以大豆胰蛋白酶抑制因子為研究對象課件

固定化胰蛋白酶殼聚糖床的制備以及在純化大豆胰蛋白酶抑制因子中的應(yīng)用報告人：劉冶學(xué)號：2012207245固定化胰蛋白酶殼聚糖床的制備以及在純化大豆胰蛋白酶抑制因子中1大豆產(chǎn)品在東亞來說是很受歡迎的產(chǎn)品，它營養(yǎng)豐富且均衡。但是，豆科植物種子中會包含一些抗?fàn)I養(yǎng)因子，其中主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子即為胰蛋白酶抑制因子,簡稱SBTI.大豆產(chǎn)品在東亞來說是很受歡迎的產(chǎn)品，它營養(yǎng)豐富且均衡。但是，2SBTI能夠引起被喂食未加工過的大豆蛋白的牲畜產(chǎn)生胰腺膨脹反應(yīng)，這種現(xiàn)象產(chǎn)生的原因在于小腸表面產(chǎn)生了過多的縮膽囊素，即腸促胰酶肽所致。SBTI能夠引起被喂食未加工過的大豆蛋白的牲畜產(chǎn)生胰腺膨脹反3SBTI屬于絲氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitztrypsininhibitor(KTI)和Bowman-Birktrypsininhibitor(BBTI)兩類，前者M(jìn)r~20kDa,后者M(jìn)r~8-10kDaSBTI屬于絲氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitztryp4我們從大豆研磨液中分離出來的BBTI是一種強(qiáng)力的胰凝乳蛋白酶抑制劑，純化的BBTI經(jīng)研究表明，BBTI還具有殺菌活性，抑制HIV-1的反轉(zhuǎn)錄活性。此外，在Sprgue-Dawley鼠中發(fā)現(xiàn)，它還能有效抑制乙?；鶃喯趸逡鸬纳窠?jīng)系統(tǒng)瘤.我們從大豆研磨液中分離出來的BBTI是一種強(qiáng)力的胰凝乳蛋白酶5實驗流程交聯(lián)殼聚糖床的制備環(huán)氧氯丙烷對交聯(lián)殼聚糖床的活化胰蛋白酶的固定化SBTI粗品的制備天然胰蛋白酶酶活鑒定固定化胰蛋白酶酶活鑒定

SBTI的親和分離

純化產(chǎn)品效果的SDS鑒定

實驗流程交聯(lián)殼聚糖床的制備環(huán)氧氯丙烷對交聯(lián)殼聚糖床的活化6CrosslinkingofchitosanbyglutaraldehydeScheme1Crosslinkingofchitosanbygl7Scheme2TrypsincouplingreactionbyepichlorohydrinScheme2Trypsincouplingreact8ResultsIsolationandpurificationprotocolforcrudetrypsininhibitorfromsoybeanseedsResultsIsolationandpurificat9FTIRspectraofchitosan(a),chitosanbeads(b),chitosanbeadsactivatedwithepichlorohydrin(c)andtrypsin-immobilisedchitosanbeads(d).FTIRspectraofchitosan(a),10Scanningelectronmicrographsofcrosslinkedchitosanparticles.Scanningelectronmicrographs11ParticlesizedistributionofchitosanbeadsdeterminedbylaserparticlesizeanalyserParticlesizedistributionof12AffinitychromatographyofSBTIbytrypsin-immobilisedchitosanbeads(0.2molL?1borax/borate(pH7.8)asequilibriumandwashingbuffer,HCl/H2Osolutionaseluent,pHgradientelutionatflowrateof30mLh?1,7.5mLpertube).AffinitychromatographyofSBT13SDSofcrudeandpurifiedtrypsininhibitorfromsoybeanseeds(CoomassiebrilliantblueR-250staining):A,crudeSBTIextract;B,purifiedSBTI;C,molecularweightmarkers.SDSofcrudeandpurified14EffectofpHonSBTIadsorptionbyfreeandimmobilisedtrypsin.EffectofpHonSBTIadsorptio15EffectoftemperatureonSBTIadsorptionbyfreeandimmobilisedtrypsin.EffectoftemperatureonSBTI16以大豆胰蛋白酶抑制因子為研究對象，通過胰蛋白酶固定化，利用親和層析技術(shù)，使得從大豆研磨后的粗溶液中提取胰蛋白酶抑制因子的比率達(dá)到33.3%。并通過SDS進(jìn)行鑒定，鑒定顯示能夠得到一條分子量在8.3kDa的比較單一的蛋白條帶.以大豆胰蛋白酶抑制因子為研究對象，通過胰蛋白酶固定化，利用親17Thankyou!Thankyou!18固定化胰蛋白酶殼聚糖床的制備以及在純化大豆胰蛋白酶抑制因子中的應(yīng)用報告人：劉冶學(xué)號：2012207245固定化胰蛋白酶殼聚糖床的制備以及在純化大豆胰蛋白酶抑制因子中19大豆產(chǎn)品在東亞來說是很受歡迎的產(chǎn)品，它營養(yǎng)豐富且均衡。但是，豆科植物種子中會包含一些抗?fàn)I養(yǎng)因子，其中主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子即為胰蛋白酶抑制因子,簡稱SBTI.大豆產(chǎn)品在東亞來說是很受歡迎的產(chǎn)品，它營養(yǎng)豐富且均衡。但是，20SBTI能夠引起被喂食未加工過的大豆蛋白的牲畜產(chǎn)生胰腺膨脹反應(yīng)，這種現(xiàn)象產(chǎn)生的原因在于小腸表面產(chǎn)生了過多的縮膽囊素，即腸促胰酶肽所致。SBTI能夠引起被喂食未加工過的大豆蛋白的牲畜產(chǎn)生胰腺膨脹反21SBTI屬于絲氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitztrypsininhibitor(KTI)和Bowman-Birktrypsininhibitor(BBTI)兩類，前者M(jìn)r~20kDa,后者M(jìn)r~8-10kDaSBTI屬于絲氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitztryp22我們從大豆研磨液中分離出來的BBTI是一種強(qiáng)力的胰凝乳蛋白酶抑制劑，純化的BBTI經(jīng)研究表明，BBTI還具有殺菌活性，抑制HIV-1的反轉(zhuǎn)錄活性。此外，在Sprgue-Dawley鼠中發(fā)現(xiàn)，它還能有效抑制乙?；鶃喯趸逡鸬纳窠?jīng)系統(tǒng)瘤.我們從大豆研磨液中分離出來的BBTI是一種強(qiáng)力的胰凝乳蛋白酶23實驗流程交聯(lián)殼聚糖床的制備環(huán)氧氯丙烷對交聯(lián)殼聚糖床的活化胰蛋白酶的固定化SBTI粗品的制備天然胰蛋白酶酶活鑒定固定化胰蛋白酶酶活鑒定

SBTI的親和分離

純化產(chǎn)品效果的SDS鑒定

實驗流程交聯(lián)殼聚糖床的制備環(huán)氧氯丙烷對交聯(lián)殼聚糖床的活化24CrosslinkingofchitosanbyglutaraldehydeScheme1Crosslinkingofchitosanbygl25Scheme2TrypsincouplingreactionbyepichlorohydrinScheme2Trypsincouplingreact26ResultsIsolationandpurificationprotocolforcrudetrypsininhibitorfromsoybeanseedsResultsIsolationandpurificat27FTIRspectraofchitosan(a),chitosanbeads(b),chitosanbeadsactivatedwithepichlorohydrin(c)andtrypsin-immobilisedchitosanbeads(d).FTIRspectraofchitosan(a),28Scanningelectronmicrographsofcrosslinkedchitosanparticles.Scanningelectronmicrographs29ParticlesizedistributionofchitosanbeadsdeterminedbylaserparticlesizeanalyserParticlesizedistributionof30AffinitychromatographyofSBTIbytrypsin-immobilisedchitosanbeads(0.2molL?1borax/borate(pH7.8)asequilibriumandwashingbuffer,HCl/H2Osolutionaseluent,pHgradientelutionatflowrateof30mLh?1,7.5mLpertube).AffinitychromatographyofSBT31SDSofcrudeandpurifiedtrypsininhibitorfromsoybeanseeds(CoomassiebrilliantblueR-250staining):A,crudeSBTIextract;B,purifiedSBTI;C,molecularweightmarkers.SDSofcrudeandpurified32EffectofpHonSBTIadsorptionbyfreeandimmobilisedtrypsin.EffectofpHonSBTIadsorptio33EffectoftemperatureonSBTIadsorptionbyfreeand