甲氨蝶呤課件

甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)匯報(bào)人：李宏斌

匯報(bào)內(nèi)容1.甲氨蝶呤理化性質(zhì)2.甲氨蝶呤的細(xì)胞毒作用3.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

甲氨蝶呤理化性質(zhì)

分子式：C20H22N8O5

分子量：454.44

性質(zhì)：熔點(diǎn)195°C。水溶性Insoluble.<0.1g/100mLat19°C性狀：橙黃色結(jié)晶粉末。溶解情況：微溶于水。幾乎不溶于乙醚、乙醇、氯仿。

用途：抗葉酸制劑，為基本抗腫瘤藥物。系聯(lián)合化療方案中常用的周期特異性藥物。用于急性白血病，絨毛膜上皮癌等。

制備或來(lái)源：由6-溴甲基喋呤與對(duì)甲氨基苯甲酰麩氨酸縮合而得。

[1].[5].甲氨蝶呤主要作用[1]1MTX的細(xì)胞毒（抑制腫瘤）作用2MTX通過(guò)腺苷誘導(dǎo)免疫抑制作用3MTX抑制免疫炎癥細(xì)胞增生及誘導(dǎo)凋亡4MTX影響細(xì)胞因子及其拮抗劑5抑制中性粒細(xì)胞的趨化作用6MTX對(duì)環(huán)氧化酶及脂氧化酶的作用7MTX對(duì)蛋白水解酶及其抑制物的作用MTX的細(xì)胞毒作用

1.葉酸[5].葉酸（folicacid;pteroyl-glutamicacid）也稱蝶酰谷氨酸，是維生素B復(fù)合體之一，相當(dāng)于蝶酰谷氨酸（pteroylglutamicacid，PGA），是米切爾（H．K．Mitchell，1941）從菠菜葉中提取純化的，故而命名為葉酸。

2.葉酸的作用[5].葉酸的活化形式四氫葉酸是體內(nèi)一碳單位轉(zhuǎn)移酶的輔酶，分子中N5,N10是一碳單位的結(jié)合位點(diǎn)，一碳單位在體內(nèi)參加嘌呤，胸腺嘧啶核苷酸等多種物質(zhì)的合成。葉酸缺少時(shí)，核酸的合成受到抑制。二氫葉酸合成酶

蝶酸-L-谷氨酸羧基肽酶二氫葉酸還原酶小腸粘膜上皮細(xì)胞葉酸（蝶酰多谷氨酸）蝶酰單谷氨酸四氫葉酸二氫葉酸

3.活化過(guò)程[5].

MTX是二氫葉酸還原酶的抑制劑(為葉酸的拮抗劑，和二氫葉酸還原酶的親和力比二氫葉酸強(qiáng)1000倍）。阻止二氫葉酸還原為活化的四氫葉酸，使胸腺嘧啶核苷酸和嘌呤核苷酸的合成原料耗竭，抑制DNA和RNA的合成，從而抑制細(xì)胞的增生和復(fù)制，起到細(xì)胞毒作用。

[1].[4].實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)一、問(wèn)題的提出1.甲氨蝶呤對(duì)于體外培養(yǎng)的細(xì)胞是否有明顯的細(xì)胞毒抑制作用.2.作用細(xì)胞的有效濃度.二、實(shí)驗(yàn)過(guò)程1.甲氨蝶呤溶解查閱文獻(xiàn)，參考相關(guān)實(shí)驗(yàn)確定溶解藥物的方案。由于文獻(xiàn)所用甲氨蝶呤多為甲氨蝶呤的注射液,且實(shí)驗(yàn)多為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?？梢灾苯佑米⑸渌芙猓ɑ蛏睇}水），對(duì)于原藥的溶解，國(guó)家藥典說(shuō)明可以溶于鹽酸，但低PH不于細(xì)胞培養(yǎng)，查閱相關(guān)公司產(chǎn)品，并經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，確定原藥可以溶解于DMSO。2.濃度設(shè)計(jì)母液配制：稱取4.5mgMTX溶于1ml100%DMSO,稀釋至10ml.即MTX濃度為1mmol/L,DMSO濃度為10%。稀釋：將母液分別稀釋至藥物濃度為10μmol/L1μmol/L0.1μmol/L，對(duì)應(yīng)DMSO濃度為0.1%0，0.01%,0.001%.為了排除DMSO本身對(duì)細(xì)胞的作用，另設(shè)置一對(duì)照為空白對(duì)照。空白對(duì)照

重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3重復(fù)4溶解相應(yīng)藥物所需DMSO濃度溶解相應(yīng)藥物所需DMSO濃度溶解相應(yīng)藥物所需DMSO濃度空白對(duì)照

空白對(duì)照

3.細(xì)胞觀察鋪板上藥細(xì)胞分別于24h36h48h72h光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)數(shù)量等。

參考文獻(xiàn)[1].周惠瓊，昊東海.甲氨蝶呤治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制的研究進(jìn)展.中國(guó)藥物與臨床，2004，7（4）[2]于曉明，張維冰，張麗華，張玉奎.用氨甲蝶呤偶聯(lián)瓊脂糖親和吸附法從人肝臟cDNA噬菌體展示文庫(kù)中篩選氨甲蝶呤相互作用蛋白。中國(guó)生物工程雜志，2007,27(10):70～74[3]AkimitsuMaeda,ShuichiTsuruoka,KentarouUshijima,YoshikatsuKanai,HitoshiEndou,KazuyukiSaito,EtsukoMiyamoto,AkioFujimura.Druginteractionbetweencelecoxibandmethotrexateinorganicaniontransporter3–transfectedrenalcellsandinratsinvivo.EuropeanJournalofPharmacology640(2010)168–171[4]JosephR.Bertino,MD,Professor,InterimDirector.Cancerresearch:fromfolateantagonismtomoleculartar