t-fixation-補(bǔ)體結(jié)合(共14張PPT)

Chapter20

LaboratoryDiagnosisandprevention、treatment病毒感染的診斷和防治1第1頁(yè)，共14頁(yè)。Section1Diagnosis

Ⅰ、collectionofsample標(biāo)本的采集Blood,Urine,Stool,nasalswab鼻拭,throatswab咽拭,saliva唾液,sputum,rectalswab直腸拭,vesiclefluid囊泡液,

tissuebiopsy活組織檢查,cerebrospinalfluid,etal.Asepsis無菌操作含雜菌的應(yīng)加入高濃度抗生素2第2頁(yè)，共14頁(yè)。Ⅱ、Cultureandidentify

病毒的培養(yǎng)與鑒定（一）※病毒的培養(yǎng)Culture：用活細(xì)胞動(dòng)物（Animals）接種雞胚（Embryonatedeggs）接種組織細(xì)胞培養(yǎng)（tissuecellculture）

Primarycultures原代細(xì)胞

Diploidcellcultures傳代細(xì)胞

Continuouscultures二倍體細(xì)胞3第3頁(yè)，共14頁(yè)。常用的細(xì)胞培養(yǎng)4第4頁(yè)，共14頁(yè)。（二）病毒的鑒定identify1、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：microscopyCytopathiceffect（CPE）致細(xì)胞病變效應(yīng)

5第5頁(yè)，共14頁(yè)。InclusionBodies：狂犬病毒包涵體（Negribody）6第6頁(yè)，共14頁(yè)。巨細(xì)胞病毒包涵體7第7頁(yè)，共14頁(yè)。PCR(Polymerasechainreaction)（一）※病毒的培養(yǎng)Culture：用活細(xì)胞Enzymeactivities(reversetranscriptase逆轉(zhuǎn)錄酶)Hemagglutinationandhemadsorption血細(xì)胞吸附Antigendetection(ELISA,Westernblot)雞胚（Embryonatedeggs）接種Directdetection:Cytopathiceffect（CPE）致細(xì)胞病變效應(yīng)5、Detectionofviralproteins

(antigensandenzymes)Neutralization中和試驗(yàn)ImmuneElectronmicroscopy免疫電鏡技術(shù):

Humanrotavirus;HAV;病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來表示。Proteinpatterns(electrophoresis電泳)2、病毒數(shù)量和感染性測(cè)定（1）、空斑形成單位（plaqueformingunits）病毒感染雞胚、動(dòng)物或細(xì)胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小量。

病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來表示。（2）、LD50或TCID50

(50%致死量或50%組織細(xì)胞感染量）8第8頁(yè)，共14頁(yè)。TCID50

(50%Tissuecellinfectivedose)TCID50isdefinedasthatdilution稀釋ofviruswhichwillcauseCPEin50%ofagivenbatch批ofcellculture3、電子顯微鏡檢查ElectronmicroscopyDirectdetection:Humanrotavirus輪狀病毒;HAV;HBV;

Smallpoxvirus天花病毒;Herpesvirus.ImmuneElectronmicroscopy免疫電鏡技術(shù):

Humanrotavirus;HAV;9第9頁(yè)，共14頁(yè)。4、serologydiagnosis血清學(xué)診斷Complementfixation補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)Hemagglutinationinhibition血凝與血凝抑制試驗(yàn)Neutralization中和試驗(yàn)Immunofluorescence(directorindirect)

免疫熒光試驗(yàn)Latexagglutination乳膠凝集試驗(yàn)ELISA10第10頁(yè)，共14頁(yè)。5、Detectionofviralproteins

(antigensandenzymes)Antigendetection(ELISA,Westernblot)Hemagglutinationandhemadsorption血細(xì)胞吸附Enzymeactivities(reversetranscriptase逆轉(zhuǎn)錄酶)Proteinpatterns(electrophoresis電泳)11第11頁(yè)，共14頁(yè)。6、DetectionofviralgeneticmaterialPCR(Polymerasechainreaction)RT-PCR(Reversetranscriptasepolymerasechainreaction)Southern（DNA),Northern(RNA),anddotblotsDNAgenomehybridizationinsitu(cytochemistry)ElectrophoreticmobilitiesofRNAforsegmentedRNAviruses(Electrophoresis)Restrictionendonucleasecleavagepatterns12第12頁(yè)，共14頁(yè)。Proteinpatterns(electrophoresis電泳)雞胚（Embryonatedeggs）接種1、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：microscopyNeutralization中和試驗(yàn)Humanrotavirus輪狀病毒;HAV;HBV;

Smallpoxvirus天花病毒;Herpesvirus.ImmuneElectronmicroscopy免疫電鏡技術(shù):

Humanrotavirus;HAV;Antigendetection(ELISA,Westernblot)TCID50isdefinedasthatdilution稀釋ofviruswhichwillcauseCPEin50%ofagivenbatch批ofcellcultureGeneengineeredvaccine基因工程疫苗Hemagglutinationandhemadsorption血細(xì)胞吸附Enzymeactivities(reversetranscriptase逆轉(zhuǎn)錄酶)組織細(xì)胞培養(yǎng)（tissuecellculture）（一）※病毒的培養(yǎng)Culture：用活細(xì)胞Directdetection:（一）※病毒的培養(yǎng)Culture：用活細(xì)胞Section2

preventionandtreatment

病毒感染的防治（一）Activeimmunization主動(dòng)免疫Attenuatedlivevaccine減毒活疫苗Inactivatedvaccine滅活疫苗Subunitvaccine亞單位疫苗Geneengineered