補(bǔ)體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)課件

第11章

補(bǔ)體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)

第11章

補(bǔ)體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)

1補(bǔ)體（C）：是一組存在于人和動(dòng)物血清與組織液中的具有酶活性的不耐熱的糖蛋白。補(bǔ)體（C）：2補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定0~10℃條件下活性只能保持3~4d56℃、30min滅活

多種理化因素（射線、機(jī)械振蕩、酒精）均可破壞補(bǔ)體所以：補(bǔ)體活性檢測(cè)要快，保存在－20℃補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定3第一節(jié)補(bǔ)體活性和組分的檢測(cè)第一節(jié)補(bǔ)體活性和組分的檢測(cè)4一、血清補(bǔ)體總活性測(cè)定（CH50試驗(yàn)）原理：在溶血反應(yīng)中，當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素定量時(shí)，在規(guī)定的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，溶血程度與補(bǔ)體的活性呈正相關(guān)。（但非直線關(guān)系）Ag激活補(bǔ)體溶血紅細(xì)胞溶血素一、血清補(bǔ)體總活性測(cè)定（CH50試驗(yàn)）原理：Ag激活補(bǔ)體溶血5應(yīng)用：正常值：50-100U/ml

增高：急性炎癥、組織損傷、惡性腫瘤等降低：嚴(yán)重肝病、某些自身免疫性疾病（如腎小球腎炎、SLE等)以引起50%溶血所需要的最小補(bǔ)體量為1U溶血率7050300（%）血清補(bǔ)體應(yīng)用：正常值：50-100U/ml以引起50%溶血所需溶血率650％溶血標(biāo)準(zhǔn)管2%綿羊紅細(xì)胞懸液0.5mlH2O2.0ml1.8%NaCl溶液2.0ml2%SRBC懸液0.5ml50％溶血標(biāo)準(zhǔn)管2%綿羊紅細(xì)胞懸液0.5ml7CH50測(cè)定方法試管號(hào)1：20稀釋血清緩沖液2U溶血素2%SRBE0.101.400.50.50.151.350.50.50.201.300.50.50.251.250.50.5

0.301.200.50.50.351.150.50.50.401.100.50.50.451.050.50.50.501.000.50.50.001.500.50.5選擇溶血程度與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管最為接近的兩管，測(cè)定OD值，以O(shè)D值最接近標(biāo)準(zhǔn)管的定為最高有效反應(yīng)管。CH50測(cè)定方法試管號(hào)1：20稀釋血清850％溶血的總補(bǔ)體值CH50（U/ml）＝1/血清用量×稀釋倍數(shù)1u

0.3ml×20總補(bǔ)體活性參考范圍：50~100U/ml50％溶血的總補(bǔ)體值CH50（U/ml）＝1u9CH50試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)1、測(cè)定的是補(bǔ)體9種成分的綜合水平2、方法簡(jiǎn)便、快速，但敏感性較低3、影響因素多CH50試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)1、測(cè)定的是補(bǔ)體9種成分的綜合水平10(一)

免疫溶血法C4活性測(cè)定：去C4血清+致敏紅細(xì)胞——不溶血+

待測(cè)血清——溶血溶血程度與待測(cè)血清中的C4活性成正相關(guān)二、補(bǔ)體成分測(cè)定(一)免疫溶血法C4活性測(cè)定：去C4血清+致敏紅細(xì)胞——不11C3含量檢測(cè)1、方法：?jiǎn)螖U(kuò)法

免疫比濁法2、應(yīng)用：正常值(二)

免疫化學(xué)法C3含量檢測(cè)1、方法：?jiǎn)螖U(kuò)法(二)免疫化學(xué)法12第二節(jié)

補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT)第二節(jié)補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT)13補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)CFTcomplementfixationtest原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測(cè)試驗(yàn)系統(tǒng)是否結(jié)合補(bǔ)體。試驗(yàn)系統(tǒng)：待測(cè)樣品和已知抗原（或抗體）指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素溶血—陰性；不溶血—陽性補(bǔ)體補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測(cè)試驗(yàn)系統(tǒng)是否結(jié)合補(bǔ)體。14補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)15方法評(píng)價(jià)①靈敏度高。比沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的靈敏度高得多，能測(cè)定0.05μg/ml的抗體。②特異性強(qiáng)。各種成分都事先滴定，選擇最佳比例，出現(xiàn)交叉反應(yīng)的機(jī)率小。③易于普及，試驗(yàn)結(jié)果顯而易見；④試驗(yàn)條件要求低，不需要特殊儀器或只用分光光度計(jì)。方法評(píng)價(jià)①靈敏度高。比沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的靈敏度高得多，能測(cè)16方法評(píng)價(jià)但參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖，所以常常被其他方法所取代。但對(duì)于免疫學(xué)技術(shù)的基本訓(xùn)練仍是一個(gè)很好的試驗(yàn)。方法評(píng)價(jià)但參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖，所以17第三節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)第三節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)18概述

免疫復(fù)合物是機(jī)體內(nèi)抗原抗體形成的抗原抗體復(fù)合物，沉積在血管壁、皮膚、臟器的免疫復(fù)合物稱為局部免疫復(fù)合物，隨血液循環(huán)的稱為循環(huán)免疫復(fù)合物。局部免疫復(fù)合物用免疫組化法檢測(cè)，而循環(huán)免疫復(fù)合物檢測(cè)技術(shù)分為抗原特異性檢測(cè)技術(shù)和非抗原特異性檢測(cè)技術(shù)兩類。概述免疫復(fù)合物是機(jī)體內(nèi)抗原抗體形成的抗原抗體復(fù)合19一、PEG（聚乙二醇）沉降法：1、

原理：低濃度的PEG能選擇性地沉淀IC，一般PEG的最終濃度選擇3.5％，PEG＞5％將失去對(duì)IC的選擇性。2、

方法：PEG（7％）+等量待檢血清→4℃16-18小時(shí)后離心沉淀→NaOH溶解→280nm測(cè)定A值，A＞0.21判為陽性。3、

評(píng)價(jià)：簡(jiǎn)單方便，既可檢測(cè)又可以用于分離；但特異性差，血清中的大分子蛋白質(zhì)易造成假陽性。一、PEG（聚乙二醇）沉降法：1、

原理：低濃度的PEG能20C1q固相法1、

原理；固相C1q+待測(cè)血清（IC）+酶標(biāo)抗人IgG+底物——根據(jù)顏色深淺判斷IC含量2、

評(píng)價(jià)：敏感度較高重復(fù)性好結(jié)果穩(wěn)定性易受影響二、ELISA測(cè)定循環(huán)免疫復(fù)合物

：C1q固相法二、ELISA測(cè)定循環(huán)免疫復(fù)合物：21免疫復(fù)合物檢測(cè)的臨床意義1、

可作為評(píng)價(jià)疾病的活動(dòng)情況及其對(duì)治療的反應(yīng)性、惡化預(yù)兆和疾病分期的指標(biāo)。2、

可幫助診斷某些疾病。3、

可協(xié)助研究疾病的發(fā)病機(jī)理。免疫復(fù)合物檢測(cè)的臨床意義1、

可作為評(píng)價(jià)疾病的活動(dòng)情況及其22思考題簡(jiǎn)答題：1、CFT的原理2、CH50的原理思考題簡(jiǎn)答題：23第11章

補(bǔ)體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)

第11章

補(bǔ)體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)

24補(bǔ)體（C）：是一組存在于人和動(dòng)物血清與組織液中的具有酶活性的不耐熱的糖蛋白。補(bǔ)體（C）：25補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定0~10℃條件下活性只能保持3~4d56℃、30min滅活

多種理化因素（射線、機(jī)械振蕩、酒精）均可破壞補(bǔ)體所以：補(bǔ)體活性檢測(cè)要快，保存在－20℃補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定26第一節(jié)補(bǔ)體活性和組分的檢測(cè)第一節(jié)補(bǔ)體活性和組分的檢測(cè)27一、血清補(bǔ)體總活性測(cè)定（CH50試驗(yàn)）原理：在溶血反應(yīng)中，當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素定量時(shí)，在規(guī)定的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，溶血程度與補(bǔ)體的活性呈正相關(guān)。（但非直線關(guān)系）Ag激活補(bǔ)體溶血紅細(xì)胞溶血素一、血清補(bǔ)體總活性測(cè)定（CH50試驗(yàn)）原理：Ag激活補(bǔ)體溶血28應(yīng)用：正常值：50-100U/ml

增高：急性炎癥、組織損傷、惡性腫瘤等降低：嚴(yán)重肝病、某些自身免疫性疾?。ㄈ缒I小球腎炎、SLE等)以引起50%溶血所需要的最小補(bǔ)體量為1U溶血率7050300（%）血清補(bǔ)體應(yīng)用：正常值：50-100U/ml以引起50%溶血所需溶血率2950％溶血標(biāo)準(zhǔn)管2%綿羊紅細(xì)胞懸液0.5mlH2O2.0ml1.8%NaCl溶液2.0ml2%SRBC懸液0.5ml50％溶血標(biāo)準(zhǔn)管2%綿羊紅細(xì)胞懸液0.5ml30CH50測(cè)定方法試管號(hào)1：20稀釋血清緩沖液2U溶血素2%SRBE0.101.400.50.50.151.350.50.50.201.300.50.50.251.250.50.5

0.301.200.50.50.351.150.50.50.401.100.50.50.451.050.50.50.501.000.50.50.001.500.50.5選擇溶血程度與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管最為接近的兩管，測(cè)定OD值，以O(shè)D值最接近標(biāo)準(zhǔn)管的定為最高有效反應(yīng)管。CH50測(cè)定方法試管號(hào)1：20稀釋血清3150％溶血的總補(bǔ)體值CH50（U/ml）＝1/血清用量×稀釋倍數(shù)1u

0.3ml×20總補(bǔ)體活性參考范圍：50~100U/ml50％溶血的總補(bǔ)體值CH50（U/ml）＝1u32CH50試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)1、測(cè)定的是補(bǔ)體9種成分的綜合水平2、方法簡(jiǎn)便、快速，但敏感性較低3、影響因素多CH50試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)1、測(cè)定的是補(bǔ)體9種成分的綜合水平33(一)

免疫溶血法C4活性測(cè)定：去C4血清+致敏紅細(xì)胞——不溶血+

待測(cè)血清——溶血溶血程度與待測(cè)血清中的C4活性成正相關(guān)二、補(bǔ)體成分測(cè)定(一)免疫溶血法C4活性測(cè)定：去C4血清+致敏紅細(xì)胞——不34C3含量檢測(cè)1、方法：?jiǎn)螖U(kuò)法

免疫比濁法2、應(yīng)用：正常值(二)

免疫化學(xué)法C3含量檢測(cè)1、方法：?jiǎn)螖U(kuò)法(二)免疫化學(xué)法35第二節(jié)

補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT)第二節(jié)補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT)36補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)CFTcomplementfixationtest原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測(cè)試驗(yàn)系統(tǒng)是否結(jié)合補(bǔ)體。試驗(yàn)系統(tǒng)：待測(cè)樣品和已知抗原（或抗體）指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素溶血—陰性；不溶血—陽性補(bǔ)體補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測(cè)試驗(yàn)系統(tǒng)是否結(jié)合補(bǔ)體。37補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)38方法評(píng)價(jià)①靈敏度高。比沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的靈敏度高得多，能測(cè)定0.05μg/ml的抗體。②特異性強(qiáng)。各種成分都事先滴定，選擇最佳比例，出現(xiàn)交叉反應(yīng)的機(jī)率小。③易于普及，試驗(yàn)結(jié)果顯而易見；④試驗(yàn)條件要求低，不需要特殊儀器或只用分光光度計(jì)。方法評(píng)價(jià)①靈敏度高。比沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的靈敏度高得多，能測(cè)39方法評(píng)價(jià)但參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖，所以常常被其他方法所取代。但對(duì)于免疫學(xué)技術(shù)的基本訓(xùn)練仍是一個(gè)很好的試驗(yàn)。方法評(píng)價(jià)但參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖，所以40第三節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)第三節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)41概述

免疫復(fù)合物是機(jī)體內(nèi)抗原抗體形成的抗原抗體復(fù)合物，沉積在血管壁、皮膚、臟器的免疫復(fù)合物稱為局部免疫復(fù)合物，隨血液循環(huán)的稱為循環(huán)免疫復(fù)合物。