維生素K3的安全性評價課件

維生素K3的安全性評價維生素K3的安全性評價1化學藥物刺激性、過敏性和溶血性概述化學藥物制劑經眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、關節(jié)腔、皮膚、直腸、陰道、靜脈、動脈、肌肉、皮下、靜脈旁和鞘內等非口服途徑給藥，對用藥局部產生的毒性（如刺激性和過敏性等）和/或對全身產生的毒性（如過敏性和溶血性等）。它是臨床前安全性評價的組成部分。藥物的活性成分及其代謝物、輔料、有關物質及理化性質（如pH值、滲透壓等）均有可能引起刺激性和/或過敏性和/或溶血性的發(fā)生，而嚴重的毒性可以影響用藥的安全有效性，因此藥物在臨床應用前應研究其制劑在給藥部位使用后引起的局部和/或全身毒性，以提示臨床應用時可能出現(xiàn)的毒性反應、毒性靶器官、安全范圍、臨床研究監(jiān)測指標并為臨床解毒或解救措施提供參考，保障臨床用藥的安全有效?；瘜W藥物刺激性、過敏性和溶血性概述化學藥物制劑經2實驗項目1.刺激性（皮膚刺激性試驗；眼刺激性試驗；注射給藥部位刺激性試驗：血管刺激性實驗、肌肉刺激性實驗。）2.過敏性3.溶血性實驗試驗設計應遵循隨機、對照、重復的原則。試驗用藥物應與用于人體的制劑一致觀察部位應選擇給藥部位，同時考慮選擇周圍組織或可能暴露于受試藥物的部位。實驗項目1.刺激性（皮膚刺激性試驗；眼刺激性試驗；注射給藥部3刺激性試驗刺激性是指非口服藥物制劑給藥后對給藥部位產生的可逆性炎癥改變，若給藥部位產生了不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性?！緦嶒災康摹坑^察動物局部接觸受試物后所產生的刺激反應，提示藥物臨床應用后給藥部位可能出現(xiàn)的炎癥反應、組織的變性和壞死等不良反應。刺激性試驗刺激性是指非口服藥物制劑給藥后對給藥部位產生的可逆4刺激性試驗設計中應考慮的問題⒈實驗動物的選擇依據(jù)觀察指標和擬采用試驗模型選擇試驗動物，一般每個試驗選擇一種動物進行評價。⒉給藥的頻率與期限給藥頻率和期限應依據(jù)擬定臨床應用的情況來決定。重復給藥試驗，一般每天給藥一次，給藥期限最長不超過4周。偶爾給藥的受試物可用單次給藥的方法進行試驗。⒊可逆性觀察為明確毒性反應的恢復情況，建議進行停藥后恢復期的觀察。局部毒性反應的可逆性評價應包括局部及相關部位的反應。刺激性試驗設計中應考慮的問題⒈實驗動物的選擇依據(jù)觀察指標和5刺激性試驗設計中應考慮的問題⒋受試物受試物應與用于人體的制劑一致。⒌對照組以溶媒和/或賦形劑作為陰性對照。必要時采用陽性對照或已上市制劑。⒍劑量劑量設計主要應該考慮受試物濃度和總劑量。一般采用與臨床制劑相同濃度，設一個劑量組，可以通過改變給藥頻率進行劑量的調整，但皮膚給藥刺激性研究通過增加涂敷厚度或加大涂布面積來提高給藥劑量是不合適的。必要時應該進行不同濃度的刺激性試驗。刺激性試驗設計中應考慮的問題⒋受試物受試物應與用于人體的制6刺激性試驗設計中應考慮的問題⒎給藥方式7.1給藥方案應盡量與臨床用藥方案一致。7.2給藥途徑和給藥部位應與臨床用藥一致。7.3設計給藥容積，給藥速率和給藥頻率時，應考慮所選用動物模型給藥部位的解剖和生理特點。⒏只要相互之間不影響且全身耐受性許可，則可在同一動物身上進行不同給藥途徑的刺激性試驗研究，并可在對側進行對照試驗。刺激性試驗設計中應考慮的問題⒎給藥方式7刺激性試驗皮膚刺激性試驗

皮膚刺激性是指動物經皮膚給予受試物后在皮膚上產生的可逆性炎癥改變，若產生了不可逆性的組織損傷則為皮膚腐蝕性。

目的觀察動物皮膚接觸受試物后所產生的刺激反應，提示藥物臨床應用后皮膚可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和壞死等不良反應。

刺激性試驗皮膚刺激性試驗8皮膚刺激性試驗試驗方法試驗動物：首選家兔，動物數(shù)4－8只，雌、雄各半。應設賦形劑對照，采用同體左右側自身對比法。試驗前24小時對給藥區(qū)（通常在背部）進行脫毛處理（可剪、剃或用適宜的脫毛劑）。去毛范圍左、右各3cm×3cm。給藥前應檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜進行試驗。但若需考察破損皮膚的刺激性，則可在用藥部位用砂紙磨或劃“井”字并以滲血為度。皮膚刺激性試驗試驗方法9皮膚刺激性試驗試驗方法受試物的給予：取受試物0.5ml直接涂布于一側已去毛的皮膚上，然后用二層紗布（2.5cm×2.5cm）和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定；另一側涂布賦型劑做對照。貼敷時間至少4小時。貼敷結束后，除去受試物并用溫水或無刺激性溶劑清潔給藥部位。多次給藥皮膚刺激性試驗應連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時間相同，貼敷期限一般不超過4周。皮膚刺激性試驗試驗方法10皮膚刺激性試驗試驗方法動物觀察：在自然光線或全光譜燈光下觀察皮膚反應。單次給藥皮膚刺激性試驗，在去除藥物后30-60分鐘，24、48和72小時肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫等情況。對出現(xiàn)中度及以上皮膚刺激性的動物應在觀察期結束時對給藥局部進行病理組織學檢查。皮膚刺激性試驗試驗方法11刺激性試驗眼刺激性試驗眼刺激性是指動物經眼給予受試物后在眼前部表面產生的可逆性組織改變，若產生了不可逆性的組織損傷則為腐蝕性。

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目的觀察動物經眼給予受試物后所產生的刺激性反應，提示藥物臨床應用后眼可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和壞死等不良反應。

刺激性試驗眼刺激性試驗12眼刺激性試驗試驗方法試驗動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于3只。應設置生理鹽水對照組，可采用同體左右側自身對比法。試驗前24小時內對每只動物的雙眼進行檢查（包括使用熒光素鈉檢查）。有眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結膜損傷的動物不能用于試驗。

眼刺激性試驗試驗方法13眼刺激性試驗給藥方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g受試物，然后輕合眼瞼約10s。一般不需沖洗眼睛。用藥周期應根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來決定，多次給藥一般不超過4周。

眼刺激性試驗給藥方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g受14眼刺激性試驗眼部觀察：單次給藥眼刺激試驗，在給藥后1、24、48和72小時對眼部進行檢查；多次給藥眼刺激試驗，每天給藥前以及最后一次給藥后1、24、48和72小時對眼部進行檢查。如果在72小時未見任何刺激癥狀，試驗則可結束。如存在持久性損傷，有必要延長觀察期限。但一般不超過21天。

眼刺激性試驗眼部觀察：單次給藥眼刺激試驗，在給藥后1、24、15溶血性試驗溶血性是指藥物制劑引起的血管外或血管內溶血和紅細胞凝聚等反應。溶血性反應包括免疫性溶血與非免疫性溶血。免疫性溶血是藥物通過免疫反應產生抗體而引起的溶血，為Ⅱ型和Ⅲ型過敏反應；非免疫性溶血包括藥物為誘發(fā)因素導致的氧化性溶血和藥物制劑引起血液穩(wěn)態(tài)的改變而出現(xiàn)的溶血和紅細胞凝聚等。

溶血性試驗溶血性是指藥物制劑引起的血管外或血管內溶血和紅細胞16注射給藥部位刺激性試驗

注射給藥部位刺激性是指動物經注射給予受試物后在注射部位產生的可逆性組織改變，若產生了不可逆性的組織損傷則為腐蝕性。目的觀察動物注射受試物后所產生的刺激性反應，提示藥物臨床應用后注射部位可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和壞死等不良反應。注射給藥部位刺激性試驗注射給藥部位刺激性是指動物經注射給予17注射給藥部位刺激性試驗試驗方法

1.試驗動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于3只。應設生理鹽水對照，可采用同體左右側自身對比法。用藥部位根據(jù)藥物的給藥途徑確定，可選用耳緣靜脈，耳中心動脈（其它動物可選用前、后肢靜脈及股動脈等），股和背部肌肉，側胸壁皮下組織，靜脈旁組織等。2.給藥方法：按臨床使用情況給予受試物，給藥容積和速率應根據(jù)動物情況進行相應的調整。給藥期限應根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來決定，多次給藥一般不超過7天。注射給藥部位刺激性試驗試驗方法18注射給藥部位刺激性試驗試驗方法3.動物觀察：單次給藥刺激性試驗，在給藥后48-96小時對動物和注射部位進行肉眼觀察；多次給藥刺激性試驗，每天給藥前以及最后一次給藥后48-96小時對動物和注射部位進行肉眼觀察。觀察期結束時應對部分動物進行給藥部位組織病理學檢查。留下的動物根據(jù)受試物的特點和刺激性反應情況，繼續(xù)觀察14－21天再進行病理組織學檢查，以了解刺激性反應的可逆程度。4.結果評價：根據(jù)肉眼觀察和病理檢查的結果，對受試物使用的安全性進行評價。

注射給藥部位刺激性試驗試驗方法19實驗材料器材：注射器1ml5支。藥品：維生素K3注射液、生理鹽水。動物：2.0～2.2kg家兔4只，雌雄各半。

家兔股四頭肌法

實驗材料器材：注射器1ml5支。家兔股四頭肌法20方法與步驟取家兔4只,每只家兔一側股四頭肌內注射維生素K3注射液1ml，另一側注射同體積生理鹽水。注射后觀察注射部位肌肉有無充血、水腫等反應,注射后48h后用空氣栓塞法處死動物，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉的刺激反應，按肌肉刺激反應分級標準計算相應的反應級，并進行局部組織病理學檢查，提供病理照片。方法與步驟取家兔4只,每只家兔一側股四頭肌內注射維生素K3注21實驗結果與討論實驗結果與討論22實驗結果與討論【結果與討論】根據(jù)肉眼觀察和組織病理學檢查的結果進行綜合判斷。實驗結果與討論【結果與討論】23實驗材料器材：注射器1ml5支。藥品：維生素K3注射液、生理鹽水。動物：2.0～2.2kg家兔4只，雌雄各半。

家兔耳殼法

是注射劑刺激性初試的一種方法。因家兔耳殼較薄，將藥物注射于耳殼皮下后，其刺激性反應易于在透光檢查中發(fā)現(xiàn)，而不需處死動物，試驗成本相對較低。實驗材料器材：注射器1ml5支。家兔耳殼法24方法與步驟取家兔4只，每只家兔一側耳緣靜脈內注射維生素K3注射液1ml，另一側注射同體積生理鹽水。注射48～96h后觀察注射部位肌肉有無充血、水腫等反應,觀察結束后用空氣栓塞法處死動物，進行給藥部位組織病理學檢查，并提供病理照片?！窘Y果與討論】根據(jù)肉眼觀察和組織病理學檢查的結果進行綜合判斷。方法與步驟取家兔4只，每只家兔一側耳緣靜脈內注射維生素K3注25溶血性試驗目的考察藥物是否能夠引起血管外或血管內溶血和紅細胞凝聚等反應。凡是注射劑和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反應的其他藥物制劑均應進行溶血性試驗。溶血性試驗目的考察藥物是否能夠引起血管外或血管內溶血和26溶血性試驗溶血性試驗方法1、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法)1.1血細胞懸液的配制

取兔血(或羊血)數(shù)毫升,放入含玻璃珠的三角燒瓶中振搖10分鐘,或用玻璃棒攪動血液,除去纖維蛋白原,使成脫纖血液.加入0.9%氯化鈉溶液約10倍量,搖勻,1000-1500r/min離心15分鐘,除去上清液,沉淀的紅細胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌2-3次,至上清液不顯紅色為止.將所得紅細胞用0.9%氯化鈉溶液配成2%的混懸液,供試驗用.溶血性試驗溶血性試驗方法27溶血性試驗溶血性試驗方法1、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法)1.2受試物的制備

除另有規(guī)定外,臨床用于非血管內途徑給藥的注射劑,以各藥品使用說明書規(guī)定的臨床使用濃度,用0.9%氯化鈉溶液1∶3稀釋后作為供試品溶液;用于血管內給藥的注射劑以使用說明書規(guī)定的臨床使用濃度作為供試品溶液。溶血性試驗溶血性試驗方法28溶血性試驗溶血性試驗方法1、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法)1.3試驗方法

取潔凈試管7只,進行編號,1-5號管為供試品管,6號管為陰性對照管,7號管為陽性對照管.按下表所示依次加入2%紅細胞懸液、0.9%氯化鈉溶液或蒸餾水,混勻后,立即置37℃±0.5℃的恒溫箱中進行溫育,開始每隔15分鐘觀察1次,1小時后,每隔1小時觀察1次,一般觀察3小時.

按下列順序加入各種溶液

溶血性試驗溶血性試驗方法29溶血性試驗結果觀察

若試驗中的溶液呈澄明紅色,管底無細胞殘留或有少量紅細胞殘留,表明有溶血發(fā)生;如紅細胞全部下沉,上清液體無色澄明,表明無溶血發(fā)生.若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀,振搖后不分散,表明有紅細胞凝聚發(fā)生.如有紅細胞凝聚的現(xiàn)象,可按下法進一步判定是真凝聚還是假凝聚.若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散,或將凝聚物放在載玻片上,在蓋玻片邊緣滴加2滴0.9%氯化鈉溶液,置顯微鏡下觀察,凝聚紅細胞能被沖散者為假凝聚,若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚.溶血性試驗結果觀察

若試驗中的溶液呈澄明紅色,30溶血性試驗溶血性試驗31溶血性試驗結果觀察

分光光度法：肉眼觀察結束后，將各管的溶液置入離心機1500rpm離心15min，取上清液，在紫外可見分光光度計545nm波長處，以蒸餾水為空白，測試各管吸光度值。用下式計算各試驗管的溶血率（%）。溶血率（%）=（ODt-ODnc）/（ODpc-ODnc）×100%式中：ODt：試驗管吸光度ODnc：陰性對照管吸光度ODpc：陽性對照管吸光度觀察指標及時間：觀察加入2%兔紅細胞懸浮液15min，30min，45min和1h，2h，3h后的溶血或凝聚情況；紫外可見分光光度計測試各管吸光度值，計算各試驗管的溶血率（%）。溶血性試驗結果觀察

分光光度法：32溶血性試驗結果判斷

肉眼觀察：當陰性對照管無溶血和凝聚發(fā)生,陽性對照管有溶血發(fā)生時,若受試物管中的溶液在3小時內不發(fā)生溶血和凝聚,則受試物可以注射使用;若受試物管中的溶液在3小時內發(fā)生溶血和(或)凝聚,則受試物不宜注射使用。分光光度法：若供試品溶血率＞5%表明出現(xiàn)了溶血，供試品不宜臨床注射使用。溶血性試驗結果判斷

肉眼觀察：當陰性對照管無溶血和凝聚發(fā)生,33溶血性試驗溶血性試驗34環(huán)丙沙星致雙手剝脫性皮炎謝謝大家！環(huán)丙沙星致雙手剝脫性皮炎謝謝大家！35每一次的加油，每一次的努力都是為了下一次更好的自己。12月-2212月-22Friday,December16,2022天生我材必有用，千金散盡還復來。04:44:2204:44:2204:4412/16/20224:44:22AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。12月-2204:44:2204:44Dec-2216-Dec-22得道多助失道寡助，掌控人心方位上。04:44:2204:44:2204:44Friday,December16,2022安全在于心細，事故出在麻痹。12月-2212月-2204:44:2204:44:22December16,2022加強自身建設，增強個人的休養(yǎng)。2022年12月16日4:44上午12月-2212月-22擴展市場，開發(fā)未來，實現(xiàn)現(xiàn)在。16十二月20224:44:22上午04:44:2212月-22做專業(yè)的企業(yè)，做專業(yè)的事情，讓自己專業(yè)起來。十二月224:44上午12月-2204:44December16,2022時間是人類發(fā)展的空間。2022/12/164:44:2204:44:2216December2022科學，你是國力的靈魂；同時又是社會發(fā)展的標志。4:44:22上午4:44上午04:44:2212月-22每天都是美好的一天，新的一天開啟。12月-2212月-2204:4404:44:2204:44:22Dec-22人生不是自發(fā)的自我發(fā)展，而是一長串機緣。事件和決定，這些機緣、事件和決定在它們實現(xiàn)的當時是取決于我們的意志的。2022/12/164:44:22Friday,December16,2022感情上的親密，發(fā)展友誼；錢財上的親密，破壞友誼。12月-222022/12/164:44:2212月-22謝謝大家！每一次的加油，每一次的努力都是為了下一次更好的自己。12月-36維生素K3的安全性評價維生素K3的安全性評價37化學藥物刺激性、過敏性和溶血性概述化學藥物制劑經眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、關節(jié)腔、皮膚、直腸、陰道、靜脈、動脈、肌肉、皮下、靜脈旁和鞘內等非口服途徑給藥，對用藥局部產生的毒性（如刺激性和過敏性等）和/或對全身產生的毒性（如過敏性和溶血性等）。它是臨床前安全性評價的組成部分。藥物的活性成分及其代謝物、輔料、有關物質及理化性質（如pH值、滲透壓等）均有可能引起刺激性和/或過敏性和/或溶血性的發(fā)生，而嚴重的毒性可以影響用藥的安全有效性，因此藥物在臨床應用前應研究其制劑在給藥部位使用后引起的局部和/或全身毒性，以提示臨床應用時可能出現(xiàn)的毒性反應、毒性靶器官、安全范圍、臨床研究監(jiān)測指標并為臨床解毒或解救措施提供參考，保障臨床用藥的安全有效?；瘜W藥物刺激性、過敏性和溶血性概述化學藥物制劑經38實驗項目1.刺激性（皮膚刺激性試驗；眼刺激性試驗；注射給藥部位刺激性試驗：血管刺激性實驗、肌肉刺激性實驗。）2.過敏性3.溶血性實驗試驗設計應遵循隨機、對照、重復的原則。試驗用藥物應與用于人體的制劑一致觀察部位應選擇給藥部位，同時考慮選擇周圍組織或可能暴露于受試藥物的部位。實驗項目1.刺激性（皮膚刺激性試驗；眼刺激性試驗；注射給藥部39刺激性試驗刺激性是指非口服藥物制劑給藥后對給藥部位產生的可逆性炎癥改變，若給藥部位產生了不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性?！緦嶒災康摹坑^察動物局部接觸受試物后所產生的刺激反應，提示藥物臨床應用后給藥部位可能出現(xiàn)的炎癥反應、組織的變性和壞死等不良反應。刺激性試驗刺激性是指非口服藥物制劑給藥后對給藥部位產生的可逆40刺激性試驗設計中應考慮的問題⒈實驗動物的選擇依據(jù)觀察指標和擬采用試驗模型選擇試驗動物，一般每個試驗選擇一種動物進行評價。⒉給藥的頻率與期限給藥頻率和期限應依據(jù)擬定臨床應用的情況來決定。重復給藥試驗，一般每天給藥一次，給藥期限最長不超過4周。偶爾給藥的受試物可用單次給藥的方法進行試驗。⒊可逆性觀察為明確毒性反應的恢復情況，建議進行停藥后恢復期的觀察。局部毒性反應的可逆性評價應包括局部及相關部位的反應。刺激性試驗設計中應考慮的問題⒈實驗動物的選擇依據(jù)觀察指標和41刺激性試驗設計中應考慮的問題⒋受試物受試物應與用于人體的制劑一致。⒌對照組以溶媒和/或賦形劑作為陰性對照。必要時采用陽性對照或已上市制劑。⒍劑量劑量設計主要應該考慮受試物濃度和總劑量。一般采用與臨床制劑相同濃度，設一個劑量組，可以通過改變給藥頻率進行劑量的調整，但皮膚給藥刺激性研究通過增加涂敷厚度或加大涂布面積來提高給藥劑量是不合適的。必要時應該進行不同濃度的刺激性試驗。刺激性試驗設計中應考慮的問題⒋受試物受試物應與用于人體的制42刺激性試驗設計中應考慮的問題⒎給藥方式7.1給藥方案應盡量與臨床用藥方案一致。7.2給藥途徑和給藥部位應與臨床用藥一致。7.3設計給藥容積，給藥速率和給藥頻率時，應考慮所選用動物模型給藥部位的解剖和生理特點。⒏只要相互之間不影響且全身耐受性許可，則可在同一動物身上進行不同給藥途徑的刺激性試驗研究，并可在對側進行對照試驗。刺激性試驗設計中應考慮的問題⒎給藥方式43刺激性試驗皮膚刺激性試驗

皮膚刺激性是指動物經皮膚給予受試物后在皮膚上產生的可逆性炎癥改變，若產生了不可逆性的組織損傷則為皮膚腐蝕性。

目的觀察動物皮膚接觸受試物后所產生的刺激反應，提示藥物臨床應用后皮膚可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和壞死等不良反應。

刺激性試驗皮膚刺激性試驗44皮膚刺激性試驗試驗方法試驗動物：首選家兔，動物數(shù)4－8只，雌、雄各半。應設賦形劑對照，采用同體左右側自身對比法。試驗前24小時對給藥區(qū)（通常在背部）進行脫毛處理（可剪、剃或用適宜的脫毛劑）。去毛范圍左、右各3cm×3cm。給藥前應檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜進行試驗。但若需考察破損皮膚的刺激性，則可在用藥部位用砂紙磨或劃“井”字并以滲血為度。皮膚刺激性試驗試驗方法45皮膚刺激性試驗試驗方法受試物的給予：取受試物0.5ml直接涂布于一側已去毛的皮膚上，然后用二層紗布（2.5cm×2.5cm）和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定；另一側涂布賦型劑做對照。貼敷時間至少4小時。貼敷結束后，除去受試物并用溫水或無刺激性溶劑清潔給藥部位。多次給藥皮膚刺激性試驗應連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時間相同，貼敷期限一般不超過4周。皮膚刺激性試驗試驗方法46皮膚刺激性試驗試驗方法動物觀察：在自然光線或全光譜燈光下觀察皮膚反應。單次給藥皮膚刺激性試驗，在去除藥物后30-60分鐘，24、48和72小時肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫等情況。對出現(xiàn)中度及以上皮膚刺激性的動物應在觀察期結束時對給藥局部進行病理組織學檢查。皮膚刺激性試驗試驗方法47刺激性試驗眼刺激性試驗眼刺激性是指動物經眼給予受試物后在眼前部表面產生的可逆性組織改變，若產生了不可逆性的組織損傷則為腐蝕性。

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目的觀察動物經眼給予受試物后所產生的刺激性反應，提示藥物臨床應用后眼可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和壞死等不良反應。

刺激性試驗眼刺激性試驗48眼刺激性試驗試驗方法試驗動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于3只。應設置生理鹽水對照組，可采用同體左右側自身對比法。試驗前24小時內對每只動物的雙眼進行檢查（包括使用熒光素鈉檢查）。有眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結膜損傷的動物不能用于試驗。

眼刺激性試驗試驗方法49眼刺激性試驗給藥方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g受試物，然后輕合眼瞼約10s。一般不需沖洗眼睛。用藥周期應根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來決定，多次給藥一般不超過4周。

眼刺激性試驗給藥方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g受50眼刺激性試驗眼部觀察：單次給藥眼刺激試驗，在給藥后1、24、48和72小時對眼部進行檢查；多次給藥眼刺激試驗，每天給藥前以及最后一次給藥后1、24、48和72小時對眼部進行檢查。如果在72小時未見任何刺激癥狀，試驗則可結束。如存在持久性損傷，有必要延長觀察期限。但一般不超過21天。

眼刺激性試驗眼部觀察：單次給藥眼刺激試驗，在給藥后1、24、51溶血性試驗溶血性是指藥物制劑引起的血管外或血管內溶血和紅細胞凝聚等反應。溶血性反應包括免疫性溶血與非免疫性溶血。免疫性溶血是藥物通過免疫反應產生抗體而引起的溶血，為Ⅱ型和Ⅲ型過敏反應；非免疫性溶血包括藥物為誘發(fā)因素導致的氧化性溶血和藥物制劑引起血液穩(wěn)態(tài)的改變而出現(xiàn)的溶血和紅細胞凝聚等。

溶血性試驗溶血性是指藥物制劑引起的血管外或血管內溶血和紅細胞52注射給藥部位刺激性試驗

注射給藥部位刺激性是指動物經注射給予受試物后在注射部位產生的可逆性組織改變，若產生了不可逆性的組織損傷則為腐蝕性。目的觀察動物注射受試物后所產生的刺激性反應，提示藥物臨床應用后注射部位可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和壞死等不良反應。注射給藥部位刺激性試驗注射給藥部位刺激性是指動物經注射給予53注射給藥部位刺激性試驗試驗方法

1.試驗動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于3只。應設生理鹽水對照，可采用同體左右側自身對比法。用藥部位根據(jù)藥物的給藥途徑確定，可選用耳緣靜脈，耳中心動脈（其它動物可選用前、后肢靜脈及股動脈等），股和背部肌肉，側胸壁皮下組織，靜脈旁組織等。2.給藥方法：按臨床使用情況給予受試物，給藥容積和速率應根據(jù)動物情況進行相應的調整。給藥期限應根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來決定，多次給藥一般不超過7天。注射給藥部位刺激性試驗試驗方法54注射給藥部位刺激性試驗試驗方法3.動物觀察：單次給藥刺激性試驗，在給藥后48-96小時對動物和注射部位進行肉眼觀察；多次給藥刺激性試驗，每天給藥前以及最后一次給藥后48-96小時對動物和注射部位進行肉眼觀察。觀察期結束時應對部分動物進行給藥部位組織病理學檢查。留下的動物根據(jù)受試物的特點和刺激性反應情況，繼續(xù)觀察14－21天再進行病理組織學檢查，以了解刺激性反應的可逆程度。4.結果評價：根據(jù)肉眼觀察和病理檢查的結果，對受試物使用的安全性進行評價。

注射給藥部位刺激性試驗試驗方法55實驗材料器材：注射器1ml5支。藥品：維生素K3注射液、生理鹽水。動物：2.0～2.2kg家兔4只，雌雄各半。

家兔股四頭肌法

實驗材料器材：注射器1ml5支。家兔股四頭肌法56方法與步驟取家兔4只,每只家兔一側股四頭肌內注射維生素K3注射液1ml，另一側注射同體積生理鹽水。注射后觀察注射部位肌肉有無充血、水腫等反應,注射后48h后用空氣栓塞法處死動物，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉的刺激反應，按肌肉刺激反應分級標準計算相應的反應級，并進行局部組織病理學檢查，提供病理照片。方法與步驟取家兔4只,每只家兔一側股四頭肌內注射維生素K3注57實驗結果與討論實驗結果與討論58實驗結果與討論【結果與討論】根據(jù)肉眼觀察和組織病理學檢查的結果進行綜合判斷。實驗結果與討論【結果與討論】59實驗材料器材：注射器1ml5支。藥品：維生素K3注射液、生理鹽水。動物：2.0～2.2kg家兔4只，雌雄各半。

家兔耳殼法

是注射劑刺激性初試的一種方法。因家兔耳殼較薄，將藥物注射于耳殼皮下后，其刺激性反應易于在透光檢查中發(fā)現(xiàn)，而不需處死動物，試驗成本相對較低。實驗材料器材：注射器1ml5支。家兔耳殼法60方法與步驟取家兔4只，每只家兔一側耳緣靜脈內注射維生素K3注射液1ml，另一側注射同體積生理鹽水。注射48～96h后觀察注射部位肌肉有無充血、水腫等反應,觀察結束后用空氣栓塞法處死動物，進行給藥部位組織病理學檢查，并提供病理照片。【結果與討論】根據(jù)肉眼觀察和組織病理學檢查的結果進行綜合判斷。方法與步驟取家兔4只，每只家兔一側耳緣靜脈內注射維生素K3注61溶血性試驗目的考察藥物是否能夠引起血管外或血管內溶血和紅細胞凝聚等反應。凡是注射劑和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反應的其他藥物制劑均應進行溶血性試驗。溶血性試驗目的考察藥物是否能夠引起血管外或血管內溶血和62溶血性試驗溶血性試驗方法1、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法)1.1血細胞懸液的配制

取兔血(或羊血)數(shù)毫升,放入含玻璃珠的三角燒瓶中振搖10分鐘,或用玻璃棒攪動血液,除去纖維蛋白原,使成脫纖血液.加入0.9%氯化鈉溶液約10倍量,搖勻,1000-1500r/min離心15分鐘,除去上清液,沉淀的紅細胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌2-3次,至上清液不顯紅色為止.將所得紅細胞用0.9%氯化鈉溶液配成2%的混懸液,供試驗用.溶血性試驗溶血性試驗方法63溶血性試驗溶血性試驗方法1、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法)1.2受試物的制備

除另有規(guī)定外,臨床用于非血管內途徑給藥的注射劑,以各藥品使用說明書規(guī)定的臨床使用濃度,用0.9%氯化鈉溶液1∶3稀釋后作為供試品溶液;用于血管內給藥的注射劑以使用說明書規(guī)定的臨床使用濃度作為供試品溶液。溶血性試驗溶血性試驗方法64溶血性試驗溶血性試驗方法1、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法)1.3試驗方法

取潔凈試管7只,進行編號,1-5號管為供試品管,6號管為陰性對照管,7號管為陽性對照管.按下表所示依次加入2%紅細胞懸液、0.9%氯化鈉溶液或蒸餾水,混勻后,立即置37℃±0.5℃的恒溫箱中進行溫育,開始每隔15分鐘觀察1次,1小時后,每隔1小時觀察1次,一般觀察3小時.

按下列順序加入各種溶液

溶血性試驗溶血性試驗方法65溶血性試驗結果觀察

若試驗中的溶液呈澄明紅色,管底無細胞殘留或有少量紅細胞殘留,表明有溶血發(fā)生;如紅細胞全部下沉,上清液體無色澄明,表明無溶血發(fā)生.若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀,振搖后不分散,表明有紅細胞凝聚發(fā)生.如有紅細胞凝聚的現(xiàn)象,可按下法進一步判定是真凝聚還是假凝聚.若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散,或將凝聚物放在載玻片上,在蓋玻片邊緣滴加2滴0.9%氯化鈉溶液,置顯微鏡下觀察,凝聚紅細胞能被沖散者為假凝聚,若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚.溶血性試驗結果觀察

若試驗中的溶液呈澄明紅色,66溶血性試驗溶血性試驗67溶血性試驗結果觀察

分光光度法：肉眼觀察結束后，將各管的溶液置入離心機1500rpm離心1