植物類黃酮含量檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4292

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微量法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶（自備）常溫保存試劑一液體2mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體2mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體15mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液液體15mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、提取液：自備60%乙醇，常溫保存；2、標(biāo)準(zhǔn)品：10mg蘆丁。臨用前加入1mL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制成10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液備用，2-8℃保存四周。產(chǎn)品說明：類黃酮是一類多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對人體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內(nèi)羥自由基，預(yù)防癌癥等作用。在堿性亞硝酸鹽溶液中，類黃酮與鋁離子形成在470nm處有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物，測定樣本提取液在470nm處的吸光值，即可計算樣本類黃酮含量。Flavonoid+NaNO2+Al(NO3)3 RedChelate(470nm)技術(shù)指標(biāo)：最低檢出限：0.00818mg/mL線性范圍：0.0097-5mg/mL2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、烘箱、粉碎儀、30-50目篩、超聲清洗儀、60%乙醇、臺式離心機、研缽、蒸餾水、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）30-500.1g1mL300W60℃30min。12000rpm，25℃10min1mL二、測定步驟分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至470nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。10mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋至250.31250.156250.078、0.039mg/mL備用，具體稀釋可參考下表。序號稀釋前濃度（mg/mL）標(biāo)準(zhǔn)液體積（μL）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液體積（μL）稀釋后濃度（mg/mL）1102507502.522.52002001.2531.252002000.62540.6252002000.312550.31252002000.1562560.156252002000.07870.0782002000.03980.0392002000.02備注：實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需60μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。操作表試劑名稱對照管測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本待測液（μL）6060--標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL）--60-蒸餾水（μL）60試劑一（μL）15151515渦旋混勻，室溫靜置5min試劑二（μL）-151515渦旋混勻，室溫靜置5min試劑三（μL）12012012012060%乙醇（μL）10590909037℃水浴鍋/45min，10000g10min200μL微量玻璃比色皿/96A470ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A1-2次。三、類黃酮含量計算根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。按樣本質(zhì)量計算類黃酮含量（mg/g質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W。按樣本蛋白濃度計算類黃酮含量（mg/mgprot）=x×V提取÷(Cpr