細菌的生理生化反應課件

實驗十細菌的生理生化反應

一、

目的1.1

了解細菌鑒定中常用的生理生化試驗反應原理1.2

掌握測定細菌生理生化反應的技術和方法

二、

原理

各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)了很大的差異。不同微生物因具有不同的酶系統(tǒng)，分解利用糖類、脂肪類和蛋白類物質的能力不同，其發(fā)酵的類型和產物也不相同。細菌的生理生化反應在菌株的分類鑒定中有很大作用。

四、步驟(一)

糖類發(fā)酵試驗（二）

乙酰甲基甲醇試驗(V．P試驗)（三）

甲基紅試驗（M.R.試驗）（四）吲哚試驗（五）檸檬酸鹽試驗（六）硫化氫試驗（七）淀粉水解試驗(一)

糖類發(fā)酵試驗原理

可根據細菌分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產酸產氣作為鑒定菌種的依據。是否產酸，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中加入指示劑，經培養(yǎng)后根據指示劑的顏色變化來判斷。是否產氣，可在發(fā)酵培養(yǎng)基中放入倒置杜氏小管觀察。

材料菌種：大腸桿菌、變形桿菌

培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)液、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液試管

步驟

1

試管標記

取分別裝有葡萄糖和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液試管各2支，每種糖發(fā)酵試管中均分別標記大腸桿菌、普通變形菌。2

接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至以上各相應試管中。置37℃恒溫箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)24h-48h，觀察結果。與對照管比較，若接種培養(yǎng)液保持原有顏色，其反應結果為陰性，表明該菌不能利用該種糖，記錄用“－”表示；如培養(yǎng)液呈黃色，反應結果為陽性，表明該菌能分解該種糖產酸，記錄用“＋”表示。培養(yǎng)液中的杜氏小管內有氣泡為陽性反應，表明該菌分解糖能產酸并產氣，記錄用“＋”表示；如杜氏小管內沒有氣泡為陰性反應，記錄用“－”表示。結果觀察（二）

乙酰甲基甲醇試驗(V．P試驗)

原理

某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液中能分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V.P（+）反應。

材料

菌種:大腸桿菌（Escherichia

coli）、產氣腸桿菌（Enterobacter

aerogenes）

培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液

步驟

1

標記試管:取2支裝有葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，分別標記大腸桿菌、產氣腸桿菌。

2

接種培養(yǎng):以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應試管中。置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)24～48h。（三）

甲基紅試驗（M.R.試驗）原理

腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，可使培養(yǎng)基pH值下降至pH4.2以下，使甲基紅指示劑變紅。

材料

菌種同V.P試驗培養(yǎng)基同V.P試驗步驟

同V.P試驗1

標記試管:取2支裝有葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，分別標記大腸桿菌、產氣腸桿菌。

2

接種培養(yǎng):以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應試管中。置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)24～48h。（四）吲哚試驗原理:有些細菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚。吲哚本身沒有顏色，不能直接看見，但當加入吲哚試劑（對二甲基氨基苯甲醛試劑）時，該試劑與吲哚作用，形成紅色的玫瑰吲哚。

材料菌種：同V．P試驗

培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基

試劑：二甲基氨基苯甲醛溶液、乙醚。

步驟

1

試管標記:取裝有蛋白胨水培養(yǎng)液的試管2支，分別標記大腸桿菌、產氣腸桿菌。

2

接種培養(yǎng):以無菌操作分別接種少量菌苔到以上相應試管中，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。（五）檸檬酸鹽試驗原理

有些細菌能夠利用檸檬酸鈉作為碳源，如產氣腸桿菌；而另一些細菌則不能利用檸檬酸鹽，如大腸桿菌。細菌在分解檸檬酸鹽后，產生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高，當培養(yǎng)基中加入1%溴麝香草酚藍指示劑時，就會由綠色變?yōu)樯钏{色。（溴麝香草酚藍的指示范圍為：pH小于6.0時呈黃色，pH在6.0~7.6時為綠色，pH大于7.6時呈藍色。）材料菌種：同V．P試驗

培養(yǎng)基：檸檬酸鹽培養(yǎng)基（固體斜面）步驟

1

試管標記

取裝有檸檬酸鹽培養(yǎng)基固體斜面的試管2支，分別標記大腸桿菌、產氣腸桿菌。

2

接種培養(yǎng)

以無菌操作分別接種少量菌苔到以上相應試管斜面上做“之”字形劃線，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。結果觀察（六）硫化氫試驗原理

有些細菌能分解含硫的有機物，如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等產生硫化氫，硫化氫一遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽等，就形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀物。材料菌種：大腸桿菌、變形桿菌培養(yǎng)基：H2S試驗培養(yǎng)基（固體）步驟

1

試管標記:取裝有H2S試驗固體培養(yǎng)基的試管2支，分別標記大腸桿菌、變形桿菌。

2

接種培養(yǎng):以無菌操作分別用接種針挑取少量菌苔到以上相應試管做穿刺接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。結果觀察（七）淀粉水解試驗原理

有些細菌可產生淀粉酶水解培養(yǎng)中的淀粉為糊精，或進一步水解為麥芽糖，淀粉水解后遇碘不再變藍。材料菌種：大腸桿菌、枯草桿菌培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基（固體）步驟

1

培養(yǎng)皿標記

取裝有淀粉培養(yǎng)基（固體）的培養(yǎng)皿一只，在培養(yǎng)皿兩側分別標記大腸桿菌、枯草桿菌。

2

接種培養(yǎng)

以無菌操作分別用接種環(huán)挑取少量菌苔到培養(yǎng)皿相應部位做十字接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。六實驗結果與分析1配制培養(yǎng)基糖發(fā)酵培養(yǎng)基（葡萄糖、乳糖）葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基蛋白胨水培養(yǎng)基淀粉培養(yǎng)基色H2