空氣消毒效果鑒定試驗

空氣消毒效果鑒定試驗2.1.3.1

目的

檢測消毒器械或消毒劑對空氣中細菌的殺滅和(或)清除作用，以驗證其對空氣的消毒效果。其他方法對空氣的消毒效果，亦可參照本試驗的有關原則進行。2.1.3.2

試驗設備和器材(1)試驗菌為白色葡萄球菌8032，其菌懸液的制備方法見2.1.1.2。(2)采樣液[用于液體撞擊式采樣器采樣。非化學因子殺菌試驗時，用含抗泡沫劑（辛醇或橄欖油）的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基；消毒劑殺菌試驗時，用含相應中和劑的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（同樣加入辛醇或橄欖油）]。(3)中和劑(按2.1.1.5方法鑒定合格者)。(4)磷酸鹽緩沖液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。(5)普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基。(6)普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。消毒劑殺菌試驗時，尚需在其中加入相應的中和劑。(7)相鄰的一對氣霧柜或氣霧室，一個用于消毒試驗，一個用于試驗對照。一對氣霧柜或氣霧室所處環(huán)境(包括溫度、濕度、光照、密閉性、和通風條件等)應一致。柜(或室)宜以鋁合金和玻璃構建。應安裝溫度和濕度調節(jié)裝置以及通風機過濾除菌或其它消毒裝置和相應管道，此外，還應開設供噴霧染菌、給消毒劑、采樣等的袖套操作和樣本傳遞等窗口。(8)噴霧染菌裝置，包括空氣壓縮機、壓力表、氣體流量計和氣溶膠噴霧器等。噴出細菌氣溶膠微粒的直徑90%以上應在1μm～10μm之間。(9)空氣微生物采樣裝置，包括六級篩孔空氣撞擊式采樣器、液體撞擊式采樣器、抽氣設備、氣體流量計等。(10)環(huán)境監(jiān)測器材，如溫度計、濕度計等。2.1.3.3

試驗階段空氣消毒試驗分為實驗室試驗、模擬現(xiàn)場試驗與現(xiàn)場試驗。三個階段試驗的特點見表2-5。2.1.3.4

實驗室試驗與模擬現(xiàn)場試驗操作程序(1)取試驗菌菌懸液，用無菌脫脂棉過濾后，再用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基稀釋成所需濃度。(2)同時調節(jié)兩個氣霧柜(或室)的溫度、相對濕度至試驗要求的溫度和相對濕度。(3)將使用的器材一次放入氣霧柜(或室)內，將門關閉。此后，一切操作和儀器設備的操縱均在柜(或室)外通過帶有密封袖套的窗口或搖控器進行。直至試驗結束，始可將門打開。(4)按設定的壓力、氣體流量及噴霧時間噴霧染菌。邊噴霧染菌，邊用風扇攪拌。噴霧染菌完畢，繼續(xù)攪拌5min，而后靜置5min。（5）同時對對照組和試驗組氣霧柜(或室)分別進行消毒前采樣，作為對照組試驗開始前和試驗組消毒處理前的陽性對照(即污染菌量)。氣霧柜(或室)內空氣中各陽性對照菌數應達5′104cfu/m3～5′106cfu/m3。表2-5

各階段空氣消毒試驗的特點項

目

實驗室試驗

模擬現(xiàn)場試驗

現(xiàn)場試驗

目

的

測定最低有效劑量

測定最低有效劑量

驗證實用消毒效果

試驗柜(室)

≥1m3柜

10m3～20m3室

≥20m3房間

采樣器

液體撞擊式

六級篩孔空氣撞擊式

六級篩孔空氣撞擊式

菌

株

白色葡萄球菌

白色葡萄球菌

空氣中自然菌

試驗菌霧粒

<10μm

<10μm

不

定

溫

度

20℃～25℃

20℃～25℃

自然條件

相對濕度

50%～70%

50%～70%

自然條件

中和劑

加于采樣液中

加于采樣培養(yǎng)基中

加于采樣培養(yǎng)基中

對

照

需有自然消亡對照

需有自然消亡對照

不需自然消亡對照結果計算

殺滅率

殺滅率

消亡率

在模擬現(xiàn)場試驗時，用六級篩孔空氣撞擊式采樣器采樣，采樣時，將六級篩孔空氣撞擊式采樣器放在柜室中央1m高處(采樣方法按采樣器使用說明書進行)。在實驗室試驗時，用液體撞擊式采樣器采樣，采樣器置柜內中央處。

(6)按產品說明書規(guī)定的方法，在試驗組氣霧柜(或室)內進行消毒。對照組氣霧柜室同時作相應(不含消毒劑)處理。

(7)作用至規(guī)定時間，對試驗組和對照氣霧柜(或室)按前述方法同時進行采樣。繼續(xù)作用至第二個預定消毒時間，再次按前述方法進行采樣。如此按作用時間分段采樣，直至規(guī)定的最終作用時間為止。

(8)在實驗室試驗階段，用液體撞擊式采樣器采集的樣本，按2.1.1.3所示方法進行活菌培養(yǎng)計數，在37℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)48h，觀察最后結果。

(9)在模擬現(xiàn)場試驗階段，用六級篩孔空氣撞擊式采樣器采樣時，采樣平板直接放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，觀察最后結果，計數生長菌落數。

(10)全程試驗完畢，對氣霧柜（室）表面和空氣中殘留的細菌做最終消毒后，打開通風機，過濾除菌排風，排除柜(或室)內滯留的污染空氣，為下一次試驗作好準備。

(11)在完成試驗組與陽性對照組采樣和樣本接種后，應將未用的同批培養(yǎng)基、采樣液和PBS等(各取1份～2份)，與上述兩組樣本同時進行培養(yǎng)或接種后培養(yǎng)，作為陰性對照。若陰性對照組有菌生長，說明所用培養(yǎng)基或試劑有污染，試驗無效，更換無菌器材重新進行。

(12)同一條件試驗重復3次，每次均分別計算其殺滅率。3次結果的殺滅率均≥99.90%時，可判為消毒合格。殺滅率的計算方法如下:

Nt:空氣中細菌的自然消亡率;

V0與Vt:分別為對照組試驗開始前和試驗過程中不同時間的空氣含菌量;Kt:消毒處理對空氣中細菌的殺滅率;V0'與Vt':分別為試驗組消毒處理前、和消毒過程中不同時間的空氣含菌量。消毒前后空氣中的含菌量按下列公式計算：[舉例:用某消毒劑對氣霧柜內空氣消毒10min，試驗組消毒前空氣含菌量為100000cfu/m3，消毒后為50cfu/m3;對照組處理前空氣含菌量為90000cfu/m3，處理后為50000cfu/m3。該消毒劑作用10min對空氣中微生物的殺滅率按下法計算:

①細菌在空氣中10min的自然消亡率為：

②對空氣中微生物的殺滅率為:

該次試驗，消毒劑作用10min，可將空氣中細菌殺滅99.91%。2.1.3.5

現(xiàn)場試驗

(1)根據使用時的實際情況，選擇有代表性的房間并在室內無人情況下進行消毒效果觀察。觀察時，在消毒處理前用六級篩孔空氣撞擊式采樣器進行空氣中自然菌采樣，作為消毒前樣本(陽性對照)。消毒處理后，再作一次采樣，作為消毒后的試驗樣本。

(2)采樣時，采樣器置室內中央1.0m高處。房間大于10m2者，每增加10m2增設一個采樣點。

(3)因現(xiàn)場試驗環(huán)境條件變化較多，難以統(tǒng)一，無法測定準確的自然沉降率，故只按所得消亡率(自然衰亡和消毒處理中殺菌的綜合效果)做出驗證結論。消亡率的計算按下式進行:[舉例:一無人手術室，消毒前采樣，空氣中的平均含菌量為5000cfu/m3。用某消毒劑噴霧對室內空氣消毒30min后采樣，含菌量減至50cfu/m3。該消毒劑處理30min后，室內空氣中自然菌的消亡率可按下法計算:

該消毒劑作用30min，可使房間內空氣中自然菌的消亡率達99.00%。

(4)試驗采樣完成后，應將未用的同批培養(yǎng)基，與上述試驗樣本同時進行培養(yǎng)或接種后培養(yǎng)，作為陰性對照。陰性對照組若有菌生長，說明所用培養(yǎng)基有污染，試驗無效，更換后重新進行。

(5)試驗重復3次或以上。計算出每次的消亡率。除有特殊要求者外，對無人室內進行的空氣消毒，每次的自然菌消亡率均≥90%者為合格。2.1.3.6

注意事項

(1)試驗中，因控制統(tǒng)一的條件較難，故每次均需同時設置試驗組與對照組。兩組條件盡量保持一致。消毒前、后及不同次數間的環(huán)境條件亦應盡量保持一致。

(2)注意記錄試驗過程中的溫度和相對濕度，以便分析對比。

(3)所采樣本應盡快進行微生物檢驗，以免影響結果的準確性。

(4)每次試驗完畢，氣霧柜、氣霧室應充分通風。必要時消毒沖洗，間隔4h后始可做第