大腸桿菌的培養(yǎng)和分離教案

實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1.進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)增，利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作。2.進(jìn)行大腸桿菌的分離，用固體平面培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌的化纖培養(yǎng)。3.說(shuō)明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理?！窘虒W(xué)重點(diǎn)】大腸桿菌的劃線分離；大腸桿菌的無(wú)菌操作和滅菌技術(shù)；大腸桿菌的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室應(yīng)注意的安全事項(xiàng)?！窘虒W(xué)難點(diǎn)】大腸桿菌的劃線分離；大腸桿菌實(shí)驗(yàn)的無(wú)菌操作技術(shù)及實(shí)驗(yàn)室安全事項(xiàng)的解讀。【實(shí)驗(yàn)教材分析】本節(jié)內(nèi)容選自浙科版生物選修1第1部分實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的分離和培養(yǎng)。本次課程主要包括了本次實(shí)驗(yàn)的目的、大腸桿菌的特點(diǎn)、無(wú)菌操作和滅菌的方法、儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)步驟等內(nèi)容。在前一節(jié)介紹了實(shí)驗(yàn)室規(guī)則和生物技術(shù)概況的基礎(chǔ)上，進(jìn)行具體的實(shí)驗(yàn)操作。并且經(jīng)過(guò)生物必修三冊(cè)書本的學(xué)習(xí)，學(xué)生已經(jīng)掌握了一定的細(xì)菌的相關(guān)知識(shí)，并對(duì)一些特殊細(xì)菌的篩選和鑒別有了一定的了解。故本次實(shí)驗(yàn)教學(xué)既是對(duì)學(xué)生前面學(xué)的理論知識(shí)的深化，同時(shí)也為學(xué)生將要學(xué)到的分離以尿素為氮源的微生物等內(nèi)容奠定了比較重要的基礎(chǔ)。因此，本節(jié)課起著承前啟后的重要作用。【學(xué)情分析】本節(jié)課的教授對(duì)象是選了選修1這門課的高二學(xué)生，在實(shí)驗(yàn)前，學(xué)生已經(jīng)學(xué)習(xí)過(guò)了革蘭氏陽(yáng)性菌與陰性菌的相關(guān)知識(shí)，本次實(shí)驗(yàn)主要是學(xué)生在掌握細(xì)菌的相關(guān)知識(shí)后學(xué)習(xí)大腸桿菌的分離與鑒定，很好地實(shí)現(xiàn)了將所學(xué)知識(shí)與實(shí)踐相聯(lián)系，易引起學(xué)生的興趣，學(xué)生的積極性較高，從而有利于實(shí)驗(yàn)教學(xué)的展開(kāi)。但學(xué)生對(duì)于實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)等方面還不熟悉，需要教師對(duì)此進(jìn)行詳細(xì)的講解，在講解過(guò)程中注意運(yùn)用適宜的教學(xué)方法，引導(dǎo)學(xué)生將所學(xué)知識(shí)運(yùn)用到具體的實(shí)驗(yàn)實(shí)踐中。同時(shí)，教師需嚴(yán)格要求學(xué)生在操作上符合實(shí)驗(yàn)室規(guī)范，將實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的注意事項(xiàng)對(duì)學(xué)生進(jìn)行逐一說(shuō)明，保證實(shí)驗(yàn)的有序性與安全性?！緦?shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程】（一）創(chuàng)設(shè)情境，導(dǎo)入新知【教師活動(dòng)】教師展示飲用水凈化、消毒滅菌、檢測(cè)、出品的簡(jiǎn)略過(guò)程，拋出在檢測(cè)這一過(guò)程中主要是以某一微生物作為指標(biāo)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，從而引出本次實(shí)驗(yàn)的材料—大腸桿菌（展示圖片）。飲用水這一素材與我們的實(shí)際生活相聯(lián)系，有利于吸引學(xué)生的興趣?！緦W(xué)生活動(dòng)】觀看PPT，聽(tīng)講（二）師生對(duì)話，構(gòu)建新知【教師活動(dòng)】拋出“為什么大腸桿菌能夠作為飲用水是否合格的指標(biāo)呢？”“大腸桿菌是如何被分離的呢？”三個(gè)問(wèn)題，請(qǐng)學(xué)生就此三個(gè)問(wèn)題進(jìn)行思考討論。本環(huán)節(jié)有利于學(xué)生明確本實(shí)驗(yàn)材料的特點(diǎn)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹緦W(xué)生活動(dòng)】思考，并查看書本，回答：大腸桿菌是革蘭氏陰性菌，兼性厭氧?！窘處熁顒?dòng)】總結(jié)學(xué)生的答案，并對(duì)學(xué)生的表現(xiàn)做出形成性評(píng)價(jià)，隨后結(jié)和PPT上呈現(xiàn)大腸桿菌的有關(guān)信息，進(jìn)行講解。大腸桿菌是革蘭氏陰性菌，兼性厭氧。是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌，與人終身相伴。其代謝活動(dòng)能抑制腸道內(nèi)分解蛋白質(zhì)的微生物生長(zhǎng)，減少蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物對(duì)人體的危害，還能合成維生素B和K，以及有殺菌作用的大腸桿菌素。正常棲居條件下不致病，但若進(jìn)入膽囊、膀胱等處可引起炎癥。在環(huán)境衛(wèi)生不良的情況下，常隨糞便散布在周圍環(huán)境中。若在水和食品中檢出此菌，可認(rèn)為是被糞便污染的指標(biāo)，從而可能有腸道病原菌的存在。因此，大腸菌群數(shù)大腸菌值常作為飲水和食物（或藥物）的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。設(shè)疑：同學(xué)們，如果我們檢驗(yàn)自來(lái)水大腸桿菌有沒(méi)有超標(biāo)，應(yīng)該怎么做呢？今天，我們先學(xué)習(xí)大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng)、分離?！窘處熁顒?dòng)】講解實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)增，利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作。2.進(jìn)行大腸桿菌的分離，用固體平面培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌的劃線培養(yǎng)。3.說(shuō)明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理?！緦W(xué)生活動(dòng)】認(rèn)真聽(tīng)講，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康模私獗竟?jié)課主要的內(nèi)容?！窘處熁顒?dòng)】為了達(dá)到本次實(shí)驗(yàn)的目的，同學(xué)們覺(jué)得應(yīng)該如何做呢？我們應(yīng)該先做什么，后做什么呢？同學(xué)們來(lái)設(shè)計(jì)下實(shí)驗(yàn)流程。我請(qǐng)同學(xué)起來(lái)回答?！緦W(xué)生活動(dòng)】認(rèn)真聽(tīng)講，分組進(jìn)行思考討論并設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程，學(xué)生代表回答老師問(wèn)題。（三）運(yùn)用新知，步驟講解【教師活動(dòng)】根據(jù)大腸桿菌的相關(guān)知識(shí)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)步驟的講解1培養(yǎng)基的選擇同學(xué)們來(lái)思考下，我們培養(yǎng)細(xì)菌通常采用什么培養(yǎng)基？根據(jù)學(xué)生的回答指出，本實(shí)驗(yàn)主要采用的是LB培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，伊紅-美藍(lán)鑒別培養(yǎng)基進(jìn)行分離和鑒定。LB培養(yǎng)基的基本配方：蛋白胨1g，酵母提取物，氯化鈉1g，瓊脂粉2g，蒸餾水100mL2.大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng)我們首先選擇LB液體培養(yǎng)基，進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng)：首先，挑取1環(huán)大腸桿菌菌種，接種到裝有的三角燒瓶?jī)?nèi)，包扎后置于37℃搖床內(nèi)振蕩培養(yǎng)12h。大腸桿菌的劃線分離倒平板：培養(yǎng)基加熱熔化，待冷至55-60℃時(shí)倒平板，每培養(yǎng)皿約15ml，水平放置，凝固成平板。注意：a.無(wú)菌操作，在酒精燈火焰旁。b.培養(yǎng)基加熱熔化，待冷至55-60℃時(shí)倒平板，溫度過(guò)高，會(huì)燙傷手或拿不穩(wěn)倒出而造成污染，溫度太低容易重新凝固。劃線分離：主要采用三區(qū)劃線法，形成的菌落由多到少，最后形成單菌落；也可采用稀釋涂布平板法，以獲得單菌落。注意：1）接種環(huán)要在酒精燈外焰進(jìn)行灼燒滅菌。2）劃線時(shí)要讓平板充分冷卻，以防培養(yǎng)基破裂。3）劃線時(shí)，動(dòng)作要輕，以防割裂培養(yǎng)基。斜面接種和菌種保存在酒精燈火焰旁，挑取大腸桿菌單菌落，接種于斜面培養(yǎng)基上，保存下來(lái)。注意：在酒精燈旁操作，先對(duì)試管口，進(jìn)行操作?！緦W(xué)生活動(dòng)】有些同學(xué)通過(guò)預(yù)習(xí)和課外知識(shí)積累，回答：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。認(rèn)真聽(tīng)老師的講解，同時(shí)做好相關(guān)筆記。思考步驟中為什么這么做，明白操作的原理。（四）課外延伸，小結(jié)新知【教師活動(dòng)】在上完實(shí)驗(yàn)課呢，同學(xué)們有沒(méi)有什么問(wèn)題？解決學(xué)生還沒(méi)有明白的問(wèn)題，同時(shí)提出以下問(wèn)題，讓同學(xué)們思考。1、在接種操作結(jié)束后是否需要灼燒接種環(huán)？2、操作過(guò)程中如何避免被雜菌污染？3、如何判斷培養(yǎng)物是否有雜菌污染？4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后