù)約800倍哈佩雕：你這下就慘了，長了霉菌細(xì)胞只能扔了，而且整個實驗室和培養(yǎng)箱都要消毒啊。我們實驗室液發(fā)生過類似事件，我把我們處理過程告訴你，希望對你有幫助：首先消毒培養(yǎng)箱，如果你們有兩個或以上培養(yǎng)箱就好辦了，如果只有一個且還有很多其他細(xì)胞就麻煩點。只能暫時的放在超凈臺上。具體如下，中午將空調(diào)溫度打到最高（也只有31度），超凈臺開紫外。下午早點來關(guān)紫外，將細(xì)胞轉(zhuǎn)到超凈臺內(nèi)，用5%酒精擦洗培養(yǎng)箱，再用無臭氧型可移動的紫外等照射半小時，然后將細(xì)胞放回即可（切記CO2瓶子閥門要關(guān)緊啊，不然氣全跑光了）。再消毒實驗室，先把室內(nèi)空調(diào)和消毒柜過濾網(wǎng)都拆下清洗，在錐形瓶內(nèi)加點高鎰酸鉀，放在實驗室地上，然后倒入甲醛，立馬關(guān)門走人就可以了。2天后再開門裝好東西，和往常一樣開始工作了。由于2天不能做事，個人細(xì)胞要先計劃好，大家都可以休息兩天。shaverwoo：確實應(yīng)該仍了，否則挽救只會浪費你更多的時間。我也遇見過，還曾經(jīng)挽救過，我用了制霉菌素來反復(fù)洗滌細(xì)胞，并在培養(yǎng)液里也加了，看著細(xì)胞長好了，還以為成功了，接著傳了二代，還凍了些，可是之后，仍然不斷的有霉菌污染發(fā)生，取出凍的細(xì)胞一復(fù)蘇，根本不貼壁，一查，是真菌，所以趕緊消毒實驗室還有你用的所有材料吧，一定要全部重新徹底消毒jcl738：三天之內(nèi)竟然發(fā)現(xiàn)有兩瓶LB培養(yǎng)基出現(xiàn)了霉菌污染（一瓶加了氨芐），很郁悶，今天不得不把搖的菌倒掉了.使用時嚴(yán)格按照無菌操作了，但為什么還是被污染了呢？我愛標(biāo)標(biāo)：霉菌污染是防不勝防的，你的培養(yǎng)基被污染了，只能說明一個問題:你的實驗技術(shù)還不過關(guān).再繼續(xù)努力吧！frederick：可能是周圍的空氣中有霉菌，你那操作臺附近最近有沒有搬過什么中大型的東西，或移動了什么。我們這里前幾天移了一下冰箱，那個星期的平板搖瓶全染霉菌了,所以你在接種或培養(yǎng)的的時候千萬要注意環(huán)境的變化，霉菌就是在不經(jīng)意見進(jìn)入了你的搖瓶或平板。jcl738：我配的培養(yǎng)基不是我一個人用，我實驗室人都用?。∥沂切率?，可能是我的問題！沒有搬過什么東西，不過我們的超凈臺就在門口附近。實驗室用紫外照可以殺霉菌么？超子植：LB被霉菌污染的原因有1、制作時滅菌不完全，可以增加滅菌的時間到40分鐘試試看2、滅菌完全但是滅菌后無適當(dāng)保存,可以將LB保存在4度的環(huán)境要使用時再回溫并且注意瓶蓋是否有完全密閉3、操作不當(dāng)，操作時未按照無菌操作原則保持無菌環(huán)境或者是操作人員雙手未先以70%的酒精消毒4、菌種受到污染，所種的菌種已經(jīng)受到霉菌的污染,建議換掉菌種5、不論是受到何種因素污染皆可以利用簡單的對照組實驗來找出污染的原因為何建議可以自己試試看freechange：我作了這么多次還沒有被霉菌污染過，可能使我僥幸。但我想主要原因是因為我注意了一下操作：1、我操作的時候，總是在滅菌同時超凈臺外側(cè)窗口處，噴一些醫(yī)用酒精，以控制周圍附近的空氣中漂浮菌。2、在做完試驗后，超凈臺里噴一遍醫(yī)用酒精，然后嚴(yán)格按照紫外滅菌等操作。3、還有，超凈臺長時間使用了的話，要把里面的防塵過濾網(wǎng)拆下來，用吸塵器或者其他東西吸凈，洗凈。wang_gost：培養(yǎng)箱中放一些飽和硫酸銅溶液可以防止霉菌污染細(xì)胞Reesei我做的是霉菌，我也很擔(dān)心染菌，不過我是擔(dān)心把別人的培養(yǎng)基染上我的菌，呵呵有霉菌的話紫外殺菌要長一些，三十分鐘左右；超凈工作臺霉菌與細(xì)菌最好分開用，如果超凈工作臺系統(tǒng)染菌的話，恐怕要進(jìn)行一次徹底殺菌了；培養(yǎng)基ph值可以適當(dāng)調(diào)高一些，霉菌一般喜歡偏酸性。mjing：我覺得還有可能是你們實驗室還有人正在做霉菌的，如果產(chǎn)抱子的話，紫外消毒的時間應(yīng)相對長些.還有你可以加青霉素或鏈霉素在培養(yǎng)基中，效果可能會更好.gleydream：有一個方法可以試試紫外開的時間久一些同時一定要有些間隔比如開20分鐘，然后關(guān)掉10分鐘再開20分鐘記得我得老師以前說過的因為有時候抱子可能沒有完全殺死兩次這樣的話就可以了。還有就是，盡量不要再太潮濕的空氣操作，同時不要裸手經(jīng)過瓶口。最好是能直接放在無菌室。一般很少染菌吧。我得LB沒有加氨卞的，放了1個月都不長菌?？赡芎途头旁跓o菌室有關(guān)，或是超凈臺neighboour：我養(yǎng)的VM總是出問題，原代培養(yǎng)后1-2天內(nèi)沒有什么問題，換液一次后1天毛病開始出現(xiàn)。（1）加血清的VM細(xì)胞出現(xiàn)絲狀漂浮物質(zhì)，生長快速，培養(yǎng)液不混濁，細(xì)胞生長差。貼圖1（2）不加血清培養(yǎng)的VM細(xì)胞沒有出現(xiàn)這種情況；（3）兩者均出現(xiàn)散在的黑色“細(xì)胞形狀”的物質(zhì)，（貼圖2）經(jīng)觀察未見明顯增長和數(shù)量增多。我?guī)熃阏f可能是霉菌污染，并告知我嚴(yán)重的后果，我不知道是不是我的血清有問題？但是我?guī)熃阋灿猛淮笃糠盅b的血清，她沒有這種情況出現(xiàn)。而且上次出現(xiàn)過一次污染之后，我拋棄了我原有的DF12和血清，重新配置和分裝（2）是否為我換液過程中操作不慎？我以前在其他試驗室也是如此操作，沒有出現(xiàn)過問題的呀。（3）黑色的小顆粒物質(zhì)是否和使用酒精燈過火玻璃吸管有關(guān)？我?guī)熃愕募?xì)胞有時也出現(xiàn)過這種情況。在以前的培養(yǎng)室（用液化氣）內(nèi)沒有出現(xiàn)過這種情況。我不敢肯定這次的污染是否和這些物質(zhì)有關(guān)。（4）如果是霉菌污染，該如何消毒呀？？fancychen_78：你的真的是真菌污染，鏈狀的菌珠是真菌的菌絲，你的培養(yǎng)液中加了雙抗嗎，一般雙抗終濃度為：青霉素100U/ml，鏈霉素100u/ml，市售的青霉素為80萬U/瓶，溶于4ml體積內(nèi)，每1000ml培養(yǎng)液中取0.5ml，鏈霉素為100萬u/ml，溶于5ml體積內(nèi)，每1000ml培養(yǎng)液中取0.5ml。污染嚴(yán)重時可以采用5-10倍的沖擊劑量。已經(jīng)吸取過細(xì)胞或培養(yǎng)液的吸管不要放在過分燒，甚至可以不少，否則，蛋白燒后，會釋放有毒物質(zhì)midas：建議可以先把液體過濾一下，在懸浮細(xì)胞，如果還有問題的話，就懷疑是在操作中有問題一一這時最好先看看別人的操作！neighboour：midas是說我把DF12過濾，還是說把培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)液過濾，另外，如果是真菌感染的話，雙抗是否沒有作用呀。midas：當(dāng)然是把加了血清的DF12過濾！生物迷：介紹點我的經(jīng)驗：真菌大多懸浮于液體表面，如果發(fā)現(xiàn)有少量真菌污染可用大量PBS或D-HANKS沖洗，加含有雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)觀察3天，然后看有沒有真菌.我用這種方法救了一瓶非常寶貴的細(xì)胞（用GIBCO胎牛血清外加FGF-2培養(yǎng)了一個月的MSC）.seaman_wang：如果你霉菌污染，有兩種方法，一種是你制備一些小鼠的飼養(yǎng)細(xì)胞加入板上，一起培養(yǎng)，讓飼養(yǎng)細(xì)胞中的巨噬細(xì)胞吃到霉菌。第二種，在培養(yǎng)基中加入制菌霉素。PINX：是真菌污染，可以用兩性酶素B試試看，不要用國產(chǎn)的，因為試劑不純，有較大毒性，GIBCO有商品化的兩性酶素，我?guī)熋糜眠^效果不錯。heimukai13：請問:我先配置DMEM,然后過濾，吸3ml檢菌三天,若無菌，添加FBS和雙抗，過濾后貯存?zhèn)溆?（不知這樣對否？因為我是從別的實驗室學(xué)的，我連續(xù)幾次配，檢菌時都發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面有一層薄薄的如雪花形狀的東西，它在配完培養(yǎng)基第二天下午六七點還看不到,而到九十點就能看到好多，非常迅速，但往后幾天卻又不怎么長了，培養(yǎng)液一直是清澈的很納悶，不知是什么東西,）若配置DMEM后不檢菌，而直接加FBS和雙抗,成為全培養(yǎng)基，過濾備用，可以嗎？2$~1191：雙抗要在配DMEM時就要加，然后過濾！過濾后最好在DMEM中加一點血清在培養(yǎng)，這樣長菌的話快！過濾前是不加血清的，因為血清是很難過濾的！培養(yǎng)基表面的如雪花形狀的東西可能是長菌的，你搖晃一下瓶子，若渾濁了，則很有可能污染了！另外培養(yǎng)基最好不要反復(fù)過濾！這樣營養(yǎng)成分會丟失的！另外反復(fù)過濾的話會偏堿！heimukai13：哦，原來要先加雙抗的!加了雙抗,還需要檢菌嗎，我想一般就生不了細(xì)菌了吧!我不加血清都有漂浮物了，會不會是真菌呢，是的話,怎么防止呢?那些雪花狀的東東，搖一下,還是在表面蕩來蕩去，培養(yǎng)液清澈.（見圖）我過濾加FBS后的培養(yǎng)液很好過濾的!怎么回事呢？八口用6丫：加雙抗也只是防止一般染菌，但像支原體等污染就很難起作用，所以加了雙抗之后還是要驗菌的。感覺你那東西像染菌，因為1）你沒加雙抗；2）開始沒有，第二天才出現(xiàn)（除非你的培養(yǎng)基pH發(fā)生大的變化，一般不可能）。鑒于你每次都出現(xiàn)這種情況，你是否可考慮環(huán)境或操作有問題，你也沒說具體，所以只能作為建議。小牛血清不好濾是相對的，我濾過小牛血清，只是比不加血清的培養(yǎng)基難濾，有時含血清培養(yǎng)基用久了，我還用濾器濾過呢！heimukai13：我第一次配時沒有發(fā)現(xiàn)這種情況,后面三次操作都一樣，而且用的都是剛滅過菌的東西，而出現(xiàn)照片上這種東西了，會不會是培養(yǎng)液里的氨基酸什么的析出來了呢，因為這雪花樣?xùn)|西過上幾天還是這么多，是菌的話應(yīng)該長瘋了吧!而如果是支原體的話，應(yīng)該肉眼看不見的了.scp：應(yīng)該不是氨基酸析出，若是氨基酸析出的話沉淀是在底部的。漂浮在上面會不會是霉菌呀？你有沒有用這種培養(yǎng)基養(yǎng)過細(xì)胞呀？不妨嘗試一下看看有沒有污染，如果沒有污染的話，大可繼續(xù)使用。還有。雙抗一定要在過濾之前就加上，血清最好也是這樣（雖然過濾速度會慢一些）。heimukai13：應(yīng)該不是霉菌吧，霉菌是絲絲連連的，絨球球樣，長起來好多就懸浮在培養(yǎng)液里了，有一瓶細(xì)胞曾經(jīng)污染過，這個就不一樣了!我試試看用它來培養(yǎng)細(xì)胞！朱晶：：雙抗一定在要濾之前加，對于DMEM培養(yǎng)基我建議在-20凍存后，如果想用最好提前一天化出來，放到4度里放一天再用，這樣比較好，因為這種培養(yǎng)基極愿意產(chǎn)生一些析出物，放置一天會就會溶開了。而且我覺得血清最好還是不要過濾，里面含有一些大分子的營養(yǎng)成份，如果過濾的話對血清本身來說是一種損失。szmengjie：我第一次培養(yǎng)T淋巴細(xì)胞，加了PHA刺激其生長。發(fā)現(xiàn)顯微鏡下它們長得特別快，昨天還是密度適中的圓圓，亮亮的小豌豆一樣的游離的細(xì)胞。細(xì)胞中間有些聚集成團(tuán)的顏色較深的象一堆血小板一樣的東西。今天一看，已是長得平鋪了一視野的密密麻麻的看不出單個細(xì)胞的形態(tài)，大小。呈向心性分布，即中間密度尤高，而越到邊緣，則稀疏點。在稀疏處可看到圓圓，亮亮的小豌豆一樣的游離的細(xì)胞。肉眼培養(yǎng)液里有白色絮狀物。白色絮狀物究竟是污染還是細(xì)胞數(shù)太多？菊花與刀：是不是霉菌感染呢，我前段時間培養(yǎng)的細(xì)胞最后就是感染霉菌了，就是一團(tuán)一團(tuán)的漂在上面，中間密度高，周圍稀疏，高倍鏡下可以看到菌絲。szmengjie：我想霉菌污染是有可能，我用的是24孔培養(yǎng)板，因為標(biāo)本是斷斷續(xù)續(xù)地來，一次只能用其中幾個，將那些細(xì)胞懸液吸走后，因還有沒用過的孔，舍不得丟掉培養(yǎng)板。過一天，看那些曾用過的孔，孔底部長出象雪花一樣的，也可說象海藻一樣，每個枝象細(xì)胞生物學(xué)上分子篩的圖像一樣。我想問：1細(xì)胞太多能出現(xiàn)白色沉淀嗎？2霉菌污染除開看到菌絲，還有其他方法證明其存在嗎？早期有什么補(bǔ)救措施嗎？3我對細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)的污染實在沒有概念。有沒有哪里提供圖譜，讓我們這些新手認(rèn)認(rèn)敵人的面貌呢？culture-spirit：1、可以，鏡下可見此處細(xì)胞程大團(tuán)分布2、如果霉菌污染已經(jīng)到了出現(xiàn)白色沉淀的時候，一般能夠看到菌絲了，鏡下相當(dāng)明顯3、這個我也沒有找到，好象一些細(xì)胞培養(yǎng)的書付頁里有，可以請教其他戰(zhàn)友qjzhou2000：1、不會是沉淀的，仔細(xì)看應(yīng)該還是可以看到細(xì)胞形態(tài)的，你用的是不是olmpus的相差境？那種倒置境的相差效果很好，細(xì)胞看起來有點象珍珠。2、霉菌看到菌絲的時候就很厲害了，早期不容易發(fā)現(xiàn)，可以加兩性霉素之類的抗霉菌的抗生素，具體請在該區(qū)搜索，很多都講到了。3、現(xiàn)在還沒找到，不過一些描述還是很直觀的。midas：細(xì)胞數(shù)太多會出現(xiàn)片狀的脫落，所以白色絮狀物污染的可能性大些！獨上高樓：霉菌污染后細(xì)胞多生長很慢，象你這種情況，細(xì)胞一夜就長滿，霉菌污染的可能性不大。另外，霉菌污染也不能一下就看出白色絮狀物，而是先在鏡下看到較稀少的短小黑色分枝串珠，再看到較密集的短小黑色分枝串珠，最后才能肉眼看到白色絮狀物，這個過程大約要1個星期左右，而且在這期間細(xì)胞幾乎不生長。szmengjie：前段時間我老被這種在細(xì)胞培養(yǎng)液中白色的象一片白膜的東西困擾。40倍鏡下同“細(xì)胞污染討論區(qū)”貼出的圖片一樣。上周我送了個培養(yǎng)，結(jié)果證實是真菌污染。顯微鏡下（100倍油鏡）染色后可見到一顆顆象紅色的南瓜子一樣的東西（真菌抱子）。據(jù)細(xì)菌室的老師說還可在這些“紅南瓜子”間見到絲一樣的東西?？赡芫褪蔷z了。我已經(jīng)非常注意實驗器材的消毒滅菌，操作應(yīng)該也沒問題。于是將試劑一個一個吸取了放在顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)是洗細(xì)胞的HANK'S液被真菌污染了!現(xiàn)在我已經(jīng)換了HANK'S液，這種污染可以說被控制了。yoyo：我想應(yīng)該是污染了，因為我也遇到過，過幾天就看到放射狀的菌絲了topgun：象霉菌的菌絲，但應(yīng)該觀察其數(shù)量是否增多？因為霉菌污染在2-3天內(nèi)可見大量的菌絲！如果是不小心帶進(jìn)去的棉絮則不會有數(shù)量的增加且培養(yǎng)基也不會變混濁。yuandong：我想應(yīng)是霉菌，白色，絮狀，培養(yǎng)基變成了黃色。apple：不象霉菌污染。前兩天我培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞被霉菌感染了，好典型的樹枝分叉樣。象抽絲一般。chenting100：是霉菌，我們的細(xì)胞就經(jīng)常出現(xiàn)這種污染，實驗室老師說霉菌有好多種變異呢。huvec：其中有多細(xì)胞真菌污染的特征性標(biāo)志：菌絲！wujinghui：我得細(xì)胞培養(yǎng)液中不知道是什么東東，它漂浮生長，在瓶底是白色的，在低倍境下就能看到，在培養(yǎng)瓶里邊呈葡萄狀，還有的呈樹枝狀，剛開始時候生長的不快，但是很快就長得很快。不知道這個東西是什么東西，英文名字怎么寫，最好能告訴以下如何控制！ya2cyto：霉菌感染。霉菌是以抱子在空氣中傳播，細(xì)胞肯定是不能要的了，一旦污染很難控制用環(huán)氧乙酸熏蒸培養(yǎng)箱，最后再對培養(yǎng)箱進(jìn)行無菌實驗方可使用wujinghui：不是霉菌，因為霉菌不用顯微鏡就能看得到的。我這個不用顯微鏡是看不到。shyaroom：不信？你再放個三天，肯定就能用肉眼看到啦，呵呵。不過建議你換個地方放，別把其它細(xì)胞再給污染了。ylh1976：霉菌，樹枝狀的東西是菌絲，葡萄狀是霉菌。趕緊處理掉細(xì)胞，培養(yǎng)箱、操作臺還有整個培養(yǎng)室好好消毒一下。梅雨季節(jié)要千萬小心，空氣中到處都有霉菌抱子。深谷幽蘭：各位，有時雞胚成纖維細(xì)胞也連在一起，呈樹枝分叉狀，而正常的細(xì)胞單個散在，這是怎么回事？junny999：我的一個同事養(yǎng)的細(xì)胞被霉菌污染，我與她共用一個培養(yǎng)箱，為防止交叉污染，我想在我的培養(yǎng)基里加點抗霉菌的藥，請教加哪一種藥物比較好？劑量怎樣添加？我養(yǎng)的是MSCXTYang：Invitrogen公司的Fungizone,1%(v/v)的用量。對有些細(xì)胞有毒害作用。renjiaqiang：我覺得你最好不要加，我加過抗霉菌藥物后細(xì)胞生長很慢，而且形狀也發(fā)生改變，不得已重新買了一株細(xì)胞，你現(xiàn)在可以先把細(xì)胞凍存，將培養(yǎng)箱消毒后繼續(xù)進(jìn)行實驗。lingzhiting：最好不要用吧！我用過nystatin，40Iu/mL。霉菌沒長起來，不過也許是不溶的緣故，細(xì)胞生長很慢，而且還引入了不明雜質(zhì)，洗了幾次，才逐漸洗去。wuguojun：如果沒有長真菌就不要加抗真菌藥物，因抗真菌藥物有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，加了結(jié)果會適得其反。最好能把環(huán)境處理一下。qianyimei：星期一復(fù)蘇了一支細(xì)胞株，養(yǎng)到星期三還好好的。心太急。老希望它能長的快些，所以，將一瓶配成三瓶用，結(jié)果倒好，今天早上一來，就發(fā)現(xiàn)里面長了很多成團(tuán)的碎片狀的東西，眾師兄都說是霉菌，叫我倒掉，好可惜，好郁悶！早知道就不換液了，這一換，全軍覆沒。那位能有更好的辦法嗎。zhaoqingshan：用含雙抗的PBS洗幾遍，換上好的培養(yǎng)液（比如用點好的胎牛血清）；每天洗1-2次，只要細(xì)胞狀態(tài)還好，洗幾天，就能把霉菌去除。然后，檢查霉菌污染的原因，清除污染源。zjuaxiu：根據(jù)經(jīng)驗霉菌污染了用雙抗的pbs沖洗基本是沒什么作用，只能是浪費雙抗pbs時間zhaoqingshan：那只是說明你的經(jīng)驗，不巧的很，我的細(xì)胞細(xì)胞很嬌貴，培養(yǎng)液價值約10元/ml）去年七月霉菌污染了一次，全部搶救過來。不可否認(rèn)很多時候是搶救不回來，前提條件是早發(fā)現(xiàn)污染，霉菌對細(xì)胞還沒有構(gòu)成太大傷害時候，是可能搶救回來的。當(dāng)然，最重要的是不要有污染了，預(yù)防最重要，即無菌觀念要強(qiáng)。flyingpumc：用3微克每毫升的兩性霉素殺殺試試!!！eweiren：如果不是唯一的一管細(xì)胞，我覺得沒有必要費這么大力氣去挽救，因為有了霉菌，基本上是無法去除的，通過換液只能達(dá)到抑制真菌的生長，在鏡下看不到不代表不存在，只是由于少或者芽抱看不到，一段時間后它可能還會出來，耽誤試驗啊！zhaoqingshanRe:碧海娃娃雙抗PBS是指含有雙抗（青鏈霉素）PBS（磷酸鹽緩沖液，也不能殺死霉菌，殺霉菌應(yīng)該用兩性霉素或制霉菌素），使用雙抗PBS沖洗僅僅是預(yù)防其它細(xì)菌的污染而已。Re:eweiren，你說的是很對的，真正嚴(yán)格的實驗是不應(yīng)該有污染的。細(xì)胞株拿來后，傳代幾次，細(xì)胞多了，就應(yīng)該凍存一些，一方面以免細(xì)胞傳代次數(shù)多了變成非二倍體或者其它變異，另外就是以防污染。如果自己培養(yǎng)的原代細(xì)胞，可以挽救一下試試，大部分情況是難以回天的，看運氣了。不過，我那次污染正是霉季，一般實驗室在這個時候，可能就不養(yǎng)細(xì)胞了，我們實驗室是我們院里無菌觀念最嚴(yán)格的一個實驗室，在這以前，細(xì)胞從來沒有污染過。那時候可能是因為空調(diào)很久沒有擦洗消毒了，而我又太大意，因此感染霉菌了。不過，那次我還真的就救回來了，因為我的培養(yǎng)液中，營養(yǎng)條件特別好，而且我每天洗幾次，換液，細(xì)胞沒有任何的受影響的表現(xiàn)，我做的是原代細(xì)胞傳代到第三代，剛好該做實驗，因此就全部用來做了同一批的實驗。避免真菌污染的幾個措施：1、嚴(yán)格的無菌操作；2、無菌間定期打掃、消毒，保持干燥；3、各種培養(yǎng)液、培養(yǎng)器皿的嚴(yán)格消毒；4、溫箱中消毒水中放置過飽和的消毒的磷酸氫二鈉或者硫酸銅。eyeball：霉菌污染了用雙抗的pbs沖洗基本是沒什么作用，只能是浪費。關(guān)鍵是液體一定要保持無菌。培養(yǎng)液過濾后要取一點先放培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)三天，無菌生長后再用。dongshiwu：我曾經(jīng)就回來過遭霉菌污染了的細(xì)胞。如果細(xì)胞好養(yǎng)或有存貨的話，干脆從頭作起，要是舍不得可以用PBS液洗3遍，在新的培基中加兩性霉素。XTYang：最好棄掉，要不在以后的培養(yǎng)基中加Invitrogen公司的Fungizone，多換幾次后也可。wangfx_vet：我最近養(yǎng)的細(xì)胞總是出現(xiàn)空泡并且不斷死光。改變血清濃度也沒有用，不知道怎樣解決俺來了：是不是排出污染，比如霉菌包子感染可能這樣，因為我的前面一批細(xì)胞就這樣，培養(yǎng)基不混，細(xì)胞內(nèi)有很多空泡，且可見一些比細(xì)胞大得多無明顯細(xì)胞結(jié)構(gòu)的‘圓形細(xì)胞”里面有很多小的空泡，如果是這樣的話，那就是霉菌污染，但愿你的不是，否則，什么都得重來！wangfx_vet：對對！就是樓上老師說得那樣！那末說我的細(xì)胞是污染霉菌了?。。。?？？那我就慘了，這是引進(jìn)的細(xì)胞哎，沒了就永遠(yuǎn)沒了！沒有拯救的辦法嗎？hkai97：霉菌污染是很煩的問題，試試殺霉菌的藥物.這只能是死馬當(dāng)活馬醫(yī)了.重要的是預(yù)防.常做清潔和消毒,保持實驗室的潔凈度.否則還會出現(xiàn)細(xì)胞污染.doctormeng：誰知道細(xì)胞培養(yǎng)血清中出現(xiàn)黑焦蟲，該怎么辦？有沒有專門對付他的東東，比如抗生素之類？我養(yǎng)的細(xì)胞中出現(xiàn)了：中間一個黑黑的東西，其四周包圍有象棉花樣的的東西，不知是不是黑漿蟲。其周圍的東東，有點類似于菌落。huiql：我以前也遇到過這種情況，估計可能是真菌污染，慢慢地培養(yǎng)液就變混了，有人說用制霉菌素在剛出現(xiàn)時可以制服，但我沒有試過，聽說南方的真菌污染和北方的不一樣，這種可能屬于南方的。義超：先需確定到底是何種微生物，可以去微生物科做細(xì)菌培養(yǎng)來確定。如果是真菌，細(xì)胞又實在很難得，可在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入二性霉素D來挽救，也許有用。hantian：黑膠蟲好象不是諸位描述的樣子。我碰到的黑膠蟲有點類似與桿狀細(xì)菌，但長度比細(xì)菌長，而且會左右擺動，甚至游動。這是血清中帶來的，不屬于細(xì)菌，普通的抑菌方法是沒用的，而且他長勢很快，所以遇到這種情況只能倒掉。也有人說，進(jìn)口血清中的黑膠蟲要甚與國產(chǎn)血清。ph123：同意樓上的意見。我亦在細(xì)胞培養(yǎng)中遇到同樣的問題膠蟲成熟后呈線狀，可以快速移動，一般由血清中帶來，如果發(fā)作的話只有把細(xì)胞棄掉，而且要趕快換血清。但你描述的情況還不能肯定是膠蟲,可以通過培養(yǎng)，在油鏡下觀察一下，看是否是污染.另外如果你觀察到的情況沒有發(fā)展，細(xì)胞不受影響的話，亦可能是血清中的纖維蛋白沉淀.icesugar75：AsfarasIknow,theblackclusterismostly霉菌，sinceIencountereditbefore.Butyoucouldknowitquicklyifitis霉菌，becaue霉菌isgrowingveryfast,finallyshowingupinunclearappereancecsdoctor：聽協(xié)和基礎(chǔ)所的陳實平老師說，她并不認(rèn)為真有什么黑焦蟲。icesugar75：一般霉菌很難控制，一天或是兩天就長起來了。如果剛剛懷疑有霉菌，加雙抗可能會好使，但說實話，剛剛開始要想判斷是不是霉菌真是太難了，當(dāng)時的霉菌類似死細(xì)胞，兩三個小團(tuán)在一起，暗的，如果不是特別有經(jīng)驗，很難說是不是。所以如果發(fā)現(xiàn)有小黑點，取出一點放入37度培養(yǎng)箱中一天就知了，而把余下的血清凍好。如果運氣好，雙抗會管用，不好就扔了吧。lim99011：雙抗好像對霉菌沒有用吧?我好像記得霉菌用的是兩性霉素,雙抗沒有作用的.zzy8896：一點經(jīng)驗之談！我在養(yǎng)pc12細(xì)胞時出現(xiàn)過這種情況，我的細(xì)胞也是莫名奇妙的出現(xiàn)，而且過幾天后，細(xì)胞活力狀態(tài)明顯下降，最后死亡，但不同于一般的細(xì)菌和霉菌。我請教了許多人，沒有結(jié)果。我試用g418加在培養(yǎng)基中，養(yǎng)了一陣子，后來就消失了，但你要摸一下濃度。到現(xiàn)在我還是沒有搞清楚什么原因，可以試一下。我傾向于它是一種特殊的細(xì)菌ronic：我也覺得雙抗對霉菌沒有用，加抗真菌的藥試試看了，不過好像很貴，而且細(xì)胞對它的耐受性比較差。Yong：建議慎用G418,除非你的細(xì)胞有抗性happywind：養(yǎng)原代，不幸4天后發(fā)現(xiàn)多瓶慘遭霉菌毒手，有一瓶細(xì)胞貼壁挺好，且菌絲沒有沾在瓶底上，因此我想試著救救這瓶細(xì)胞，換液，反復(fù)沖洗，最后再放進(jìn)孵箱，結(jié)果過了兩天，培養(yǎng)瓶里的細(xì)胞竟然長的挺好，沒有絲毫霉菌污染的跡象。難道這樣也可以！kaize：不知污染的細(xì)胞的一些基本特性會不會改變chelonian：但是這樣的細(xì)胞，做實驗結(jié)果可信嗎Skyhawk：這是我們實驗室細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)的不像霉菌，不像死細(xì)胞的東西，培養(yǎng)越久越多，看看大家是不是也遇見過，是什么呢？什么原因引起的？（圖：http:〃/bbs/post/view?bid=66&id=&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#）以上圖片取自轉(zhuǎn)染有目的基因的cos7細(xì)胞，是在用G418篩選時出現(xiàn)的東西，不同細(xì)胞都有（vero細(xì)胞也是），我的師兄和師姐都出現(xiàn)有類似的情況，但我的細(xì)胞沒問題（和師姐的實驗?zāi)康囊粯?，只是我是自己另外?zhǔn)備培養(yǎng)基的），目前他們都挺困惑的，希望得到dxyer的幫助?。縯aolt：我感到是真菌污染，肯定不是培養(yǎng)液解凍后出現(xiàn)的東西。我們這里配好的培養(yǎng)液都先凍到一20度，等用的時候再拿出來用，已經(jīng)有4-5年了，從來沒有見過這樣的東西。我有一次也是感染了真菌，與你的照片很相似，而且在早期并不影響細(xì)胞的生長，甚至細(xì)胞長得速度更快了。這可能是因為有的真菌會分泌一些能促進(jìn)細(xì)胞生長的因子有關(guān)。加些抗真菌藥物，要是不重要的細(xì)胞就扔掉吧。再看看細(xì)胞孵箱里有沒有真菌斑！Skyhawk：我們一般都是把培養(yǎng)液配成1X,過濾后放4度保存使用。所以，應(yīng)該可以排除是培養(yǎng)液凍溶的問題。培養(yǎng)久了，細(xì)胞生長狀態(tài)不好了，但培養(yǎng)液沒有變渾，不像是細(xì)菌污染。真菌污染倒很有可能。誰有類似情況的照片放上來看看？曾經(jīng)用不含抗生素的培養(yǎng)基出現(xiàn)過細(xì)菌污染，反復(fù)用雙倍抗生素的PBS洗后，用含抗生素的生長液培養(yǎng)，不再出現(xiàn)污染?？磥磉@個方法可以用于一般的細(xì)菌污染的解救。如果是真菌污染，我想可以用類似的方法，但抗生素要用相應(yīng)的抗真菌的。勤換液。但這個方法適合在污染不是很嚴(yán)重的時候用。helenm：培養(yǎng)的細(xì)胞有輕度的霉菌污染，有辦法補(bǔ)救么？這可是我辛苦養(yǎng)了兩個月的細(xì)胞。iris_cql：以我以前養(yǎng)各類細(xì)胞的經(jīng)驗，出現(xiàn)霉菌的最好補(bǔ)救方法：1、重新配置所用的全部培養(yǎng)液、PBS、消化液等，確保無菌！2、用雙蒸水洗細(xì)胞1—2次，然后在用PBS洗細(xì)胞1—2次。記住動作一定要輕柔！后換上新配的培養(yǎng)液！3、徹底打掃細(xì)胞室，培養(yǎng)箱等。little_G：偶的經(jīng)驗是，如果發(fā)生霉菌污染，最好是馬上檢測，一般輕微霉菌污染對檢測結(jié)果的影響不大。至于想解救，你想想用什么抗菌素能行呢，除非你用復(fù)康唑，那也難說好用。最好徹底重來，只要不影響別人的和自己的其他細(xì)胞就算萬幸了。小樣一菜鳥跑路：霉菌污染是不是培養(yǎng)基一定變混濁？霉菌能進(jìn)入細(xì)胞嗎？在我印象中是培養(yǎng)基變得很混，能見到白色的菌絲之類的，細(xì)胞狀態(tài)不是很好?？墒怯腥苏f霉菌污染能進(jìn)入細(xì)胞，是真的嗎？loyal1006：霉菌污染后培養(yǎng)基不一定會變混，是否變混要看霉菌的生長速度。霉菌污染肯定會影響細(xì)胞生長，最終結(jié)果是導(dǎo)致細(xì)胞脫落、死亡。霉菌較大，污染后很容易在顯微鏡下看到大量的典型的霉菌絲。angel2004：我的細(xì)胞被真菌污染了，有什么補(bǔ)救措施sonina你用兩性霉素處理，最好作抑菌試驗，確定使用濃度。之后，用兩性霉素的培養(yǎng)液培養(yǎng)一代，如果霉菌消失，換用正常的培養(yǎng)液（即沒有兩性霉素的培養(yǎng)液）培養(yǎng)一代，如此反復(fù)3次，確定沒有霉菌后，以致可用正常培養(yǎng)液培養(yǎng)。這樣太浪費時間，最好還是棄掉污染的細(xì)胞，重新復(fù)蘇新細(xì)胞。zhanghong38：我是一個試驗新手，現(xiàn)培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞，反復(fù)遇到霉菌污染問題，已試過用酒精和新潔爾滅試擦孵箱，但均不奏效，懇請各位師兄師姐不吝賜教，感謝。topgun：關(guān)于污染的問題，這涉及幾個方面的因素：操作，超凈臺、孵箱。（1）操作：做實驗時應(yīng)養(yǎng)成無菌觀念（操作前用70%酒精檫手，實驗時如吸管等物品接觸到臺面應(yīng)立即更換，并隔3-5分鐘用酒精燈燒灼吸管）。（2）超凈臺：如果超凈臺使用時間過長（3-5年以上），應(yīng)及時更換濾板。消毒的紫外燈管也按時更換。在操作前用酒精或新潔爾滅檫拭臺面。（3）孵箱：懷疑孵箱污染時，將孵箱關(guān)掉，然后用上述消毒劑消毒，之后用移動紫外消毒車將紫外燈插入孵箱照射30分鐘以上。zrzhong6519：還有注意孵箱內(nèi)的水盆，經(jīng)常檢查，如發(fā)現(xiàn)有絮狀物，立即更換滅菌水，之前用75%乙醇擦拭，第二天要及時察看是否徹底，不徹底在按上述方法再來。Iwangfang：我建議你們把所有的與培養(yǎng)相關(guān)的物品進(jìn)行一次徹底的消毒，然后啟動孵箱的自動消毒功能讓其消毒過夜，再注意一下操作。我覺得物品污染的可能性比較大。yoyo：反復(fù)遇到霉菌污染問題，最可能的還是在操作中不太注意無菌觀念所致。應(yīng)當(dāng)要常用75%酒精消毒手，靠近火焰旁操作，注意吸管口，瓶口等不要接觸到桌面或手等地方，如果碰到，盡可能棄用吸管，或者在火焰上烤一下。超凈臺也是關(guān)鍵的，每天使用前消毒30分鐘，用完也應(yīng)當(dāng)消毒30分鐘。孵箱，已試過用酒精和新潔爾滅試擦，應(yīng)該可以視做是安全的。個人觀點ahui：主要考慮手的污染。獅心：霉菌反復(fù)出現(xiàn)，還有一個問題要注意：環(huán)境濕度，必須注意除濕，長期不用的東西，使用前必須從新消毒，把沖洗消毒和培養(yǎng)分開liuxiaohua889：以前是否養(yǎng)細(xì)菌?可以全面消毒再作，有條件換培養(yǎng)箱，無水的較好miffyqx：感覺有細(xì)胞污染了，于是很不放心，請問染菌的培養(yǎng)瓶再污染別的瓶里細(xì)胞，直至污染整個培養(yǎng)箱里東西的幾率有多大？以前聽說過會這樣的香山雪林：你的培養(yǎng)箱采用什么樣的抑菌方法？我現(xiàn)在采用的是：水盤中裝飽和的硫酸銅溶液（無菌水配），有資料說可以增大保險系數(shù)。miffyqx：我們的做法和你們差不多：飽和硫酸銅溶液配制后，高壓蒸氣滅菌，放在水盤里。這樣很有用是嗎？特別防箱內(nèi)染菌？？shyaroom：霉菌污染會染壞一箱子細(xì)胞，因為霉菌會飄，但細(xì)菌不會的。yuefeiyf：硫酸銅只是保證水不長菌，對其他地方無效。路遙只要搶救措施及時應(yīng)該不會有大問題，我的細(xì)胞出現(xiàn)過霉菌污染，但及時用苯酚消了孵箱，用甲醛重熏了培養(yǎng)間，沒出什么大問題.pipi：CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。gongqiang：孵箱霉菌污染，經(jīng)新潔爾滅及酒精徹底擦洗數(shù)次并紫外照射滅菌處理，仍有霉菌滋生，懇求高手出招解救！:天氣炎熱，霉菌也開始肆無忌憚的繁殖。想想去年這個時候，也被霉菌折騰得郁悶無比。還好后來控制住了。經(jīng)驗如下：1、細(xì)胞培養(yǎng)室大掃除，水池、吸引器中的引流瓶等無一不是霉菌孳生的地方。然后室內(nèi)進(jìn)行紫外燈照射殺菌。2、培養(yǎng)箱消毒時是否注意了里面的幾層鋼板。紫外線照射時得拿出來。我當(dāng)時干脆就放到180度烤箱里考過夜。3、處理培養(yǎng)箱時還有個要考慮的地方，培養(yǎng)箱內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶。重新放回去的時候得用酒精將瓶周搽洗數(shù)次，能換掉更好。4、培養(yǎng)箱搽洗時重點在箱底的四個角落。碰到頑固的霉菌孳生時的確很傷腦筋，最夸張的時候消毒第二天箱底就看到白色的點裝物?？偟脑瓌t就是徹底的殺、殺、殺！當(dāng)時我就是這么處理的，后來情況大為改觀。你可以再試試。gongqiang：謝謝！我已經(jīng)和霉菌奮戰(zhàn)近一個月，我總是失敗者！上述方法：如將培養(yǎng)箱能拆下的都經(jīng)高溫高壓消毒，各個角落每天新潔爾滅、酒精擦洗，都不行，辛苦不敢說，努力總沒結(jié)果！amwwxf757：你應(yīng)分析一下每次成功和失敗的原因，用本子記下來。操作要細(xì)心。請一位有外科經(jīng)驗的人給你看一下是不是有漏的地方?jīng)]有消毒好。全面包括各種試驗品和培養(yǎng)器。flyingpumc：因為霉菌有抱子的存在，所以酒精，新潔而滅，紫外線等等根本不可能去除霉菌！我們原來用過國外帶回來的一種試劑稀釋后可以用來抑制霉菌，但是我們沒有發(fā)生過霉菌污染，所以不知道效果到底怎么樣？而且這種試劑可以稀釋后直接放在孵箱內(nèi)，此試劑對細(xì)胞沒有毒性！具體是什么我也忘了?。∧阕约汉煤貌椴榘?！應(yīng)該會有這種試劑賣!zjuaxiu：有帶消毒程序的培養(yǎng)箱，很方便。jzyxynwm：整個培養(yǎng)間用福爾馬林和高鎰酸鉀熏蒸,孵箱內(nèi)部包括托盤等全部用苯酚搽洗，封閉2天，基本就沒問題!!但培養(yǎng)良好的無菌觀念是前提！真菌多數(shù)是空氣中懸浮污染，所以除紫外線照射外，每次進(jìn)出培養(yǎng)間要用來蘇或者新潔爾滅搽地，減少空氣懸浮顆粒及細(xì)菌！！開心的水：一周清洗一次，75%酒精擦洗，再將溫度打到94度持續(xù)3到4分鐘。wangyibo：孵箱內(nèi)托盤的水中加一些硫酸銅可抑制霉菌。無影劍客：做原代培養(yǎng)，20多天后已經(jīng)傳代或要傳代時幾瓶細(xì)胞均出現(xiàn)局部黏附在在瓶底的葡萄狀漂浮物，搖晃后會有部分脫落。有兩瓶突然出現(xiàn)渾濁，鏡下找不到細(xì)菌。換液后漂浮物較前增多。疑為霉菌污染。原代培養(yǎng)做的好辛苦，突然發(fā)現(xiàn)大面積污染，最近一兩個月的工作就要化為烏有。請教已經(jīng)出現(xiàn)的污染有沒有辦法彌補(bǔ)。兩性霉素B如何配制、貯存及污染后的最大應(yīng)用劑量。youngtiger：做原代培養(yǎng)出現(xiàn)污染原則上應(yīng)遺棄細(xì)胞，但鑒于你的個人原因及我以往排除污染的經(jīng)驗，現(xiàn)給出以下建議：兩性霉素，濃度范圍1-50ug/ml,常用濃度3ug/ml；制霉菌素，濃度范圍1-500U/ml,常用濃度50U/ml。兩者任選其一。Pathway：建議樓主樓主試一試用96孔（或48孔）細(xì)胞培養(yǎng)板來培養(yǎng);這樣局部的、偶然的污染不會使實驗全軍覆沒。因為我也經(jīng)常要做原代培養(yǎng)，一般會同時接種細(xì)胞培養(yǎng)皿和96孔板。因而有時會出現(xiàn)這樣的情況：5塊96孔板總共只有4、5個孔污染了，但所有的細(xì)胞培養(yǎng)皿都污染了。從來沒有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)皿沒有污染，但96孔培養(yǎng)板卻污染了（至少目前是這樣）。對有污染的培養(yǎng)孔，我一般用8M的NaOH處理（加熱至70-80度，污染也從來就沒有擴(kuò)大過）?？傊?，原代培養(yǎng)出現(xiàn)的污染多是機(jī)會性、偶然的，使廂6孔或48孔細(xì)胞培養(yǎng)板是一種很好的控制污染的手段。（說到底是一種機(jī)械的、行之有效的隔離措施）loyal1006：E出現(xiàn)污染一般是無法挽救的，兩性霉素、制霉菌素也只能是預(yù)防污染，或許在污染的早期還有一點作用。目前關(guān)鍵是要找到污染源，以防下次再污染。qingshi：這段時間大量養(yǎng)細(xì)胞，呵呵，880多個，那個多呀，可是竟然出現(xiàn)霉菌和酵母污染，于是，消毒處理，可是，污染照舊，于是大膽決定，撤掉水盤，呵呵，果然效果良好，已經(jīng)20多天了，一切正常，順便說一下，我同時養(yǎng)的懸浮、貼壁。加入10ml培養(yǎng)液，3天換液，沒問題。Pathway：樓主不是同時養(yǎng)880種細(xì)胞吧？而是用了96孔培養(yǎng)板養(yǎng)了多種細(xì)胞吧？我覺得國內(nèi)還沒有那個單位和公司能同時養(yǎng)880種不同的細(xì)胞。另外，不要水盤的話，樓主怎么保證培養(yǎng)箱內(nèi)的相對濕度呢？（培養(yǎng)箱內(nèi)的高濕度和溫暖的環(huán)境確實是最適合霉菌生長的），我的培養(yǎng)箱內(nèi)也可見長有很多的霉菌，但會引起細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞污染的可能性卻很?。词故褂眉?xì)胞培養(yǎng)皿和細(xì)菌培養(yǎng)皿也是如此）；不過，由于我的培養(yǎng)箱可自動消毒，我一般每個季度都會消毒一次。qingshi：no。貼壁細(xì)胞無法用96孔板，當(dāng)然不會一次性培養(yǎng)880種，而是持續(xù)培養(yǎng)，一般維持在80多個，使用50ml的培養(yǎng)瓶。我也擔(dān)心濕度問題，但是沒什么大問題。小毒物：我正在養(yǎng)細(xì)胞，一開始有10瓶，不斷的養(yǎng)，不斷的有真菌污染，現(xiàn)在剩下4瓶了.因為也并不是所有細(xì)胞都出現(xiàn)污染，大家?guī)兔Ψ治鲆幌聭?yīng)該注意哪些問題？juju：真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的問題。首先，環(huán)境需要清潔，超做臺每天用新潔爾滅清洗是必要的。然后在培養(yǎng)基中適量添加制霉菌素，和兩性霉素可以抑制真菌及其他霉菌的生長。再者，超做時加以注意。應(yīng)該對你有幫助的。細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的問題建議你可以看看“細(xì)胞培養(yǎng)實驗指南”一書。里面有更詳細(xì)的講解。mlfyandw2002：最好的方法就是丟掉它，然后用甲醛熏蒸，再就是集體放假一個星期.再回來重新做過.小毒物：謝謝兩位，我已經(jīng)將孵箱用甲醛熏過一次了，每次照臺子之前用酒精擦臺子，紫外線照30分鐘，操作也很注意,但還是不能幸免遇難，看來要加制霉菌素等試試看了fairyland：最近培養(yǎng)篩選細(xì)胞頻頻污染，以前操作還沒有現(xiàn)在認(rèn)真，細(xì)胞一樣長勢旺盛，一點問題也沒有?，F(xiàn)在越是小心謹(jǐn)慎，卻總是污染，即使第一二天沒有污染，時間稍長就出現(xiàn)了。其它同學(xué)有時有，但我出現(xiàn)的次數(shù)最多。一種是一小團(tuán)一小團(tuán)褐色成致密網(wǎng)狀，一種是如同芽抱狀，一串一串的。細(xì)胞篩不出來后面的試驗根本就無法進(jìn)行，真是心急如焚，大家?guī)蛶兔Π?！gsy1234：嚴(yán)格保證泡酸，消毒過程！，換血清和重新配培養(yǎng)基！我有過類似經(jīng)歷