HIV實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

HIV實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程HIV實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程HIV實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程xxx公司HIV實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計(jì)，管理制度沙洋縣人民醫(yī)院艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書編制人：王笑石審核人：王笑石批準(zhǔn)人：李克華批準(zhǔn)日期：2016/1/1實(shí)施日期：2016/1/1G受控編號(hào)：輸血科目錄序號(hào)主題內(nèi)容代號(hào)頁號(hào)1全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀操作規(guī)程2全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀溶液配制操作3生物安全柜(BSC-1500ⅡA2-X型)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4HIV臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（化學(xué)發(fā)光法）567891011121314151617181920修訂頁序號(hào)文件編號(hào)頁碼需更改的內(nèi)容更改內(nèi)容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期1234567891011121314151617181920CHEMCLIN600全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程（SOP）工作環(huán)境溫度：10℃—30℃濕度：小于70%電源：220V，50Hz開機(jī)前的的準(zhǔn)備工作確保廢液桶已清空；配制洗針液，確保洗針液的量足夠做完一批試驗(yàn)；配置方法見附錄1；配制洗板液，并裝入洗板液桶中，確保洗板液的量足夠做完一批試驗(yàn)（每整板微孔板實(shí)驗(yàn)需準(zhǔn)備洗板液500ml左右）；配置方法見附錄2；準(zhǔn)備好試劑和標(biāo)本。開機(jī)打開儀器電源開關(guān)（儀器正面左側(cè)）打開打印機(jī)電源打開顯示器及電腦主機(jī)電源，待電腦啟動(dòng)后雙擊桌面圖標(biāo)，即可啟動(dòng)儀器。開機(jī)維護(hù)在運(yùn)行實(shí)驗(yàn)之前，需要對(duì)儀器做一次日常維護(hù)，具體步驟如下：點(diǎn)擊主界面中的“維護(hù)”按鈕，就進(jìn)入到維護(hù)界面，如下圖所示：圖1維護(hù)界面準(zhǔn)備好洗針液、洗板液及酒精等系統(tǒng)液體，確保洗板液管路在洗板液桶中，點(diǎn)擊“開機(jī)維護(hù)”按鈕，儀器開始執(zhí)行開機(jī)維護(hù)動(dòng)作；開機(jī)維護(hù)完成后，點(diǎn)擊窗口右上角“關(guān)閉”按鈕，即可退出維護(hù)界面；將酒精溶液收好并蓋好瓶蓋。選擇項(xiàng)目和樣本在儀器進(jìn)行完日常維護(hù)后，就可以編制工作列表，具體流程如下：點(diǎn)擊主界面中的“項(xiàng)目”按鈕，進(jìn)入“項(xiàng)目選擇”界面中選擇此次試驗(yàn)需要做的項(xiàng)目，點(diǎn)擊“確認(rèn)”返回到主界面；在主界面的樣本輸入框中輸入此次試驗(yàn)需要做的樣本數(shù)，點(diǎn)擊按鈕，就能將所需做樣本添加到項(xiàng)目中；預(yù)選擇樣本對(duì)應(yīng)的項(xiàng)目。在樣本和項(xiàng)目對(duì)應(yīng)表中可通過點(diǎn)擊或拖住鼠標(biāo)左鍵來選擇，被選中的樣本列表變?yōu)辄S色；也可通過再次點(diǎn)擊左鍵來取消預(yù)選的樣本；可通過點(diǎn)擊按鈕選定所有的樣本，同樣可通過點(diǎn)擊按鈕取消所有的選擇；確認(rèn)樣本和項(xiàng)目對(duì)應(yīng)表。檢查無誤后點(diǎn)擊對(duì)應(yīng)表中項(xiàng)目的名稱欄，被選中的項(xiàng)目列表則變?yōu)樯罹G色。運(yùn)行檢測樣本在選擇好檢測項(xiàng)目和樣本后，就可以進(jìn)行如下操作：在主界面點(diǎn)擊“運(yùn)行”按鈕，系統(tǒng)會(huì)彈出一對(duì)話框，提示選擇試劑批號(hào)。若為默認(rèn)批號(hào)直接點(diǎn)“確定”按鈕，若需更改試劑批號(hào)或質(zhì)控品、校準(zhǔn)品重復(fù)孔數(shù)，可點(diǎn)擊“更改”按鈕進(jìn)行更改。根據(jù)軟件提示的標(biāo)本、微孔板、試劑、校準(zhǔn)品的位置來擺放這些組分的位置。（注意：一定按照儀器提示的位置來擺放）點(diǎn)擊“運(yùn)行”按鈕，儀器開始工作。（注意：當(dāng)儀器檢測到有的試劑量或樣本量不夠時(shí)，儀器會(huì)彈出提示框，按提示補(bǔ)充試劑或樣品后再點(diǎn)擊“重試”）。當(dāng)所有實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，儀器提示“實(shí)驗(yàn)已完成”，點(diǎn)擊“確定”；再點(diǎn)擊“退出”按鈕回到主界面。通過點(diǎn)擊主界面的“結(jié)果”按鈕可進(jìn)入到數(shù)據(jù)處理界面，在此界面可進(jìn)行數(shù)據(jù)的結(jié)果的顯示、查詢、打印等功能。關(guān)機(jī)維護(hù)在測試結(jié)束后，需要對(duì)儀器再進(jìn)行一次日常維護(hù)，具體步驟基本與第四部分“開機(jī)維護(hù)”相同，唯一不同的是確保洗板液管路在去離子水桶中，點(diǎn)擊“關(guān)機(jī)維護(hù)”功能按鈕。將微孔板蓋用酒精擦拭干凈。關(guān)機(jī)點(diǎn)擊主界面中“退出”按鈕即可退出測試軟件，之后關(guān)閉電腦。保養(yǎng)日保養(yǎng)每次實(shí)驗(yàn)前后都需要執(zhí)行維護(hù)程序，具體參照第四部分“開機(jī)維護(hù)”和第七部分“關(guān)機(jī)維護(hù)”；做完試驗(yàn)后請(qǐng)用酒精擦拭臺(tái)面，保持臺(tái)面清潔；每次實(shí)驗(yàn)后需要執(zhí)行維護(hù)程序，要將微孔板蓋用酒精擦拭干凈；做完實(shí)驗(yàn)后，關(guān)閉電源，用棉簽蘸上酒精分別對(duì)四根加樣針的外壁進(jìn)行擦拭。周保養(yǎng)在日保養(yǎng)的基礎(chǔ)上增加管路消毒和試劑瓶清洗，具體按如下步驟進(jìn)行操作：將置于去離子水中的洗板機(jī)管路放置到保養(yǎng)液中（二氧化氯，配置方法見附錄3），多次執(zhí)行維護(hù)程序中的“洗板機(jī)維護(hù)液灌洗”；然后再將管路放回到去離子水瓶中，再反復(fù)執(zhí)行“洗板機(jī)維護(hù)液灌洗”，直至沖洗干凈。將盛放A、B底物、稀釋液等通用試劑瓶用去離子水進(jìn)行清洗并晾干備用。月保養(yǎng)在周保養(yǎng)的基礎(chǔ)上增加對(duì)試劑桶的維護(hù)保養(yǎng)，倒掉殘余的洗針液和洗板液，用去離子水進(jìn)行涮洗，直至桶內(nèi)無異物。注意事項(xiàng)1、為確保實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，在實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)關(guān)閉倉門；2、儀器運(yùn)行時(shí)，請(qǐng)不要操作電腦運(yùn)行其它程序，也不能使用U盤或其他即插即用設(shè)備，否則會(huì)造成儀器運(yùn)行錯(cuò)誤；3、載架放置一定要正確，注意觀察指示燈，燈亮表示放置正確；燈不亮表示放置不正確，需重新放置；4、擺放試劑一定要注意位置編號(hào)，不要放錯(cuò)；試劑量要足夠，禁止液面有氣泡；5、試劑瓶瓶內(nèi)液體不能加注得過滿，以免在分配試劑的過程中吸入空氣，造成部分孔加不上試劑；6、標(biāo)本一定要處理好，切忌有血凝塊及纖維蛋白原；7、血清的最少量為(300+*A)ulA為標(biāo)本所做項(xiàng)目的所需血清數(shù)量之和；8、拼板時(shí)，不夠8孔時(shí)一定要用廢孔填充，且要平，以達(dá)到最佳效果；9、確保洗針臺(tái)的廢液管路通暢，廢液管路不能深入到廢液桶內(nèi)過長；10、儀器進(jìn)行日維護(hù)，要確保針管路中無氣泡。CHEMCLIN600化學(xué)發(fā)光儀器溶液配制規(guī)程洗針液配制方法將去離子水加入到配液桶內(nèi)，加至接近2L刻度處；取20mL專用洗針濃縮液加到配液桶中；再加去離子水定容至2L刻度處；蓋緊配液桶蓋，搖勻待用；從洗針液傳感器秤上取出洗針液桶，倒立后擰開瓶蓋，將配好的洗針液倒入該桶中；依據(jù)上述方法，將洗針液桶灌滿；擰緊洗針液桶瓶蓋，將管路和瓶蓋裝好，配制工作結(jié)束。附錄2洗板液配制方法將去離子水加入到配液桶內(nèi)，加至接近2L刻度處；取1瓶（每瓶100ml）專用洗板濃縮液加到配液桶中；再加去離子水定容至2L刻度處；蓋緊配液桶蓋，搖勻倒入到洗板液桶中；配制工作結(jié)束。附錄3洗板機(jī)管路沖洗液二氧化氯溶液配制方法將去離子水加入到桶內(nèi)，加至1L刻度處；取兩粒二氧化氯的片劑置于桶中；蓋緊配液桶蓋，搖勻直至片劑完全溶解，待用；配制工作結(jié)束。生物安全柜(BSC-1500ⅡA2-X型)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1．目的為規(guī)范BSC-1500ⅡA2-X型生物安全柜的操作，確保該儀器的正確使用，依據(jù)《輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序》條款的要求制定本規(guī)程。2．適用范圍適用于輸血科（血庫）技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作。3．職責(zé)輸血科（血庫）技術(shù)人員負(fù)責(zé)BSC-1500ⅡA2-X型生物安全柜的操作。4．原理（略）5．所需設(shè)備和材料（略）6．環(huán)境條件（略）7．操作步驟實(shí)驗(yàn)前，先用75%乙醇擦拭操作臺(tái)表面以去除污染，劃分好生物安全柜內(nèi)的清潔區(qū)、半污染區(qū)與污染區(qū)，將儀器的“Light”按鈕按到“.”標(biāo)志處，打開紫外燈消毒30min，然后將實(shí)驗(yàn)全部物品按照相應(yīng)分區(qū)分別移入生物安全柜內(nèi)。消毒結(jié)束后，將“Light”按鈕按到“ON”標(biāo)志處，關(guān)閉紫外燈，開啟實(shí)驗(yàn)照明燈。將“Blower”按鈕按到“ON”位置，打開鼓風(fēng)機(jī)，然后把生物安全柜前玻璃窗拉升到適當(dāng)位置（不能高于,否則儀器會(huì)報(bào)警），待鼓風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)15min后，將雙臂緩緩伸入安全柜內(nèi)，靜止1min,待壓力指示儀表穩(wěn)定以后，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。操作時(shí)應(yīng)按照從清潔區(qū)到污染區(qū)進(jìn)行，以避免交叉污染。為防止可能濺出的液滴，可在操作臺(tái)面上鋪一層用消毒劑浸泡過的紗布，但不能覆蓋生物安全柜氣流通道。實(shí)驗(yàn)完成后，先用消毒液溶液擦拭操作臺(tái)面，然后關(guān)閉玻璃窗，保持風(fēng)機(jī)繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)10～15min，同時(shí)打開紫外線燈，消毒30min。消毒30min后，關(guān)閉紫外燈和鼓風(fēng)機(jī)。8．注意事項(xiàng)生物安全柜內(nèi)不得放入與本次實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品，物品放置不得擋住氣道口，以免干擾氣流正常流動(dòng)。操作時(shí)，嚴(yán)禁使用酒精燈等明火，以避免產(chǎn)生的熱量干擾柜內(nèi)氣流穩(wěn)定，且明火可能損壞高效過濾器。操作時(shí)，盡量減少實(shí)驗(yàn)室內(nèi)人員走動(dòng)，以防止柜內(nèi)氣流不穩(wěn)定。在實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，操作者應(yīng)保證臉部在工作窗口之上，動(dòng)作應(yīng)輕柔、舒緩，防止柜內(nèi)氣流受到影響。生物安全柜應(yīng)定期進(jìn)行檢測與保養(yǎng)。工作中一旦發(fā)現(xiàn)生物安全柜運(yùn)行異常，應(yīng)立即停止使用，采取相應(yīng)處理措施，并通知相關(guān)人員檢查維修。9．相關(guān)文件及表單（略）人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程一、項(xiàng)目名稱：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）二、實(shí)驗(yàn)原理：采用雙抗原夾心（兩步法）分析模式，預(yù)先采用基因工程HIV(1+2)特異性蛋白抗原包被固相發(fā)光微孔板。加入血清或血漿標(biāo)本后，待測抗體與包被抗原形成復(fù)合物，再加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的相同抗原，三者結(jié)合形成雙抗原夾心結(jié)構(gòu)，洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)抗原，加入HRP化學(xué)發(fā)光底物液，測定其發(fā)光強(qiáng)度（RLU），根據(jù)臨界值判斷樣本中是否含有HIV特異性抗體。三、試劑：為北京科美生物技術(shù)有限公司提供人類免疫缺陷病毒抗體化學(xué)發(fā)光診斷試劑盒，規(guī)格為96T，2-8℃貯存，有效期6個(gè)月；在效期內(nèi)使用試劑。儀器：可適用北京科美生物技術(shù)有限公司提供的GloRun、CDM-I發(fā)光分析儀、ECLIA-II發(fā)光分析儀、CHEMCLIN-600全自動(dòng)發(fā)光儀、CHEMCLIN-1500全自動(dòng)發(fā)光儀。五、操作步驟：自4℃冰箱中取出試劑盒，室溫(18～25℃)平衡20分鐘。將發(fā)光板從密封袋中取出，設(shè)空白對(duì)照一孔，不加樣本稀釋液和樣本，設(shè)陰性對(duì)照3孔，陽性對(duì)照2孔，取陰性對(duì)照和陽性對(duì)照分別加入100l于相對(duì)應(yīng)對(duì)照孔中。其余每孔先加樣本稀釋液50l，再加入樣本50l。微量震蕩器充分振蕩混勻，用不干膠片封蓋反應(yīng)板。發(fā)光板置37℃溫育30分鐘，小心甩去反應(yīng)液，用稀釋后的洗滌液洗板5次，每孔加滿洗滌液，每次浸泡10秒，最后在干凈的吸水紙上拍干?？瞻卓壮猓靠准尤朊附Y(jié)合物100l，輕輕振蕩混勻后，用不干膠片封蓋反應(yīng)板。發(fā)光板置37℃溫育30分鐘，洗板5次，操作同上，拍干。將發(fā)光底物A液與B液1:1混合后，每孔加入底物工作液100l。置室溫避光反應(yīng)5分鐘后，須于加化學(xué)發(fā)光底物液后的第5-30分鐘內(nèi)用發(fā)光儀測定各孔R(shí)LU值（測量時(shí)間1秒/孔）。六、質(zhì)量控制：質(zhì)控血清符合規(guī)定；一旦發(fā)現(xiàn)失控，應(yīng)即時(shí)查找和分析原因，并在該結(jié)果欄作詳細(xì)的批注和記錄解決的過程；失控情況處理及原因分析按照實(shí)驗(yàn)室內(nèi)失控分析程序進(jìn)行。七、結(jié)果計(jì)算臨界值（CUTOFF）＝×陰性對(duì)照孔平均RLU值。待測樣品RLU值≥臨界值為HIV抗體陽性。待測樣品RLU值＜臨界值為HIV抗體陰性。對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對(duì)呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。陽性樣品的復(fù)檢試驗(yàn)：對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)（見圖1）。樣品樣品篩查試篩查試劑陽性反應(yīng)均陰性反應(yīng)初篩檢測陽性反應(yīng)均陰性反應(yīng)初篩檢測陰性反應(yīng)陰性反應(yīng)原有試劑加另外一種篩查原有試劑加另外一種篩查試劑陽性反應(yīng)陽性反應(yīng)一陰一陽均陽性反應(yīng)一陰一陽均陽性反應(yīng)送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn) 送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)報(bào)告陰性報(bào)告陰性八、性能指標(biāo)：精密性：分析內(nèi)CV%≤15%（n=10）有效期：在2～8℃貯存，有效期12個(gè)月。交叉反應(yīng)：對(duì)臨床確診的22例風(fēng)疹病人血清、13例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人血清、15例系統(tǒng)紅斑狼瘡病人血清、16例干燥綜合癥病人血清、8例多肌炎病人血清進(jìn)行HIV1+2型抗體檢測未出現(xiàn)陽性。九、方法局限性：本試劑盒僅用于血清或血漿樣本的測定，對(duì)其它體液樣本測定的可靠性尚未得到充分的實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。此試劑不能用于HIV抗原的篩查。低滴度的HIV抗體在感染的初期不能被檢出，陰性結(jié)果不能排除HIV1、HIV2的感染。變異的HIV1型（M群和O群）HIV2型可能出現(xiàn)假陰性，已知檢測方法中，尚無法完全保證消除漏檢。加熱標(biāo)本可以影響結(jié)果。十、臨床意義：HIV抗體檢測可用于監(jiān)測、診斷、血液篩查。以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢而進(jìn)行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群和一般人群。以診斷為目的的檢測是為了確定個(gè)體HIV感染狀況而進(jìn)行的檢測，包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術(shù)前檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV而進(jìn)行的檢測，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。十一、標(biāo)本采集及處理：1檢測標(biāo)本種類要求：靜脈血或動(dòng)脈血的血清或血漿標(biāo)本均可作為檢測標(biāo)本；溶血、脂血、黃疸血不宜使用，如需使用，應(yīng)在報(bào)告單上注明“標(biāo)本溶血/脂血/黃疸”。2受檢者準(zhǔn)備：受檢者無需做特殊準(zhǔn)備；3標(biāo)本采集及處理：宜空腹采集靜脈血，無需抗凝，采用離心方法分離血清，分離血清應(yīng)徹底，不含纖維蛋白；病人標(biāo)本無需特殊制備處理，采用正確醫(yī)用技術(shù)收集全血標(biāo)本，離心分離后提取血清用于檢測。使用抗凝劑（濃度為L枸櫞酸鈉，5mmol/LEDTA-Na，15IU/ml肝素，10mmol/L草酸鈉）不影響檢測結(jié)果。4標(biāo)本保存：留取的標(biāo)本最好在當(dāng)天檢測，不能立即檢測的應(yīng)放置于2-8℃不應(yīng)超過3天，血清置于-20℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)冰融。5.同規(guī)格的塑料離心管；6標(biāo)本外送：如涉及到需要外送的標(biāo)本，必須以規(guī)定的容器（塑料離心管）存放并密封，并根據(jù)郵寄規(guī)則和要求進(jìn)行包裝，運(yùn)送時(shí)還要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由專人運(yùn)送至指定地點(diǎn)指定接收人。7標(biāo)本拒收：凡與以上所述內(nèi)容不符的標(biāo)本，檢驗(yàn)人員應(yīng)向臨床或就診者說明拒收標(biāo)本的原因，并提出解決的方案或建議。十二、注意事項(xiàng)：184消毒液等強(qiáng)氧化劑能引起發(fā)光底物液發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致結(jié)果誤判，故發(fā)光操作實(shí)驗(yàn)室應(yīng)禁止使用此類消毒劑.2檢測必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染。所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)當(dāng)按傳染物處理。3不要使用