蛋白緩沖液置換方法匯總

蛋白緩沖置換方法匯置蛋緩液的當(dāng)?shù)鞍姿诰彌_液環(huán)境無法滿足后續(xù)純化時，就需要緩沖液置換，以下例舉了幾種需要進(jìn)行蛋白緩沖液置換的案例。1）分泌達(dá)的蛋白，蛋白所在環(huán)境中培養(yǎng)基成分較多，影響后續(xù)工藝，此時就需要置換緩沖液，如細(xì)胞分泌表達(dá)的蛋白用Ni純化時，因其培養(yǎng)基成分復(fù)雜，影響蛋白和鎳柱的結(jié)合或影響鎳柱的性能，此時就需要進(jìn)行緩沖液置換。2）蛋白離子交換層析及部分親和層析如肝素親和及金屬螯合親和層析后，在繼續(xù)下一步離子層析時通常需要把上一步洗脫液中高濃度的鹽去除掉，此時就要脫鹽處理，脫鹽處理的過程也是緩沖液置換的過程。3）蛋白離子交換層析及部分親和層析后，在保存之前通常都要將緩沖體系中的鹽降低到一定程度，此時也需要緩沖液置換。4）包涵蛋白用變性劑溶解后，在復(fù)性的過程中要將變性劑去除，這個過程也涉及到緩沖液置換。沖置的用法緩沖液置換的常用方法主要有膜法（透析及超濾）和凝膠過濾層析兩種方式。除此之外一些情況下也可以通過稀釋的方式達(dá)到緩沖液的置換，如包涵體溶解后去變性劑的過程通常用稀釋的方式去除變性劑，以此達(dá)到緩沖液置換的目的，去除變性劑完成蛋白復(fù)性。（1）透析法置換緩沖液透析是利用半透性膜將蛋白質(zhì)溶液包,沉浸在透析緩沖液中，由于緩沖液濃度低于膜內(nèi)部的濃因此在半透膜上會發(fā)生物質(zhì)交換，但蛋白質(zhì)不能通過半透膜，只有鹽離子等小分子物質(zhì)可以通過，因此蛋白質(zhì)溶液中的鹽雜質(zhì)就通過半透膜交換到外面了。透析原理圖

透析緩沖液的體積越大，小分子擴(kuò)散的驅(qū)動力越大。我們一般推薦緩沖液和樣品的體積比為，最佳為5001當(dāng)擴(kuò)散速率降低，膜兩側(cè)溶液趨于平衡時，通過置換緩沖液，可維持小分子擴(kuò)散驅(qū)動力和透析速率。我們一般推薦在小時內(nèi)，置換緩沖液2次，具體安排如下：a.第一次緩沖液置換：透析開始后2-3小時；b.第二次緩沖液置換：透析開始后4-5小時；最后一次緩沖液置換：透析隔夜之前；透析法置換緩沖液，因周期較長，且需要大量的置換液，使其應(yīng)用受到很大的限制，工業(yè)上用的較少，主要在實(shí)驗(yàn)室有部分仍在使用，實(shí)驗(yàn)室也逐漸被超濾管濾杯及凝膠過濾層析所替代。2）凝過濾層析G-25凝膠過濾介質(zhì)廣泛應(yīng)用于生物大分子的脫鹽和緩沖液置換，因其過程溫和，被廣泛應(yīng)用到生物制藥工藝中，特別是在離心交換及親和后脫鹽及緩沖液置換中應(yīng)用普遍。凝膠過濾層析原理圖脫鹽柱法案例：層析柱：1.6cm*20cm,物填料（柱體積）樣品：（各）上樣量：流速為50cm/h時，上樣量為（柱體積的7.5%）；流速為100cm/h和150cm/h時，上樣量為8mL（柱體積的20%）流(cm/h)50100150

蛋白峰(mL)

半峰寬3.297.708.42

鹽峰(mL)

半峰寬(mL)5.308.788.82

1.800.860.903）超超濾法是一種膜濾法，它以多孔薄膜作為分離介質(zhì)，依靠薄膜兩側(cè)壓力差作為推動力來分離溶液中不同分子量的物質(zhì)，從而起到脫鹽濃縮作用

提純等作用的方法。它具有不存在相的轉(zhuǎn)換、不需加熱、能量消耗少、操作條件溫和、不必添加化學(xué)試劑、不損壞熱敏藥物等優(yōu)點(diǎn)。超濾法從實(shí)驗(yàn)室微量處理的超濾管，小量處理的超濾杯，及工業(yè)上的超濾系統(tǒng)技術(shù)都比較成熟。超