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文檔簡(jiǎn)介
24免疫診斷第一節(jié)Ag或Ab的檢測(cè)AgAb反應(yīng)的原理㈠反應(yīng)的特異性(Specificity
)
Ag與Ab的結(jié)合為非共價(jià)的可逆結(jié)合一種抗原一般只能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合,這是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性,即特異性??乖贵w結(jié)合力的大小,常用親和力(affinity)或親合力(avidity)來(lái)表示。親和力(affinity)——指抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合部位與相應(yīng)的抗原決定基之間的結(jié)合強(qiáng)度。親合力(avidity)——指一個(gè)抗體分子與整個(gè)抗原之間的結(jié)合強(qiáng)度,與抗原決定基的數(shù)目相關(guān)。一抗——用已知抗原免疫動(dòng)物所得的抗血清(antiserum)或單抗二抗——用Ig免疫異種動(dòng)物所得的抗抗體㈡反應(yīng)的可見性
是指抗原抗體特異性結(jié)合時(shí),生成結(jié)合物的量與反應(yīng)物的濃度的關(guān)系,只有當(dāng)兩者濃度比例適當(dāng)時(shí),才出現(xiàn)可見反應(yīng)。Ag或Ab的檢測(cè)方法凝集反應(yīng),agglutination直接凝集:玻片法,如血型鑒定、細(xì)菌鑒定試管法,如肥大凝集試驗(yàn)間接凝集:Coombs試驗(yàn)(二)沉淀反應(yīng)(precipitation)血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物的反應(yīng)。1、單向免疫擴(kuò)散(singleimmunodiffusion)2、雙向免疫擴(kuò)散(doubleimmunodiffusion)3、免疫電泳(immunoelectrophoresis)4、免疫比濁(immunonephelometry)(三)補(bǔ)體參加的反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)溶血空斑試驗(yàn)(四)用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)1、免疫熒光法(immunofluorescence)(1)直接熒光法(2)間接熒光法2、酶免疫測(cè)定(enzymeimmunoassay,EIA)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA
)(1)雙抗體夾心法(2)間接法(3)BAS(biotinavidinsystem)-ELISA
固相載體包被抗體+待檢抗原+生物素(biotin)標(biāo)記的抗體+親和素(avidin)及酶標(biāo)記的生物素+底物顯色(4)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(enzyme-linkedimmunespot,ELISPOT)抗細(xì)胞因子的抗體包被固相載體+待檢細(xì)胞,溫育后洗去細(xì)胞+酶標(biāo)抗體+底物顯色(5)免疫組化技術(shù)(immunohistochemistrytechnique)包括酶免疫組化、免疫金銀組化、免疫電鏡技術(shù)等4、放射免疫測(cè)定法(radioimmunoassay,RIA)5、化學(xué)發(fā)光免疫分析6、免疫印跡法(Westernblotting)分三步:(1)SDS(2)電轉(zhuǎn)移(3)固相酶免疫測(cè)定第二節(jié)免疫細(xì)胞的測(cè)定一、淋巴細(xì)胞的分離與類型鑒定分離:1、用淋巴細(xì)胞分層液密度梯度離心法制備外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC),包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。2、用粘附貼壁法、磁鐵吸引法等將淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分離3、用E花環(huán)沉降法、尼龍毛柱分離法等可將T、B淋巴細(xì)胞分離類型鑒定:——檢測(cè)表面標(biāo)志1、免疫熒光法——間接免疫熒光法2、磁珠分離法3、流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry)流式細(xì)胞儀(flowcytometer,F(xiàn)CM)GreenFluorescenceIntensityNumberofCellsUnstainedcellsFITC-labeledcellsOneParameterHistogram二、淋巴細(xì)胞功能測(cè)定(一)T細(xì)胞功能測(cè)定1、T細(xì)胞增殖試驗(yàn)——PHA、ConA作刺激物(1)形態(tài)學(xué)方法(2)3H-TdR摻入法(3)MTT法2、細(xì)胞毒試驗(yàn)(1)51Cr釋放法(2)凋亡細(xì)胞檢查法(如電泳法、流式細(xì)胞術(shù)等)3、細(xì)胞因子檢測(cè)(1)ELISA——雙抗體夾心法、ELISPOT法(2)生物學(xué)活性測(cè)定法(3)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)4、皮膚試驗(yàn)1)特異性抗原皮膚試驗(yàn)如OT試驗(yàn)——將定量舊結(jié)核菌素(OT)注射到受試者前臂皮內(nèi),24~48h局部紅腫硬結(jié),硬結(jié)直徑大于0.5cm者為陽(yáng)性。2)PHA皮膚試驗(yàn)將定量PHA注射到受試者前臂皮內(nèi),6~16h局部紅斑硬結(jié),24~48h達(dá)到高峰,硬結(jié)直徑大于15mm者為陽(yáng)性。(二)B細(xì)胞功能測(cè)定1、B細(xì)胞增殖試驗(yàn)小鼠——用LSP刺激人—
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