焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉移酶（PFP）活性檢測試劑盒說明書-紫外分光光度法UPLC-MS-4270

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第3頁，共3頁焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉移酶（PFP）活性檢測試劑盒說明書紫外分光光度法注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。貨號：UPLC-MS-4270規(guī)格：50T/48S產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體55mL×1瓶4℃保存試劑一液體40mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1瓶-20℃保存試劑三粉劑×1瓶-20℃保存試劑四粉劑×2支4℃保存試劑五粉劑×2支-20℃保存試劑六液體60μL×1支4℃保存溶液的配制：16mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周，禁止反復凍融。26mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周，禁止反復凍融。3、試劑四：臨用前取1支加入0.3mL蒸餾水溶解備用，4℃保存一周。4、試劑五：臨用前取1支加入0.3mL蒸餾水溶解備用，-20℃分裝保存一周，禁止反復凍融。5、試劑六：臨用前加入0.6mL蒸餾水溶解備用，4℃保存一周，也可按比例現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說明：-6-磷酸-1-磷酸轉移酶（PFP，EC0）激酶一樣催化果糖-6-PEP重要作用。PFP6-1,6-二磷酸果糖，它在醛縮酶和磷酸丙糖異構酶的作用下轉變?yōu)榱姿岫u丙酮，α-NADH3-PFP的活性的高低。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1提取液體積(mL)（0.11mL提取液加入提取液，4℃，20000g15min，取上清置冰上待測；2（104個（mL500~10001（5001mL提取液冰浴超聲波破碎細胞（300W373min4℃，20000g15mn，取上清置冰上待測；3、液體：直接檢測。二、測定步驟1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。2、操作表：試劑名稱（μL）測定管空白管試劑一670670試劑二100100試劑三100100試劑四1010試劑五1010試劑六1010樣本100-蒸餾水-100充分混勻于1mL石英比色皿中測定37℃條件下，340nm處初始值A1和30min的吸光值A2，分別記為A1測定管、A1空白管、A2測定管，A2ΔA=（A1測定管-A2測定管）-（A1空白管-A2空白管。注：也可將試劑一、二、三、四、五、六按操作表比例，配制成工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用；空白管只需做1-2次。三、焦磷酸：果糖6-磷酸-1磷酸轉移酶活性的計算按照樣本蛋白濃度計算1nmolNADHPFP（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(V樣×Cpr)÷T=53.59×ΔA÷Cpr按照樣本質量計算酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。PFP（U/g質量）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V提取)÷T=53.59×ΔA÷W按照細胞數(shù)量計算酶活單位定義：每104個細胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。PFP（U/104cell）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(V樣×細胞數(shù)量÷V提取)÷T=53.59×ΔA÷細胞數(shù)量按照液體體積計算1nmolNADHPFP（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷V樣÷T=53.59×ΔAV0.001摩爾消光