《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)

獸醫(yī)免疫學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2015.4實(shí)驗(yàn)五吞噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)獸醫(yī)免疫學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)五吞噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試吞噬細(xì)胞簡(jiǎn)介大、小吞噬細(xì)胞專司吞噬功能，在特異性免疫發(fā)揮作用前，防控病原異物侵襲，為特異性免疫贏得時(shí)間。吞噬細(xì)胞簡(jiǎn)介大、小吞噬細(xì)胞專司吞噬功能，在特異性免疫發(fā)揮作用小吞噬細(xì)胞是主要的吞噬細(xì)胞。數(shù)量多(60%白細(xì)胞的60%)、體積小(10~12μM)、變形和穿越能力強(qiáng)、行動(dòng)快(6h達(dá)峰值，10倍增加)、壽命短(數(shù)小時(shí))。胞漿有大量中性顆粒，大多是溶酶體，內(nèi)含髓過氧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性水解酶。呼吸爆發(fā)：在吞噬后激活位于細(xì)胞膜上和吞噬體內(nèi)膜面的氧化酶，產(chǎn)生毒性物質(zhì)，有效殺傷病原微生物，接著在吞噬溶酶體內(nèi)水解之。小吞噬細(xì)胞是主要的吞噬細(xì)胞。數(shù)量多(60%白細(xì)胞的60%)、對(duì)腫瘤和病毒感染細(xì)胞具有強(qiáng)大的殺傷功能。部分是定居的組織特異MФ，部分成為游走M(jìn)Ф(如腹腔MФ），以變形蟲樣方式游走各處。體積大（Ф:50~80μM），感染時(shí)比小吞噬細(xì)胞滯后出現(xiàn),數(shù)量少(白細(xì)胞的1%-3%)。胞漿中有吞噬泡、線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體。溶酶體內(nèi)有過氧化物酶、酸性磷酸酶、非特異性酯酶和溶菌酶。靜息MФ殺傷功能低下，被LPS或IFN-?活化后具有較強(qiáng)的吞噬殺滅能力。在吞噬抗原的同時(shí)，還可加工提呈抗原，又是NK-C的激活劑。大吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤和病毒感染細(xì)胞具有強(qiáng)大的殺傷功能。部分是定居的組織特異一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察吞噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，理解吞噬現(xiàn)象的原理、吞噬作用的過程及其在機(jī)體非特異性免疫中的作用。2.學(xué)習(xí)小鼠腹腔炎癥模型的制備技術(shù)，掌握小鼠腹腔注射和頸椎脫臼處死的方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察吞噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，理解吞噬現(xiàn)象的原理、二、實(shí)驗(yàn)原理淀粉可以刺激小鼠腹腔，引起非感染性炎癥滲出，在腹腔局部出現(xiàn)較多吞噬細(xì)胞，吞噬細(xì)胞則能吞噬注入腹腔的雞紅細(xì)胞等異物。可計(jì)算出吞噬有異物的細(xì)胞數(shù)和吞噬細(xì)胞中吞入的異物數(shù)。在吞噬細(xì)胞中亦可見到雞紅細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變。據(jù)此可判斷吞噬細(xì)胞的吞噬、消化功能，用以評(píng)價(jià)機(jī)體的免疫狀態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)原理淀粉可以刺激小鼠腹腔，引起非感染性炎癥滲出，在腹三、實(shí)驗(yàn)材料1.小鼠2.2%淀粉溶液、生理鹽水。3.0.5%雞紅細(xì)胞懸液：從雞翼下靜脈或心臟取血，加入適量抗凝劑，用前用生理鹽水洗3次，第3次洗滌2000rpm離心5min，棄上清，壓積細(xì)胞用生理鹽水配成0.5%細(xì)胞懸液。4.注射器、眼科鑷、眼科剪、載玻片、瑞氏染色液、顯微鏡。三、實(shí)驗(yàn)材料1.小鼠四、實(shí)驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)前2天，每天向小鼠腹腔注射滅菌2%淀粉肉湯1mL/只，誘導(dǎo)吞噬細(xì)胞聚集（此步由教師在實(shí)驗(yàn)前完成)；2.實(shí)驗(yàn)時(shí)，每組取2只上述處理的小鼠，腹腔注射雞紅細(xì)胞1mL/只，輕揉其腹部使之分散均勻；3.15min、25min后，分別取1只小鼠頸椎脫臼處死；四、實(shí)驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)前2天，每天向小鼠腹腔注射滅菌2%淀粉四、實(shí)驗(yàn)方法4.將小鼠固定在解剖板上，打開腹腔，向腹腔加入1ml生理鹽水，混勻生理鹽水與腹腔液，取腹腔液滴于載玻片上作成涂片，涂片自然干燥；5.涂片用瑞氏染液染色：加瑞氏染液覆蓋涂片，染色1~3min(染液易揮發(fā)，需補(bǔ)加)，滴加相當(dāng)于染液1.5倍的蒸餾水于涂片上，輕輕混勻，再染8~10min，流水輕洗；6.印干，油鏡觀察染色結(jié)果。四、實(shí)驗(yàn)方法4.將小鼠固定在解剖板上，打開腹腔，向腹腔加入從雞翼下靜脈取血方法從雞翼下靜脈取血方法小鼠腹腔注射給藥的方法右手抓住鼠尾提起，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳和頭頸皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，用左手的無名指和小指按住尾巴與后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后l/2處的一側(cè)注射。小鼠腹腔注射給藥的方法右手抓住鼠尾提起，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，用左手右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指與食指同時(shí)向下按住鼠頭，使脊髓與腦髓間斷開致鼠死亡)。

頸椎脫臼處死小鼠的方法右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指與食指同時(shí)向下按住鼠頭，使五、結(jié)果觀察及示例觀察大、小吞噬細(xì)胞對(duì)雞紅血細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，并觀察雞紅細(xì)胞的消化程度。

計(jì)算吞噬百分比和吞噬指數(shù)

吞噬百分比：100個(gè)吞噬細(xì)胞中吞噬有雞紅血球的數(shù)量。

吞噬指數(shù)：100個(gè)吞噬細(xì)胞中吞噬雞紅血球的總數(shù)除以100兩者一般是平行的。五、結(jié)果觀察及示例觀察大、小吞噬細(xì)胞對(duì)雞紅血細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，雞紅細(xì)胞被消化的程度分4級(jí)：Ⅰ級(jí)：未消化，胞質(zhì)淺紅或淺黃，胞核淺紫紅色。Ⅱ級(jí)：輕度消化，胞質(zhì)淺黃綠色，核固縮，呈紫藍(lán)色。Ⅲ級(jí)：重度消化，胞質(zhì)淡染，胞核呈淺灰黃色。Ⅳ級(jí)：完全消化，只見形狀類似雞紅細(xì)胞大小的空泡，胞核隱約可見。雞紅細(xì)胞被消化的程度分4級(jí)：巨噬細(xì)胞中性粒細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞中性粒細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞單核細(xì)胞《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)

巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)示教照片

雞紅細(xì)胞巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞后的巨噬細(xì)胞

吞噬雞紅細(xì)胞后的巨噬細(xì)胞

巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)示教照片

雞紅細(xì)胞巨噬細(xì)胞吞噬雞《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)IL-8生物活性測(cè)定試驗(yàn)中的豚鼠嗜中性粒細(xì)胞IL-8對(duì)嗜中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞有趨化作用。IL-8的趨化作用沒有種屬特異性。IL-8生物活性測(cè)定試驗(yàn)中的豚鼠嗜中性粒細(xì)胞IL-8對(duì)嗜中性實(shí)驗(yàn)報(bào)告按六個(gè)要素完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果要求如下：1.圖示你所觀察到的小鼠腹腔吞噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞各種形態(tài)。2.計(jì)算吞噬百分比。思考如下問題：1.在高等動(dòng)物中哪些細(xì)胞具有吞噬功能？2.在什么情況下巨噬細(xì)胞吞噬功能加強(qiáng)？實(shí)驗(yàn)報(bào)告按六個(gè)要素完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果要求如下：獸醫(yī)免疫學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2015.4實(shí)驗(yàn)五吞噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)獸醫(yī)免疫學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)五吞噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試吞噬細(xì)胞簡(jiǎn)介大、小吞噬細(xì)胞專司吞噬功能，在特異性免疫發(fā)揮作用前，防控病原異物侵襲，為特異性免疫贏得時(shí)間。吞噬細(xì)胞簡(jiǎn)介大、小吞噬細(xì)胞專司吞噬功能，在特異性免疫發(fā)揮作用小吞噬細(xì)胞是主要的吞噬細(xì)胞。數(shù)量多(60%白細(xì)胞的60%)、體積小(10~12μM)、變形和穿越能力強(qiáng)、行動(dòng)快(6h達(dá)峰值，10倍增加)、壽命短(數(shù)小時(shí))。胞漿有大量中性顆粒，大多是溶酶體，內(nèi)含髓過氧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶、酸性水解酶。呼吸爆發(fā)：在吞噬后激活位于細(xì)胞膜上和吞噬體內(nèi)膜面的氧化酶，產(chǎn)生毒性物質(zhì)，有效殺傷病原微生物，接著在吞噬溶酶體內(nèi)水解之。小吞噬細(xì)胞是主要的吞噬細(xì)胞。數(shù)量多(60%白細(xì)胞的60%)、對(duì)腫瘤和病毒感染細(xì)胞具有強(qiáng)大的殺傷功能。部分是定居的組織特異MФ，部分成為游走M(jìn)Ф(如腹腔MФ），以變形蟲樣方式游走各處。體積大（Ф:50~80μM），感染時(shí)比小吞噬細(xì)胞滯后出現(xiàn),數(shù)量少(白細(xì)胞的1%-3%)。胞漿中有吞噬泡、線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體。溶酶體內(nèi)有過氧化物酶、酸性磷酸酶、非特異性酯酶和溶菌酶。靜息MФ殺傷功能低下，被LPS或IFN-?活化后具有較強(qiáng)的吞噬殺滅能力。在吞噬抗原的同時(shí)，還可加工提呈抗原，又是NK-C的激活劑。大吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤和病毒感染細(xì)胞具有強(qiáng)大的殺傷功能。部分是定居的組織特異一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察吞噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，理解吞噬現(xiàn)象的原理、吞噬作用的過程及其在機(jī)體非特異性免疫中的作用。2.學(xué)習(xí)小鼠腹腔炎癥模型的制備技術(shù)，掌握小鼠腹腔注射和頸椎脫臼處死的方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察吞噬細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，理解吞噬現(xiàn)象的原理、二、實(shí)驗(yàn)原理淀粉可以刺激小鼠腹腔，引起非感染性炎癥滲出，在腹腔局部出現(xiàn)較多吞噬細(xì)胞，吞噬細(xì)胞則能吞噬注入腹腔的雞紅細(xì)胞等異物?？捎?jì)算出吞噬有異物的細(xì)胞數(shù)和吞噬細(xì)胞中吞入的異物數(shù)。在吞噬細(xì)胞中亦可見到雞紅細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變。據(jù)此可判斷吞噬細(xì)胞的吞噬、消化功能，用以評(píng)價(jià)機(jī)體的免疫狀態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)原理淀粉可以刺激小鼠腹腔，引起非感染性炎癥滲出，在腹三、實(shí)驗(yàn)材料1.小鼠2.2%淀粉溶液、生理鹽水。3.0.5%雞紅細(xì)胞懸液：從雞翼下靜脈或心臟取血，加入適量抗凝劑，用前用生理鹽水洗3次，第3次洗滌2000rpm離心5min，棄上清，壓積細(xì)胞用生理鹽水配成0.5%細(xì)胞懸液。4.注射器、眼科鑷、眼科剪、載玻片、瑞氏染色液、顯微鏡。三、實(shí)驗(yàn)材料1.小鼠四、實(shí)驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)前2天，每天向小鼠腹腔注射滅菌2%淀粉肉湯1mL/只，誘導(dǎo)吞噬細(xì)胞聚集（此步由教師在實(shí)驗(yàn)前完成)；2.實(shí)驗(yàn)時(shí)，每組取2只上述處理的小鼠，腹腔注射雞紅細(xì)胞1mL/只，輕揉其腹部使之分散均勻；3.15min、25min后，分別取1只小鼠頸椎脫臼處死；四、實(shí)驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)前2天，每天向小鼠腹腔注射滅菌2%淀粉四、實(shí)驗(yàn)方法4.將小鼠固定在解剖板上，打開腹腔，向腹腔加入1ml生理鹽水，混勻生理鹽水與腹腔液，取腹腔液滴于載玻片上作成涂片，涂片自然干燥；5.涂片用瑞氏染液染色：加瑞氏染液覆蓋涂片，染色1~3min(染液易揮發(fā)，需補(bǔ)加)，滴加相當(dāng)于染液1.5倍的蒸餾水于涂片上，輕輕混勻，再染8~10min，流水輕洗；6.印干，油鏡觀察染色結(jié)果。四、實(shí)驗(yàn)方法4.將小鼠固定在解剖板上，打開腹腔，向腹腔加入從雞翼下靜脈取血方法從雞翼下靜脈取血方法小鼠腹腔注射給藥的方法右手抓住鼠尾提起，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳和頭頸皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，用左手的無名指和小指按住尾巴與后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后l/2處的一側(cè)注射。小鼠腹腔注射給藥的方法右手抓住鼠尾提起，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，用左手右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指與食指同時(shí)向下按住鼠頭，使脊髓與腦髓間斷開致鼠死亡)。

頸椎脫臼處死小鼠的方法右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指與食指同時(shí)向下按住鼠頭，使五、結(jié)果觀察及示例觀察大、小吞噬細(xì)胞對(duì)雞紅血細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，并觀察雞紅細(xì)胞的消化程度。

計(jì)算吞噬百分比和吞噬指數(shù)

吞噬百分比：100個(gè)吞噬細(xì)胞中吞噬有雞紅血球的數(shù)量。

吞噬指數(shù)：100個(gè)吞噬細(xì)胞中吞噬雞紅血球的總數(shù)除以100兩者一般是平行的。五、結(jié)果觀察及示例觀察大、小吞噬細(xì)胞對(duì)雞紅血細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，雞紅細(xì)胞被消化的程度分4級(jí)：Ⅰ級(jí)：未消化，胞質(zhì)淺紅或淺黃，胞核淺紫紅色。Ⅱ級(jí)：輕度消化，胞質(zhì)淺黃綠色，核固縮，呈紫藍(lán)色。Ⅲ級(jí)：重度消化，胞質(zhì)淡染，胞核呈淺灰黃色。Ⅳ級(jí)：完全消化，只見形狀類似雞紅細(xì)胞大小的空泡，胞核隱約可見。雞紅細(xì)胞被消化的程度分4級(jí)：巨噬細(xì)胞中性粒細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞中性粒細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞單核細(xì)胞《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)《獸醫(yī)免疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)課件：實(shí)驗(yàn)五-吞噬試驗(yàn)

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雞紅細(xì)胞巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞后的巨噬細(xì)胞

吞噬雞紅細(xì)胞后的巨噬細(xì)胞

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