山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制備工藝研究分析 中藥學(xué)專業(yè)

山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制備工藝研究中文摘要工作包括：采用乙醇提取－大孔樹脂精制的方法提取山楂葉中的總黃酮。對其中的乙D-101用稀堿的濃度，對確定的工藝進行了初步驗證。建立了硝酸鋁比色法測定山楂總黃酮含量、香草醛－高氯酸比色法測定山定山楂黃酮提取部位中金絲桃苷和牡荊素-2”-O-鼠李糖苷含量，雙波長薄層色譜掃描法測定三萜酸提取部位中熊果酸含量的方法。條件的優(yōu)選，對確定的工藝進行了驗證。通過以上研究，同時使用了山楂中黃酮類和三萜酸類有效成分制備滴丸，有效利用了山楂資源，提高了山楂類制劑的技術(shù)水平。關(guān)鍵詞：山楂；制備工藝；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；滴丸；大孔樹脂ABSTRACTNowdrugsmadefromHawthornaredroppingbehind.MostofthemonlycomposedbytheFlavonoids.Sothecurativeeffectsofthedrugsisnotgetthebest.Inthestudies,flavonoidsandtriterpenicacidsinHawthornareusedtomakeanewdrug.TheFlavonoidsoftheleaves(FEL)andthetriterpenicacidsoftheberries(TAEB)wereextracted,isolatedbymacroporousresin,acid,alkali,etc.ThenadroppingpillwasmadefromflavonoidsandtriterpenicacidsinHawthorn.Theflavonoidswereextrcatedbyethanolandisolatedbymacroporousresin.ThemaininfluencefactorsofethanolextractionweredefinedbyUniformdesign.Foundouttheoptimumextractionprocessfortotal-FlavonoidsofHawthorn.Forthefirsttime,studiesonthemechanismandfactorsofisolatingFlavonoidsbymacroporousresin.Thetriterpenicacidswereextractedbyethanolandisolatedbyacidandalkali.Themaininfluencefactorsofethanolextractionweredefinedbyorthogonaldesign.Theconcentrationsofacidandalkaliweredefined.Themethodsofcolorimetrytodeterminingflavonoids’contentusingaluminiumnitrate,triterpenicacids’contentusingaceticacid-vanillinwereestablished.TheflavonoidswereidentifiedbyTLC.Hyperosideandvitexin-2”-o-rhamnosidewerequantitativelyanalyzedbyHPLC.Ursolicacidwerequantitativelyanalyzedbydual-wavelenghtTLCscan.MoreoversandsftheflavonoidsandtriterpenicacidsinHawthornwereexplored.ThestabilitiesoftheflavonoidsandtriterpenicacidsinHawthornandinteractionswithmaterialswerestudied.Finallytheprescriptionsofthedrugweredetermined,thepreparationprocessesweredefinedbyorthogonaldesign.TherehasasystematicalreasearchoftheflavonoidsandtriterpenicacidsinHawthorn.Anewdosageformwasmadebytheflavonoidsandtriterpenicacids.ThestudiesimprovedthetechnicallevelsofdrugsmadefromHawthorn.Keyresin目 錄前 言 1第一章綜 述 2山楂的研究概述 2山楂來源 2山楂的化學(xué)成分 3山楂的藥理作用 4山楂總黃酮類研究 7滴丸研究的概述 8高脂血癥的藥物研究概述和研究展望 10高脂血癥概述 10目前臨床上常用的藥物簡述如下： 10中藥的研究展望： 12本文主要研究工作和創(chuàng)新點 12第二章指標(biāo)性成分測定方法的研究 14山楂葉黃酮的薄層色譜法鑒別 14試驗儀器和藥品 14溶液的制備 14薄層層析 14比色法測定山楂葉總黃酮的含量 15實驗儀器和藥品 16實驗方法 16實驗條件的優(yōu)選 162.2.4結(jié)論 21反相高效液相色譜法測定山楂葉黃酮中的有效成分含量 21儀器與試藥 21色譜條件 21對照品溶液的制備 23線性關(guān)系的考察 23供試品溶液的制備 24方法學(xué)考察 242.3.7討論 26比色法測定山楂果中總?cè)扑崽崛∥锏暮?27實驗儀器和藥品 27對照品溶液的配制 27供試品溶液的配制 27測定波長選擇 27顯色劑用量及條件優(yōu)選 27樣品的測定方法 29線性關(guān)系的考察 29精密度試驗： 29重復(fù)性試驗： 30穩(wěn)定性考察 30回收率試驗 312.4.12結(jié)論 32薄層色譜掃描法測定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量 32試驗儀器與藥品 32對照品溶液的制備 32展開劑的選擇 32提取條件的優(yōu)選 32掃描條件的選擇 33供試品的測定方法 33方法學(xué)的考察 342.5.8討論 37本章結(jié)論 37第三章有效部位的提取精制工藝研究 39山楂葉中總黃酮的提取精制工藝研究 39試驗儀器和藥品 39山楂葉藥材中總黃酮含量的測定。 39山楂葉總黃酮提取精制工藝的初步選擇 39山楂總黃酮乙醇提取工藝影響因素的考察 39山楂總黃酮提取工藝優(yōu)化 41樹脂吸附性能的考察 44工藝的驗證 503.1.8討論 50山楂果中總?cè)扑岵课惶崛」に嚨难芯?50提取工藝優(yōu)選 51提取工藝的驗證 543.2.3討論 54本章結(jié)論 55第四章制劑處方前的研究 56材料和儀器 56方法與結(jié)果 56山楂黃酮提取物和山楂三萜酸提取物表觀溶解度測定 56粉體學(xué)基本性質(zhì)的測定 57指標(biāo)性成分化學(xué)穩(wěn)定性考察 61藥物在基質(zhì)中的分散程度考察 644.3討論 65第五章滴丸制備工藝的研究 66試驗儀器和藥品 66聚乙二醇基質(zhì)的初步優(yōu)選 66滴丸的處方設(shè)計 67因素水平設(shè)計 67數(shù)據(jù)處理方式 67正交試驗結(jié)果 68滴制條件的優(yōu)化 695.5結(jié)果 715.6驗證 715.7討論 71第六章結(jié)論與展望 726.1結(jié)論 726.2展望 73參考文獻 74前 言心血管疾病是目前威脅我國人民健康的重大疾病之一，而由脂質(zhì)代謝紊亂所致的高脂血癥是動脈粥樣硬化(AS)及冠心病(CAD)的重要致病因素。高血脂還（TC（TG（LDL－C的水平降血脂藥物需要長期服用，患者對藥物的副作用較為敏感，幾種西藥均有久的使用歷史，其安全性和對脂質(zhì)代謝紊亂的調(diào)節(jié)作用得到了廣泛的認(rèn)可。山楂中降血脂的主要有效成分被認(rèn)為有山楂黃酮和三萜酸兩類[1]部位組方，制成新制劑。當(dāng)使用兩種有效部位組方時，需要考察為何選擇這兩種有效部位組方和兩(3:3.5)組方[2]，制成單方制劑。但考慮到山楂果中黃酮類含量較低，提取成本取的黃酮代替從果實中的黃酮作為原料進行制劑。山楂中黃酮類成分和三萜酸類成分均為脂溶性成分，在水中溶解度低。目－中藥滴丸，使其增加生物利用度，提高療效。第一章綜 述山楂的研究概述100017（2000定中藥山楂原植物為北山楂（Crataeguspinnatifida）和山里紅（C.pinnatifidaVarMajor）制、藥理及臨床研究都有較大發(fā)展。近幾十年來，更廣泛用于治療心血管疾病。山楂來源山楂在我國供藥用者8種[3]。其名稱和分布如表1-1。表1-1山楂品種表Tab.1-1Crataegusspecies序號 品 種山楂(Crataeguspinnatifids)，山海關(guān)以南稱山楂，主產(chǎn)東北、河北、內(nèi)蒙、河南、山東、山西、陜西等省。朝鮮和蘇聯(lián)西伯利亞亦有分布。山里紅(C.pinnatifidavarMajor)，產(chǎn)地同山楂。野山楂(C.cuneatasiebetzuse)，產(chǎn)于河南、湖南、湖北、江西等省。云南山楂(C.seabrifolia)，產(chǎn)于云、貴、川等省。湖北山楂(C.hupehensis)，產(chǎn)于湖北、湖南、江蘇、浙江、江西、四川、陜西等省。甘肅山楂(C.kansuensis)，產(chǎn)于甘肅、山西、河北、陜西、貴州、四川各地。華中山楂(C.wilsonii)，產(chǎn)地同甘肅山楂.桔紅山楂(C.aurantia古也有分布。山楂的化學(xué)成分2050[8]。關(guān)于山楂化學(xué)成分的研究有報道[2]分離出兒茶酚精、槲皮素、金絲桃苷、枸櫞酸及其單甲酯、二甲酯以及蘋果酸、氯原酸、咖啡酸、苦杏仁苷、皂苷、維生素C、核黃素、胡蘿卜素鞣酸，及三萜類成分山楂酸、熊果酸、齊墩果酸21CuNiMnCrTiZnCd、Li、Na、Be、Mg、Sr、Ba、B、Al、Sn、P、Pt、Ag、Mo，山楂還含有豐富的氨基酸、磷酸絲氨酸、?；撬?、天冬氨酸、蛋氨酸亞砜、谷酰胺、蘇氨酸、谷氨酸、肌氨酸、脯氨酸等。山楂中黃酮類成分主要有金絲桃苷、蘆丁、牡荊素－2”-O-鼠李糖苷等。三萜酸類成分主要有熊果酸（Ursolicacid、齊墩果酸（Oleanolicacid山楂酸（Crateagolicacid、樺皮醇、樺皮酸等。研究表明山楂果實中總黃酮與果實大小、果肉薄厚呈正相關(guān)，山里紅及云值[5]3倍[36]。劉霞[10]等也認(rèn)為葉中總黃酮含量高于果實。相反陳堅[11]望的替代品，近年來引起了較多的關(guān)注。Nikolov.N10[6][7]山楂屬植物晚秋鮮葉中類黃酮的含量較高，為3.16%左右，而鮮果中的含量則1.65%左右[9]。山楂的藥理作用山楂的心血管作用(1)降血脂作用：學(xué)者對山楂黃酮調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用進行了大量研究[3]：山楂及山楂黃酮能（MDA(GSH－Px)膽固醇飼料大鼠血清總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白—膽固醇(LDL－C)和ApoB濃度，顯著升高高密度脂蛋白—膽固醇(HDL－C)ApoAl(RT－PCR)LDLR(低密度脂蛋白受體)mRNALDLRLDLRLDLR葉希韻[20]在山楂葉總黃酮防治鵪鶉動脈粥樣硬化的試驗研究過程中認(rèn)為：山植葉總黃酮對鵪鶉血液中含量的上升均有很明顯的抑制作用同時與動脈粥樣硬（Atherosclerosis 組相比其含量有明顯的提高在降血脂方面與脂必妥對照組的效果相近，而在抗脂質(zhì)過氧化方面比脂必妥效果更好。說明山植葉總黃酮可通過降低血脂，抗脂質(zhì)過氧化損傷，達到防治AS形成的作用。錢偉平等[19]認(rèn)為山楂葉制劑益心酮有降血清膽固醇作用，在五天內(nèi)，山楂15%，9.2%，5.8酮，使動物廓清速度加快，廓清時間縮短。張賽璐[21]認(rèn)為山楂可能具有抑制β－羥基βA蛋白，有利于清除外周組織中過多的膽固醇，從而改善體內(nèi)的脂質(zhì)代謝。其它研究還包括林啟云[23]用95%的乙醇提取了廣西大果山楂，預(yù)試驗認(rèn)為其可以降低大鼠的膽固醇和甘油三酯。葛志英[24]33三脂的作用，結(jié)果均低于對照組。陳紅賓[25]山楂和山楂屬植物山里紅則沒有降膽固醇作用。鄧國剛[26]成的軟脈降脂方喂服兔高脂血癥模型，做了預(yù)防和治療實驗，9(P<0.05)，且本藥無損害肝功的不良副作用。王樹立[27]HMGR，HMGR[29]用山楂核醇提物喂服鵪鶉，并設(shè)立了對照組。觀察了血清總膽固醇、HDL-膽固醇以及動脈壁粥樣硬化處的總膽固醇、游離膽固醇的含量，結(jié)果表明山楂度脂蛋白，低于對照組，兩者有顯著差異(P<0.01)，HDL-(2)降壓作用：較小劑量注射對麻醉兔、小鼠有降壓作用。山楂乙醇浸出物靜脈給藥，能3h10mg/kg5～10min20～40mg/kg25mg/kg(3)舒張血管作用：山楂總黃酮可增加冠脈流量抗實驗性心肌缺氧，抗心率失常等作用，山楂提取液無論體內(nèi)或體外給藥均可顯著抑制家兔血小板凝集性，這對冠心病等心血管疾病的防治顯然是有益的[30]。(4)抗心率失常作用：山楂浸膏對垂體后葉素引起的心率不齊，有一定的抑制作用。日本用山楂使劑量很小，也能較快地恢復(fù)由烏頭堿引起的心律不齊，無副作用[18][31]。(5)抗氧化作用：山楂葉乙醇提取物對羥自由基和超氧陰離子的生成有清除和抑制作用，其作用隨提取物的百分比濃度增加而增加。山楂葉的抗氧化作用的活性物質(zhì)是山楂葉中的主要成份黃酮，因為黃酮是公認(rèn)最具抗氧化潛力的一類化合物[32]。三萜酸類的藥理作用多數(shù)的研究表明山楂黃酮類成分具有降壓、增加冠脈血流量、降血脂、強心和抗心律失常的藥理作用。也應(yīng)注意到，近年來的研究同時表明，山楂中的三萜酸類成分也是降血脂的主要有效成分之一。三萜類成分有降低高脂模型小鼠血脂的作用。孫曉飛[28]用山楂核的提取物TCHHDL/TCHSOD[33]質(zhì)的分解和代謝，以保護血管內(nèi)皮。助消化作用山楂中脂肪酸可促進脂肪分解，山楂酸等可提高蛋白分解酶的活性，有助消化[18]?？拱┳饔肗-提取物對體內(nèi)合成芐基亞硝胺及其誘癌的阻斷作用。山楂提取物對人胚肺細(xì)胞及誘癌細(xì)胞的抑制作用。這些報道提示山楂的抗癌作用[2]。提高機體免疫力100%進作用[19～20][34]?？咕饔蒙介鍎┖鸵掖继崛∫簩ΩＪ狭〖矖U菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、變形桿菌、大腸桿菌有抗菌作用[35]。止痛作用山楂能使血管舒張，有助于解除局部瘀血狀態(tài)，并有收縮子宮、促進子宮復(fù)原的作用[3]。山楂總黃酮類研究總黃酮的提取分離馮寶樹[37]的聚酰胺精制，便可得到山楂總黃酮含量高于80%3.943%[37]60℃60%4h[38][17]。其中常用的提取方法概述如下[13]：（1）水煮浸提法：流程為：山楂葉→水浸煮（2次）→濾液濃縮→沉淀→過濾→干燥。本方法收率不高，產(chǎn)品總黃酮僅為6%～12%。（2）溶劑萃取法：流程為：山楂葉→用70%乙醇提取→減壓回收乙醇→水分散→用正丁醇萃取→回收正丁醇→總黃酮。本方法成本高，使用有機溶劑，不便于生產(chǎn)使用。（3）聚酰胺分離法：流程為：山楂葉→用70%乙醇提取→回收乙醇→加入聚酰胺粉→用乙醇梯度洗脫→收集各級洗脫液→合并濃縮。實驗室經(jīng)常使用聚酰胺分離方法，由于消耗大量的聚酰胺，所以不適于工業(yè)化生產(chǎn)。（4）樹脂吸附法：流程為：山楂葉→浸漬→回收乙醇→過濾→樹脂分離→回收乙醇→干燥是現(xiàn)在最常用的方法。單成分的分離山楂葉乙醇提取物經(jīng)聚酰胺柱層析分離即可得到牡荊素[13]。丁杏苞等人[12]則用80%乙醇回流提取山楂葉粗粉，提取液濃縮至糖漿狀，用熱水萃取數(shù)次，合并萃取液，減壓濃縮，硅藻土拌料，依次用乙醚、丙酮與乙醇回流提取。其中丙酮提取物經(jīng)硅膠柱層析，氯仿—甲醇—水梯度洗脫，薄層層析檢控，相同部分合并，分別得到槲皮素、金絲桃苷、牡荊素、牡荊素鼠李糖苷、鹽酸二乙胺等化合物。成分的測定研究人員利用高效液相色譜和薄層色譜測定山楂葉黃酮[39]。其中液相色譜是利用乙酸：甲醇（57：43）C18350nm以乙酸乙酯：甲乙醚：水：丙酮：甲酸（50：70：30：10：15）350nm法國研究者利用反相高效液相色譜檢測出C.laevigata（1%C.monogyna4”-乙酰-2”-糖苷和牡荊素-2”-（1%量的如斯多苷（Rustoside）即山奈素-3-葡萄糖木糖呋喃糖苷[40～42]。滴丸研究的概述Nernst－Noyes—Whitney因：dCDS(C

C)

公式（1-1）dt V s tdC/dt面積，Cs，Ctt對難溶性藥物Ct較小，Cs>>Ct，且對某一藥物來說，D/Vδ＝k所dC/dt＝kSCs 公式（1-2）CskS物能夠形成高能狀態(tài)的結(jié)晶，這些亞穩(wěn)態(tài)分子擴散能量高，溶出快。滴丸中藥物分散狀態(tài)的鑒別是質(zhì)量檢查的首要項目。差示掃描量熱法是常用的考察藥物的分散狀態(tài)的方法。差示掃描量熱法（differentialscanning同環(huán)境中，用補償器測量使兩者的溫度差保持為零所必須的熱量對溫度（或時間DSC得到的dH/dt－T曲線中出現(xiàn)的熱量變化峰或基線突變的溫度與測試物的轉(zhuǎn)變溫度相對應(yīng)。差動分析儀與差熱分析儀的結(jié)構(gòu)相似。固體分散體中若有藥物晶體存在，則有吸熱峰存在；藥物晶體存在越多，吸熱峰總面積越大。由于滴丸劑具有溶出快、生物利用度高、療效好、藥物穩(wěn)定性好及制備簡便、質(zhì)量易控等優(yōu)點，因此受到醫(yī)藥界廣泛的重視。1958年國內(nèi)有人用滴制法制備酒石酸銻鉀滴丸[47]。中藥滴丸的研制始于2070開展了生物有效性研究，表明該滴丸有效劑量小，起效快等優(yōu)點[48]。備成強心靈滴丸4000蠟為基質(zhì)，將雷公藤乙酸乙酯提取物制備為腸溶滴丸，可減少胃腸道刺激[51]張恩娟等[52]40006000用滴丸；孫昕等[53][54]6000黃芩耳用滴丸。中藥滴丸往往不是單一成分，難以從理論上推出適當(dāng)?shù)墓に嚄l件，因此在工藝研究中多借助正交試驗、均勻設(shè)計等方法優(yōu)選最佳工藝。比如林亞平等[55]用均勻設(shè)計法優(yōu)選了咽立爽滴丸和米槁心樂滴丸[56]的制劑工藝條件，而侯世祥等[57]用正交試驗法優(yōu)選了四逆湯滴丸的制備工藝，何群等研究了麻杏石甘湯改成滴丸工藝中提取物的制備方法[58]及用正交試驗法對其成型工藝的優(yōu)選[59]，馬云淑等亦用正交試驗法研究了黃連解毒滴丸成型的較優(yōu)工藝條件[60]。其中對外觀質(zhì)量判斷尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，因人而異。例如，侯世祥等[57]以成型性、外形和硬度在內(nèi)的外觀質(zhì)量用10分制進行評分。郭麟端等[61]以肉眼觀察和從30°4總之，滴丸載藥量小，中藥制備要求精細(xì)，因而成分明確，質(zhì)量易于控制。滴丸的質(zhì)量研究中，郭建平等[62]作了葛根黃酮滴丸體外釋放度的研究，何國熙等[63]作了明膠基質(zhì)含水量對牡荊油滴丸質(zhì)量的研究，認(rèn)為基質(zhì)含水量控制在50%萃取-分光光度法[64]，牙科用中藥滴丸鹽酸小檗堿用薄層-比色法[65]。高脂血癥的藥物研究概述和研究展望高脂血癥概述心血管疾病是目前威脅我國人民健康的重大疾病之一，而由脂質(zhì)代謝紊亂所致的高脂血癥是動脈粥樣硬化(AS)及冠心病(CAD)116CAD(TG)CADTGCADCADTGTGCAD(LDL－C、血胰島素水HDL－C2%～3%。HDL[43]。調(diào)脂治療是心血管病藥物防治的重要內(nèi)容之一。采用合適的藥物降低血脂，不僅有利于減少冠心病的危險因素，降低冠心病的發(fā)病率，而且可起到穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊、防止動脈粥樣硬化斑塊破裂的作用，對于防止急性冠狀動脈綜合征(acutecoronarysyndrome，ACS)的發(fā)生，減少心血管事件的發(fā)生具有重要意義。調(diào)脂治療還有一定的促使動脈粥樣硬化病變逆轉(zhuǎn)的作用[44]。目前臨床上常用的藥物簡述如下：171000療現(xiàn)狀的最新調(diào)查，其臨床用藥位居首位的是他汀類，占調(diào)脂處方總數(shù)的(3.9%)及煙酸類(1.7%)等。他汀類A(HGM-CoA)HGM-CoAHGM-CoA活性而導(dǎo)致機體內(nèi)源性膽固醇合成減少，顯著降低血清總膽固醇(TC)脂蛋白膽固醇(LDL-C)(TG)白膽固醇(HDL-C)2090劑對照臨床試驗，特別是北歐辛伐他汀生存研究(4S)，TCTC（SGPT橫紋肌溶解癥（CK，嚴(yán)重時導(dǎo)致急性腎功能衰竭[45]。貝丁酸類臨床常用的有非諾貝特、苯扎貝特、吉非羅齊等。此類藥物可增加脂蛋白TGTC、LDL-C(VLDL)，HDL-CTGTG(ISI)呈明顯負(fù)相關(guān)。目前臨床上非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM)TG其他常用藥物(1)多烯脂肪酸類[45]常用的有月見草油膠丸、魚油烯康丸等，為不飽和脂肪酸制劑。魚油制劑VLDL(CM)TGHDL-C(2)煙酸類[45]TG(3)在降脂治療中可配合使用抗氧化維生素等[45]。常用降血脂中藥降膽固醇為主的中藥有生姜、人參、大黃、短毛五加、葛根、麻仁、徐長卿、接骨木、澤瀉、茵陳等；降甘油三酯為主的中藥有赤陽子、銀杏葉、哈蟆中藥的研究展望：隨著近年來深入的研究,認(rèn)為中藥制劑具有療效肯定,毒副作用少,藥物食中藥。研究表明有降脂作用的中草藥有幾十種，其中山楂是其中研究較多，效果120（LDL對肝的低密度脂蛋白受體具有正向調(diào)節(jié)作用，降解膽固醇而使膽汁酸的形成增加及抑制膽固醇的合成等[46]。因此山楂是極有前途的降血脂中藥。本文準(zhǔn)備選擇山楂作為原料，提取精制其中的有效成分，制成現(xiàn)代劑型，開發(fā)新藥。本文主要研究工作和創(chuàng)新點料、工藝過程和制劑的質(zhì)量。主要創(chuàng)新點如下：的水平。藝。確保了山楂黃酮提取部位的質(zhì)量。結(jié)合三萜酸類的性質(zhì)，選擇山楂三萜酸的提取精制工藝，使用乙醇提取－酸堿處理的方法，減少了有機溶劑對藥品的污染，提高了山楂三萜酸類有效部位的含量。本文進行的其它研究工作如下：建立了山楂中黃酮類成分的薄層色譜鑒別方法，能同時在色譜中鑒別金乙腈－四氫呋喃－水－甲酸（55：45：400：1.5）為流動相，在相同色譜條件下測定了山楂黃酮提取部位中的金絲桃苷和牡荊素-2”-O-紋性較強，為進一步建立指紋圖譜墊定基礎(chǔ)。量，展開劑為環(huán)已烷—氯仿—醋酸乙酯—甲酸(20：5：8：0.1)。均勻設(shè)計方法考察了提取過程中影響因素，優(yōu)選了乙醇提取的工藝條件。及對藥物在基質(zhì)中的分散狀態(tài)進行了初步研究。優(yōu)選滴丸的處方組成和制劑過程中的工藝條件。第二章指標(biāo)性成分測定方法的研究山楂葉黃酮的薄層色譜法鑒別建立山楂黃酮提取部位中蘆丁、金絲桃苷的TLC鑒別方法。試驗儀器和藥品硅膠G薄層板，煙臺化工研究所；甲醇、甲酸，丁酮，乙酸乙酯均為分析純?nèi)芤旱闹苽鋵φ掌啡芤旱闹苽洌壕芊Q取蘆丁對照品3mg，加甲醇10mL使溶解，定容，即為蘆丁對照品溶液。精密稱取金絲桃苷對照品1mg，加甲醇10mL使溶解，定容，即為金絲桃苷對照品溶液。供試品溶液的制備：取山楂總黃酮提取物0.02g，加甲醇5mL溶解定容，作為供試液。陰性對照溶液制備：按山楂滴丸制備方法，除山楂總黃酮外，取其它原輔料制做陰性對照藥，同供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照溶液。薄層層析G365nm2－1圖2－1山楂葉黃酮薄層色譜圖Fig.2-1TLCcharacteristationofFEL1、蘆?。?、金絲桃苷；3、4、5、7、8、樣品液；2、陰性對照1、rutin；6、hyperoside；3、4、5、7、8、sample；2、emptyREF.上面和近前沿處是一個亮藍色熒光斑點。比色法測定山楂葉總黃酮的含量間等較為關(guān)鍵，需要考察。實驗儀器和藥品島津2401紫外分光光度計；容量瓶；秒表蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：購自中國藥品生物制品檢定所，批號：0080-9705；乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純；聚酰胺，100目實驗方法聚酰胺的處理取適量聚酰胺，裝柱，使用適量乙醇沖洗后，改用60％乙醇處理，即以60％乙醇充分洗滌后，烘干，備用。對照品溶液的配制105℃60％60％50mL，25mL60％（1mL0.4mg。供試品溶液的制備精密稱取山楂總黃酮提取物0.02g，加入10mL60％乙醇分散溶解，加入0.3g0.3g100mL60％50mL瓶中，定容，作為供試品溶液。實驗條件的優(yōu)選測定波長選擇吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按下述的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法顯色，用紫外-可見分300～600nm510nm2－2。0.350.3吸收度A0.25吸收度A0.050400 450 500 550 600波長（nm）2－2Fig.2－2theUV-VISspectraofrutin顯色劑用量的選擇0.412mg/mL5mL，5％NaNO210％Al（NO3）30.4、0.4mL；0.8、0.8mL；1.2、1.2mL；1.6、1.6mL；2.0、2.0mL顯色測定。其它按下述的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法顯色。結(jié)果見表2-1表2-1不同顯色劑用量的考察結(jié)果Tab.2-1therelationsbetweenamountoftheNaNO2、Al（NO3）3andabsorbtion加入量（mL）1.62.0吸收度0.3410.6220.76507640.7685mL（最大量）1.2mL1.2mL顯色完全，并且吸收度不隨顯色劑用量的增加而增加。顯色后時間的選擇1mol/LNaOH2min、5min、10min15min、20min、25min、40min、60min、90min2-2表2-2顯色后不同時間的吸收度變化情況Tab.2-2therelationsbetweentimeandabsorption時間（min）2510152025406090蘆丁0.3400.3190.3080.3030.3030.3020.3020.3010.301樣品0.3760.3530.3410.3380.3370.3370.3370.3360.3351515～90min之間，吸收度值一直穩(wěn)定，可以進行含量測定。供試品的測定工藝10mL60％乙0.3g0.3g100mL60％乙醇溶解50mL25mL60％5mL，5％NaNO21.2mL，6min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm線性關(guān)系的考察精密吸取蘆丁對照品液(0.412mg/mL)0mL1mL2mL3mL4mL25mL60％5％NaNO26min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm3853x-0.0022(r=0.9999)0～2.06mg2－3。1吸收度0.8吸收度00 0.5 1 1.5 2 2.5標(biāo)準(zhǔn)品量（mg）圖2－3蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品硝酸鋁顯色法線性關(guān)系Fig.2－3thestandardcurveofrutin精密度試驗6，RSD％0.505％2－3。表2－3精密度試驗Tab.2－3repeatability序號吸收度平均值RSD（％）10.35320.352340.3530.3540.3540.50550.35760.355重復(fù)性試驗6RSD％0.86％2－4。序號含量（％）序號含量（％）平均值（％）RSD（％）173.5272.13473.172.673.00.86573.8672.7加樣回收率試驗915mg、20mg、25mg33.12mg/mL5mL，0.3g2－5。序號樣品含黃酮量序號樣品含黃酮量標(biāo)準(zhǔn)品加入量測得量回收率平均回收率RSD（mg）（mg）（mg）（％）（％）（％）114.7115.6030.1098.63214.9315.6030.4999.74315.0415.6030.3197.88420.1915.6035.7299.57520.5915.6036.23100.2598.771.03621.6215.6036.7897.16725.1715.6040.5298.39824.8615.6040.1497.94924.3915.6039.8999.35結(jié)論中注意嚴(yán)格控制反應(yīng)時間、顯色劑的用量等試驗條件。反相高效液相色譜法測定山楂葉黃酮中的有效成分含量RP-HPLC方法測定山楂總黃酮中代表性成分金絲桃苷和牡荊素-2”-O--2”-O-了同時測定金絲桃苷和牡荊素-2”-O-鼠李糖苷的反相高效液相方法。儀器與試藥實驗儀器和藥品日本島津LC－10AVP高效液相色譜儀（包括在線脫氣機、二元泵、SPD－M10VP二極管陣列檢測器，－VP5.03軟件；Metler十萬分之一電子分析天平；超聲清洗儀。（（Fluca>98.0%453344/2其他試劑為分析純色譜條件色譜柱為 intersil ODS－3 C18柱（5μm， 250×4.6mm）（（；1.0mL/min255nm；柱溫：25℃。在上述色譜條件下，金絲桃苷和牡荊素-2”-O--2”-O-7000，28min，理論塔板數(shù)以6000。abc時間t/mintimet/min2－4金絲桃苷（a、牡荊素-2”-O-鼠李糖苷（b、山楂提取物（c）HPLCchromatogramsofhyperoside(a)、vitexin-2”-o-rhamnoside(b)、materialofHawthornflavonoids(c)對照品溶液的制備25mL0.45μm精密稱取干燥至恒重的牡荊素-2”-O-鼠李糖苷的對照品L0.45μm的濾膜濾過，即得對照品溶液Ⅱ。線性關(guān)系的考察25mL1、2、3、4、5mL10mL，混勻。再經(jīng)微Y＝1714968X－20498.5，r＝0.9999。結(jié)果表明，金絲桃苷進樣量在0.1232～0.616μg與峰面積線性關(guān)系良好。見圖2－5。峰面積積分值峰面積積分值00 0.2 0.4 0.6 0.8金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品量（μg）圖2－5金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2－5thethestandardcurveofhyperoside精密稱取牡荊素-2”-O-6.85mg25mL容量瓶中，加12345mL10mL，10μL，按上述色譜條件操作。以峰面積為縱坐標(biāo)，進樣量為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，得回歸Y＝1312124X－32467.4，r＝0.9999-2”-O-鼠李糖苷0.2740～1.370μg2－6。峰面積積分值2000000峰面積積分值150000000 0.5 1 1.5標(biāo)準(zhǔn)品量（μg）圖2－6牡荊素-2”-O-鼠李糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2－6thethestandardcurveofvitexin-2”-o-rhamnoside供試品溶液的制備7030mL10min70％丙酮溶液反復(fù)洗3～450mL，搖勻。再經(jīng)微孔濾膜濾過，即得。方法學(xué)考察精密度試驗取同一份山楂黃酮提取物的供試液連續(xù)重復(fù)進樣，測定金絲桃苷的峰面SD2％（n＝，同時測定牡荊素-2”-O-鼠李糖苷峰面積，其D％（n＝－6表2－6精密度試驗結(jié)果Tab.repeatability序號123456金絲桃苷峰面積206866320614862076218208759020861472091575牡荊素峰面積351672235045293529571354889835464453555673重復(fù)性試驗精密稱取9份同一批山楂黃酮提取物，其中15mg、20mg、25mg各3份，按3.5所述方法制備供試品溶液，采用HPLC分別檢測，測定金絲桃苷和牡荊素-2”-O-鼠李糖苷含量，其RSD為0.63%和0.78%。數(shù)據(jù)見表2－7。序號取樣量序號取樣量金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積金絲桃苷含量牡荊素含量10.01592260765443300.55.15%11.39%20.01588261076443829.25.17%11.43%30.015772543804324465.08%11.23%40.01952325092552656.45.16%11.42%50.01997332945566006.55.16%11.42%60.01997336427571925.95.21%11.53%70.02399402808684773.65.15%11.39%80.02398408101693771.75.21%11.54%90.02398402415684105.55.14%11.39%穩(wěn)定性試驗HPLC-2”-O-鼠李糖苷峰面RSD0.900.942－8。時間（h）金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積0322375時間（h）金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積0322375548037.11318424541325.82327101556061.74321900545221.28326140554438.814324190552137.524322612548340.3回收率試驗0.01g0.5530mg/mL0.8mL1.0mL1.2mL。按供試品溶液的制備項下方法操作，采用HPLC分別檢測。金絲桃苷的平均回收率為101.7%、RSD0.77%，牡荊素-2”-O-101.5%、RSD0.88%2－9。序 取樣量金絲桃苷含量牡荊素含量序 取樣量金絲桃苷含量牡荊素含量金絲桃苷加入量牡荊素加入量金絲桃苷測得量牡荊素測得量金絲桃苷牡荊素回號 /g回收率/%收率/%/mg/mg/mg/mg/mg/mg1 0.010420.53771.19000.44240.97440.45040.9929101.8101.92 0.010410.53711.18870.44240.97440.44460.9793100.5100.53 0.010320.53231.17810.55301.2180.56791.2485102.7102.54 0.010390.53601.18630.55301.2180.56021.2326101.3101.25 0.010490.54121.19780.66361.46160.67491.4704101.7100.66 0.010540.54371.20330.66361.46160.67951.4981102.4102.5討論對于山楂葉總黃酮提取物中金絲桃苷和牡荊素-2”-O-鼠李糖苷的含量直接使用甲醇超聲提（（％丙酮超聲提取，揮干后，甲醇溶解定容等方法。通過比較色譜峰的峰面積、分離度70255nm處有較強的吸收，同時牡荊素-2”-O-鼠李糖苷的吸收度也較強。在此波長下檢測，可于同一色譜中顯示其他黃酮類成分的保留時間、峰面積等參數(shù)，在測定金絲桃苷和牡荊素-2”-O-可增加色譜的指紋性。比色法測定山楂果中總?cè)扑崽崛∥锏暮咳?、高氯酸比色對山楂總?cè)扑徇M行測定，并對其相關(guān)條件進行考察。實驗儀器和藥品島津2401紫外分光光度計；容量瓶；水浴鍋；溫度計110704-200216；對照品溶液的配制1.5mg10mL容量瓶中加無水乙醇溶解，并定10mL，作為對照品溶液。供試品溶液的配制50mL容量瓶中加無水乙醇溶解，50mL，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。測定波長選擇經(jīng)紫外掃描在548nm有最大吸收，空白無干擾。顯色劑用量及條件優(yōu)選香草醛—冰醋酸液用量的優(yōu)選取熊果酸對照品(0.15mg/mL)2.0mL5份，805%香草0.25mL0.50mL0.75mL1.00mL2.0mL，60155.0mL搖勻，補加冰醋酸至25mL定容，在548nm處測定吸收值，結(jié)果見表2-10。表2-10不同5%香草醛—冰醋酸用量結(jié)果Tab.2-10therelationsbetweenamountofaceticacid-vanillinandabsorption5％香草醛－冰醋酸用量（mL）0.250.500.751.001.25吸收值0.4370.4660.4690.4840.478結(jié)果表明5%香草醛-冰醋酸用量為1.00mL最佳。高氯酸的用量的優(yōu)選取熊果酸對照品(0.15mg/mL)2.0mL5805%香1.00mL1.0mL1.5mL2.0mL2.5mL3.0mL60155.0mL25mL定容，在548nm處測定吸收值，結(jié)果見表2－11。表2－11 不同量高氯酸測定結(jié)果Tab.2-11therelationsbetweenamountofHClO4andabsorption高氯酸用量（mL）1.01.52.02.53.0吸收值0.3300.3910.4640.4880.485結(jié)果表明，高氯酸用量為2.5mL時最佳。顯色后水浴的溫度的考察取熊果酸對照品(0.15mg/mL)2.0mL615分鐘，2－12。表2－12 不同溫度考察結(jié)果Tab.2-12therelationsbetweentemperatureandabsorption顯色水浴溫度（℃）5060708090100吸收值0.4580.4750.4950.5420.5630.6526060℃。樣品的測定方法經(jīng)過以上實驗的優(yōu)選，確定最終的實驗工藝為：精密吸取供試樣品液5%2.5mL，60155.0mL25mL定548nm處測定吸收值。按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算。線性關(guān)系的考察精密吸取熊果酸對照品無水乙醇液(0.15mg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL2.5mL5%1.0mL，2.5mL，60155.0mL25mL548nm75～450μg2-6。吸收度吸收度

0.145

0.282

0.425

0.562

0.697

0.8380 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5熊果酸的取樣量（mg）圖2-7熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系Fig.2-7thethestandardcurveofursolicacid精密度試驗：5據(jù)所得吸收度值計算，RSD1.222－13。表2－13精密度試驗Tab.2-13repeatability序號吸收度平均值RSD％10.40720.41030.4050.4101.2240.41250.418重復(fù)性試驗：6RSD1.932－14。表2－14重復(fù)性試驗Tab.2-14reproducibility序號 總?cè)扑岷?/p>

（％）

RSD％160.3262.2160.3262.2359.8461.9561.2663.0穩(wěn)定性考察0.15mg/mL2.0mL按標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法操作，并分0～1800～5分鐘內(nèi)不穩(wěn)定，RSD14.1%；5～60RSD0.98%；60～180分鐘穩(wěn)定性開始下降，RSD為6.5％。結(jié)果見表2-15。表2-15穩(wěn)定性考察表Tab.2-15stability時間(min)吸收度平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(%)00.59810.52620.4730.4930.06914.130.43940.43150.429100.425200.4210.4230.00410.98400.423600.418800.4061000.4031200.3910.3830.0256.51500.3621800.351回收率試驗9769%2-16。序號樣品中相當(dāng)于熊加入熊果酸的測定熊果酸的量回收率序號樣品中相當(dāng)于熊加入熊果酸的測定熊果酸的量回收率平均回收RSD果酸含量（μg）量（μg）（μg）（％）率（％）（％）131373125619997.98230023125603997.183428673204312531255973631299.3999.4698.570.91530023125609098.82630853125618399.14結(jié)論測定方法。薄層色譜掃描法測定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量描法測定熊果酸含量。試驗儀器與藥品日本島津CS－9301型雙波長薄層掃描儀10742-200212G甲酸、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇、環(huán)己烷等均為分析純。對照品溶液的制備精密稱取熊果酸對照品適量2.5mg，置5mL容量瓶中，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。展開劑的選擇（（正丁醇—氯仿—醋酸乙酯（20：5：8）等展開劑進行優(yōu)選，認(rèn)為環(huán)已烷—氯仿—醋酸乙酯—甲酸(20：5：8：0.1)效果最佳，在本展開劑的展開條件下，熊果酸斑點顯色清晰，附近沒有干擾。提取條件的優(yōu)選12345342－17表2－17不同提取時間的熊果酸含量Tab.2-17thecontentsofursolicacidoffiveextractiontimes提取時間（h）12345熊果酸含量（％）35777掃描條件的選擇經(jīng)對顯色后分別在熊果酸對照品及供試品色譜斑點處和空白處掃描紫外吸收光譜，熊果酸顯色后色譜斑點最大吸收峰在530～540nm之間。比較后確定使用雙波長掃描，掃描方法為反射式鋸齒掃描，波長為λs＝535nm，λr＝700nm，狹縫1.2×1.2mm，SX=3，靈敏度中等。見圖2－7。圖2－8熊果酸的薄層掃描圖Fig2-8TheTLCchromatogramofursolicacid供試品的測定方法4小時，提取液回收乙醚至干，殘渣用石油醚（30～60℃）浸泡15l（2分鐘，傾去石油醚。殘渣加適量無水乙醇―氯仿（3：2）25ml勻，作為供試品溶液。（200010ul，2ulG10％硫1055～7（附錄ⅥB薄層掃描法方法學(xué)的考察線性關(guān)系的考察2.04.06.08.010.0μL對照品溶液(0.54mg/ml)，點于同一Gy=-477.31+1546.6x，r=0.9997(y為吸收度積分值；x為對照品量)，線性范圍為：1.08～5.40μg2－8。色譜峰面積色譜峰面積00 2 4 6熊果酸的量（μg）圖2－9熊果酸的線性關(guān)系Fig.2-9thethestandardcurveofursolicacid穩(wěn)定性試驗4μLG0.511.5234662－18。表2－18穩(wěn)定性試驗結(jié)果Tab.2-18stability時間（h）吸收度積分值平均值RSD（％）0.52875.2412935.381.52918.0422865.322909.371.6632861.7942912.0762997.73精密度試驗G52－19。52－19。序號（吸收度積分值）同板精密度不同板精密度179069.83序號（吸收度積分值）同板精密度不同板精密度179069.8379069.83278274.8880374.58375222.5774954.92477639.2575028.33574592.9074997.80平均值76959.8976885.09RSD％2.5383.422從表2-19可以看出本法精密度良好。重現(xiàn)性試驗52－20。序號熊果酸含量（％）序號熊果酸含量（％）平均含量（％）RSD％17.2427.35347.117.037.231.9257.3967.28結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。加樣回收率試驗(，9份，精密加入熊果酸對照品溶液(0.494mg/mL)適量，按樣品含量測定方法制備供試品溶液并測定熊果酸的含量，計算回收率，測得熊果酸的平均100.32%，RSD=2.14%2－21。已知量加入量已知量加入量測得量回收率平均回收率序號（mg）（mg）（mg）（％）（％）13.5202.7176.19998.6023.4272.7176.176101.2033.4942.7176.277102.4043.5073.4586.85596.8053.5363.4587.004100.30100.322.1463.4403.4586.83698.2073.4274.1997.62099.8783.4664.1997.774102.6093.5074.1997.827102.87討論條件，均未能使熊果酸和齊墩果酸成功分離，包括甲醇－水(88：12)、甲醇－磷酸鹽緩沖液（9：1、24－乙腈(30：70)、甲醇－水－冰醋酸(33：67：0.2)等。和齊墩果酸的含量之和。薄層色譜方法受實驗操作、儀器、環(huán)境的影響較大，測定熊果酸的含量測定方法有待于進一步改進。本章結(jié)論的指標(biāo)性成分測定方法。G（基酮）－乙酸乙酯（10：10：30：50）為展開劑，展開，取出晾干，噴以AlCl3365nm3.C18為流255nm、柱溫：25℃的色譜條件，同時測定了山楂黃酮提取部位中的金絲桃苷和牡荊素-2”-O-立指紋圖譜墊定基礎(chǔ)。2.5mL，80℃水溶5%1.0mL2.5mL，6015分5.0mL25mL548nm處測定吸收值。按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算。G％硫酸乙醇溶液顯色。第三章有效部位的提取精制工藝研究山楂葉中總黃酮的提取精制工藝研究定物質(zhì)基礎(chǔ)。試驗儀器和藥品CrataeguspinnatifidaBgemajorN.E.Br的析純山楂葉藥材中總黃酮含量的測定。1000.5g，加入40mL60％乙醇，6030min3次，合并10mL600.3g0.3g100mL60％50mL2.2的測定。山楂葉總黃酮提取精制工藝的初步選擇少了有機溶劑的污染，并在此基礎(chǔ)上進一步開展了工藝優(yōu)選研究。山楂總黃酮乙醇提取工藝影響因素的考察乙醇濃度對山楂總黃酮提取率的影響精密稱取山楂葉粗粉（20目）25g共4份，分別加0，30，60，95％乙醇500mL1.5h中含有量相比，按公式（－－1提取率％＝提取物中黃酮量100％藥材中黃酮量

公式（3－1）表3－1乙醇濃度對山楂黃酮提取率的影響Tab.3-1comparisionofFELextractionratesbyfourcontentsofalcohol乙醇濃度(%) 0 30 60 95提取率(%) 25.1 49.9 73.1 63.6由表3－1可知，以60%乙醇為溶媒山楂總黃酮提取率最高。提取時間對山楂總黃酮提取率的影響精密稱取山楂葉粗粉（20目）25g560500mL，1h5，20，30，40，60min，濾過，殘渣用少量溶媒洗滌，合量，與藥材中含有量相比，按公式(3－1)3－2。表3－2提取時間對山楂總黃酮提取率的影響Tab.3-2comparisionofFELextractionratesbyfiveextractiontimes時間(min) 5 20 30 40 提取率(%) 5.1 48.7 62.1 63.9 71.4由表3－2可知，山楂總黃酮提取率隨時間的延長而提高。溶劑用量對山楂總黃酮提取率的影響（20目60500mL1h60min，濾過，殘渣用少量溶媒洗滌，合并濾液，減壓干燥，得粗粉。按上述總黃酮測定方法操作，測定山楂總黃酮含量，與藥材中含有量相比，按公式（－－。表3－3溶劑用量對山楂總黃酮提取率的影響Tab.3-3comparisionofFELextractionratesbyfouramountsofsolvent溶劑用量(mL) 125 250 375 500提取率(%) 34.1 49.9 57.1 73.1由表3－3可知，山楂總黃酮提取率隨60％乙醇用量的增加而提高。提取溫度對山楂總黃酮提取率的影響（20目6040、60、80、10090min，濾過，殘渣用少量溶3－4。表3－4提取溫度對山楂總黃酮提取率的影響Tab.3-4comparisionofFELextractionratesbyfourextractiontemperatures溫度(℃)406080100提取率(%)32.562.768.775.3由表3－4可知，溫度對山楂總黃酮提取率有顯著的影響，40～60℃之間提取率增大顯著，而在60～100℃之間提取率增加趨緩。山楂總黃酮提取工藝優(yōu)化3－5U10（10×53）均勻設(shè)計表安排3－6。g（0目2得粗粉。按上述總黃酮測定方法操作，測定山楂總黃酮含量，用公式計算提取率。水平溶劑用量*水平溶劑用量*乙醇濃度(%)溫度(℃)加熱時間(min)1560404027655560397070804117585100513801001206157178199211023*：溶劑用量為原料重量的倍數(shù)(mL).表3－6均勻設(shè)計的試驗安排和結(jié)果Tab.3-6Experimentaldesignandresultsbytheuniformdesign因素序號溶劑用量(倍)乙醇濃度(%)溫度(℃)加熱時間(min)提取率(%327708512055.839804010026.3411607010055513651008067.761575408039.171780706050.9819601006093.392170554069.5102375854090.6表3－6中數(shù)據(jù)用spss10.0(step-upforward-entryprocedure)y(選入變量的影響后)對y考慮剔除。最終確定方程如下：Y=9.022+4.659x1-0.868x2+0.181x3+0.700x4+0.0184x1x3-0.0427x1x4式中：y：提取率，x1：溶劑用量，x2：乙醇濃度，x3：提取溫度，x4：加熱時間，x1x3、x1x4：因素的交互作用。R＝0.9975，S＝2.585，F(xiàn)＝98.953，P<0.00155，方程有顯著意義。bYb（轉(zhuǎn)換公式如下：

i）的bb

公式（3－2）i iliixilyy3－7表3－7回歸方程的標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)Tab.3-7Standardcoefficientofregressiveequation因素x1x2x3x4x1x3x1x4標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)1.340-0.3070.1930.9910.521-0.36070x1、x43－1236070℃，加熱時間40min295.109％。按此工藝安393.9有提取率高、生產(chǎn)成本低的優(yōu)點，更適合工業(yè)生產(chǎn)。圖3－1提取率與溶劑用量、加熱時間的關(guān)系Fig.3-1relationsbetweenextrationratesandamountsofsolvent,extrationtimes樹脂吸附性能的考察樹脂的預(yù)處理大孔吸附樹脂（40～60目）48h，裝柱。254nm再用蒸餾水洗至無醇味，備用。裝柱0.2g餾水浸泡，備用。D101型大孔吸附樹脂吸附率和解吸率的比較（72.4％）200mL，放入恒溫（30℃）18h，充分吸附后，濾過。測定溶液中剩余山楂總黃酮含量，按公式（3-3）計算：吸附量＝溶液體積吸附前溶液濃度－吸附后溶液濃度樹脂重量（干）

公式（3-3）9mm70測定解吸液中總黃酮含量。按公式（3-4）3－8。解吸百分率＝洗脫液的平衡濃度洗脫液的體積吸附量樹脂重量（干）

公式（3-4）表3－8不同型號大孔樹脂的吸附量和解吸率Tab.3-8Absorptionanddesorptionofdifferenttypemacroporeousresins型號 D-101 D-101A D-101C吸附量(mg/g) 256.5 231.4 280.2解吸率(%) 95.4 98.7 94.8由表3－8D-101CD-101AD-101型大孔吸附樹脂。濃度對吸附的影響（吸附等溫線）0.5g40mL不同濃度的0.8mL，在表面皿上水浴蒸去溶劑，按山楂總黃酮含量測定方法測定含量。按公式（3-3）計算吸附量。以平衡濃度為橫坐標(biāo)，吸附量為縱坐標(biāo)，得到吸附等溫線，見圖3－2。吸附量(mg/g)吸附量(mg/g)00 5 10 15平衡濃度(mg/ml)圖3－2山楂總黃酮在D－101型大孔樹脂中的吸附等溫線Fig.3-2AbsorptionisothermcurveofFELwithD-101macroporousresin3－2BrunauerD-101樹脂對山楂總黃酮的Langmuir－5）表示：qqbc1bc

公式（3－5）q（/b為吸附平衡常數(shù)；q（/；C為山楂總黃酮的平衡濃度。上式可改成：c1q

1q

公式（3－6）c~c以q 作圖，可得一直線，由直線的斜率可得飽和吸附量q為687mg/g。溫度對吸附的影響0.5g540mL濃度5mg/mL24h，（3－3）計算吸附量。結(jié)果見圖3－3。300吸附量(mg/g)250吸附量(mg/g)2001501005000

20 40 60 80溫度(℃)圖3－3溫度對山楂總黃酮在D－101型大孔樹脂吸附量的影響Fig.3-3EffectoftemperatureontheabsorptionofFELwithD-101macroporousresin3－325～65℃對山楂總黃酮吸附性能較好，55℃時吸鹽離子對吸附的影響0.5g105mg/mL40mLNaClKCl0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mol/L（30℃）24h1.6.43－4吸附量(mg/g)400吸附量(mg/g)NaClKCl300NaClKCl20010000 1 2 3鹽濃度(mol/L)圖3－4鹽離子濃度對山楂總黃酮在D－101型大孔樹脂吸附量的影響Fig3-4EffectofironstrengthontheabsorptionofFELwithD-101macroporousresin山楂總黃酮的吸附曲線6BV/h2mg/mL的山楂總5mL3－5。濃度(mg/mL)2濃度(mg/mL)100 100 200 300 400體積(mL)圖3－5山楂總黃酮溶液在D－101型大孔樹脂上的穿透曲線Fig.3-5BreakthroughcurveofFELsolutiononD-101macroporousresin3－530倍床體積的山楂總黃酮水溶液而無穿透現(xiàn)260mg/g。洗脫液的考察0.5g5mg/mL20mL30％、50％、70％、9514BV/h的速度洗脫，以解吸劑的體積為橫坐標(biāo)，流出的解吸劑的濃度為縱坐標(biāo)作圖3－6。濃度(μg/mL)濃度(μg/mL)30%30% 50%70%90%00 10 20 30體積(ml)圖3－6不同濃度乙醇對山楂總黃酮洗脫能力的考察Fig.3-6EffectofdifferentalcoholconcentrationonthedescorptionofFELwithD-101macroporousresin3－630507095％時，70％乙醇作為洗脫劑。洗脫劑流速的考察0.5g5mg/mL20mL7，14，21，35BV/h的流速洗脫，以洗脫液的體積為橫坐標(biāo)，洗脫液的濃度為縱坐標(biāo)作圖3－7?？梢?，流速為7BV/h14BV/h21BV/h35BV/h時洗脫峰鈍且有拖尾現(xiàn)象。從縮短生產(chǎn)周期的角度考慮，14BV/h的流速比較合理，8BV的洗脫液可以洗脫的比較完全。7BV/h 7BV/h 14BV/h21BV/h35BV/h濃度(μg/mL)100050000 5 10 15 20洗脫液體積(mL)圖3－7洗脫劑的流速對山楂總黃酮洗脫的影響Fig.3-7EffectofflowrateofeluateonthedesorptionofFEL0大孔吸附樹脂吸附純化山楂總黃酮的工藝1.0g處理過的樹脂1mL1g10mL，將上述水溶液6BV/h12BV14BV/h的流速洗去雜15BV70％乙醇用同一流速洗脫。即得。工藝的驗證g0L7011.5L60%1mL1g6BV/h12BV的水14BV/h15BV7065％以上。討論60237040min，同法提取293.9%。該法具有提取率高、成本低的優(yōu)點。對于D－101型大孔吸附樹脂對山楂總黃酮的吸附性能和機理尚未報道。試驗結(jié)果表明，D－101型、D－101A型、D－101C型三種大孔吸D－101型大孔吸附樹脂吸附機理Langmuir625mg/g，動態(tài)飽和吸附量260mg/g。吸附時，溫度、鹽離子濃度、洗脫劑濃度及流速對山楂總黃酮的吸65％。山楂果中總?cè)扑岵课惶崛」に嚨难芯?0提取工藝優(yōu)選醇提取條件的確定3－9。表3－9因素水平表Tab.3-9FactorsandLevels乙醇濃度（％）提取時間（h）乙醇用量（倍）16041527062038082550g，加入設(shè)定濃度乙醇回流提取設(shè)定時（2小時1.1g/mL。量取適量稠膏真空干燥，精密稱定，按含量測定方法測定（3－7）計算出三萜酸類的提取率作為指標(biāo)。將三個因A、B、D列，C3－10。三萜酸類提取率＝干膏出膏率×總?cè)扑岷?公式（3－7）表3－10正交試驗安排和結(jié)果Tab.3-10Experimentaldesignandresultsbytheorthogonaldesign序號ABCD結(jié)果111112.65212222.58313331.71421232.08522312.80623122.44731322.61832131.62933212.16Ⅰ6.947.346.717.61Ⅱ7.327.006.827.63Ⅲ6.396.317.125.41R0.310.340.140.74平方和142.58142.69142.23145.40s0.14580.18360.03001.0854變差來源離差平方和自由度均方F值變差來源離差平方和自由度均方F值P值A(chǔ)0.145820.07294.855p<0.01B0.183620.09186.116p<0.01C0.030020.01501D1.085420.542736.154p<0.01誤差0.030020.0150總和1.444880.7224通過上表可以得知，三個因素均對結(jié)果有顯著性的影響，因素主次為D>B>A，A2B1D1，70％28770％酸濃度的確定200g，70％2871.1g/mL323％、6％、9％90℃223％NaOH230mL，最后用適