腸道傳染病常見(jiàn)致病菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

（優(yōu)選）腸道傳染病常見(jiàn)致病菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)第一頁(yè)，共二十七頁(yè)。一、概述腸道傳染病是由各種病原體經(jīng)口侵入腸道，在腸道內(nèi)繁殖并產(chǎn)生毒素，破壞腸粘膜組織，引起腸道功能紊亂和損害，病原體再?gòu)幕颊哂杉S便中排出感染他人的一類(lèi)疾病。往引起腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐及發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重者可引起身體重度脫水、昏迷和休克，甚至有生命危險(xiǎn)。第二頁(yè)，共二十七頁(yè)。一、概述特點(diǎn)：發(fā)病急、傳播快、傳染性強(qiáng)、危害性大、極易引起暴發(fā)或流行流行特征1、傳播途徑：糞-口（食物、水、日常生活接觸、昆蟲(chóng)媒介）2、病原體：外界抵抗力和存活力強(qiáng)3、傳染源：病人、帶菌者目前認(rèn)為是唯一的傳染源4、明顯季節(jié)性：主要出現(xiàn)在夏秋季第三頁(yè)，共二十七頁(yè)。傳播途徑1、經(jīng)水傳播：生活飲用水源被腸道傳染病人和病原攜帶者排出的糞便、嘔吐物污染或在水中洗滌病人的衣褲、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍亂、傷寒、細(xì)菌性痢疾等疾病的暴發(fā)流行。2、經(jīng)食物傳播：食品在加工、儲(chǔ)存、制作、運(yùn)輸?shù)匿N(xiāo)售等過(guò)程中被腸道傳染病的病原體污染，可造成局部的流行和暴發(fā)流行。3、接觸傳播：通過(guò)握手、使用或接觸過(guò)病人的衣物、文具、門(mén)具、門(mén)把手、人民幣等造成病原體傳播。4、昆蟲(chóng)傳播：有些腸道傳染病的病原體可在蒼蠅、蟑螂等媒介昆蟲(chóng)體內(nèi)存活一段時(shí)間，并隨著昆蟲(chóng)的活動(dòng)進(jìn)行傳播。第四頁(yè)，共二十七頁(yè)。病原體甲類(lèi)傳染?。夯魜y；乙類(lèi)傳染?。簜透眰?、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、脊髓灰質(zhì)炎、甲、戊型病毒性肝炎；丙類(lèi)傳染?。撼魜y、傷寒副傷寒、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾以外的細(xì)菌、病毒、原蟲(chóng)等病原體引起的腸道感染。第五頁(yè)，共二十七頁(yè)。二、幾種常見(jiàn)致病菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）第六頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）由傷寒沙門(mén)菌和甲、乙、丙型副傷寒沙門(mén)菌引起的急性腸道傳染病。參照傷寒和副傷寒診斷標(biāo)準(zhǔn)（ws280-2008）第七頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）1診斷依據(jù)1.1流行病學(xué)史1.1.1病前30d內(nèi)曾到過(guò)或生活在傷寒、副傷寒流行區(qū)。1.1.2有傷寒、副傷寒患者、帶菌者密切接觸史。1.1.3有喝生水等不良衛(wèi)生習(xí)慣者。1.2臨床表現(xiàn)

1.2.1不明原因持續(xù)發(fā)熱。1.2.2特殊中毒面容（表情淡漠，呆滯），相對(duì)緩脈，皮膚玫瑰疹，肝脾腫大。1.3實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1.3.1嗜酸性粒細(xì)胞減少或消失、白細(xì)胞總數(shù)正?；虻拖?；1.3.2肥達(dá)反應(yīng)“O”抗體凝集效價(jià)≥1：80，“H”抗體凝集效價(jià)≥1：160者；但在高發(fā)地區(qū)，許多正常人因既往感染亦可有較高滴度，此時(shí)最好首先檢查當(dāng)?shù)厝巳好庖咚剑_定正常值；

1.3.3恢復(fù)期血清中特異性抗體效價(jià)較急性期血清特異性抗體效價(jià)增高4倍以上；1.3.4從血、骨髓、糞便、膽汁中任一種標(biāo)本分離到傷寒沙門(mén)菌或副傷寒沙門(mén)菌。2診斷帶菌者：無(wú)任何臨床表現(xiàn)、從糞便中分離到傷寒沙門(mén)菌或副傷寒沙門(mén)菌。疑似病例：1.1任何一項(xiàng)或1.2.1+1.2.2任何一項(xiàng)體征或臨床診斷病例：1.2.1+1.2.2中任何一項(xiàng)體征+（或）確診病例：或第八頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）3實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)與染色

生化反應(yīng)

血清學(xué)及確定鑒定

第九頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）標(biāo)本采集及送檢：發(fā)病1-2周取血，3-4周取糞便(新鮮糞便冷藏8h內(nèi)送檢，轉(zhuǎn)移至卡里-布萊爾Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基的糞便試子冷藏24h內(nèi)送檢)，全程可取骨髓（已用抗生素，其他標(biāo)本陰性）作細(xì)菌培養(yǎng)。整個(gè)病程中應(yīng)分期采集2-3份標(biāo)本作血清抗體檢測(cè)。轉(zhuǎn)移至Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基的糞便試子分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)輕攪混合標(biāo)本第十頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）分離培養(yǎng)血液：按1：10加入血液增菌培養(yǎng)基或葡萄糖膽鹽肉湯，36℃±1℃孵育，分別于1d、2d、7d轉(zhuǎn)種血平板或營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)24-48h骨髓：直接或增菌分離糞便：直接接種或于亞硒酸鹽增菌培養(yǎng)基36℃±1℃增菌18-24h后接種于SS、MAC或沙門(mén)顯色等培養(yǎng)基36℃±1℃培養(yǎng)18-24h第十一頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）形態(tài)與染色：在SS和MAC培養(yǎng)基上形成中等大小、無(wú)色透明、表面光滑、邊緣整齊的菌落部分產(chǎn)H2S菌株形成中心黑褐色的菌落革蘭陰性桿菌周身鞭毛，無(wú)莢膜、芽胞

SSagarE.coli第十二頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）生化反應(yīng)：純化后挑取可疑菌落接種KIA/TSI、MIU等36℃±1℃培養(yǎng)18-24h觀察生化反應(yīng)進(jìn)行初篩。發(fā)酵葡萄糖、不發(fā)酵乳糖，除傷寒沙門(mén)菌不產(chǎn)氣外，其余菌產(chǎn)生氣體，動(dòng)力陽(yáng)性、吲哚陰性、不水解尿素，其KIA生化反應(yīng)模式為：K/AGH2S(+)；MIU生化模式為：＋－－第十三頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）第十四頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）血清學(xué)鑒定：凡生化反應(yīng)附合沙門(mén)菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗(yàn)確定相應(yīng)群和生物型，基本原則：O:Vi:H1:H2

A-F群多價(jià)O血清多價(jià)凝集后再用每個(gè)O血清群的單價(jià)因子血清定群后用H因子檢查第1相和第2相H抗原單價(jià)O因子血清不凝集，應(yīng)排除Vi抗原(制成菌懸液100℃水浴30min破壞Vi抗原后再進(jìn)行血清凝集)第十五頁(yè)，共二十七頁(yè)。（一）傷寒和副傷寒（沙門(mén)氏菌）確定鑒定：腸桿菌科細(xì)菌各屬之間，生化有類(lèi)似，抗原有交叉反應(yīng)和不典型菌株的出現(xiàn)，需進(jìn)一步做系統(tǒng)生化反應(yīng)鑒定，可選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)鑒定。第十六頁(yè)，共二十七頁(yè)。（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）簡(jiǎn)稱(chēng)菌痢，是由志賀菌屬細(xì)菌引起的腸道傳染病。細(xì)菌性和阿米巴性痢疾診斷標(biāo)準(zhǔn)（WS287-2008）分類(lèi)：A群：痢疾志賀菌(S.dysenteriae)B群：福氏志賀菌(S.flexneri)C群：鮑氏志賀菌(S.boydii)D群：宋內(nèi)志賀菌(S.sonnei)第十七頁(yè)，共二十七頁(yè)。（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）1診斷依據(jù)1.1流行病學(xué)史：患者有不潔飲食和（或）與菌痢患者接觸史。1.2臨床表現(xiàn)1.2.1潛伏期：數(shù)小時(shí)至7d，一般1d～3d。1.2.2臨床癥狀和體征：起病急驟，畏寒、寒戰(zhàn)伴高熱，繼以腹痛、腹瀉和里急后重，每天排便10次～20次，但量不多，呈膿血便，并有中度全身中毒癥狀。重癥患者伴有驚厥、頭痛、全身肌肉酸痛，也可引起脫水和電解質(zhì)紊亂，可有左下腹壓痛伴腸鳴音亢進(jìn)。1.2.3臨床分型1.3實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1.3.1糞便常規(guī)檢查，白細(xì)胞或膿細(xì)胞≥15/HPF（400倍），可見(jiàn)紅細(xì)胞、吞噬細(xì)胞。1.3.2病原學(xué)檢查，糞便培養(yǎng)志賀菌陽(yáng)性。2診斷2.1疑似病例：腹瀉，有膿血便或黏液便或水樣便或稀便，伴有里急后重癥狀，尚未確定其他原因引起的腹瀉者。2.2臨床診斷病例：1.1+1.2+1.3.1+排除其他原因引起之腹瀉。2.3確診病例：臨床診斷病例第十八頁(yè)，共二十七頁(yè)。（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）3實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)與染色

生化反應(yīng)

血清學(xué)及確定鑒定

第十九頁(yè)，共二十七頁(yè)。（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）標(biāo)本采集及分離：盡量在抗生素使用前，采集血液（懷疑菌血癥）或新鮮糞便膿血、粘液部分(新鮮糞便置于清潔、干燥、無(wú)肥皂或消毒液殘留的容器中冷藏條件下8h內(nèi)送檢或轉(zhuǎn)移至卡里-布萊爾Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基的糞便試子冷藏24h內(nèi)送檢)。分離培養(yǎng)：血液：按1：10加入血液增菌培養(yǎng)基，36℃±1℃孵育，分別于1d、2d、7d轉(zhuǎn)種血平板或營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)24-48h，觀察結(jié)果。糞便：直接劃線(xiàn)接種于MAC或XLD（木糖賴(lài)氨酸去氧膽酸鈉）培養(yǎng)基36℃±1℃培養(yǎng)18-24h。不建議使用SS，因其可抑制痢疾志賀氏菌A1型生長(zhǎng)，漏檢第二十頁(yè)，共二十七頁(yè)。（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）形態(tài)與染色：革蘭陰性短小桿菌，無(wú)鞭毛、芽胞，有菌毛。在MAC上呈不發(fā)酵乳糖的無(wú)色、透明、光滑、濕潤(rùn)、圓形、邊緣整齊的小菌落；在XLD上呈粉紅色至無(wú)色，半透明、光滑、濕潤(rùn)、圓形、邊緣整齊或不齊的小菌落S.flexnerionMACagarS.boydiionMACagarS.sonneiandE.coliXLD第二十一頁(yè)，共二十七頁(yè)。（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）生化反應(yīng)：純化后挑取可疑菌落接種KIA/TSI、MIU等36℃±1℃培養(yǎng)16-20h觀察生化反應(yīng)。KIA生化反應(yīng)模式為：K/AH2S(-)；MIU：－+/－－第二十二頁(yè)，共二十七頁(yè)。（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）血清學(xué)凝集：凡生化反應(yīng)附合志賀菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗(yàn)進(jìn)行鑒定分型

無(wú)菌挑取KIA表面菌落，用志賀氏菌四種多價(jià)抗血清凝集；凝集者，再取痢疾志賀氏I、痢疾志賀氏II、宋內(nèi)志賀氏、福氏志賀氏抗血清凝集；不凝者排除k抗原(制成菌懸液100℃水浴30min后再進(jìn)行血清凝集)后，取鮑氏志賀氏菌抗血清凝集；若與某型血清發(fā)生凝集，應(yīng)進(jìn)一步作分型鑒定。確定鑒定：選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)一步做系統(tǒng)生化反應(yīng)鑒定。第二十三頁(yè)，共二十七頁(yè)。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)（ws271-2007）感染性腹瀉：除霍亂、傷寒副傷寒、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾以外的細(xì)菌、病毒、原蟲(chóng)等病原體引起的、以腹瀉為主要臨床特征的一組腸道傳染病。主要常見(jiàn)的傷寒、副傷寒以外的沙門(mén)氏菌、致瀉性大腸埃希菌（腸毒素型大腸埃希菌ETEC、腸致病型大腸埃希菌EPEC、腸侵襲型大腸埃希菌EIEC、腸出血型大腸埃希菌EHEC、腸凝聚型大腸埃希菌EaggEC）、副溶血性弧菌、彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、輪狀病毒、隱孢子蟲(chóng)等第二十四頁(yè)，共二十七頁(yè)。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）副溶血性弧菌（VibrioParahemolyticus,VP）是一種革蘭氏陰性，無(wú)芽胞，呈弧狀、桿狀、絲狀等多種形狀的嗜鹽性細(xì)菌。進(jìn)食含有該菌的食物可致食物中毒，臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。傳染源主要為帶菌的海產(chǎn)品，近海淡水魚(yú)帶菌較高。第二十五頁(yè)，共二十七頁(yè)。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)與染色

生化反應(yīng)

確定鑒定

第二十六