中醫(yī)中藥中藥制劑分析第三章課件

第三章中藥制劑的檢查第三章中藥制劑的檢查1制劑通則檢查一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查微生物限度檢查制劑通則檢查2§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)：指能危害人體健康或影響藥物質(zhì)量的物質(zhì)。雜質(zhì)的分類一般雜質(zhì)（如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽）特殊雜質(zhì)雜質(zhì)來源中藥材原料中帶入生產(chǎn)制備過程中引入貯存過程中引起的中藥制劑自身理化性質(zhì)的改變§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)：指能危害人體健康或影響藥物質(zhì)量的3§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查雜質(zhì)限量：指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用%或ppm來表示。雜質(zhì)限量檢查及計(jì)算方法取一定量與被檢雜質(zhì)相同的純物質(zhì)或其它對(duì)照品配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液，與一定量供試藥物的溶液，在相同處理?xiàng)l件下，比較反應(yīng)結(jié)果，從而確定雜質(zhì)限量是否超過規(guī)定。

注射用雙黃連（凍干）中砷鹽限量檢查

取本品0.4g，加2%硝酸鎂乙醇溶液3ml，點(diǎn)燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，依法檢查（中國(guó)藥典2000版附錄ⅨF）。如果標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（1μgAs/ml）取用量為2ml，雜質(zhì)限量的計(jì)算如下：§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查注射用雙黃連（凍干）中砷4§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查

不用標(biāo)準(zhǔn)溶液，直接在供試品溶液中加入試劑進(jìn)行檢查。肉桂油中重金屬檢查取肉桂油10ml，加水10ml與鹽酸1滴，振搖后，通硫化氫氣使飽和，水層與油層均不得變色。

§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查肉桂油中重金屬檢查5

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法重金屬：在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。重金屬檢查法基本原理CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S↑Pb2++H2S→PbS↓+2H+pH3.5§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法pH3.56

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法檢查方法方法適用范圍檢查方法第一法適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查。甲管：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（1μg/ml）+醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml+水或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；乙管：供試品溶液25ml；甲管

硫代乙酰胺試液各2ml→搖勻→放置2分鐘→同置白紙上,自上向下透視→乙管中顯出的顏色不得比甲管更深。乙管第二法適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?jīng)處理后在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查。取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)酉跛?.5ml→蒸干至氧化氮蒸氣除盡→放冷→加鹽酸2ml→置水浴上蒸干→加水15ml→滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性→加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml→微熱溶解→移置納氏比色管中→加水稀釋成25ml；另取配制供試品溶液的試劑→置瓷皿中蒸干→加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml→水15ml→微熱溶解→移置納氏比色管中→加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量→用水稀釋成25ml；以上兩管溶液，照上述第一法檢查。§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法方法適用范圍檢查方7

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法檢查方法方法適用范圍檢查方法第三法適用于檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬。甲管：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液適量+氫氧化鈉試液5ml+水20ml+硫化鈉試液5滴，搖勻；乙管：供試品適量+加氫氧化鈉試液5ml+水20ml溶解→置納氏比色管中+加硫化鈉試液5滴，搖勻；兩管比較，乙管顏色不得比甲管深。第四法適用于有色溶液或重金屬限量低的品種。用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑后與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液獲得的色斑進(jìn)行比較檢查?！?一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法方法適用范圍檢查方8

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法注意事項(xiàng)方法靈敏度適用于含鉛量在10μg-30μg之間。標(biāo)準(zhǔn)鉛液的用量以20μg（相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2ml）為宜。反應(yīng)條件硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺試液加入量以2ml時(shí)呈色最深，最佳顯色時(shí)間為2分鐘。有色供試液的處理供試品在加硫代乙酰胺試液以前如帶色，可用稀焦糖液或加常用的指示劑調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)溶液，使兩者顏色一致。其他離子的干擾Fe3+---

加抗壞血酸。當(dāng)使用鹽酸超過1.0ml、氨試液超過2ml，以及用硫酸或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，對(duì)照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后，依法檢查。鐵鹽供試品，可利用Fe3+在比重為1.103-1.105的鹽酸（鹽酸9ml與蒸餾水6ml的混合液）中成為HFeC162-，可用乙醚提取而除去，再將酸性溶液加氨試液使呈堿性后，用氰化鉀作為微量鐵鹽的掩蔽劑，再加硫化鈉試液測(cè)定?！?一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法9

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法注意事項(xiàng)前處理1需將藥品灼燒破壞，使有機(jī)物分子中的重金屬游離。灼燒時(shí)熾灼溫度必須控制在500～600℃。2……,3……其他標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制硫化鈉試液應(yīng)采用分析純的硫化鈉配制，貯存在棕色瓶中可保存1～2個(gè)月。含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，如需過濾，可加入對(duì)酚酞呈微堿性的飽和醋酸銨溶液，溫?zé)岷笥弥睆捷^小的定量濾紙濾過，或者選用玻砂漏斗過濾。如供試品本身能生成不溶性硫化物時(shí)，影響重金屬的檢查，可加入適當(dāng)?shù)难诒蝿?。保證色斑上色調(diào)均勻性?！?一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法10§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：藥品中微量砷（以As計(jì)算）的限量檢查古蔡氏法基本原理①AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O②AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2(黃色)

（溴化汞試紙）AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3(棕色)※As(V)反應(yīng)慢，須將As(V)還原成As(III)初生態(tài)的氫§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：藥品中微量砷（以As計(jì)算）的11[中醫(yī)中藥]中藥制劑分析第三章課件12§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+

4I-+Zn2+→[ZnI4]2-Sn2++Zn→Sn+Zn2+促進(jìn)反應(yīng)向右進(jìn)行形成鋅錫齊，有利于反應(yīng)平穩(wěn)的進(jìn)行§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：促進(jìn)反應(yīng)向右進(jìn)行形成鋅錫齊，13§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法

古蔡氏法檢查砷裝置A:100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶B:中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞C:導(dǎo)氣管(外徑8.0mm，內(nèi)徑6.0mm)，全長(zhǎng)約180mmD/E:具孔（孔徑6.0mm）的有機(jī)玻璃旋塞HgBr2試紙醋酸鉛棉60mg(裝管高度6-8cm)§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法檢查砷裝置HgBr214§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法

標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備①A瓶：標(biāo)準(zhǔn)砷溶液(1μg/ml)2ml+鹽酸5ml+水21ml+KI試液5ml+酸性SnCl2試液5滴，室溫10min②A瓶＋鋅粒2g，接導(dǎo)氣管C③25℃-40℃水浴45min檢查法§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備15§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查古蔡氏法注意事項(xiàng)方法靈敏度約為0.75μg(以As計(jì))。2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（相當(dāng)于2μgAs）所形成的砷斑色度適中，清晰，便于辨認(rèn)。酸度及各種試液用量反應(yīng)液的酸度相當(dāng)于2mol/L的鹽酸液。含KI濃度為2.5%，SnCl2濃度為0.3%，加入鋅粒以2g為宜。反應(yīng)溫度和時(shí)間:25～40℃，時(shí)間為45分鐘。鋅粒選用2mm左右粒徑(能通過一號(hào)篩)的為宜。汞試紙的選擇選用質(zhì)量較好，組織疏松的中速定量濾紙；溴化汞試紙一般宜新鮮制備。采用醋酸鉛棉花吸收除去H2S。2000版藥典規(guī)定稱取60mg醋酸鉛棉花，裝管高度約80mm。

§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查16§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法注意事項(xiàng)中藥制劑的前處理：常用酸破壞法、堿破壞法及直接炭化法等使有機(jī)砷游離出來，以氫氧化鈣破壞法較為常用。干擾物質(zhì)：如硝酸、磷、銻化合物或硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽、碘、氯、汞、銀、鎳、鈷、銅、鐵、鉍等的干擾。其他A所用儀器、試液等的影響B(tài)同一套儀器應(yīng)能辨別出標(biāo)準(zhǔn)砷溶液1.5ml與2.0ml所呈砷斑的深淺。C標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天配制，標(biāo)準(zhǔn)砷貯備液存放時(shí)間一般不宜超過一年。D砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。E配制成的酸性氯化亞錫試液3個(gè)月后不宜使用。

§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：17§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）基本原理※既可做限量檢查，又可做含量測(cè)定。紅色膠態(tài)銀§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：紅色膠態(tài)銀18§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）檢查方法Ag-DDC5ml目視檢測(cè)分光光度計(jì),λ=510§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：Ag-DDC19§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）注意事項(xiàng)吡啶(DL=0.5μgAs/30ml)有機(jī)堿液的選擇三乙胺(0.75-7.5μg范圍內(nèi),A∝C)

溫度和時(shí)間：25～40℃水浴，45min§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：20§2一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法硫氰酸鹽法(CP)原理Fe3++6SCN-

→[Fe(SCN)6]3-檢查方法供試品標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液方法靈敏度

20-50μgFe3+/50ml

H++H20至25ml,+稀HCl4ml,+(NH4)2S2O850mg,+H20至35ml,+30%NH4SCN3ml,+H20至50ml§2一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法H++H20至25ml,+21§2一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法巰基醋酸法（EP）

2Fe3++2HS·CH2COOH→2Fe2++HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+Fe2++2HS·CH2COOH→Fe(S·CH2COOH)2+2H+Fe(S·CH2COOH)2+2OH-

→[Fe(S·CH2COO)2]2-+2H2O

§2一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法22§2一般雜質(zhì)檢查方法有害元素的測(cè)定§2一般雜質(zhì)檢查方法有害元素的測(cè)定23§2一般雜質(zhì)檢查方法干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的重量，包括水分及其他揮發(fā)性成分。檢查方法常壓恒溫干燥（烘干法）--受熱較穩(wěn)定的中藥制劑恒重：連續(xù)2次干燥后的重量差異不超過0.3mg干燥劑干燥–受熱易分解或揮發(fā)的供試品硅膠，五氧化二磷，硫酸等干燥劑減壓干燥—熔點(diǎn)低、受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分的供試品熱分析法§2一般雜質(zhì)檢查方法干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后24§2一般雜質(zhì)檢查方法水分測(cè)定法烘干法—不含或含少量揮發(fā)性成分的供試品甲苯法--含揮發(fā)性成分的供試品減壓干燥--含揮發(fā)性成分的貴重藥品干燥劑：P2O5

氣相色譜法--散劑、顆粒劑、丸劑、片劑等各類型中藥制劑中微量水分的測(cè)定

費(fèi)休法甲苯法裝置§2一般雜質(zhì)檢查方法水分測(cè)定法甲苯法裝置25§2一般雜質(zhì)檢查方法熾灼殘?jiān)鼨z查法(硫酸灰分,EP)

700℃－800℃+硫酸※取樣量由熾灼殘?jiān)蘖繘Q定,一般1~2g※緩慢灼燒※將殘?jiān)糇髦亟饘贆z查時(shí),500℃－600℃灰分測(cè)定總灰分500℃－600℃

灰燼

+鹽酸溶解

過濾濾渣灼燒(+10%NH4NO3)酸不溶性灰分有機(jī)物→炭化，分解非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)→硫酸鹽§2一般雜質(zhì)檢查方法熾灼殘?jiān)鼨z查法(硫酸灰分,EP)有機(jī)26§3特殊雜質(zhì)檢查方法特殊雜質(zhì)：指在該藥品的生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)其來源、生產(chǎn)工藝及藥品的性質(zhì)有可能引入的雜質(zhì)。

§3特殊雜質(zhì)檢查方法特殊雜質(zhì)：指在該藥品的生產(chǎn)和貯存過程中27§3特殊雜質(zhì)檢查方法大黃流浸膏中土大黃苷的檢查

取本品適量，加甲醇2ml，溫浸10分鐘，放冷，取上清液10μl，點(diǎn)于濾紙上，以45%乙醇展開，取出，晾干，放置10分鐘，置紫外燈（365nm）下檢視，不得顯持久的亮紫色熒光。

大黃素土大黃苷§3特殊雜質(zhì)檢查方法大黃流浸膏中土大黃苷的檢查大黃素土大28§3特殊雜質(zhì)檢查方法§3特殊雜質(zhì)檢查方法29§4農(nóng)藥殘留量的檢查常用農(nóng)藥

有機(jī)氯類：艾氏劑、六六六、氯丹、DDT、狄氏劑等有機(jī)磷類：三硫磷、氯硫磷、蠅毒磷、內(nèi)吸磷、敵敵畏、樂果等苯氧羧酸類除草劑：2，4-D；2，4，5-T氨基甲酸酯類：西維因（甲萘威）二硫代氨基甲酸酯類：福美鐵、代森錳、代森鈉、福美雙等無機(jī)農(nóng)藥：磷化鋁、砷酸鈣、砷酸鉛植物性農(nóng)藥：煙葉和尼古??；除蟲菊花提取物和除蟲菊酯（合成除蟲菊酯）；毒魚藤根和魚藤根其他：溴螨酯、氯化苦、二溴乙烷、環(huán)氧乙烷、溴甲烷?！?農(nóng)藥殘留量的檢查常用農(nóng)藥30§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

供試品的制備殘留農(nóng)藥的提取

提取溶劑：乙腈、丙酮提取方法：索氏提取法和振蕩提取法樣品純化—液-液分配+柱層析分離檢測(cè)方法—色譜分離法§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定31§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

檢測(cè)方法薄層色譜法氣相色譜法和液相色譜法

吸附劑展開劑顯色劑有機(jī)氯農(nóng)藥

硅膠G、氧化鋁、硅膠GF254己烷、庚烷等硝酸銀顯色劑、芳胺類顯色劑、熒光顯色劑有機(jī)磷農(nóng)藥

硅膠G、氧化鋁、硅藻土、纖維素粉、聚酰胺丙酮、氯仿、乙腈、環(huán)己烷等剛果紅、4-（對(duì)硝基芐基）吡啶（NBP）、四溴苯酚磺酞乙酯-硝酸銀-檸檬酸、硝酸銀-溴酚藍(lán)以及薄層-酶抑制法§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定吸附劑展開劑顯色劑有32§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)——彈性石英毛細(xì)管柱SE-54(或DB-1701)、電子捕獲檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度：230℃，檢測(cè)器溫度：300℃，不分流進(jìn)樣，程序升溫對(duì)照品儲(chǔ)備液

——六六六（BHC）[α-，β-，γ-，δ-BHC]，滴滴涕（DDT）[PP’-DDE，-DDD，-DDT，OP’-DDT]及五氯硝基苯（PCNB）+石油醚（60-90℃）分別制成每1ml約含4-5μg的溶液混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備——對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5ml→10ml混合對(duì)照品溶液的制備——取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液制成每1L含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、500μg濃度系列?！?農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定33§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查供試品溶液制備——供試品研細(xì)，稱取適量（相當(dāng)于藥材2g），置100ml具塞錐形瓶中，+水20ml浸泡過夜，+丙酮40ml，稱定，超聲處理30min，放冷，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，+氯化鈉約6g及二氯甲烷30ml，稱定，超聲處理15min，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置使分層，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時(shí)。精密量取35ml，于40℃水浴減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60-90℃）溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚（60～90℃）至5ml。+硫酸1ml，振搖1分鐘，離心（3000轉(zhuǎn)/分）10分鐘。精密量取上清液2ml置具刻度的濃縮瓶（見圖3-5）中，連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，40℃下（或用氮?dú)猓⑷芤簼饪s至適量，精密稀釋至1ml，即得。測(cè)定§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定34§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)——彈性石英毛細(xì)管柱DB-17MS(或HP-5)、氮磷檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度：230℃，檢測(cè)器溫度：300℃，不分流進(jìn)樣，程序升溫對(duì)照品儲(chǔ)備液

——對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷，+用乙酸乙酯，制成每1ml約含100μg的溶液混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備——對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml→20ml混合對(duì)照品溶液的制備——取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液制成每1ml含0.1μg、0.5μg、1μg、2μg、5μg濃度系列。§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定35§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查供試品溶液制備——供試品研細(xì)，稱取適量（相當(dāng)于藥材5g），+無水硫酸鈉5g，+乙酸乙酯50-100ml，冰浴超聲處理3min，放置，取上層液濾過，藥渣加乙酸乙酯30-50ml，冰浴超聲處理3min，放置，濾過，合并濾液，40℃減壓濃縮至干，+乙酸乙酯5ml，使溶解。精密量取1ml，加到活性炭小柱（120-400目，0.25g），置多功能真空樣品處理器上，用正己烷-乙酸乙酯（1:1）5ml洗脫。洗脫液置氮吹儀上濃縮至近干。+乙酸乙酯1ml，溶解。

測(cè)定§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定36§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查1-敵敵畏2-速滅磷3-久效磷4-甲拌磷5-巴胺磷6-二嗪農(nóng)7-乙嘧硫磷8-甲基嘧啶硫磷9-甲基對(duì)硫磷10-稻瘟凈11-水胺硫磷12-氧化喹硫磷13-稻豐散14-甲喹硫磷15-克線磷16-乙硫磷十六種有機(jī)磷農(nóng)藥的氣相色譜圖§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定1-敵敵畏2-速37§6黃曲霉毒素的檢查黃曲霉毒素（aflatoxin）極強(qiáng)的毒性和致癌性在紫外線照射下，能發(fā)出熒光耐熱，在280℃時(shí)發(fā)生裂解低濃度時(shí)易受紫外線破壞，被氧化或遇堿被破壞在水中溶解度低，易溶于油及氯仿、丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑測(cè)定方法微柱色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、熒光分析法、免疫化學(xué)分析法等§6黃曲霉毒素的檢查黃曲霉毒素（aflatoxin）38§6黃曲霉毒素的檢查測(cè)定方法高效液相色譜法原理：黃曲霉毒素經(jīng)衍生后得到能產(chǎn)生強(qiáng)熒光的物質(zhì)，可用熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。衍生的方法：柱前三氟乙酸（TFA）衍生，柱后碘衍生和柱后過溴化溴化吡啶（PBPB）衍生分析方法標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制黃曲霉毒素衍生標(biāo)樣的配制樣品提取、凈化衍生物的制備色譜條件（甲醇-水的磷酸緩沖體系）※本法靈敏度為0.2μg/kg§6黃曲霉毒素的檢查測(cè)定方法39§5黃曲霉毒素的檢查測(cè)定方法熒光分析法黃曲霉毒素B1

α-香豆素鈉鹽（熒光）（無熒光）激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm免疫化學(xué)分析法放射免疫法親和層析法酶連免疫法（ELISA）NaOHHCl§5黃曲霉毒素的檢查測(cè)定方法NaOHHCl40§5黃曲霉毒素的檢查§5黃曲霉毒素的檢查41第三章中藥制劑的檢查第三章中藥制劑的檢查42制劑通則檢查一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查微生物限度檢查制劑通則檢查43§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)：指能危害人體健康或影響藥物質(zhì)量的物質(zhì)。雜質(zhì)的分類一般雜質(zhì)（如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽）特殊雜質(zhì)雜質(zhì)來源中藥材原料中帶入生產(chǎn)制備過程中引入貯存過程中引起的中藥制劑自身理化性質(zhì)的改變§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)：指能危害人體健康或影響藥物質(zhì)量的44§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查雜質(zhì)限量：指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用%或ppm來表示。雜質(zhì)限量檢查及計(jì)算方法取一定量與被檢雜質(zhì)相同的純物質(zhì)或其它對(duì)照品配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液，與一定量供試藥物的溶液，在相同處理?xiàng)l件下，比較反應(yīng)結(jié)果，從而確定雜質(zhì)限量是否超過規(guī)定。

注射用雙黃連（凍干）中砷鹽限量檢查

取本品0.4g，加2%硝酸鎂乙醇溶液3ml，點(diǎn)燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，依法檢查（中國(guó)藥典2000版附錄ⅨF）。如果標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（1μgAs/ml）取用量為2ml，雜質(zhì)限量的計(jì)算如下：§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查注射用雙黃連（凍干）中砷45§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查

不用標(biāo)準(zhǔn)溶液，直接在供試品溶液中加入試劑進(jìn)行檢查。肉桂油中重金屬檢查取肉桂油10ml，加水10ml與鹽酸1滴，振搖后，通硫化氫氣使飽和，水層與油層均不得變色。

§1中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查肉桂油中重金屬檢查46

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法重金屬：在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。重金屬檢查法基本原理CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S↑Pb2++H2S→PbS↓+2H+pH3.5§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法pH3.547

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法檢查方法方法適用范圍檢查方法第一法適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查。甲管：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（1μg/ml）+醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml+水或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；乙管：供試品溶液25ml；甲管

硫代乙酰胺試液各2ml→搖勻→放置2分鐘→同置白紙上,自上向下透視→乙管中顯出的顏色不得比甲管更深。乙管第二法適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，?jīng)處理后在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查。取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)酉跛?.5ml→蒸干至氧化氮蒸氣除盡→放冷→加鹽酸2ml→置水浴上蒸干→加水15ml→滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性→加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml→微熱溶解→移置納氏比色管中→加水稀釋成25ml；另取配制供試品溶液的試劑→置瓷皿中蒸干→加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml→水15ml→微熱溶解→移置納氏比色管中→加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量→用水稀釋成25ml；以上兩管溶液，照上述第一法檢查?！?一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法方法適用范圍檢查方48

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法檢查方法方法適用范圍檢查方法第三法適用于檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬。甲管：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液適量+氫氧化鈉試液5ml+水20ml+硫化鈉試液5滴，搖勻；乙管：供試品適量+加氫氧化鈉試液5ml+水20ml溶解→置納氏比色管中+加硫化鈉試液5滴，搖勻；兩管比較，乙管顏色不得比甲管深。第四法適用于有色溶液或重金屬限量低的品種。用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑后與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液獲得的色斑進(jìn)行比較檢查。§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法方法適用范圍檢查方49

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法注意事項(xiàng)方法靈敏度適用于含鉛量在10μg-30μg之間。標(biāo)準(zhǔn)鉛液的用量以20μg（相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2ml）為宜。反應(yīng)條件硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺試液加入量以2ml時(shí)呈色最深，最佳顯色時(shí)間為2分鐘。有色供試液的處理供試品在加硫代乙酰胺試液以前如帶色，可用稀焦糖液或加常用的指示劑調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)溶液，使兩者顏色一致。其他離子的干擾Fe3+---

加抗壞血酸。當(dāng)使用鹽酸超過1.0ml、氨試液超過2ml，以及用硫酸或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，對(duì)照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后，依法檢查。鐵鹽供試品，可利用Fe3+在比重為1.103-1.105的鹽酸（鹽酸9ml與蒸餾水6ml的混合液）中成為HFeC162-，可用乙醚提取而除去，再將酸性溶液加氨試液使呈堿性后，用氰化鉀作為微量鐵鹽的掩蔽劑，再加硫化鈉試液測(cè)定。§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法50

§2一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法注意事項(xiàng)前處理1需將藥品灼燒破壞，使有機(jī)物分子中的重金屬游離。灼燒時(shí)熾灼溫度必須控制在500～600℃。2……,3……其他標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制硫化鈉試液應(yīng)采用分析純的硫化鈉配制，貯存在棕色瓶中可保存1～2個(gè)月。含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，如需過濾，可加入對(duì)酚酞呈微堿性的飽和醋酸銨溶液，溫?zé)岷笥弥睆捷^小的定量濾紙濾過，或者選用玻砂漏斗過濾。如供試品本身能生成不溶性硫化物時(shí)，影響重金屬的檢查，可加入適當(dāng)?shù)难诒蝿?。保證色斑上色調(diào)均勻性?！?一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法51§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：藥品中微量砷（以As計(jì)算）的限量檢查古蔡氏法基本原理①AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O②AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2(黃色)

（溴化汞試紙）AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3(棕色)※As(V)反應(yīng)慢，須將As(V)還原成As(III)初生態(tài)的氫§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：藥品中微量砷（以As計(jì)算）的52[中醫(yī)中藥]中藥制劑分析第三章課件53§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+

4I-+Zn2+→[ZnI4]2-Sn2++Zn→Sn+Zn2+促進(jìn)反應(yīng)向右進(jìn)行形成鋅錫齊，有利于反應(yīng)平穩(wěn)的進(jìn)行§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：促進(jìn)反應(yīng)向右進(jìn)行形成鋅錫齊，54§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法

古蔡氏法檢查砷裝置A:100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶B:中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞C:導(dǎo)氣管(外徑8.0mm，內(nèi)徑6.0mm)，全長(zhǎng)約180mmD/E:具孔（孔徑6.0mm）的有機(jī)玻璃旋塞HgBr2試紙醋酸鉛棉60mg(裝管高度6-8cm)§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法檢查砷裝置HgBr255§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法

標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備①A瓶：標(biāo)準(zhǔn)砷溶液(1μg/ml)2ml+鹽酸5ml+水21ml+KI試液5ml+酸性SnCl2試液5滴，室溫10min②A瓶＋鋅粒2g，接導(dǎo)氣管C③25℃-40℃水浴45min檢查法§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備56§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查古蔡氏法注意事項(xiàng)方法靈敏度約為0.75μg(以As計(jì))。2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（相當(dāng)于2μgAs）所形成的砷斑色度適中，清晰，便于辨認(rèn)。酸度及各種試液用量反應(yīng)液的酸度相當(dāng)于2mol/L的鹽酸液。含KI濃度為2.5%，SnCl2濃度為0.3%，加入鋅粒以2g為宜。反應(yīng)溫度和時(shí)間:25～40℃，時(shí)間為45分鐘。鋅粒選用2mm左右粒徑(能通過一號(hào)篩)的為宜。汞試紙的選擇選用質(zhì)量較好，組織疏松的中速定量濾紙；溴化汞試紙一般宜新鮮制備。采用醋酸鉛棉花吸收除去H2S。2000版藥典規(guī)定稱取60mg醋酸鉛棉花，裝管高度約80mm。

§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查57§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：古蔡氏法注意事項(xiàng)中藥制劑的前處理：常用酸破壞法、堿破壞法及直接炭化法等使有機(jī)砷游離出來，以氫氧化鈣破壞法較為常用。干擾物質(zhì)：如硝酸、磷、銻化合物或硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽、碘、氯、汞、銀、鎳、鈷、銅、鐵、鉍等的干擾。其他A所用儀器、試液等的影響B(tài)同一套儀器應(yīng)能辨別出標(biāo)準(zhǔn)砷溶液1.5ml與2.0ml所呈砷斑的深淺。C標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天配制，標(biāo)準(zhǔn)砷貯備液存放時(shí)間一般不宜超過一年。D砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。E配制成的酸性氯化亞錫試液3個(gè)月后不宜使用。

§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：58§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）基本原理※既可做限量檢查，又可做含量測(cè)定。紅色膠態(tài)銀§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：紅色膠態(tài)銀59§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）檢查方法Ag-DDC5ml目視檢測(cè)分光光度計(jì),λ=510§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：Ag-DDC60§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）注意事項(xiàng)吡啶(DL=0.5μgAs/30ml)有機(jī)堿液的選擇三乙胺(0.75-7.5μg范圍內(nèi),A∝C)

溫度和時(shí)間：25～40℃水浴，45min§2一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查：61§2一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法硫氰酸鹽法(CP)原理Fe3++6SCN-

→[Fe(SCN)6]3-檢查方法供試品標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液方法靈敏度

20-50μgFe3+/50ml

H++H20至25ml,+稀HCl4ml,+(NH4)2S2O850mg,+H20至35ml,+30%NH4SCN3ml,+H20至50ml§2一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法H++H20至25ml,+62§2一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法巰基醋酸法（EP）

2Fe3++2HS·CH2COOH→2Fe2++HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+Fe2++2HS·CH2COOH→Fe(S·CH2COOH)2+2H+Fe(S·CH2COOH)2+2OH-

→[Fe(S·CH2COO)2]2-+2H2O

§2一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法63§2一般雜質(zhì)檢查方法有害元素的測(cè)定§2一般雜質(zhì)檢查方法有害元素的測(cè)定64§2一般雜質(zhì)檢查方法干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的重量，包括水分及其他揮發(fā)性成分。檢查方法常壓恒溫干燥（烘干法）--受熱較穩(wěn)定的中藥制劑恒重：連續(xù)2次干燥后的重量差異不超過0.3mg干燥劑干燥–受熱易分解或揮發(fā)的供試品硅膠，五氧化二磷，硫酸等干燥劑減壓干燥—熔點(diǎn)低、受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分的供試品熱分析法§2一般雜質(zhì)檢查方法干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后65§2一般雜質(zhì)檢查方法水分測(cè)定法烘干法—不含或含少量揮發(fā)性成分的供試品甲苯法--含揮發(fā)性成分的供試品減壓干燥--含揮發(fā)性成分的貴重藥品干燥劑：P2O5

氣相色譜法--散劑、顆粒劑、丸劑、片劑等各類型中藥制劑中微量水分的測(cè)定

費(fèi)休法甲苯法裝置§2一般雜質(zhì)檢查方法水分測(cè)定法甲苯法裝置66§2一般雜質(zhì)檢查方法熾灼殘?jiān)鼨z查法(硫酸灰分,EP)

700℃－800℃+硫酸※取樣量由熾灼殘?jiān)蘖繘Q定,一般1~2g※緩慢灼燒※將殘?jiān)糇髦亟饘贆z查時(shí),500℃－600℃灰分測(cè)定總灰分500℃－600℃

灰燼

+鹽酸溶解

過濾濾渣灼燒(+10%NH4NO3)酸不溶性灰分有機(jī)物→炭化，分解非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)→硫酸鹽§2一般雜質(zhì)檢查方法熾灼殘?jiān)鼨z查法(硫酸灰分,EP)有機(jī)67§3特殊雜質(zhì)檢查方法特殊雜質(zhì)：指在該藥品的生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)其來源、生產(chǎn)工藝及藥品的性質(zhì)有可能引入的雜質(zhì)。

§3特殊雜質(zhì)檢查方法特殊雜質(zhì)：指在該藥品的生產(chǎn)和貯存過程中68§3特殊雜質(zhì)檢查方法大黃流浸膏中土大黃苷的檢查

取本品適量，加甲醇2ml，溫浸10分鐘，放冷，取上清液10μl，點(diǎn)于濾紙上，以45%乙醇展開，取出，晾干，放置10分鐘，置紫外燈（365nm）下檢視，不得顯持久的亮紫色熒光。

大黃素土大黃苷§3特殊雜質(zhì)檢查方法大黃流浸膏中土大黃苷的檢查大黃素土大69§3特殊雜質(zhì)檢查方法§3特殊雜質(zhì)檢查方法70§4農(nóng)藥殘留量的檢查常用農(nóng)藥

有機(jī)氯類：艾氏劑、六六六、氯丹、DDT、狄氏劑等有機(jī)磷類：三硫磷、氯硫磷、蠅毒磷、內(nèi)吸磷、敵敵畏、樂果等苯氧羧酸類除草劑：2，4-D；2，4，5-T氨基甲酸酯類：西維因（甲萘威）二硫代氨基甲酸酯類：福美鐵、代森錳、代森鈉、福美雙等無機(jī)農(nóng)藥：磷化鋁、砷酸鈣、砷酸鉛植物性農(nóng)藥：煙葉和尼古??；除蟲菊花提取物和除蟲菊酯（合成除蟲菊酯）；毒魚藤根和魚藤根其他：溴螨酯、氯化苦、二溴乙烷、環(huán)氧乙烷、溴甲烷。§4農(nóng)藥殘留量的檢查常用農(nóng)藥71§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

供試品的制備殘留農(nóng)藥的提取

提取溶劑：乙腈、丙酮提取方法：索氏提取法和振蕩提取法樣品純化—液-液分配+柱層析分離檢測(cè)方法—色譜分離法§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定72§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

檢測(cè)方法薄層色譜法氣相色譜法和液相色譜法

吸附劑展開劑顯色劑有機(jī)氯農(nóng)藥

硅膠G、氧化鋁、硅膠GF254己烷、庚烷等硝酸銀顯色劑、芳胺類顯色劑、熒光顯色劑有機(jī)磷農(nóng)藥

硅膠G、氧化鋁、硅藻土、纖維素粉、聚酰胺丙酮、氯仿、乙腈、環(huán)己烷等剛果紅、4-（對(duì)硝基芐基）吡啶（NBP）、四溴苯酚磺酞乙酯-硝酸銀-檸檬酸、硝酸銀-溴酚藍(lán)以及薄層-酶抑制法§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定吸附劑展開劑顯色劑有73§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)——彈性石英毛細(xì)管柱SE-54(或DB-1701)、電子捕獲檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度：230℃，檢測(cè)器溫度：300℃，不分流進(jìn)樣，程序升溫對(duì)照品儲(chǔ)備液

——六六六（BHC）[α-，β-，γ-，δ-BHC]，滴滴涕（DDT）[PP’-DDE，-DDD，-DDT，OP’-DDT]及五氯硝基苯（PCNB）+石油醚（60-90℃）分別制成每1ml約含4-5μg的溶液混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備——對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5ml→10ml混合對(duì)照品溶液的制備——取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液制成每1L含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、500μg濃度系列?！?農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定74§4農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查供試品溶液制備——供試品研細(xì)，稱取適量（相當(dāng)于藥材2g），置100ml具塞錐形瓶中，+水20ml浸泡過夜，+