大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件

煮辭州大學(xué)皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)煮辭州大學(xué)1可主要內(nèi)容:4實驗原理準(zhǔn)備工作實驗步驟影響因素可主要內(nèi)容:21實驗原理◆細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中最常用的手段之可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種。◆原代培養(yǎng):將動物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出,經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理,分散成單細(xì)胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖1實驗原理32實驗準(zhǔn)備儀器、材料與試劑無菌操作臺,培養(yǎng)箱實驗儀器培養(yǎng)板,青霉素瓶,離心機(jī),計數(shù)板冰盒,濾器(200目自制),手術(shù)器械新生鼠材料與試劑DMEMF12培養(yǎng)基(20%血清),025%胰酶多聚賴氨酸,碘酒,75%酒精,PBS,阿糖胞苷242實驗準(zhǔn)備實驗前準(zhǔn)備工作培養(yǎng)板包被制備冰盒培養(yǎng)基,阿糖胞苷配制==,-----0.1%多聚賴氨酸包被25實驗步驟要點(diǎn)細(xì)節(jié)決定成敗細(xì)心耐心實驗步驟62實驗步驟胰酶消化法1準(zhǔn)備:取名種2滑奮的培用品寬涂華臺面紫緋擦拭手及臺面2布局點(diǎn)燃酒精燈,安裝吸管帽;準(zhǔn)備離心管;平皿及器械放置妥當(dāng)272實驗步驟布局剝離血管及筋膜廣器減酒精PBSPBBS斷頭剪碎組織塊冰盒取腦,分離皮層神經(jīng)清洗血液元28實驗步驟3斷頭取腦:超凈臺內(nèi),斷頭取腦,置于盛有PBS的培養(yǎng)皿內(nèi),洗滌3次,棄除表面殘余血跡,迅速置于無菌的生理鹽水冰浴上4剝離軟腦膜:剝離大腦皮層至預(yù)冷的PBS中,用兩把無齒彎鑷仔細(xì)剝離軟腦膜和血絲,剝離干凈后用PBs液洗23遍實驗步驟9實驗步驟5剪碎將大腦皮層轉(zhuǎn)移到另一裝有PBS的平皿中,用手術(shù)剪將其剪成小塊(1mm3),用PBS液洗三次,轉(zhuǎn)移至離心管中離心1000rpm×5min。6消化:加入025%胰蛋白酶,放入37℃培養(yǎng)箱消化20min,中間翻轉(zhuǎn)振蕩一次。使細(xì)胞分離實驗步驟10大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件11大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件12大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件13大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件14大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件15大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件16大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件17大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件18大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件19大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件20煮辭州大學(xué)皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)煮辭州大學(xué)21可主要內(nèi)容:4實驗原理準(zhǔn)備工作實驗步驟影響因素可主要內(nèi)容:221實驗原理◆細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中最常用的手段之可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種?！粼囵B(yǎng):將動物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出,經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理,分散成單細(xì)胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖1實驗原理232實驗準(zhǔn)備儀器、材料與試劑無菌操作臺,培養(yǎng)箱實驗儀器培養(yǎng)板,青霉素瓶,離心機(jī),計數(shù)板冰盒,濾器(200目自制),手術(shù)器械新生鼠材料與試劑DMEMF12培養(yǎng)基(20%血清),025%胰酶多聚賴氨酸,碘酒,75%酒精,PBS,阿糖胞苷2242實驗準(zhǔn)備實驗前準(zhǔn)備工作培養(yǎng)板包被制備冰盒培養(yǎng)基,阿糖胞苷配制==,-----0.1%多聚賴氨酸包被225實驗步驟要點(diǎn)細(xì)節(jié)決定成敗細(xì)心耐心實驗步驟262實驗步驟胰酶消化法1準(zhǔn)備:取名種2滑奮的培用品寬涂華臺面紫緋擦拭手及臺面2布局點(diǎn)燃酒精燈,安裝吸管帽;準(zhǔn)備離心管;平皿及器械放置妥當(dāng)2272實驗步驟布局剝離血管及筋膜廣器減酒精PBSPBBS斷頭剪碎組織塊冰盒取腦,分離皮層神經(jīng)清洗血液元228實驗步驟3斷頭取腦:超凈臺內(nèi),斷頭取腦,置于盛有PBS的培養(yǎng)皿內(nèi),洗滌3次,棄除表面殘余血跡,迅速置于無菌的生理鹽水冰浴上4剝離軟腦膜:剝離大腦皮層至預(yù)冷的PBS中,用兩把無齒彎鑷仔細(xì)剝離軟腦膜和血絲,剝離干凈后用PBs液洗23遍實驗步驟29實驗步驟5剪碎將大腦皮層轉(zhuǎn)移到另一裝有PBS的平皿中,用手術(shù)剪將其剪成小塊(1mm3),用PBS液洗三次,轉(zhuǎn)移至離心管中離心1000rpm×5min。6消化:加入025%胰蛋白酶,放入37℃培養(yǎng)箱消化20min,中間翻轉(zhuǎn)振蕩一次。使細(xì)胞分離實驗步驟30大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件31大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件32大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件33大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)課件34大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞原代