HPV的講課資料(市級)課件

人乳頭狀瘤病毒感染與宮頸癌的關(guān)系

1977年Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)顆粒,70年代末ZurHausen首先提出人乳頭瘤病毒與宮頸癌發(fā)病可能有關(guān)的假想后,國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量的研究,并獲取了許多證據(jù),1995年國際癌癥協(xié)會(IARC)專題討論會的學(xué)者們認(rèn)為:HPV感染是宮頸癌的主要病因。HPV的歷程人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）是一種感染皮膚和粘膜鱗狀上皮細(xì)胞的小DNA病毒，病毒外層為衣殼蛋白組成的外殼，內(nèi)部包裹著病毒核酸。HPV的結(jié)構(gòu)HPV病毒顆粒直徑約55nm,由72個病毒殼粒包被。HPV的結(jié)構(gòu)(外觀)HPV的結(jié)構(gòu)(基因組)HPV基因由3個部分組成早期區(qū)(earlyregion,E)含有E1、E2、E4、E5、E6、E7共6個基因,是維持病毒復(fù)制、編碼病毒蛋白、維持細(xì)胞內(nèi)病毒的高拷貝數(shù)的基因晚期區(qū)(lateregion,L)長控制區(qū)(longcontrolregion,LCR)E2調(diào)控蛋白E2蛋白通過與病毒DNA結(jié)合抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄。HPV基因整合宿主DNA后，往往丟失E2基因，從而失去對E6、E7基因的控制，導(dǎo)致細(xì)胞癌變病毒DNAE2蛋白E7癌蛋白

E7蛋白較小，約100個氨基酸，同樣具有兩個鋅指結(jié)構(gòu)。E7蛋白是HPV致癌的關(guān)鍵分子，E7分為CR1、CR2、CR3和C端結(jié)構(gòu)域。E7蛋白結(jié)合pRB蛋白使轉(zhuǎn)錄因子E2F被釋放。E2F是一類轉(zhuǎn)錄激活因子，一般情況下受pRB蛋白的負(fù)調(diào)控，當(dāng)pBR與E2F解離后，E2F即可激活基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)了眾多細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。。E7蛋白還可以結(jié)合RB相關(guān)的porket蛋白pRB、p107、p130等，導(dǎo)致這些蛋白通過泛素途徑降解。高危HPV整合時

E2斷裂、E6、E7激活

E6與P53結(jié)合，激活c-myc,H-ras，凋亡↓

E7與Rb結(jié)合，激活P16、cyclinE，增殖↑激活端粒酶等使細(xì)胞增殖和永生化

FerenczyA,FrancoE.Lancetncol,2002;3:11HPV整合是宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵

當(dāng)某一未知基因組與任何已知型別HPV進(jìn)行雜交，其同源性小于50％時，被稱為是一個獨(dú)立的新型；而雜交的同源性大于50％，則稱為一個亞型；如果僅出現(xiàn)限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的數(shù)目不同，則被認(rèn)為是一個突變株。據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，到目前為止，從不同人病灶組織中，已鑒定出HPV達(dá)70多個亞型，有資料報道為100種以上HPV型。HPV分型HPV分型目前世界上已發(fā)現(xiàn)的110余種HPV,大約35種型別涉及生殖道感染，約20種與腫瘤有關(guān)。根據(jù)不同型別HPV與癌發(fā)生的危險性高低分為高危型和低危型2種。

危險性型別引起疾病高危型HPV16,18,31,33,35,39,4551,52,56,58,59,68,73,82等

高度子宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CINⅡ、Ⅲ)和宮頸癌低危型HPV6,11,40,42,43,44,54,61,70,72,81,cp6108等

生殖道尤其是陰道下部及肛周皮膚的濕疣類病變和低度子宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CINⅠ)

HPV大家族，超過100個亞型

根據(jù)是否會誘發(fā)宮頸癌可分為低危：6、11、42、43、44

高危：16、18、31、33、35、39、45、51、

52、56、58、59、66及68型低危HPV基因組不能整合進(jìn)宿主細(xì)胞染色體高危HPV基因組能整合進(jìn)宿主細(xì)胞染色體

FerenczyA,FrancoE.LancetOncol,2002;3:11HPV的分型HPV感染途徑性接觸傳播丈夫陰莖HPV的存在可使妻子宮頸受染的危險增加9倍，相同的HPV亞型可以在性伴侶中檢出，與此相反，處女通常是檢測不到HPV感染直接皮膚接觸也被認(rèn)為是主要的傳播方式母嬰傳播母親生殖道的HPV感染也可以傳播至她們的嬰兒的口腔中

HPV感染潛伏期

低危型HPV感染平均持續(xù)時間是4.8個月，高危型HPV感染平均持續(xù)時間大概是8個月。HPV感染的最常見的結(jié)局是沒有明顯的臨床表現(xiàn)，絕大部分會被機(jī)體免疫力自動清除。Richardson,etal.2003

HPV的感染是非系統(tǒng)性感染，只局限于最初的感染的部位，感染部位的先天性免疫是阻止感染的第一道防線。主要由局部細(xì)胞因子和非特異性的效應(yīng)細(xì)胞，如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞。先天性免疫

HPV感染后可以激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞免疫。針對衣殼蛋白L的IgG和IgA中和抗體在病毒感染的早期較為重要，針對早期蛋白的細(xì)胞免疫反應(yīng)對最終清除病毒可能更為重要。獲得性免疫HPV的感染過程HPV檢測方法1.PCR-HPV2.IIC23.原位雜交REVERSELINEBLOT(RLB)PCR結(jié)合雜交的方法高危型感染低危型感染其原理是利用對抗體捕獲信號的放大和化學(xué)發(fā)光信號的檢測?；緦?shí)驗(yàn)步驟如下：

1、樣本DNA雙鏈被釋放并分解為核苷酸單鏈；

2、DNA單鏈與RNA探針結(jié)合為RNA-DNA雜交體；

3、特異性抗體將RNA-DNA雜交體固定在試管壁或微孔壁上；

4、結(jié)合有堿性磷酸酶的多個第二抗體與RNA-DNA雜交體結(jié)合，使信號放大；

5、堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光。雜交捕獲(HC)試驗(yàn)HPV的流行病學(xué)WoodmanetalHPV檢測陰性并開始活動平均1年者2011例隨訪3年?HPV感染率44％?最常見亞型16型

?246例出現(xiàn)細(xì)胞涂片異常

?28例進(jìn)展為HSIL

Lancet,2001;9:357正常人群的HPV感染Beby-DefouxAetalHPV感染7.3%HR-HPV：5.3%；LR-HPV：2.4%；Mixed-HPV：0.9%；unknown-HPV:0.5%常見型別的順序：16、58、18、30、33

JMedVirol2004;73(2):262-8正常人群的HPV感染正常人群的HPV感染北京市正常人群：23.9%HR-HPV：19.5%，LR-HPV：4.4%，Mixed-HPV：2.0%分布前10位的亞型：16、58、52、68、CP8304、31、33、59、18and11。

——國家十五科技攻關(guān)項(xiàng)目BeerensEetalHR-HPV：ASCUS72%;HSIL94.5%Mixed-HPV：HSIL35.8%常見型別：16、52、51、31；18型罕見

Cytopathology2005;16(4):199-205高危人群HPV的感染高危人群HPV的感染北大醫(yī)院2285名門診高危人群：HPV感染率：57.1%HR-HPV:41.0%;LR-HPV:7.2%;Mixed-HPV：8.9%HPV感染常見亞型是HPV16、58、52、53、33、6和CP8304。人群HPV感染高峰年齡在30~34歲

——國家十五科研攻關(guān)項(xiàng)目

中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志；22（6），444-445HPV與細(xì)胞學(xué)結(jié)果的關(guān)系ShlayJetal.195例細(xì)胞涂片為ASCUS后平均64（12－430）天行陰道鏡檢查和HPV檢測，陰道鏡異常再行活檢結(jié)果:高危HPV總陽性率31.3%CINI36.4%CINII-III93.3%

ObstetGynecol,2000;96:410HPV分型檢測與ASCUSLeeetal457例細(xì)胞學(xué)診斷為ASCUS/LSIL，行HPV檢測和活檢

LSIL且高危HPV陽性者,22.7%為CINII/IIILSIL但高危HPV陰性者，僅1％為CINII/III

ArchPatholLabMed,2001;125:1453HPV檢測與ASCUS\LSILNobbenhuis等，觀察353例HPV感染者.1年消退率平均消退時間低危HPV細(xì)胞輕、中度68％5個月重度53％6個月高危HPV細(xì)胞輕度37％17個月中度34％24個月重度12％>60個月

BrJCancer,2002;87:75HPV隨訪在宮頸病變中的作用HPV隨訪在宮頸病變中的作用MoscickiABetal187名LSIL，每4個月檢測一次細(xì)胞學(xué)、陰道鏡、HPVDNA。三次細(xì)胞學(xué)均為陰性為轉(zhuǎn)歸一年后轉(zhuǎn)歸：61%（95%CI53-71）三年后轉(zhuǎn)歸：91%（95%CI84-99）提示：HPV感染轉(zhuǎn)陰與LSIL的轉(zhuǎn)歸有相關(guān)性

Lancet2004;364(9446):1678-83

●HPV感染先于細(xì)胞學(xué)發(fā)生●HPV感染消退也先于細(xì)胞學(xué)消退HPV感染與細(xì)胞學(xué)病例LEEP術(shù)后：HPV（-）HPV感染與各級宮頸疾病Plummeretal10058例宮頸癌，8550宮頸鱗癌，1508宮頸腺癌和宮頸腺鱗癌HPV16感染與宮頸癌的相關(guān)具有普遍意義宮頸鱗癌：HPV16占46-63%；

HPV18占10-14%宮頸腺癌和宮頸腺鱗癌：HPV18占37-41%；

HPV16占26-36%。HPV分型與宮頸癌HPV分型檢測與宮頸病變北大醫(yī)院463例（CIN）宮頸病變中，HPV陽性率76.9%,HR-HPV73.4%;LR-HPV12.1%;M-HPV31.3%（其中2型感染98例、3型感染31例、4型感染10例、5型感染4例、6型感染2例，多型感染都至少有一種高危型存在）。

——國家十五科研攻關(guān)項(xiàng)目HPV分型檢測與CIN1\炎癥CIN1\炎癥HR-HPV：77.1%常見亞型分別是：HPV16、58、52、33、31、18和51型，且均為高危亞型感染。

——國家十五科研攻關(guān)項(xiàng)目CIN2\3HR-HPV:94.0%，常見亞型：HPV16、33、58、31和52型LogisticRegression分析：HPV16、33和31與CIN2\3相關(guān)，是主要致病型。

——國家十五科研攻關(guān)項(xiàng)目

中國婦產(chǎn)科臨床雜志；7（4）：253-256.HPV分型檢測與宮頸病變CIN2\3HPV在宮頸治療前后的比較宮頸治療前后HPV的變化HoufflinDebangeVetalLEEP治療205例CIN2或3的患者術(shù)前：HPV陽性94.1%術(shù)后：HPV陽性34.6%提示：治療后HPV仍為陽性，復(fù)發(fā)的可能性大

GynecolOncol2003;90(3):287-92宮頸治療前后HPV的變化北大醫(yī)院2005年LEEP治療256例CIN2或3的患者術(shù)前：HPV陽性