微生物綜合實驗報告

華東理工大學(xué)2014-2015學(xué)年第I學(xué)《微生物學(xué)綜合實驗》實驗報告B姓名思聰號10110619姓名爾立號10110662姓名泊宇號10110656姓名預(yù)備號101106661）2）3）1）2）3）4）5）.實驗名稱：FeCl36H2O的濃度對解脂耶式酵母的油脂和番茄紅素產(chǎn)量的影 一．實驗?zāi)慷畬嶒炘庵浇湍福╕arrowialipolytica）屬于子囊酵母，最初被歸于解脂的念珠菌三．實驗材250mlEPMgSO4.7H2O、NiCl2.6H2O、H3BO3、ZnCl2、MnSO4.7H20、KI、MnCl2.4H2OKH2PO4、VitaminB1、正己烷、KOH、三氯甲烷、甲醇、三氟化硼、鹽酸、NaOH。M2FeCl37個1.培養(yǎng)基MgSO4-NiCl2-MnSO4-MnCl2-Na2MoO4-FeCl3-01.00E-M1稱取MgSO4.7H2O、NiCl2.6H2O、H3BO3、ZnCl2、MnSO4.7H20、KI、MnCl2.4H2ONa2MoO4.2H2O、KNO3、Yeastextract、(NH4)2SO4、KH2PO4、VitamineB1加水稀釋，900ml，并混合均勻；M2稱取MgSO47H2O、NiCl26H2O、H3BO3、ZnCl2、MnSO47H20、KI、MnCl24H2O、Na2MoO42H2OFeCl36H2O、KNO3、Yeastextract、(NH4)2SO4、KH2PO4、Vitamine900ml，另稱取20g葡萄20g的果糖、溶于適量的蒸餾水中，定容到100ml，攪拌至完全溶解。為了補料，稱取80g葡萄糖和80g的果糖、溶于適量的蒸餾水中400ml（3）7FeCl3FeCl3-6H2013203451667912ml36%-38%100ml100ml2.氧電極，8層干凈紗布扎好各橡皮管出口，115℃、20min滅菌。滅菌結(jié)束后，連接溫度pHpH：pH4.0pH6.8pHDO：0%100%220rpm；DO50%、設(shè)定攪拌串聯(lián)24h50ml發(fā)酵監(jiān)測：12h、24h、36h、48h10ml，24h48h，72h200ml3.4℃5min；105℃24h90ml，4000rpm5min，60/80（VHCL/VH20）HCLD.用注射器抽取下層液相，80℃真空干燥純化過夜，105℃1h；E.GC-MS3ml0.5MKOH，75℃3ml14%的三氟化硼-甲醇溶液，75℃1mlNaCl0.5ml10GC-MS（5）HPLC取1ml體積的經(jīng)過了4d搖瓶培養(yǎng)的細胞發(fā)酵液至1.5ml離心管中，12,00010minDMSO55℃30min；500μl55℃15min12,000rpm10min2ml采用島津LC-20A型高效液相色譜儀裝備有LC Solution軟件程序LC-20AD泵以及紫外-可見光檢測器。所用色譜柱為ZorbaxSB-Aq型C18-反相柱（4.6mm×250mm,5μm;AgilentTechnologie,PaloAlto,CA)，柱溫設(shè)置為30℃；等度洗脫溶劑系統(tǒng)由80%乙腈、15%甲醇和5%異丙醇組成，流速設(shè)置為1ml/min；進樣量為10μl；檢測波長為472nm。首先根據(jù)番茄紅素標準品比較顏色和HPLC保留時間來鑒定樣品實驗安排任時開結(jié)（HPLC），GC-MS番茄紅素油脂含量番茄紅素含量M1-M1-M1-M2-M2-M2-M3-M3-M3-12FeCl3)油脂含量1320345166003.搖瓶中發(fā)酵液菌體干重、油脂測定結(jié)果柱狀圖4.1M22.87g/LFeCl3,明顯可以看出解脂