果蔬組織中乙醛、乙醇含量的測(cè)定

果蔬組織中乙醛、乙醇含量的測(cè)定Ⅰ.氣相色譜法測(cè)定乙醛、乙醇含量一、目的要求學(xué)習(xí)利用氣相色譜法測(cè)定果蔬組織中乙醛、乙醇含量的原理和方法。二、基本原理利用乙醛（Acetaldehyde）和乙醇（Ethanol）的易揮發(fā)性，頂空收集果蔬組織釋放的乙醛、乙醇?xì)怏w，通過氣相色譜柱分離后，可以進(jìn)行檢測(cè)。三、材料、儀器及試劑（一）材料蘋果、梨、鮮棗。（二）儀器及用具研缽、電子天平、容量瓶（100mL、1000mL）、樣品瓶（20mL，帶密封橡膠塞）、移液器、氣相色譜儀、色譜工作站、恒溫箱、計(jì)時(shí)器、漏斗、濾紙。（三）試劑40%乙醛、無水乙醇，均為分析純?cè)噭?。四、?shí)驗(yàn)步驟（一）氣相色譜配置及工作條件氣相色譜配置有氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）和Carbowax(5%)-Carbopac60/80填充柱，柱長2m，內(nèi)徑2mm。載氣N2流速20mL/min。進(jìn)樣溫度150℃，柱溫85℃，檢測(cè)溫度200℃。（二）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用蒸餾水分別配制0、20、40、60、80、100μL/L（v/v）的乙醛或乙醇溶液。取5.0mL乙醛或乙醇各溶液，分別移入到20mL樣品瓶中，用橡膠塞密封后在60℃保溫1h，頂空取1.0mL氣體，在氣相色譜儀進(jìn)樣口上進(jìn)樣測(cè)定，確定乙醛或乙醇的出峰時(shí)間，制作乙醛或乙醇溶液濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線。（三）提取稱取20.0g果肉樣品，加10.0mL蒸餾水研磨后，轉(zhuǎn)入到100mL容量瓶中，用蒸餾水沖洗研缽，一并轉(zhuǎn)入容量瓶，定容至刻度線，提取10min后，過濾，濾液用于乙醛和乙醇含量的測(cè)定。（四）測(cè)定取5.0mL提取液，移入到20mL小瓶中，用橡膠塞密封后在60℃保溫1h，頂空取1.0mL氣體進(jìn)樣用氣相色譜測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用面積外標(biāo)法，計(jì)算樣品提取液中乙醛或乙醇的濃度。重復(fù)三次。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算根據(jù)樣品提取液中乙醛或乙醇的濃度，計(jì)算每克果蔬組織中含有的乙醛或乙醇的微克數(shù)，表示為μg/gFW。計(jì)算公式：式中：C——利用氣譜法測(cè)的樣品液中乙醛或乙醇的濃度，μL/L；V——樣品提取液體積，mL；W——樣品重量，g；六、注意事項(xiàng)1．還可選擇弱極性毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行測(cè)定。2．本實(shí)驗(yàn)中，將提取液移入到密閉樣品瓶中，在60℃保溫后形成乙醛或乙醇蒸汽，然后頂空取氣進(jìn)樣測(cè)定。根據(jù)峰面積和標(biāo)準(zhǔn)溶液中乙醛或乙醇濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用面積外標(biāo)法確定樣品提取液中乙醛或乙醇含量。Ⅱ.重鉻酸鉀氧化法測(cè)定乙醇含量一、目的要求學(xué)習(xí)利用重鉻酸鉀氧化、滴定法測(cè)定果蔬組織中乙醇含量的原理和方法。二、基本原理一般剛采收的果實(shí)乙醇含量極少（約0.04%左右），在貯藏中乙醇的含量逐漸增加。蘋果中乙醇含量達(dá)到0.3%時(shí)就能引起果實(shí)的傷害。因此，果蔬中乙醇的積累和變化情況，可以作為判斷貯藏效果的依據(jù)。重鉻酸鉀氧化法是測(cè)定果蔬中微量乙醇的常用方法。在濃硫酸存在的條件下，過量的重鉻酸鉀能將乙醇氧化為乙酸，而自身被還原成鉻的硫酸鹽。氧化乙醇后剩余的重鉻酸鉀可與碘化鉀發(fā)生反應(yīng)，生成游離的碘。游離的碘再被硫代硫酸鈉滴定還原，根據(jù)滴定時(shí)消耗的硫代硫酸鈉的量，可以推導(dǎo)、計(jì)算出氧化乙醇所消耗的重鉻酸量，從而計(jì)算出果蔬中乙醇的含量。反應(yīng)式如下：3CH3CH2OH+2K2Cr2O7+8H2SO4→3CH3COOH+2Cr2(SO4)3+2K2SO4+11H2OK2Cr2O7+6KI+7H2SO4→4K2SO4+Cr2(SO4)3+7H2O+3I22Na2S2O3+I2→2NaI+Na2S4O6三、材料、儀器及試劑（一）材料蘋果、棗、梨、柑桔等。（二）儀器及用具電子天平、研缽、燒杯、容量瓶（100、1000mL）、圓底燒瓶（250mL）、移液管（5mL、10mL、20mL）、酒精燈、石棉網(wǎng)、鐵架臺(tái)、漏斗、蒸餾頭、冷凝管、磨口三角瓶（250mL、500mL）、滴定管（25mL）、量筒（20mL）、洗瓶、橡膠塞。（三）試劑1．濃硫酸。2．碘化鉀。3．0.5%淀粉溶液。4．0.05mol/L標(biāo)準(zhǔn)重鉻酸鉀溶液：精確稱取14.71g重鉻酸鉀（K2Cr2O7，分子量294.21），用蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶，稀釋至刻度，混勻。5．0.05mol/L硫代硫酸鈉溶液：稱取12.4g硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O，分子量248.18），用蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶，稀釋至刻度，混勻。硫代硫酸鈉溶液的標(biāo)定：吸取20mL標(biāo)準(zhǔn)重鉻酸鉀溶液置于500mL的三角瓶中，緩緩加入5mL濃硫酸及2.00g碘化鉀，蓋上瓶塞后于暗處放置5min。取出后加入200mL蒸餾水搖勻，用待標(biāo)定的硫代硫酸鈉溶液進(jìn)行滴定。當(dāng)溶液由橙色轉(zhuǎn)為黃色時(shí)，加入5mL0.5%淀粉溶液搖勻，繼續(xù)（緩慢地）滴定至溶液由蘭色變成淺綠色為止。記錄硫代硫酸鈉用量，根據(jù)它與碘的反應(yīng)式，計(jì)算出硫代硫酸鈉溶液的摩爾濃度。四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）乙醇的提取稱取20.0g果蔬樣品置于研缽中，研磨后轉(zhuǎn)入250mL圓底燒瓶中，用150mL蒸餾水洗滌研缽，將洗滌液一并轉(zhuǎn)入燒瓶中。將燒瓶固定在鐵架臺(tái)上，安裝上蒸餾頭、冷凝管后，用一個(gè)100mL容量瓶收集冷凝管中的蒸餾流出液。冷凝管的進(jìn)水口、出水口通過橡膠管分別與自來水龍頭和水槽連接。安裝好后，放上石棉網(wǎng)，在瓶底加熱煮沸混合液，收集蒸餾液于容量瓶中，至容量瓶中液面達(dá)到刻度線為止，蓋上瓶塞，混合均勻。（二）乙醇的氧化吸取20mL標(biāo)準(zhǔn)重鉻酸鉀溶液置于250mL的磨口三角瓶中，緩緩加入5mL濃硫酸，再加入10mL蒸餾液，振蕩混勻。連接立式冷凝管，安裝在鐵架臺(tái)上，放上石棉網(wǎng)上加熱回流，使瓶中溶液輕微煮沸10min。（三）游離碘的生成待回流過的溶液冷卻后，用約100mL蒸餾水沖洗冷凝管，并全部無損地轉(zhuǎn)入到原250mL的磨口三角瓶。稱取1.0g碘化鉀加入到該磨口三角瓶中，振蕩，塞上瓶塞，放置暗處保持5min。（四）滴定從暗處取出三角瓶后，自滴定管中滴加0.05mol/L硫代硫酸鈉溶液。當(dāng)三角瓶中溶液的顏色由橙色變?yōu)闇\黃色時(shí)，加入5mL0.5%淀粉溶液。然后繼續(xù)滴定，至溶液由蘭色變?yōu)闇\綠色時(shí)為止，記下消耗的硫代硫酸鈉溶液的體積。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算1．將測(cè)定的數(shù)據(jù)填入下列表重復(fù)次數(shù)樣品重量W(g)提取液體積V(mL)吸取提取液體積VS(mL)重鉻酸鉀溶液用量V0(mL)硫代硫酸鈉溶液消耗量V1(mL)硫代硫酸鈉溶液標(biāo)定濃度C1(mol/L)樣品中乙醇含量(%)計(jì)算值平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差1232．計(jì)算結(jié)果根據(jù)硫代硫酸鈉滴定消耗量，從反應(yīng)式中推導(dǎo)出每克鮮重（FW）果蔬組織中乙醇含量（以