細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法(凝膠法)課件

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

（凝膠法）

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法凝膠法方法分類 濁度法光度法顯色基質(zhì)法重現(xiàn)性好方法特性能定量能控制藥物的增強(qiáng)/抑制干擾操作簡便。節(jié)省時間原理：利用鱟血液中的變性細(xì)胞，經(jīng)裂解液和機(jī)械方式促使細(xì)胞破裂而提取到的一種細(xì)胞溶解物，能與極微量的細(xì)菌內(nèi)毒素形成特異凝膠反應(yīng)，反應(yīng)的速度和凝膠的堅(jiān)固程度與內(nèi)毒素濃度有關(guān).細(xì)菌內(nèi)毒素檢測之凝膠法實(shí)驗(yàn)程序1、試驗(yàn)準(zhǔn)備：試劑、儀器及用具2、內(nèi)毒素限值的確定3、確定最大有效稀釋倍數(shù)4、凝膠限度試驗(yàn)5、結(jié)果判定要求1、以最終產(chǎn)品為檢測必要（濃度超過0.5mg/ml）2、檢測樣品PH應(yīng)在6~8之間，不符應(yīng)調(diào)整1、試驗(yàn)準(zhǔn)備：試劑、儀器及用具

儀器與器具電熱恒溫水浴鍋、定時鐘、去熱源槍頭和小玻璃瓶、移液槍、試管架、剪刀、錫箔紙。試劑細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、鱟試劑。2、內(nèi)毒素限值的確定

L=K/M式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K為人每千克體重每小時最大可接受的內(nèi)毒素劑量，以EU/（kg·h）表示；M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供試品提供者直接提供內(nèi)毒素限值如1000EU。3、鱟試劑靈敏度復(fù)核

按下表制備溶液A、B、C，使用稀釋倍數(shù)為MVD的供試品溶液來制備溶液A，按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作。

BCAA鱟試劑200ul100ul100ul100ul標(biāo)準(zhǔn)品100ul供試品100ul100ul操作注意事項(xiàng)試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1、玻璃器具應(yīng)規(guī)范化，便于除熱原、計量準(zhǔn)確、清洗操作方便。2、用于內(nèi)毒素檢測的稀釋試管最好用玻璃試管；塑料用具只能為一次性且保證無內(nèi)毒素。實(shí)驗(yàn)環(huán)境：最好在潔凈室或潔凈工作臺內(nèi)進(jìn)行，保證環(huán)境溫度、濕度及通風(fēng)穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)人員：戴干凈手套和口罩。5、恒溫器的溫度變化應(yīng)<1℃，鱟試劑與樣品混勻后應(yīng)立即移入水浴槽，嚴(yán)格控制保溫時間在60±2min，保溫期間不得移動試管架，桌面保持平穩(wěn)，周圍不能有振顫因素。結(jié)