中藥分析中供試品的制備

關(guān)于中藥分析中供試品的制備第一頁，共六十頁，2022年，8月28日2講授提綱第一節(jié)取樣第二節(jié)樣品的提取第三節(jié)樣品的凈化第四節(jié)樣品提取液的濃縮第五節(jié)樣品的衍生化第六節(jié)不同類型中藥樣品的預(yù)處理特點第二頁，共六十頁，2022年，8月28日3最大限度地保留被測成分，除去干擾物質(zhì)，將被測定成分濃縮至高于分析方法最小檢測限所需濃度第三頁，共六十頁，2022年，8月28日4第一節(jié)取樣取樣鑒別含量測定檢查提取純化樣品粉碎科學(xué)性、真實性、代表性均勻合理第四頁，共六十頁，2022年，8月28日5一、抽樣中藥材和飲片的抽樣中藥提取物的抽樣中藥制劑的抽樣第五頁，共六十頁，2022年，8月28日6

二、樣品的粉碎第六頁，共六十頁，2022年，8月28日7三、取樣保留一半數(shù)量作留樣觀察,時間為半年或一年第七頁，共六十頁，2022年，8月28日8第二節(jié)樣品提取第八頁，共六十頁，2022年，8月28日9供試品溶液的制備

取本品粉末(過二號篩)約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇10ml，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)20分鐘，濾過，濾渣和濾紙再加甲醇10ml，同法超聲處理一次，濾過，加甲醇適量洗滌2次，合并濾液和洗液，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。（荊芥項下胡薄荷酮含量測定）第九頁，共六十頁，2022年，8月28日10第二節(jié)樣品提取第十頁，共六十頁，2022年，8月28日11供試品溶液的制備

取本品中粉約4g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10ml……（黃芪中黃芪甲苷）第十一頁，共六十頁，2022年，8月28日12第二節(jié)樣品提取第十二頁，共六十頁，2022年，8月28日13超臨界流體萃取法（CO2）設(shè)備加壓溶劑萃取法設(shè)備微波輔助萃取法設(shè)備第十三頁，共六十頁，2022年，8月28日14不同分析目的樣品的提取實驗?zāi)康姆椒ㄒ蟪Ｓ梅椒ü╄b別用針對待檢成分的溶解性能選擇適宜的提取溶劑，提取方法力求簡便、易操作超聲，加熱回流提取，浸漬法供雜質(zhì)檢查用無機雜質(zhì)檢查用消化法；有機雜質(zhì)的檢查可按常規(guī)的鑒別或含量測定的方法提取定量雜質(zhì)：定量方法定性雜質(zhì)：鑒別方法供含量測定用特別強調(diào)待測成分要提取完全超聲處理法、加熱回流法和連續(xù)回流法第十四頁，共六十頁，2022年，8月28日15第三節(jié)樣品的分離凈化沉淀法蒸餾法液-液萃取法色譜法消化法第十五頁，共六十頁，2022年，8月28日161、沉淀法

利用某些試劑與被測成分或雜質(zhì)生成沉淀，分離沉淀或保留溶液以得到精制的方法例水蘇堿+雷氏鹽生物堿雷氏鹽沉淀H+第十六頁，共六十頁，2022年，8月28日172、萃取法

利用被測成分與干擾成分溶解性能的不同進行分離，使物質(zhì)從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，將測定組分提取出來的方法例生物堿鹽氨水H2O第十七頁，共六十頁，2022年，8月28日18正丁醇

——用于皂苷類醋酸乙酯——用于黃酮類三氯甲烷——用于生物堿類乙醚、石油醚——用于揮發(fā)油（1）萃取溶劑的選擇直接萃?。旱谑隧摚擦?，2022年，8月28日19（2）水相pH的選擇酸性成分——

比其pKa低1~2個pH單位堿性成分——

比其pKa高1~2個pH單位第十九頁，共六十頁，2022年，8月28日20（3）儀器和提取次數(shù)（4）乙醇提取液——先揮去乙醇（5）防止和消除乳化分液漏斗鑒別——1次含量測定——3~4次第二十頁，共六十頁，2022年，8月28日21離子對萃?。狠腿。x子對）有機相有機酸生物堿+離子對試劑（離子對）水相

第二十一頁，共六十頁，2022年，8月28日22例，華山參片中生物堿含量測定取本品40片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密量取適量（約相當(dāng)于12片的重量），置具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0）25mL，振搖5分鐘，放置過夜，用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，精密量取續(xù)濾液2mL，置分液漏斗中，精密加枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0）10mL，再精密加入0.04%溴甲酚綠溶液2mL，搖勻，用10mL三氯甲烷振搖提取5分鐘，待溶液完全分層后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷濕潤的濾紙濾入25mL量瓶中，再用三氯甲烷提取3次，每次5mL，依次濾入量瓶中，并用三氯甲烷洗滌濾紙，濾入量瓶中，加三氯甲烷至刻度。第二十二頁，共六十頁，2022年，8月28日233、色譜法（1）保留測定組分在柱上，洗去雜質(zhì)，再用適當(dāng)溶劑洗下組分（2）保留雜質(zhì)于柱上---簡便，精制效果好，被普遍使用第二十三頁，共六十頁，2022年，8月28日24常用固定相硅膠氧化鋁鍵合相硅膠大孔吸附樹脂-皂苷類聚酰胺-黃酮類硅藻土、纖維素200-100目,1-10g機理：吸附第二十四頁，共六十頁，2022年，8月28日25例

燒傷靈酊中大黃素的含量測定【處方】虎杖黃柏冰片精密量取本品2mL，加硅膠（色譜用，60～160目）1g，置溫水浴上蒸干，加在硅膠柱（色譜用，60～160目，2g，內(nèi)徑為1.7cm）上，用石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（100:100:2）混合液90mL分次減壓洗脫，收集洗脫液，置100mL量瓶中，并用混合溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。第二十五頁，共六十頁，2022年，8月28日26例復(fù)脈定膠囊中黃芪含量測定【處方】黨參黃芪遠(yuǎn)志桑椹川芎

取本品20粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，混勻，取約2g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40mL，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40mL，合并正丁醇液，用氨試劑充分洗滌2次，每次40mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，通過D101型大孔樹脂柱（內(nèi)徑為1.5cm，柱高為12cm），用水50mL洗脫，再用40%乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇100mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。第二十六頁，共六十頁，2022年，8月28日274、固相萃取法通過吸附劑與目標(biāo)化合物之間的相互作用來保留/吸附疏水作用：C18、C8、silica離子交換作用：SAX,SCX,COOH，NH2等物理吸收：Florsil、Alumina等第二十七頁，共六十頁，2022年，8月28日28Sep-PakC18柱：30-60um一般操作程序：（1）柱的活化（2）上樣（3）清洗（4）洗脫第二十八頁，共六十頁，2022年，8月28日29例新雪顆粒中梔子的鑒別【處方】磁石石膏滑石南寒水石硝石梔子等取本品1.5g，研細(xì)，加正己烷10mL，充分振搖，放置30分鐘，濾過，濾渣加甲醇10mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水5mL使溶解，離心15分鐘（轉(zhuǎn)速為每分鐘3000轉(zhuǎn)），上清液通過十八烷基硅烷鍵合硅膠固相萃取小柱（500mg），以水10mL洗脫，棄去洗液，再用甲醇15mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。第二十九頁，共六十頁，2022年，8月28日305、固相微萃取法

SPME是在SPE基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，保留了SPE的優(yōu)點，克服了SPE樣品預(yù)處理技術(shù)的缺陷，即無需柱填充物和使用溶劑解吸被測組分的前處理，它能直接從樣品中采集揮發(fā)和非揮發(fā)性的化合物，然后直接在GC、GC/MS、HPLC和HPCE上分析，集采樣、提取、濃縮、進樣于一體。優(yōu)點：費用低、操作簡單、省時、環(huán)保缺點：離子交換作用：SAX,SCX,

COOH，

NH2等第三十頁，共六十頁，2022年，8月28日31第四節(jié)樣品提取液的濃縮方法適用成分適用檢測備注水浴蒸發(fā)熱穩(wěn)定性好的成分薄層自然揮散小體積提取液或揮發(fā)性強溶劑，乙醚薄層減壓蒸發(fā)對熱不穩(wěn)定的樣品殘留分析溫度低、速度快氣流吹蒸法少量液體，氮吹法特別適用于結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、易氧化的化學(xué)成分定量氮氣流可以防止氧化冷凍干燥熱不穩(wěn)定的生物樣品定量干燥后的物料保持原來的化學(xué)組成和物理性質(zhì)；熱量消耗比其他干燥方法少第三十一頁，共六十頁，2022年，8月28日32例當(dāng)歸流浸膏的鑒別取本品3mL，加1%碳酸氫鈉溶液50mL，充分振蕩，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。第三十二頁，共六十頁，2022年，8月28日33第四節(jié)樣品的衍生化種類衍生化目的衍生化方法提高成分的揮發(fā)性增加成分的穩(wěn)定性生成非對映異構(gòu)體硅烷化酰化烷基化不對稱衍生氣相例氣相色譜法測定鴉膽子中油酸的含量

－甲酯化

校正因子測定：取油酸對照品適量，精密稱定，加正己烷制成每1mL含3mg的溶液。精密量取5mL，置10mL具塞試管中，用氮氣吹干，加入0.5mol/L氫氧化鉀甲醇溶液2mL，置60℃水浴中皂化25分鐘，至油珠全部消失，放冷，加15%三氯化硼乙醚溶液2mL，置60℃水浴中甲酯化2分鐘，第三十三頁，共六十頁，2022年，8月28日34續(xù)例氣相色譜法測定鴉膽子中油酸的含量

放冷，精密加入正己烷2mL，振搖，加飽和氯化鈉溶液1mL，振搖，靜置，取上層溶液作為對照品溶液。精密稱取苯甲酸苯酯適量，加正己烷制成每1mL含8mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。精密量取對照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各1mL，搖勻，吸取1μL，注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子。第三十四頁，共六十頁，2022年，8月28日35種類衍生化目的反應(yīng)要求提高檢測的靈敏度改善色譜分離效果反應(yīng)要求不苛刻，且迅速定量單一衍生化產(chǎn)物，副產(chǎn)物不干擾衍生化試劑易得、通用性好高效液相衍生化方法在線離線柱前柱后紫外衍生化熒光衍生化非對映衍生化第三十五頁，共六十頁，2022年，8月28日36例16，HPLC法測定阿膠中氨基酸的含量對照品溶液的制備：取L-羥脯氨酸對照品、甘氨酸對照品、丙氨酸對照品、L-羥脯氨酸對照品適量，精密稱定，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1mL分別含L-羥脯氨酸80μg、甘氨酸0.16mg、丙氨酸70μg、L-脯氨酸0.12mg的混合溶液，即得。供試品溶液的制備：取本品粗粉約0.25g，精密稱定，置25mL量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液20mL，超聲處理（功率500W，頻率40Hz）30分鐘，放冷，加0.1mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻。精密量取2mL，置5mL安瓿中，加鹽酸2mL，150℃水解1小時，放冷，移至蒸發(fā)皿中，用水10mL分次洗滌，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加0.1mol/L鹽酸溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得。第三十六頁，共六十頁，2022年，8月28日37精密量取上述對照品溶液和供試品溶液各5mL，分別置25mL量瓶中，各加0.1mol/L異硫氰酸苯酯（PITC）的乙腈溶液2.5mL，1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5mL，搖勻，室溫放置1小時后，加50%乙腈至刻度，搖勻。取10mL，加正己烷10mL，振搖，放置10分鐘，取下層溶液，過濾，取續(xù)濾液，即得。測定法：分別精密吸取衍生化后的對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測定，即得。第三十七頁，共六十頁，2022年，8月28日38第六節(jié)不同類型中藥樣品的預(yù)處理特點固體中藥樣品的預(yù)處理特點半流體中藥樣品的預(yù)處理特點液體中藥樣品的預(yù)處理特點第三十八頁，共六十頁，2022年，8月28日396.1固體中藥樣品的預(yù)處理特點第三十九頁，共六十頁，2022年，8月28日40例天王補心丸中五味子的含量測定【處方】丹參當(dāng)歸石菖蒲黨參茯苓五味子等取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取適量，精密稱定，精密加入兩倍量的硅藻土，研勻，取約4.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率180W，頻率50kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。第四十頁，共六十頁，2022年，8月28日416.1固體中藥樣品的預(yù)處理特點第四十一頁，共六十頁，2022年，8月28日42例復(fù)方丹參片中丹參、冰片的鑒別【處方】丹參三七冰片取本品5片，糖衣片除去糖衣，研碎，加乙醚10mL，超聲處理5分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2mL使溶解，作為供試品溶液。

例雙黃連顆粒中金銀花、黃芩的鑒別【處方】金銀花黃芩連翹取本品1g，加75%乙醇溶液10mL，搖勻，置水浴中加熱振搖使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。第四十二頁，共六十頁，2022年，8月28日436.1固體中藥樣品的預(yù)處理特點第四十三頁，共六十頁，2022年，8月28日44例

雙黃連栓中金銀花、黃芩的鑒別【處方】金銀花黃芩連翹取本品1粒，加水20mL，置溫水浴中，用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0～7.5，使熔化，置冷處使基質(zhì)凝固，濾過，取濾液10mL，加無水乙醇4mL，至水浴中振搖數(shù)分鐘，放置，取上清液作為供試品溶液。例

九分散中士的寧的含量測定【處方】馬錢子粉麻黃乳香（制）沒藥（制）

取本品約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加三氯甲烷20mL與濃氨試液1mL，輕輕搖勻，稱重，于室溫放置24小時，再稱重，補足三氯甲烷減失的重量，充分振搖，濾過。精密量取續(xù)濾液10mL，用硫酸溶液（3→100）分次提取至生物堿提盡，合并硫酸液，加濃氨試液使呈堿性，用三氯甲烷分次提取，合并三氯甲烷液，蒸干，精密加三氯甲烷5mL使殘渣溶解，作為供試品溶液。第四十四頁，共六十頁，2022年，8月28日456.1固體中藥樣品的預(yù)處理特點第四十五頁，共六十頁，2022年，8月28日46例復(fù)方丹參滴丸中丹參的鑒別【處方】丹參三七冰片取本品15丸，置離心管中，加水1mL和稀鹽酸2滴，振搖使溶解，加入乙酸乙酯3mL，振搖1分鐘后離心2分鐘，取上清液作為供試品溶液。例藿香正氣軟膠囊中蒼術(shù)的鑒別【處方】蒼術(shù)陳皮厚樸白芷茯苓大腹皮生半夏甘草浸膏等取本品4粒的內(nèi)容物，加硅藻土1g，研勻，加環(huán)己烷20mL，超聲處理15分鐘，過濾，濾液低溫蒸干，殘渣加正己烷2mL使溶解，作為供試品溶液。第四十六頁，共六十頁，2022年，8月28日476.2半流體中藥樣品的預(yù)處理特點第四十七頁，共六十頁，2022年，8月28日48例阿膠三寶膏中黃芪的含量測定【處方】阿膠大棗黃芪取本品10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入等量的硅藻土，拌勻，在60℃烘干（適時攪拌），放冷，精密加入甲醇100mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50mL，蒸干，殘渣加水25mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，每次25mL，合并正丁醇液，正丁醇液用氨試液洗滌2次，每次25mL，合并氨試液，氨試液再用水飽和的正丁醇25mL提取，合并正丁醇提取液，回收正丁醇至干，殘渣加甲醇適量使溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。第四十八頁，共六十頁，2022年，8月28日49例刺五加水浸膏浸出物測定【處方】刺五加取本品2.5g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加水25mL使溶散（必要時以玻璃棒攪拌使溶散），再精密加水25mL沖洗瓶壁及玻璃棒，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL，置己干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。第四十九頁，共六十頁，2022年，8月28日506.2半流體中藥樣品的預(yù)處理特點第五十頁，共六十頁，2022年，8月28日516.3液體中藥樣品的預(yù)處理特點第五十一頁，共六十頁，2022年，8月28日52例藿香正氣水中甘草的鑒別【處方】蒼術(shù)陳皮厚樸（姜制）白芷茯苓甘草浸膏等取本品30mL，蒸至無醇味，用乙醚振搖提取2次，每次10mL，棄去乙醚液，用正丁醇振搖提取3次，每次10mL，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次10mL，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶液2mL使溶解，作為供試品溶液。第五十二頁，共六十頁，2022年，8月28日536.3液體中藥樣品的預(yù)處理特點第五十三頁，共六十頁，2022年，8月28日54例

注射用雙黃連（凍干）中金銀花的含量測定【處方】連翹金銀花黃芩取本品60mg，精密稱定，置50mL棕色量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。例小兒止咳糖漿中氯化銨的含量測定【處方】甘草流浸膏桔梗流浸