藥物分析甾體激素類藥物的分析課件

藥物分析甾體激素類藥物的分析藥物分析甾體激素類藥物的分析1分類：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素分類：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激21．腎上腺皮質(zhì)激素皮質(zhì)酮的衍生物1．腎上腺皮質(zhì)激素皮質(zhì)酮的衍生物3代表藥物有：

可的松氫化可的松代表藥物有：可的松氫化可的松4人工合成藥物：

地塞米松氫化可的松結(jié)構(gòu)的基礎上1，2位間引入一個雙鍵，9位上引入-F，16位上引入-CH3

氫化潑尼松在氫化可的松結(jié)構(gòu)的基礎上1，2位間引入一個雙鍵人工合成藥物：地塞米松氫化潑尼松5結(jié)構(gòu)特點：?。?1個Cⅱ．A環(huán)：4-3-酮結(jié)構(gòu)（,-不飽和酮）ⅲ．17位：-醇酮基，有還原性。ⅳ．其它：10位、13位-甲基，11位羥基、羰基等人工合成品：1、2位間有雙鍵，6位，9位引入鹵素，16位或16位引入甲基，16位引入羥基等。結(jié)構(gòu)特點：62．雄性激素及蛋白同化激素睪丸素的衍生物

2．雄性激素及蛋白同化激素睪丸素的衍生物7代表藥物：甲基睪丸素

丙酸睪丸素代表藥物：甲基睪丸素丙酸睪丸素8

蛋白同化激素在睪丸素基礎上結(jié)構(gòu)修飾得到，如苯丙酸諾龍蛋白同化激素在睪丸素基礎上結(jié)構(gòu)修飾得到，如苯丙酸諾龍9結(jié)構(gòu)特點：?。?9個Cⅱ．A環(huán)的4-3-酮ⅲ．17位羥基、甲基、酯

供分析官能團：A環(huán)4-3-酮結(jié)構(gòu)特點：供分析官能團：103．孕激素黃體酮3．孕激素黃體酮11結(jié)構(gòu)特點：?。?1個Cⅱ．A環(huán)的4-3-酮ⅲ．17位甲酮基供分析官能團：?。瓵環(huán)的4-3-酮ⅱ．17位上的甲酮基。結(jié)構(gòu)特點：供分析官能團：124．雌激素

雌二醇、炔雌醇及衍生物

雌酮4．雌激素雌酮13結(jié)構(gòu)特點：ⅰ．含有18個Cⅱ．A環(huán)：苯環(huán)，3位上有酚羥基，10位無甲基ⅲ．17位：羥基、乙炔基供分析官能團：A環(huán)的酚羥基及17位的羥基結(jié)構(gòu)特點：供分析官能團：14苯環(huán)280nm紫外分光光度法()2．雄性激素及蛋白同化激素苯環(huán)280nm酸度↑→異煙肼鹽↓苯環(huán)280nmC16無論何種取代基ν↓硫色素反應()BPTTC（RT）用異煙肼比色法測定甾體激素藥物含量時，其溶液的環(huán)境是()ⅰ．含有19個C藥物分析甾體激素類藥物的分析異煙肼比色法()使待測組分光譜位移，避免干擾ⅱ．A環(huán)的4-3-酮口服避孕藥，如炔諾酮、異炔諾酮、安宮黃體酮等A環(huán)有4-3-酮結(jié)構(gòu)；有的第17位有羥基和乙炔基；第10位無甲基。苯環(huán)280nm口服避孕藥，如炔諾15小結(jié)甾體激素碳原子數(shù)A環(huán)17位取代基腎上腺皮質(zhì)激素214-3-酮-醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯環(huán)C3-酚OH-OH-C≡CH小結(jié)甾體激素碳原子數(shù)A環(huán)17位取代基腎上腺皮質(zhì)激素214-16二、鑒別試驗（一）與強酸的呈色反應甾體激素類藥物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）二、鑒別試驗（一）與強酸的呈色反應甾體激素類藥物呈色H2SO17與硫酸顯色反應顯色熒光加水稀釋潑尼松龍深紅絮狀↓灰潑尼松橙黃→藍綠炔雌醚橙紅黃綠↓紅色

炔雌醇橙紅黃綠絮狀↓玫紅醋酸可的松黃或微褪色并澄帶橙清與硫酸顯色反應18(二)官能團的反應腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色四氮唑鹽OHˉ1C17

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α–醇酮基還原性A.呈色反應(二)官能團的反應腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色四氮唑鹽119腎上腺皮質(zhì)激素藥物Cu2O↓橙紅色堿性酒石酸銅B.沉淀反應Ag↓黑色氨制硝酸銀腎上腺皮質(zhì)激素藥物Cu2O↓橙紅色堿性B.沉淀反應Ag↓20甾酮類激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼甾酮類激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基21異煙腙（黃色）睪酮異煙腙（黃色）睪酮22黃體酮異煙雙腙（黃色）黃體酮異煙雙腙（黃色）23具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物呈色亞硝基鐵氰化鈉間二硝基酚芳香醛3.甲酮基具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物呈色亞硝基鐵氰化鈉3.24C11=O＞C11－OH1C17–α–醇酮基112．甾體激素類藥物的結(jié)構(gòu)中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應的基團()藥物分析甾體激素類藥物的分析解產(chǎn)物無此反應）來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫C3=O＞C17=O、C20=O含水10%→A↓10%在氫化可的松結(jié)構(gòu)的基礎上1，2位間引入一個雙鍵?。瓵環(huán)的4-3-酮反應應在強堿性（pH13.RP－HPLC（大多內(nèi)標法）C17–乙炔基主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別口服避孕藥，如炔諾酮、異炔諾酮、安宮黃體酮等黃體酮藍紫色亞硝基鐵氰化鈉其他甾體淡橙色不顯色C11=O＞C11－OH黃體酮藍紫色亞硝基鐵氰化鈉25黃體酮黃體酮26藍紫色藍紫色27有機氟Fˉ有機破壞有機氯Clˉ4.有機鹵素茜素氟藍硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀AgCl↓呈色有機氟Fˉ有機破壞有機氯Clˉ4.有機鹵素茜素氟藍28茜素氟藍藍紫色F-茜素氟藍藍紫色F-29雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羥基雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羥基30含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6.乙炔基↓含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6.乙炔基↓31炔雌醇白炔雌醇白32△KOH(三)制備衍生物測定m.p.△KOH(三)制備衍生物測定m.p.33△△△△34USP、BP、JP均采用解產(chǎn)物無此反應）ⅲ．17位：羥基、乙炔基結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OH雄性激素和蛋白同化激素具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物原理Zimmermann反應B．異煙肼ⅰ．含有21個CD．硫酸（3）可以控制雜質(zhì)的總量；A．雌二醇B．四氮唑鹽法異煙肼比色法()（2）不需對照品；香（四）水解產(chǎn)物的反應USP、BP、JP均采用香（四）水解產(chǎn)物的反應35特臭特臭特臭特臭36△４-3-酮240nm苯環(huán)280nm（五）UV法△４-3-酮240nm苯環(huán)37藥物分析甾體激素類藥物的分析課件38藥物分析甾體激素類藥物的分析課件393300～3000cm-13000～2700cm-11900～1650cm-11650～1450cm-11000～650cm-1（六）IR法3750～3300cm-1ν3300～3000cm-13000～2700cm-1190040醋酸可的松結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OHC20–酮基、C11–酮基、醋酸酯醋酸可的松結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OH411630cm-1ν3420cm-亞甲基、角甲基吸收帶1750cm-11232cm-11052cm-11630cm-1ν3420cm-亞甲基、角甲基吸收帶175042結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OHC17–乙炔基炔諾酮結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OH炔諾酮431650cm-1ν3300cm-3270cm-1ν1615cm-11650cm-1ν3300cm-3270cm-1ν1615c44結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OH炔雌醇45E．以上都不對適用于非分光光度活性藥物1650～1450cm-1結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OH解產(chǎn)物無此反應）E.異煙肼比色法()C．醋酸可的松D．硫酸C．醋酸可的松C．紫外分光光度法10位無甲基HPLC法（類似高低濃度對比法）蛋白同化激素在睪丸素基礎上結(jié)構(gòu)修飾得到，如H2SO4H3PO4HClO4HCl1505cm-1ν3505cm-3300cm-1ν1590cm-13610cm-ν酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動E．以上都不對1505cm-1ν3505cm-3300cm-46（七）TLC法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別方法：對照品法要求供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同。（七）TLC法主要用于甾體激素類藥物制劑的47炔諾酮TLC圖炔諾酮48（八）HPLC法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）方法：對照品法要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。（八）HPLC法主要用于甾體激素類藥物制劑49三、雜質(zhì)檢查（一）其他甾體定義與標示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為“其他甾體”三、雜質(zhì)檢查（一）其他甾體定義50特點（1）可能存在多個甾體雜質(zhì)（2）結(jié)構(gòu)類似2.來源原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物特點2.來源514.方法（具有一定分離能力）TLC法（高低濃度對比法）HPLC法（類似高低濃度對比法）4.方法（具有一定分離能力）52（1）TLC法（高低濃度對比法）判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色（1）TLC法（高低濃度對比法）判定方法：53特點：（1）簡便易行，不需特殊的儀器；（2）不需對照品；（3）只能控制單個雜質(zhì)的限量；（4）要求雜質(zhì)與主成分的顯色靈敏度接近。特點：54（2）HPLC法（高低濃度對比法）判定方法：規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積（2）HPLC法（高低濃度對比法）判定方法：55特點：（1）需特殊的儀器；（2）不需對照品；（3）可以控制雜質(zhì)的總量；

特點：56（二）游離磷酸地塞米松磷酸鈉氫化可的松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉氫化潑尼松磷酸鈉（三）甲醇和丙酮（二）游離磷酸地塞米松磷酸鈉（三）甲醇和丙酮57（四）雌酮原理Zimmermann反應堿性KOH乙醇高純度（四）雌酮原理Zimmermann反應堿性KO58硒四、來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫劇毒原理方法硒四、來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫劇毒原理方59四、含量測定（一）UV法△４-3-酮240nm（±）腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯環(huán)280nm（±）雌激素四、含量測定（一）UV法△４-3-酮240nm（±）60（二）反應分光光度法1.適用于非分光光度活性藥物2.使待測組分光譜位移，避免干擾3.增加測定靈敏度4.增加選擇性弱、非分光光度活性藥物強分光光度活性藥物化學反應（二）反應分光光度法1.適用于非分光光度活性藥物弱、非分光61腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強還原性1.原理OH-[還原]四氮唑比色法腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強還原性1.原理62[O]OH-分子重排[O]OH-分子重排63三苯甲瓚↓深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）三苯甲瓚↓深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）64藍四氮唑（BT）藍四氮唑（BT）65雙甲瓚（暗藍）雙甲瓚（暗藍）662.方法ChPTTC（RT）BPTTC（RT）USPBT對照品法40～45′暗2.方法ChPTTC（RT）對照品法40～673.討論（1）基團對反應速度的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16無論何種取代基ν↓3.討論（1）基團對反應速度的影響C11=O＞C168（2）溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→幾無反應—無醛無水乙醇醛→A↑—無水乙醇（2）溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓169（3）O2與光線的影響反應過程反應產(chǎn)物怕光→避光、快速O2影響顏色強度和穩(wěn)定性→隔絕空氣、快速、充N2（3）O2與光線的影響反應過程怕光→避光、快速O2影響顏色70（4）堿的種類及加入順序反應應在強堿性（pH13.75）條件下進行以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳加入順序：（4）堿的種類及加入順序反應應在強堿性（pH13.75）加入71（5）溫度與時間t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑→%↓ChP25℃40～45′BP30℃1h（5）溫度與時間t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑→%↓ChP72ⅳ．其它：10位、13位-甲基，USPBTE．重氮苯磺酸雄性激素和蛋白同化激素ⅱ．A環(huán)的4-3-酮（1）需特殊的儀器；適用于非分光光度活性藥物C20–酮基、C11–酮基、醋酸酯RP－HPLC（大多內(nèi)標法）解產(chǎn)物無此反應）以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳硫色素反應()B．異煙肼A．強酸性A．氨制硝酸銀4.特點：缺點影響因素太多優(yōu)點測定結(jié)果能指示藥品的穩(wěn)定性（氧化及降解產(chǎn)物無此反應）ⅳ．其它：10位、13位-甲基，4.特點：73腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基1.原理HCl（縮合）異煙肼比色法腎上腺皮質(zhì)激素、C3－酮基1.原理HCl（縮合）異煙肼比74異煙腙（黃色）異煙腙（黃色）752.方法暗45′對照品法2.方法暗45′對照品法763.討論反應速度（1）C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反應反應專屬性C3－酮基3.討論反應速度（1）C3=O＞C17=O、C277（2）溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇無水甲醇無水乙醇（2）溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇無水甲醇78（3）水分、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時→O2與光線無影響（3）水分、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不79酸、異煙肼的量(3)鹽酸:異煙肼=2:1樣品:異煙肼=1:8→ν↑酸度↑→異煙肼鹽↓酸度↓→A↓溫度(4)t℃↑→ν↑酸、異煙肼的量(3)鹽酸:異煙肼=2:1樣品:801.原理λmax=465λmax=515雌激素Kober反應比色法△△1.原理λmax=465λmax=515雌激素Kober反81藥物分析甾體激素類藥物的分析課件82雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=515雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=51583（三）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多內(nèi)標法）特點用樣量少，靈敏度高，分離效果好，測定速度快（甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對利用結(jié)構(gòu)特征設計的比色法有干擾）（三）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多84112．甾體激素類藥物的結(jié)構(gòu)中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應的基團()A.酚羥基B.活潑次甲基C.甲酮基D.C17-α-醇酮基E.酮基用異煙肼比色法測定甾體激素藥物含量時，其溶液的環(huán)境是()A．強酸性B．中性C．強堿性D．弱堿性E．以上都不對DA112．甾體激素類藥物的結(jié)構(gòu)中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應的基團85蛋白同化激素在睪丸素基礎上結(jié)構(gòu)修飾得到，如藥物分析甾體激素類藥物的分析來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫使待測組分光譜位移，避免干擾HPLC法（類似高低濃度對比法）3000～2700cm-1使待測組分光譜位移，避免干擾用異煙肼比色法測定甾體激素藥物含量時，其溶液的環(huán)境是()硫色素反應()B.ⅱ．A環(huán)的4-3-酮ⅱ．A環(huán)的4-3-酮異煙肼比色法()以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳1C17–α–醇酮基問題31～35A．維生素B1B．醋酸地塞米松C．兩者皆是D．兩者皆不是31.異煙肼比色法()32.硫色素反應()33.紫外分光光度法()34.羥肟酸鐵反應()可用于氫化可的松鑒別的試劑有()A．氨制硝酸銀B．異煙肼C．紅四氮唑D．硫酸E．重氮苯磺酸蛋白同化激素在睪丸素基礎上結(jié)構(gòu)修飾得到，如問題31～358675．可用于甾體激體類藥物的測定方法有A．高效液相色譜法B．四氮唑鹽法C．紫外分光光度法D．異煙肼比色法E．Kober反應比色法能與亞硝基鐵氰化鈉反應生成蘭紫色的藥物是A．雌二醇B．黃體酮C．醋酸可的松D．苯丙酸諾龍E．以上都不對75．可用于甾體激體類藥物的測定方法有能與亞硝87謝謝觀看！謝謝觀看！88藥物分析甾體激素類藥物的分析藥物分析甾體激素類藥物的分析89分類：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素分類：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激901．腎上腺皮質(zhì)激素皮質(zhì)酮的衍生物1．腎上腺皮質(zhì)激素皮質(zhì)酮的衍生物91代表藥物有：

可的松氫化可的松代表藥物有：可的松氫化可的松92人工合成藥物：

地塞米松氫化可的松結(jié)構(gòu)的基礎上1，2位間引入一個雙鍵，9位上引入-F，16位上引入-CH3

氫化潑尼松在氫化可的松結(jié)構(gòu)的基礎上1，2位間引入一個雙鍵人工合成藥物：地塞米松氫化潑尼松93結(jié)構(gòu)特點：?。?1個Cⅱ．A環(huán)：4-3-酮結(jié)構(gòu)（,-不飽和酮）ⅲ．17位：-醇酮基，有還原性。ⅳ．其它：10位、13位-甲基，11位羥基、羰基等人工合成品：1、2位間有雙鍵，6位，9位引入鹵素，16位或16位引入甲基，16位引入羥基等。結(jié)構(gòu)特點：942．雄性激素及蛋白同化激素睪丸素的衍生物

2．雄性激素及蛋白同化激素睪丸素的衍生物95代表藥物：甲基睪丸素

丙酸睪丸素代表藥物：甲基睪丸素丙酸睪丸素96

蛋白同化激素在睪丸素基礎上結(jié)構(gòu)修飾得到，如苯丙酸諾龍蛋白同化激素在睪丸素基礎上結(jié)構(gòu)修飾得到，如苯丙酸諾龍97結(jié)構(gòu)特點：ⅰ．含有19個Cⅱ．A環(huán)的4-3-酮ⅲ．17位羥基、甲基、酯

供分析官能團：A環(huán)4-3-酮結(jié)構(gòu)特點：供分析官能團：983．孕激素黃體酮3．孕激素黃體酮99結(jié)構(gòu)特點：?。?1個Cⅱ．A環(huán)的4-3-酮ⅲ．17位甲酮基供分析官能團：ⅰ．A環(huán)的4-3-酮ⅱ．17位上的甲酮基。結(jié)構(gòu)特點：供分析官能團：1004．雌激素

雌二醇、炔雌醇及衍生物

雌酮4．雌激素雌酮101結(jié)構(gòu)特點：?。?8個Cⅱ．A環(huán)：苯環(huán)，3位上有酚羥基，10位無甲基ⅲ．17位：羥基、乙炔基供分析官能團：A環(huán)的酚羥基及17位的羥基結(jié)構(gòu)特點：供分析官能團：102苯環(huán)280nm紫外分光光度法()2．雄性激素及蛋白同化激素苯環(huán)280nm酸度↑→異煙肼鹽↓苯環(huán)280nmC16無論何種取代基ν↓硫色素反應()BPTTC（RT）用異煙肼比色法測定甾體激素藥物含量時，其溶液的環(huán)境是()ⅰ．含有19個C藥物分析甾體激素類藥物的分析異煙肼比色法()使待測組分光譜位移，避免干擾ⅱ．A環(huán)的4-3-酮口服避孕藥，如炔諾酮、異炔諾酮、安宮黃體酮等A環(huán)有4-3-酮結(jié)構(gòu)；有的第17位有羥基和乙炔基；第10位無甲基。苯環(huán)280nm口服避孕藥，如炔諾103小結(jié)甾體激素碳原子數(shù)A環(huán)17位取代基腎上腺皮質(zhì)激素214-3-酮-醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯環(huán)C3-酚OH-OH-C≡CH小結(jié)甾體激素碳原子數(shù)A環(huán)17位取代基腎上腺皮質(zhì)激素214-104二、鑒別試驗（一）與強酸的呈色反應甾體激素類藥物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）二、鑒別試驗（一）與強酸的呈色反應甾體激素類藥物呈色H2SO105與硫酸顯色反應顯色熒光加水稀釋潑尼松龍深紅絮狀↓灰潑尼松橙黃→藍綠炔雌醚橙紅黃綠↓紅色

炔雌醇橙紅黃綠絮狀↓玫紅醋酸可的松黃或微褪色并澄帶橙清與硫酸顯色反應106(二)官能團的反應腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色四氮唑鹽OHˉ1C17

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α–醇酮基還原性A.呈色反應(二)官能團的反應腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色四氮唑鹽1107腎上腺皮質(zhì)激素藥物Cu2O↓橙紅色堿性酒石酸銅B.沉淀反應Ag↓黑色氨制硝酸銀腎上腺皮質(zhì)激素藥物Cu2O↓橙紅色堿性B.沉淀反應Ag↓108甾酮類激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼甾酮類激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基109異煙腙（黃色）睪酮異煙腙（黃色）睪酮110黃體酮異煙雙腙（黃色）黃體酮異煙雙腙（黃色）111具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物呈色亞硝基鐵氰化鈉間二硝基酚芳香醛3.甲酮基具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物呈色亞硝基鐵氰化鈉3.112C11=O＞C11－OH1C17–α–醇酮基112．甾體激素類藥物的結(jié)構(gòu)中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應的基團()藥物分析甾體激素類藥物的分析解產(chǎn)物無此反應）來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫C3=O＞C17=O、C20=O含水10%→A↓10%在氫化可的松結(jié)構(gòu)的基礎上1，2位間引入一個雙鍵ⅰ．A環(huán)的4-3-酮反應應在強堿性（pH13.RP－HPLC（大多內(nèi)標法）C17–乙炔基主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別口服避孕藥，如炔諾酮、異炔諾酮、安宮黃體酮等黃體酮藍紫色亞硝基鐵氰化鈉其他甾體淡橙色不顯色C11=O＞C11－OH黃體酮藍紫色亞硝基鐵氰化鈉113黃體酮黃體酮114藍紫色藍紫色115有機氟Fˉ有機破壞有機氯Clˉ4.有機鹵素茜素氟藍硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀AgCl↓呈色有機氟Fˉ有機破壞有機氯Clˉ4.有機鹵素茜素氟藍116茜素氟藍藍紫色F-茜素氟藍藍紫色F-117雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羥基雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羥基118含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6.乙炔基↓含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6.乙炔基↓119炔雌醇白炔雌醇白120△KOH(三)制備衍生物測定m.p.△KOH(三)制備衍生物測定m.p.121△△△△122USP、BP、JP均采用解產(chǎn)物無此反應）ⅲ．17位：羥基、乙炔基結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OH雄性激素和蛋白同化激素具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物原理Zimmermann反應B．異煙肼ⅰ．含有21個CD．硫酸（3）可以控制雜質(zhì)的總量；A．雌二醇B．四氮唑鹽法異煙肼比色法()（2）不需對照品；香（四）水解產(chǎn)物的反應USP、BP、JP均采用香（四）水解產(chǎn)物的反應123特臭特臭特臭特臭124△４-3-酮240nm苯環(huán)280nm（五）UV法△４-3-酮240nm苯環(huán)125藥物分析甾體激素類藥物的分析課件126藥物分析甾體激素類藥物的分析課件1273300～3000cm-13000～2700cm-11900～1650cm-11650～1450cm-11000～650cm-1（六）IR法3750～3300cm-1ν3300～3000cm-13000～2700cm-11900128醋酸可的松結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OHC20–酮基、C11–酮基、醋酸酯醋酸可的松結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OH1291630cm-1ν3420cm-亞甲基、角甲基吸收帶1750cm-11232cm-11052cm-11630cm-1ν3420cm-亞甲基、角甲基吸收帶1750130結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OHC17–乙炔基炔諾酮結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OH炔諾酮1311650cm-1ν3300cm-3270cm-1ν1615cm-11650cm-1ν3300cm-3270cm-1ν1615c132結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OH炔雌醇133E．以上都不對適用于非分光光度活性藥物1650～1450cm-1結(jié)構(gòu)特征：△4–3–酮、C17–OH解產(chǎn)物無此反應）E.異煙肼比色法()C．醋酸可的松D．硫酸C．醋酸可的松C．紫外分光光度法10位無甲基HPLC法（類似高低濃度對比法）蛋白同化激素在睪丸素基礎上結(jié)構(gòu)修飾得到，如H2SO4H3PO4HClO4HCl1505cm-1ν3505cm-3300cm-1ν1590cm-13610cm-ν酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動E．以上都不對1505cm-1ν3505cm-3300cm-134（七）TLC法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別方法：對照品法要求供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同。（七）TLC法主要用于甾體激素類藥物制劑的135炔諾酮TLC圖炔諾酮136（八）HPLC法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）方法：對照品法要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。（八）HPLC法主要用于甾體激素類藥物制劑137三、雜質(zhì)檢查（一）其他甾體定義與標示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為“其他甾體”三、雜質(zhì)檢查（一）其他甾體定義138特點（1）可能存在多個甾體雜質(zhì)（2）結(jié)構(gòu)類似2.來源原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物特點2.來源1394.方法（具有一定分離能力）TLC法（高低濃度對比法）HPLC法（類似高低濃度對比法）4.方法（具有一定分離能力）140（1）TLC法（高低濃度對比法）判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色（1）TLC法（高低濃度對比法）判定方法：141特點：（1）簡便易行，不需特殊的儀器；（2）不需對照品；（3）只能控制單個雜質(zhì)的限量；（4）要求雜質(zhì)與主成分的顯色靈敏度接近。特點：142（2）HPLC法（高低濃度對比法）判定方法：規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積（2）HPLC法（高低濃度對比法）判定方法：143特點：（1）需特殊的儀器；（2）不需對照品；（3）可以控制雜質(zhì)的總量；

特點：144（二）游離磷酸地塞米松磷酸鈉氫化可的松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉氫化潑尼松磷酸鈉（三）甲醇和丙酮（二）游離磷酸地塞米松磷酸鈉（三）甲醇和丙酮145（四）雌酮原理Zimmermann反應堿性KOH乙醇高純度（四）雌酮原理Zimmermann反應堿性KO146硒四、來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫劇毒原理方法硒四、來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫劇毒原理方147四、含量測定（一）UV法△４-3-酮240nm（±）腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯環(huán)280nm（±）雌激素四、含量測定（一）UV法△４-3-酮240nm（±）148（二）反應分光光度法1.適用于非分光光度活性藥物2.使待測組分光譜位移，避免干擾3.增加測定靈敏度4.增加選擇性弱、非分光光度活性藥物強分光光度活性藥物化學反應（二）反應分光光度法1.適用于非分光光度活性藥物弱、非分光149腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強還原性1.原理OH-[還原]四氮唑比色法腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強還原性1.原理150[O]OH-分子重排[O]OH-分子重排151三苯甲瓚↓深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）三苯甲瓚↓深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）152藍四氮唑（BT）藍四氮唑（BT）153雙甲瓚（暗藍）雙甲瓚（暗藍）1542.方法ChPTTC（RT）BPTTC（RT）USPBT對照品法40～45′暗2.方法ChPTTC（RT）對照品法40～1553.討論（1）基團對反應速度的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16無論何種取代基ν↓3.討論（1）基團對反應速度的影響C11=O＞C1156（2）溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→幾無反應—無醛無水乙醇醛→A↑—無水乙醇（2）溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓1157（3）O2與光線的影響反應過程反應產(chǎn)物怕光→避光、快速O2影響顏色強度和穩(wěn)定性→隔絕空氣、快速、充N2（3）O2與光線的影響反應過程怕光→避光、快速O2影響顏色158（4）堿的種類及加入順序反應應在強堿性（pH13.75）條件下進行以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳加入順序：（4）堿的種類及加入順序反應應在強堿性（pH13.75）加入159（5）溫度與時間t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑→%↓ChP25℃40～45′BP30℃1h（5）溫度與時間t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑→%↓ChP160ⅳ．其它：10位、13位-甲基，USPBTE．重氮苯磺酸雄性激素和蛋白同化激素ⅱ．A環(huán)的4-3-酮（1）需特殊的儀器；適用于非分光光度活性藥物C20–酮基、C11–酮基、醋酸酯RP－HPLC（大多內(nèi)標法）解產(chǎn)物無此反應）以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳硫色素反應()B．異煙肼A．強酸性A．氨制硝酸銀4.特點：缺點影響因素太多優(yōu)點測定結(jié)果能指示藥品的穩(wěn)定性（氧化及降解產(chǎn)物無此反應）ⅳ．其它：10位、13位-甲基，4.特點：161腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基1.原理HCl（縮合）異煙肼比色法腎上腺皮質(zhì)激素、C3－酮基1.原理HCl（縮合）異煙肼比162異煙腙（黃色）異煙腙（黃色）1632.方法暗45′對照品法2.方法暗45′對照品法1643.討論反應速度（1）C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反應反應專屬性C3－酮基3.討論反應速度（1）C3=O＞C17=O、C2165（