甘草黃酮高效提取

甘草黃酮高效提取及分離純化研究小組成員：范雲(yún)季越

唐靜李利芹1

甘草是豆科蝶形花亞科多年生草本植物，是我國重要的傳統(tǒng)中藥，有著重要的藥理作用和保健功能。本實驗由烏拉爾甘草為原料，探索其黃酮的提取和分離工藝。黃酮類化合物泛指兩個苯環(huán)，通過中央三碳相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物。現(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明，甘草中黃酮類化合物具有較強(qiáng)的生理活性，具有抗炎、抗病毒、利膽、強(qiáng)心、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等功效，是一種有效的活性成分，具有許多潛在的藥用價值，如抗腫瘤作用，抗氧化作用，抗菌作用，抗病毒作用，抗心律失常作用，保肝及對消化系統(tǒng)的其它作用。2實驗思路1：提取——提純——初步鑒定——分離——結(jié)構(gòu)測定實驗思路2：提取——分離純化——檢測3甘草中黃酮的提取方法冷凝回流法超聲微波協(xié)同提取法超聲輔助法黃酮的提取得率受到很多因素的影響，根據(jù)文獻(xiàn)報道及初步實驗，本文選擇提取的料液比，提取時間，提取溫度，乙醇濃度及提取次數(shù)五個因素進(jìn)行分析4超聲-微波協(xié)同萃取技術(shù)提取時間15min，料液比1∶30，提取溫度50℃，提取1次的條件下，考察乙醇濃度為50%，60%，70%，80%，90%時黃酮的提取得率，確定乙醇濃度。5固定乙醇濃度80%,超聲功率50w，微波頻率2450Hz。

67通過以上分析并結(jié)合單因素分析可以確定關(guān)于提取得率的最佳的因素水平組合為：提取時間15min，料液比1∶15，提取溫度50℃，提取次數(shù)3次，在此條件下進(jìn)行重復(fù)實驗，得到平均提取得率為98.80%，RSD為0.31%。

8冷凝回流法

固定乙醇濃度為80%。

9綜合上述考慮并結(jié)合單因素實驗結(jié)果，選擇：提取時間為90min，料液比為1∶15，提取溫度為70℃，提取次數(shù)3次為最優(yōu)條件，在此條件下平均提取得率為99.10%，RSD為0.61%，重復(fù)性較好。

10超聲波輔助萃取法

設(shè)定超聲波功率為50w，固定乙醇濃度為80%。

11綜合考慮確定最佳提取條件為A3B2C3D3，即提取時間60min，料液比1∶15，提取溫度70℃，提取次數(shù)3次，在此條件下，甘草總黃酮提取得率為98.19%，RSD為0.92%。

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將三種提取工藝進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在提取得率相近的情況下，超聲-微波萃取法所需的時間大大縮短，顯示超聲微波協(xié)同萃取技術(shù)具有低能耗及高效快速的優(yōu)點(diǎn)，適合于黃酮類化合物的提取。13甘草中黃酮的分離純化方法大孔吸附樹脂柱層析分離純化甘草黃酮本實驗采用AB-8型號的大孔吸附樹脂。裝柱：充分吸脹的樹脂在攪拌下倒入層析柱(80×1500mm)中，裝柱后液體必須高于樹脂20～40mm。上樣：將甘草乙醇提取物加適量去離子水稀釋后上樣至經(jīng)過預(yù)處理的AB-8大孔吸附樹脂柱，調(diào)節(jié)柱層析流出速度大約15mL·min-1，流出液收集備用。洗脫：先用去離子水洗脫，再用體積分?jǐn)?shù)分別為30%、40%、50%和95%的乙醇梯度洗脫，流出液以500mL/瓶收集。14薄層層析

展開劑的選擇：通過反復(fù)實驗以尋找最合適的展開體系與配比，最后展開劑選用體系：氯仿：甲醇＝9∶1顯色劑：茴香醛（1%）：硫酸（10%）=1∶1操作步驟：a.點(diǎn)樣

b.展開

c.顯色

d.測定比移值15甘草中黃酮的檢測紫外光譜分析

紫外光譜分析可以幫助鑒定黃酮類化合物的類型。以甲醇為參比液，將產(chǎn)物的甲醇溶液在200-400nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。從圖中可以看到，在275nm處有一個強(qiáng)吸收，310nm處有一肩峰，顯示有黃酮類化合物特征吸收，可以初步判定為黃酮類化合物。16顏色反應(yīng)17從表3-10可以看出，由大孔吸附樹脂提取的粗品，可以和顏色試劑反應(yīng)產(chǎn)生黃酮類化合物特征的顏色，因此可以判斷含有黃酮類化合物。根據(jù)和不同試劑產(chǎn)生的不同的顏色，對照表2-4，可以進(jìn)一步推斷出，粗品中的黃酮類化合物可能是二氫黃酮（醇）類或黃酮類。18主要結(jié)論

本文以烏拉爾甘草為研究對象，采用不同的提取技術(shù)對其中的有效成分黃酮進(jìn)行系統(tǒng)的提取，采用柱色譜并結(jié)合沉淀法分離提純甘草黃酮，并應(yīng)用薄層色譜、紫外光譜對產(chǎn)品進(jìn)行分析鑒定，具體結(jié)論如下：1．利用超聲微波協(xié)同萃取技術(shù)對甘草中的總黃酮進(jìn)行提取并進(jìn)行了工藝優(yōu)化，得出最佳工藝條件為：提取時間15min，料液比1:15，提取溫度50℃，乙醇濃度80%，提取3次，平均提取得率為98.80%。2．利用超聲波輔助萃取法和冷凝回流法提取甘草中總黃酮，并進(jìn)行工藝優(yōu)化得出最佳工藝條件。同時將這兩種提取方法與超聲-微波協(xié)同萃取法的工藝進(jìn)行比較，結(jié)果說明了超聲微波協(xié)同萃取技術(shù)是一種高效快速的提取方法，具有提取工藝操作簡便，雜質(zhì)含量小，提取成本較低，節(jié)約能源等優(yōu)點(diǎn)，適合甘草黃酮的提取，前景廣闊。3．將甘草的乙醇提取物先用AB-8大孔吸附樹脂柱處理，獲得黃酮類物質(zhì)，含量為96%以上。

19以下是本小組經(jīng)過討論設(shè)計的試驗因素表

冷凝回流提