Cha4 藥物的含量測定方法與驗證課件

藥物分析

PharmaceuticalAnalysis

第四章藥物的含量測定方法與驗證§4.2藥品分析方法的驗證

§4.3定量分析樣品的前處理方法

§4.1定量分析方法的特點

12/7/2022常用的定量分析方法：滴定分析法、光譜分析法、色譜分析法。、滴定分析法用于常量組分測定；準確度高（RSD<0.2%）、精密度好；儀器設備簡單、試驗成本低及操作簡便、快速。（一）特點定量分析方法的特點§4.1定量分析方法的特點

12/7/2022（二）滴定分析法的計算例：原料藥異煙肼的含量計算稱取供試品0.2003g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取20ml，加水40ml、鹽酸16ml與甲基橙指示液1滴，用溴酸鉀滴定液（0.01671mol/L）緩緩滴定（溫度保持在18～25℃）至粉紅色消失，消耗溴酸鉀滴定液11.57ml。每1ml溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當于3.429mg的C6H7N3O。計算異煙肼中異煙肼的百分含量。定量分析方法的特點12/7/2022（二）滴定分析法的計算例：異煙肼片的含量計算取異煙肼片20片，稱重1.3882g（標示量60mg/片），研細，精密稱取0.2281g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取20ml，加水40ml、鹽酸16ml與甲基橙指示液1滴，用溴酸鉀滴定液（0.01671mol/L）緩緩滴定（溫度保持在18～25℃）至粉紅色消失，消耗溴酸鉀滴定液11.57ml。每1ml溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當于3.429mg的C6H7N3O。計算異煙肼片中異煙肼的百分含量，并計算其含量為標示量的多少（%）。定量分析方法的特點12/7/2022二、光譜分析法1、原理：根據Lambert-Beer定律物質對單色光吸收強弱與吸光物質濃度、液層厚度都有關系（一）紫外-可見分光光度法定量分析方法的特點百分吸收系數：當溶液濃度為1%（g/100ml）溶液厚度為1cm時的吸光度每100ml溶液中所含被測物質的重量12/7/20222、定量方法：吸收系數法、對照品比較法、標準曲線法吸收系數法例：維生素B2的測定取本品0.0752g，置燒杯中，加冰醋酸1ml與水75ml，加熱溶解后，加水稀釋，放冷，移置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加4%氫氧化鈉溶液7ml，并用水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法在444nm的波長處測吸收度，按維生素B2的吸收系數為323計算含量。定量分析方法的特點12/7/20222、定量方法：吸收系數法、對照品比較法、標準曲線法對照品比較法供試品中被測成分的濃度原料藥制劑定量分析方法的特點12/7/20223、儀器的校正

4、特點靈敏度高，可達10-4g/ml～10-7g/ml；準確度高，RSD（%）為2%～5%；儀器價格低廉，操作簡單，易普及；應用范圍廣

定量分析方法的特點12/7/2022S2S1S0T1吸收發(fā)射熒光發(fā)射磷光系間跨越內轉換振動弛豫能量l2l1l

3

外轉換l

2T2內轉換振動弛豫定量分析方法的特點12/7/20222、熒光激發(fā)光譜與熒光發(fā)射光譜Stokes位移發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長無關鏡像規(guī)則定量分析方法的特點12/7/20223、分子產生熒光必須具備的條件具有一定的熒光量子產率（熒光效率）；熒光效率：具有合適的結構；躍遷類型：*→有利于熒光的產生；共軛效應：提高共軛度有利于增加熒光效率并產生紅移剛性平面結構：分子剛性平面越大，熒光效率越大取代基效應：芳環(huán)上有供電基，能增加電子共軛程度，使熒光增強。定量分析方法的特點12/7/20224、影響熒光強度的外部因素溶劑的影響溶劑極性↑，熒光效率↑。溫度的影響溫度↑，熒光效率↓，熒光強度↓。溶液pH當熒光物質為弱酸或弱堿時，溶液pH的改變對熒光強度有很大影響。熒光熄滅劑的影響散射光的干擾瑞利散射和拉曼散射定量分析方法的特點12/7/20225、熒光光度計組成：光源、單色器、樣品池、檢測器。定量分析方法的特點12/7/20227、特點定量分析方法的特點靈敏度高，可達10-10g/ml～10-12g/ml；選擇性好；適用于低濃度的溶液，濃度太大會有“自熄滅”作用；干擾因素多，須做空白試驗。

12/7/2022三、色譜分析法1、原理（一）高效液相色譜法適用范圍廣、分離性能好、分析速度快、靈敏度高、分離分析同時進行。根據樣品組分在固定相與流動相中的分配系數的不同而分離。2、特點定量分析方法的特點12/7/20224、在含量測定中的應用（1）內標法加校正因子測定供試品中主成分含量方法：內標物+對照品→對照溶液，進樣，測定，計算校正因子內標物+供試品→供試品溶液，進樣，測定，計算含量（2）外標法測定供試品主成分含量供試品→供試品溶液對照品→對照品溶液進樣，測定，計算定量分析方法的特點12/7/2022三、色譜分析法（二）氣相色譜法載氣為氮氣；色譜柱為填充或毛細管柱。GC用于樣品本身具揮發(fā)性，含有雜質等干擾的品種，如維生素E。定量分析方法的特點12/7/2022三、需驗證的分析項目鑒別試驗；雜質定量檢查或限度檢查；原料藥或制劑中有效成分含量測定；制劑中其它成分（如降解物、防腐劑等）的測定；藥品制劑溶出度、均勻度等檢查中的溶出量等的測定方法。藥品分析方法的驗證

12/7/2022四、驗證內容準確度精密度專屬性檢測限定量限線性范圍耐用性

藥品分析方法的驗證

12/7/2022準確度（accuracy）

指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。（1）原料藥空白+已知量A的對照品（或標準品）測定，測得值為M。（n=5）or用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較：藥品分析方法的驗證

12/7/2022規(guī)定的范圍內，至少用9次測定結果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次。應報告已知加入量的回收率，或測定結果平均值與真實值之差及其相對標準偏差。準確度驗證應用于：雜質定量、主成分的含量測定。數據要求：UV、HPLC、GC法98.0%-102.0%滴定分析法99.7%-100.3%體內藥物分析85.0%-115.0%藥品分析方法的驗證

12/7/2022精密度（precision）指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。

重復性：在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度。中間精密度：同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備所得結果的精密度。重現性：不同實驗室，不同分析人員測定結果的精密度。精密度包括：重復性、中間精密度、重現性藥品分析方法的驗證

12/7/2022精密度表示方法

偏差(deviation,d)標準偏差（standarddeviation,S）相對標準差(relativestandarddeviation,RSD)藥品分析方法的驗證

12/7/2022精密度試驗結果的RSD允許值RSD滴定分析法≤0.2%重量分析法≤0.5%氧瓶燃燒法、凱氏定氮法≤0.5%儀器分析法≤2%精密度驗證應用于：雜質限量、主成分的含量測定。藥品分析方法的驗證

12/7/2022專屬性（specificity）指有其他成分（雜質、降解物、輔料等）可能存在情況下，采用的方法能準確測定出被測物的特性

。

專屬性驗證應用于：鑒別反應、雜質檢查、含量測定

。藥物分析中考慮：雜質、降解產物、相關物質、制劑輔料。生物藥物分析中考慮：內源性物質的干擾，代謝產物的干擾，同時服藥時的干擾。藥品分析方法的驗證

12/7/2022檢測限（limitofdetection，LOD）指試樣中被測物能被檢測出的最低濃度或量。反映方法與儀器的靈敏度和噪音的大?。槐砻鳂悠方浱幚砗罂瞻?本底)值的高低；常用%、ppm、ppb表示。

檢測限的確定非儀器分析用目視法儀器分析用信噪比法：以能達到S/N≥2或S/N≥3(信噪比)時樣品的最低濃度為檢測限。檢測限應用于：雜質的限量檢查。藥品分析方法的驗證

12/7/2022定量限（1imitofquantitation，LOQ）指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和精密度，常用%、ppm、ppb表示。定量限的確定儀器分析用信噪比法：以信噪比（S/N）為10∶1時相應的濃度或注入儀器的量進行確定。定量限應用于：雜質定量、降解產物定量。藥品分析方法的驗證

12/7/2022線性指在設計的范圍內，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。

相關系數yxr=1xyr=-1xyr=0藥品分析方法的驗證

12/7/2022范圍指達到一定精密度、準確度和線性的條件下，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。原料藥和制劑含量測定范圍應為測試濃度的80%-120%制劑含量均勻度檢查范圍應為測試濃度的70%-130%溶出度或釋放度中的溶出量測定范圍應為限度的±20%線性和范圍應用于：雜質定量、降解物定量、主成分含量測定。

藥品分析方法的驗證

12/7/2022耐用性指測定條件稍有變動時，結果不受影響的承受程度。耐用性驗證應用于：鑒別、檢查、含量測定。

體現耐用性的典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性樣品提取次數時間試劑來源等藥品分析方法的驗證

12/7/2022驗證項目鑒別雜質檢查含量測定限量定量準確度--++精密度--++專屬性++++檢測限-+--定量限--+-線性--++范圍--++耐用性++++藥品分析方法的驗證

12/7/2022一、概述定量分析樣品的前處理方法

§4.3定量分析樣品的前處理方法含鹵素的藥物

含金屬的藥物

含P、S、Se等的藥物與脂肪鏈的碳原子直接相連與芳環(huán)直接相連三氯叔丁醇泛影酸

含金屬的有機藥物

有機金屬藥物

富馬酸亞鐵醋酸苯汞12/7/2022不經有機破壞經有機破壞直接測定配位滴定法氧化還原滴定法水解后測定堿水解酸水解經氧化還原分解后測定濕法破壞——凱氏定氮法干法破壞高溫灼燒法氧瓶燃燒法二、定量分析樣品的前處理方法前處理方法定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（一）不經有機破壞的分析方法

直接測定法適用范圍：

金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬藥物或某些C－M鍵結合不牢固的有機金屬藥物。

富馬酸亞鐵硫酸鈰滴定富馬酸亞鐵溶于熱H2SO4例：Fe2+鄰二氮菲指示紅色→淺藍色

定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（一）不經有機破壞的分析方法

經水解后測定法適用范圍：

本法適用于含鹵素有機藥物結構中鹵素原子結合不牢固的藥物。三氯叔丁醇的測定例：堿水解后測定法

三氯叔丁醇定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（一）不經有機破壞的分析方法

經水解后測定法適用范圍：

本法適用于分子結構中的金屬原子結合不夠牢固的含金屬的有機藥物。

十一烯酸鋅的測定例：酸水解后測定法

定量分析樣品的前處理方法

EBTEDTA紫紅色→純藍色12/7/2022（一）不經有機破壞的分析方法

經氧化還原后測定法堿性還原后測定

酸性還原后測定

利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量

定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（一）不經有機破壞的分析方法

適用范圍：

本法適用于碘原子直接與芳環(huán)連接的含碘有機化合物。泛影酸的測定例：經氧化還原后測定法1.堿性還原后測定

泛影酸

定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（一）不經有機破壞的分析方法

泛影酸的測定例：經氧化還原后測定法1.堿性還原后測定

曙紅鈉為吸附指示劑黃色→玫瑰紅色定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（一）不經有機破壞的分析方法

碘番酸的測定JP（13）例：經氧化還原后測定法2.酸性還原后測定

碘番酸定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（一）不經有機破壞的分析方法

葡萄糖酸銻鈉的測定

例：經氧化還原后測定法3.利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（二）經有機破壞的分析方法

有機破壞方法：濕法破壞、干法破壞有機破壞目的：有機結合狀態(tài)的金屬及鹵素→可測定的無機化合物

定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（二）經有機破壞的分析方法

濕法破壞硝酸-高氯酸法硝酸-硫酸法硫酸-硫酸鹽法其它濕法本法適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞；有機金屬藥物經破壞后，得到的無機金屬離子一般呈高價態(tài)；本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞。本法常用于含砷或銻有機藥物的破壞分解；破壞得到的無機金屬離子多為低價態(tài)。加入硫酸鹽的目的：提高硫酸的沸點，以使樣品破壞完全。防止硫酸分解損失。本法適用于大多數有機物質的破壞；破壞分解所得的無機金屬離子均為高價態(tài)。本法不適用于含堿土金屬有機藥物的破壞。定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022濕法破壞蒸餾：吸收：測定:常量凱氏定氮消化蒸餾裝置圖凱氏定氮法定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022濕法破壞凱氏燒瓶K2SO4(提高消解溫度)CuSO4(加快消解速度)硫酸堿液硼酸(吸收液)甲基紅-溴甲酚綠指示劑硫酸滴定空白校正凱氏定氮法半微量凱氏定氮消化蒸餾裝置圖定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（二）經有機破壞的分析方法

濕法破壞濕法破壞的注意事項：凱氏燒瓶空白試驗通風櫥中進行定量分析樣品的前處理方法

12/7/2022（二）經有機破壞的分析方法

干法破壞干法破壞可分為高溫熾灼法和氧瓶燃燒法

高溫熾灼法用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。加入無水Na2CO3、Mg(NO3)2、Ca(OH)2、ZnO等輔助灰化氧瓶燃燒法適用于含鹵素及硫、磷、硒等藥物的鑒別、檢查和含量測定，特別適用于