《制藥業(yè)滅菌工藝的驗(yàn)證與監(jiān)控》教學(xué)課件

制藥業(yè)滅菌工藝的驗(yàn)證與監(jiān)控主要內(nèi)容2主題1.滅菌工藝的重要性主題2.藥品生產(chǎn)中的滅菌方式主題3.

滅菌設(shè)備確認(rèn)與工藝驗(yàn)證主題4.參數(shù)放行的定義主題5.參數(shù)放行的技術(shù)基礎(chǔ)主題6.參數(shù)放行實(shí)施展望3主題1.滅菌工藝的重要性藥害事件與GMP的發(fā)展cGMP的誕生與發(fā)展4藥害事件中的產(chǎn)品特點(diǎn)成分復(fù)雜對(duì)質(zhì)量要求高劣質(zhì)產(chǎn)品具有致命性患者在使用前無(wú)法確定藥品的質(zhì)量案例分析1901年，接受白喉抗毒素治療的兒童死于破傷風(fēng)。起因是用于制備抗毒素的馬血清被破傷風(fēng)梭菌污染。51970年10月和1971年4月，美國(guó)疾病控制中心（CDC）報(bào)告有敗血癥流行，該病的流行與靜脈輸液藥劑有關(guān)。該中心報(bào)告說(shuō)：截至到1971年3月6日，在美國(guó)7個(gè)州中的8家醫(yī)院里發(fā)現(xiàn)有150例細(xì)菌污染病例。一周以后，敗血癥的病例升至350例。到1971年3月27日則達(dá)到405人。美國(guó)1976年的統(tǒng)計(jì)數(shù)字表明，前十年內(nèi)因質(zhì)量問(wèn)題從市場(chǎng)撤回輸液產(chǎn)品的事件超過(guò)600起，造成410人受到傷害，54人死亡。案例分析（續(xù)）1972年，英國(guó)，德旺波特事故英國(guó)德旺波特醫(yī)院輸液滅菌過(guò)程不力而導(dǎo)致污染，造成至少5例敗血癥患者死亡的事故。消毒柜的排氣閥已被碎玻璃和紙團(tuán)堵塞，導(dǎo)致在滅菌時(shí)，消毒柜內(nèi)的空氣無(wú)法順利排出，局部空間達(dá)不到預(yù)定滅菌溫度溫度記錄儀損壞在取樣和檢測(cè)方法上存在失誤未按照書面規(guī)程操作滅菌釜設(shè)備維修保養(yǎng)存在缺陷6-7-無(wú)菌藥品按照生產(chǎn)工藝可分為兩類采用最終滅菌工藝的最終滅菌產(chǎn)品部分或全部采用無(wú)菌生產(chǎn)工藝的非最終滅菌產(chǎn)品-7-無(wú)菌藥品的生產(chǎn)方式-8-最終滅菌工藝高潔凈環(huán)境控制滅菌前微生物污染在密封容器中最終滅菌無(wú)菌生產(chǎn)工藝極高潔凈環(huán)境組成材料分別滅菌在密封容器中無(wú)進(jìn)一步滅菌處理兩種生產(chǎn)方式的差別無(wú)菌藥品生產(chǎn)的微生物學(xué)關(guān)注點(diǎn)-9-最終滅菌工藝賦予產(chǎn)品更高的無(wú)菌保證水平生產(chǎn)中可變因素少，出現(xiàn)偏差的概率低幾乎能殺滅產(chǎn)品中的所有微生物

需要關(guān)注的微生物范圍集中在具有耐受性的芽孢上面無(wú)菌生產(chǎn)工藝影響因素多各類微生物污染都可能導(dǎo)致工藝失敗驗(yàn)證時(shí)以污染瓶數(shù)衡量無(wú)菌保證水平-10-微生物污染的來(lái)源原輔料內(nèi)包裝容器配料用水生產(chǎn)環(huán)境制造工藝操作人員Bioburden10最終滅菌產(chǎn)品無(wú)菌保證的主要環(huán)節(jié)11產(chǎn)品的無(wú)菌保證滅菌前微生物污染包裝密封性滅菌工藝滅菌設(shè)備滅菌工藝驗(yàn)證二次污染原料設(shè)備和生產(chǎn)過(guò)程生產(chǎn)環(huán)境生產(chǎn)時(shí)限滅菌工藝在無(wú)菌藥品生產(chǎn)中的應(yīng)用最終滅菌產(chǎn)品

灌裝在容器中的藥品必要時(shí)，產(chǎn)品溶液或粉末、內(nèi)包裝材料、設(shè)備、管路必要時(shí)，用具、人員防護(hù)裝備等12無(wú)菌工藝產(chǎn)品

產(chǎn)品的組分、內(nèi)包裝材料和直接接觸設(shè)備

A級(jí)（或ISO5級(jí)）內(nèi)，任何接近產(chǎn)品的材料、人員防護(hù)裝備、用具等粉末模擬分裝用乳糖13主題2.藥品生產(chǎn)中的滅菌方式滅菌的主要目的

殺滅或除去所有微生物繁殖體和芽胞最大限度地提高藥物制劑的安全性保護(hù)制劑的穩(wěn)定性保證制劑的臨床療效研究、選擇有效的滅菌方法，對(duì)保證產(chǎn)品質(zhì)量具有重要意義1415什么是微生物15從以下幾方面理解微生物并不是生物分類學(xué)上的名詞是包括所有形體微小的單細(xì)胞，或個(gè)體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的多細(xì)胞，或沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物的通稱16微生物的復(fù)雜性16復(fù)雜性最低最高朊病毒和類病毒病毒細(xì)菌古細(xì)菌酵母菌絲狀真菌原生動(dòng)物植物動(dòng)物微生物真核細(xì)胞原核細(xì)胞無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)微生物的分類病毒細(xì)菌真菌18細(xì)菌在環(huán)境中的生存狀態(tài)18活躍死亡受傷芽孢、孢囊生物膜休眠生長(zhǎng)存活死亡細(xì)胞間的相互作用酸堿度/pH輻射溫度水活度化學(xué)物質(zhì)饑餓19芽孢的特性芽孢是休眠體Endospore與Exospore形成芽孢的細(xì)菌種類1920芽孢的特性細(xì)菌細(xì)胞與內(nèi)生孢子的區(qū)別20特性生長(zhǎng)態(tài)細(xì)菌細(xì)胞細(xì)菌芽孢結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、原生質(zhì)厚皮層、外衣和外壁顯微鏡下形態(tài)無(wú)折射光有折射光鈣含量低高水含量高極低吡啶二羧酸（DPA）無(wú)有酶、代謝活性高低或無(wú)mRNA有無(wú)或非常低對(duì)環(huán)境脅迫條件的耐受性（物理或化學(xué)）低高小分子酸溶性蛋白無(wú)有內(nèi)部pH~7.05.5~6.021芽孢的特性細(xì)菌芽孢對(duì)脅迫條件的耐受性原理21處理方式（脅迫條件）保護(hù)性因素芽孢殺滅機(jī)理濕熱內(nèi)核極低含水量、SASP、DPA、礦物化、熱穩(wěn)定性蛋白酶被滅活干熱SASP，熱穩(wěn)定性蛋白，DNA修復(fù)酶被滅活，DNA損傷UV–輻射內(nèi)核極低含水量、SASP、DPA、礦物化、熱穩(wěn)定性蛋白、DNA修復(fù)DNA損傷γ–輻射SASP、DPA、礦物化DNA損傷化學(xué)物質(zhì)致密的皮層和內(nèi)膜難以被化學(xué)物質(zhì)滲透、SASP、DNA修復(fù)DNA損傷（部份）、皮層和內(nèi)膜損傷或降解滅菌技術(shù)的應(yīng)用歷史滅菌作為工業(yè)化技術(shù)已使用了120多年1890’s–濕熱(蒸汽)1890’s–干熱1940’s–環(huán)氧乙烷1950’s–電子束1960’s–加瑪輻射1960’s–無(wú)菌包裝1970’s–美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(e.g.AAMI)1980’s–美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法制化1990’s–國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織/ISO/ENS注：無(wú)菌操作技術(shù)始于1860’s經(jīng)典滅菌方法物理滅菌法利用物理方法，殺滅或截留去除微生物，亦稱物理滅菌技術(shù)包括干熱滅菌、濕熱滅菌、除菌過(guò)濾和輻射滅菌等化學(xué)滅菌法利用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺滅包括液體滅菌、氣體滅菌、低溫蒸汽滅菌。23經(jīng)典滅菌方法在制藥業(yè)中的應(yīng)用最終滅菌藥品濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法無(wú)菌工藝藥品除菌過(guò)濾法（如產(chǎn)品、工藝氣體等）濕熱滅菌法、干熱滅菌法輻照滅菌法（如防護(hù)裝備、濾器、一次性用具等）液體滅菌法（如某些生物制品、器械）氣體滅菌法（如防護(hù)裝備、濾器等）低溫蒸汽滅菌法（進(jìn)入隔離器的包裝材料等）24合適的滅菌工藝迅速殺滅微生物，但不損害產(chǎn)品的用途不現(xiàn)實(shí)。除了那些高度穩(wěn)定的材料…在殺滅微生物的同時(shí)，破壞了產(chǎn)品用途毫無(wú)價(jià)值

尋找平衡點(diǎn)在產(chǎn)品降解與殺滅微生物之間尋找平衡點(diǎn)在能夠提供最低無(wú)菌保證水平的基礎(chǔ)上，保證藥品的安全性、穩(wěn)定性和有效性25滅菌對(duì)產(chǎn)品的不利影響因素濕熱滅菌－溫度約為121℃干熱滅菌－溫度約為170℃~250℃輻射滅菌－退色、自由基、強(qiáng)度降低氣體滅菌－殘留、化學(xué)反應(yīng)過(guò)濾除菌－溶出、析出、吸收液體滅菌－化學(xué)反應(yīng)、高pH值、腐蝕低溫蒸汽滅菌－殘留、化學(xué)反應(yīng)、腐蝕總而言之，對(duì)微生物的殺滅依靠惡劣條件26滅菌工藝的設(shè)計(jì)原則27產(chǎn)品特性法滅菌工藝過(guò)度殺滅法滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)和日常滅菌前微生物監(jiān)控所需要的信息量預(yù)計(jì)效期供熱量上升上升下降28濕熱滅菌又稱為Moistheatsterilizationunderpressure細(xì)胞內(nèi)起關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)和酶發(fā)生熱變性或凝固。濕度對(duì)該破壞性過(guò)程起促進(jìn)作用。只要可能，通常取121℃（2個(gè)大氣壓）優(yōu)點(diǎn)：無(wú)殘留，不污染環(huán)境，不破壞產(chǎn)品表面，容易控制和重現(xiàn)性好包括脈動(dòng)真空滅菌器（或稱預(yù)真空滅菌器）、蒸汽-空氣混合物滅菌器、過(guò)熱水滅菌器等28濕熱滅菌國(guó)內(nèi)外法規(guī)和指南USPISO17665ISO11138-BI,ISO11140-CIHTM2010EN554,285PDATRNo.1中國(guó)藥典藥品GMP指南GB8599YY0646GB18281GB/T1997229脈動(dòng)真空滅菌器示意圖干熱滅菌原理：使微生物氧化而不是蛋白質(zhì)變性，因此溫度要高得多，時(shí)間也相應(yīng)延長(zhǎng)利用干熱滅菌工藝滅菌溫度高、時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)，可使干熱滅菌同時(shí)具備除熱原的功用干熱滅菌適用于耐高溫但不適于濕熱或可被濕熱破壞的物品，如玻璃、金屬設(shè)備、器具，不需濕氣穿透的油脂類，耐高溫的粉末化學(xué)藥品等干熱滅菌不適用于橡膠、塑料及大部分藥品30干熱滅菌國(guó)內(nèi)外法規(guī)和指南USPISO11138-BI,ISO11140-CIISO20857PDATRNo.3PDATRNo.7中國(guó)藥典藥品GMP指南YY1275GB1828131氣體滅菌滅菌劑的種類環(huán)氧乙烷（ETO，C2H4O）臭氧（Ozone，O3）二氧化氯（ChlorineDioxide-ClO2）氣體滅菌不同于低溫蒸汽滅菌32環(huán)氧乙烷滅菌原理：蛋白質(zhì)上的羧基（-COOH）、氨基（-NH2）、硫氫基（-SH）和羥基（-OH）發(fā)生烷基化作用，造成蛋白質(zhì)失去反應(yīng)基因，阻礙蛋白質(zhì)的正?；瘜W(xué)反應(yīng)和新陳代謝抑制生物酶活性，包括磷酸致活酶、肽酶、膽堿化酶和膽堿脂

DNA、RNA發(fā)生烷基化作用而導(dǎo)致微生物的滅活優(yōu)點(diǎn)：高效，易于擴(kuò)散，廣泛的兼容性缺點(diǎn)：過(guò)程復(fù)雜，安全性問(wèn)題，職業(yè)健康問(wèn)題、環(huán)境問(wèn)題影響滅菌效果的外在因素–氣體濃度、溫度、相對(duì)濕度、載體材料33環(huán)氧乙烷滅菌由三個(gè)階段組成：預(yù)處理、滅菌和解析典型的環(huán)氧乙烷滅菌周期預(yù)熱、抽真空、加濕、加藥、滅菌34國(guó)內(nèi)外法規(guī)和指南中國(guó)藥典藥品GMP指南GB18279USPISO11138-BI,ISO11140-CIISO11135輻射滅菌輻射類型α射線，穿透力差β射線，穿透力略強(qiáng)于α射線

γ射線，穿透力很強(qiáng)X射線，人工產(chǎn)生的電磁輻射電子束，可用于表面消毒（低能量）或內(nèi)部消毒（高能量）電離輻射殺滅微生物的作用，可以分為直接作用和間接作用兩種35輻射滅菌輻射滅菌的優(yōu)點(diǎn)在常溫下處理，特別適用于不耐熱物品的處理不會(huì)產(chǎn)生放射性污染，滅菌后的產(chǎn)品無(wú)殘留毒性輻射穿透力強(qiáng)，可深入到被滅菌物體內(nèi)部，滅菌徹底，可對(duì)包裝后的產(chǎn)品滅菌對(duì)溫度、壓力無(wú)特殊要求，常溫常壓下即可進(jìn)行輻照滅菌工藝參數(shù)易于控制,易于進(jìn)行參數(shù)放行，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)，節(jié)約能源。36輻射滅菌國(guó)內(nèi)外法規(guī)和指南ISO11737PDATRNo.11PDATRNo.16中國(guó)藥典藥品GMP指南GB1828037過(guò)濾除菌定義：除菌過(guò)濾是指除去流體中微生物的工藝過(guò)程，該過(guò)程不應(yīng)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生不良影響。包括液體和氣體除菌過(guò)濾。藥品生產(chǎn)中采用的除菌過(guò)濾膜的孔徑一般不超過(guò)0.22μm（或者0.2μm，這兩種標(biāo)稱沒(méi)有區(qū)別）除菌級(jí)過(guò)濾器可以有不同的大小、形式和膜材，過(guò)濾器的使用者應(yīng)當(dāng)根據(jù)使用需要選擇不同的過(guò)濾器。38過(guò)濾除菌除菌級(jí)過(guò)濾器是指在工藝條件下每cm2

有效過(guò)濾面積可以截留107CFU的缺陷假單胞菌（Brevundimonasdiminuta,ATCC19146）的過(guò)濾器。影響細(xì)菌截留效果的因素過(guò)濾器源的因素，如過(guò)濾器類型、結(jié)構(gòu)、基礎(chǔ)聚合物、表面改性化學(xué)、孔徑分布和過(guò)濾膜的厚度等工藝源的因素，如流體組分、流體性質(zhì)、工藝條件，產(chǎn)品、料液和生產(chǎn)環(huán)境中實(shí)際微生物污染的特點(diǎn)和水平等3940過(guò)濾除菌國(guó)內(nèi)外指南性文件中國(guó)藥典藥品GMP指南YY/T0567YY/T0918PDATRNo.15PDATRNo.26PDATRNo.40PDATRNo.41低溫蒸汽滅菌氣體滅菌與低溫蒸汽滅菌的區(qū)別氣體滅菌穿透性好，分布均勻，不易受到溫濕度影響低溫蒸汽滅菌，兩個(gè)階段的濃度不同，條件不易控制41來(lái)自PDASterilizationTechnology低溫蒸汽滅菌滅菌劑的種類過(guò)氧化氫（HydrogenPeroxide，H2O2）過(guò)氧乙酸（PeraceticAcid-C2H4O3

）甲醛（Formaldehyde-CH2O）低溫蒸汽滅菌的特點(diǎn)室溫殘留，穿透性低，環(huán)境中的溫濕度會(huì)有差異，工藝的均一性不好42滅菌新技術(shù)電穿孔技術(shù)（Electroporation）低溫等離子體技術(shù)（Non-ThermalPlasma）超高壓技術(shù)（HighPressureProcessing）43HPP處理前的嗜熱脂肪芽孢桿菌HPP處理后的嗜熱脂肪芽孢桿菌44主題3.滅菌設(shè)備確認(rèn)與工藝驗(yàn)證453-1.設(shè)計(jì)階段到驗(yàn)證階段的基本要點(diǎn)4546項(xiàng)目設(shè)計(jì)-確認(rèn)的一籃子計(jì)劃46確認(rèn)活動(dòng)PQ/PV=性能試驗(yàn)用戶技術(shù)要求

即，項(xiàng)目的目標(biāo)？功能設(shè)計(jì)/要領(lǐng)設(shè)計(jì)

達(dá)到什么功能要求？性能確認(rèn)試驗(yàn)計(jì)劃運(yùn)行確認(rèn)試驗(yàn)計(jì)劃安裝檢查計(jì)劃包括管線儀表進(jìn)入項(xiàng)目實(shí)施影響評(píng)估設(shè)計(jì)確認(rèn)技術(shù)交底技術(shù)溝通及設(shè)計(jì)詳細(xì)設(shè)計(jì)--

即如何從工程上實(shí)現(xiàn)確認(rèn)活動(dòng)確認(rèn)活動(dòng)OQ=系統(tǒng)/設(shè)備調(diào)試IQ=完成安裝并進(jìn)行檢查工藝先導(dǎo)項(xiàng)目驗(yàn)證總計(jì)劃指導(dǎo)設(shè)備選型工藝及設(shè)備初定滅菌設(shè)備/工藝驗(yàn)證生命周期的活動(dòng)4747用戶需求標(biāo)準(zhǔn)(URS)具體設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)(DDS)試車(Commissioning)工廠驗(yàn)收測(cè)試(FAT)終端驗(yàn)收測(cè)試(SAT)設(shè)備靜態(tài)確認(rèn)(IQ)設(shè)備動(dòng)態(tài)確認(rèn)(OQ)設(shè)計(jì)確認(rèn)(DQ)設(shè)備確認(rèn)(IQ/OQ)工藝程序開(kāi)發(fā)性能確認(rèn)(PQ)和持續(xù)性監(jiān)控功能需求標(biāo)準(zhǔn)(FRS)滅菌微生物學(xué)的基本概念無(wú)菌(Sterility)：是指產(chǎn)品中不存在任何活的微生物。這個(gè)絕對(duì)的概念，無(wú)法用實(shí)驗(yàn)來(lái)證明，不能成為工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)滅菌工藝(Sterilization)：通過(guò)適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段，將一定數(shù)量的活性微生物完全殺滅，并且使其生命活動(dòng)產(chǎn)生了不可逆轉(zhuǎn)的過(guò)程。無(wú)菌保證值（SAL）：指經(jīng)滅菌后非無(wú)菌品的概率。通常為10-6或10-3（來(lái)自ISO11139）4849最終滅菌產(chǎn)品無(wú)菌的標(biāo)準(zhǔn)49通過(guò)物理/生物學(xué)方法證明，單位產(chǎn)品內(nèi)微生物存在的概率不超過(guò)百萬(wàn)分之一(即批產(chǎn)品的污染概率不超過(guò)百萬(wàn)分之一).無(wú)菌保證值（SAL）：指經(jīng)滅菌后非無(wú)菌品的概率。最終滅菌產(chǎn)品非無(wú)菌品的概率不超過(guò)百萬(wàn)分之一，即SAL≤10-650EMEA滅菌工藝決策樹(shù)（適用于液體制劑）50能否耐受121℃×15分鐘的濕熱滅菌條件選擇121℃×15分鐘濕熱滅菌工藝是否能否耐受F0≥8的濕熱滅菌條件，以達(dá)到SAL≤10-6選擇F0≥8的濕熱滅菌工藝，以達(dá)到SAL≤10-6是否使用無(wú)菌過(guò)濾加無(wú)菌灌封方式是否能否經(jīng)可截留微生物的過(guò)濾器對(duì)藥液進(jìn)行除菌過(guò)濾對(duì)原料預(yù)先滅菌，進(jìn)行無(wú)菌配制和無(wú)菌灌封51EMEA滅菌工藝決策樹(shù)

（適用于非溶液劑型、半固體或干粉制劑）5152滅菌方法的選擇52滅菌方法的選擇受滅菌對(duì)象的穩(wěn)定性、使用目的和具體條件等限制，可以選擇不同的方法。非產(chǎn)品類物質(zhì)的滅菌方法，環(huán)境設(shè)施宜使用化學(xué)滅菌法處理，玻璃容器一般使用干熱滅菌處理，衣物、橡膠制品等多使用濕熱滅菌處理，模擬分裝用乳糖則可以選擇輻射滅菌處理，對(duì)制劑產(chǎn)品的滅菌方法的選擇根據(jù)需要產(chǎn)品的特性進(jìn)行決策53設(shè)備的安裝確認(rèn)（IQ）和運(yùn)行確認(rèn)（OQ）53安裝確認(rèn)（InstallQualification）證明滅菌設(shè)備安裝的所有關(guān)鍵環(huán)節(jié)（如，設(shè)備構(gòu)造、控制/監(jiān)測(cè)系統(tǒng)、運(yùn)行系統(tǒng)、安全系統(tǒng)及所有零部件）符合法規(guī)和設(shè)計(jì)要求，并根據(jù)設(shè)備生產(chǎn)商的建議進(jìn)行。運(yùn)行確認(rèn)（OperationalQualification）對(duì)設(shè)備進(jìn)行檢查和試運(yùn)行，為滅菌程序所有重要控制參數(shù)的確定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。54滅菌工藝的驗(yàn)證（PQ/PV）54共同點(diǎn)滅菌劑分布與穿透（物理檢測(cè)手段）微生物殺滅水平（生物指示劑測(cè)試）目的保證產(chǎn)品用途達(dá)到滅菌效果55滅菌工藝再驗(yàn)證的頻率55定期：每年至少一次重大變更關(guān)鍵滅菌控制參數(shù)

裝載方式

被滅菌品及其包裝方式重大維修563-2.濕熱滅菌工藝5657A.工作原理和工藝標(biāo)準(zhǔn)5758腔室滅菌設(shè)備－例158蒸汽－空氣混和氣體滅菌器59腔室滅菌設(shè)備－例159蒸汽－空氣混和氣體滅菌程序的溫度-壓力曲線圖60腔室滅菌設(shè)備－例260重力置換式滅菌器工作原理1、蒸汽進(jìn)入2、高溫度蒸汽比重小，在上部3、蒸汽不斷進(jìn)入4、冷凝水及低溫度空氣在底部被擠走61腔室滅菌設(shè)備－例261重力置換式滅菌程序溫度-壓力曲線圖62腔室滅菌設(shè)備－例362預(yù)真空式滅菌器此程序特別適用于對(duì)包藏或夾帶空氣的物品，如織物、膠管、過(guò)濾器和灌裝機(jī)部件等的滅菌63腔室滅菌設(shè)備－例363高真空式滅菌程序溫度-壓力曲線圖溫度真空64腔室滅菌設(shè)備－例364脈動(dòng)真空式滅菌程序溫度-壓力曲線圖65腔室滅菌設(shè)備－例465水噴淋式滅菌器循環(huán)泵冷卻水工業(yè)蒸汽滅菌柜腔室水壓縮空氣沒(méi)標(biāo)出66腔室滅菌設(shè)備－例466水噴淋式滅菌器67腔室滅菌設(shè)備－例467水噴淋式滅菌程序溫度-壓力曲線圖68在線滅菌系統(tǒng)－示例68灌裝線和固定罐相連接的在線滅菌系統(tǒng)69濕熱滅菌的能量轉(zhuǎn)移濕熱滅菌通常指一定壓力下的蒸汽滅菌，盡管有時(shí)也采用過(guò)熱水滅菌，如水浴式或噴淋式。蒸汽滅菌是一個(gè)高效的熱傳遞方式，因?yàn)檎羝佑|溫度較低的物體時(shí)，會(huì)釋放潛熱，生成冷凝水，直到物體溫度與蒸汽溫度相等。6970濕熱滅菌的熱力學(xué)基礎(chǔ)70濕熱滅菌的熱力學(xué)基礎(chǔ)壓力-溫度相圖7172濕熱滅菌微生物學(xué)相關(guān)術(shù)語(yǔ)FT：指T℃下的滅菌時(shí)間F0：指標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間。將121℃作為標(biāo)準(zhǔn)滅菌溫度，當(dāng)Z設(shè)定為10℃時(shí)，滅菌程序賦予被滅菌品121℃下的等效滅菌時(shí)間。D值：在一定溫度下將微生物數(shù)量殺滅90%或下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位所需要的時(shí)間（分鐘）Z值：當(dāng)某種微生物的D值下降（或上升）一個(gè)對(duì)數(shù)（log）單位時(shí)，其溫度應(yīng)升高（或降低）的度數(shù)。7273濕熱滅菌微生物學(xué)相關(guān)術(shù)語(yǔ)滅菌率（L，LethalRate）系指在某溫度下滅菌1分鐘所的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間(分鐘)，即F0和FT的比值(L＝F0/FT)

公式：L(Tref,z)=10(T-Tref)/zT被加熱的物體的實(shí)際溫度Tref參照溫度，通常取121℃z微生物的z值（可取10℃），指使微生物的D值變化一個(gè)對(duì)數(shù)單位滅菌溫度所需調(diào)節(jié)的度數(shù)73用121℃和z取10代入，得L=1，即一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)單位，其它溫度下，可代入計(jì)算74不同溫度和z值下的滅菌率T/(℃)Z＝7Z＝8Z＝9Z＝10Z＝11Z＝121000.0010.0020.0060.0080.0120.018…………………1150.1390.1780.2150.2510.2850.3161160.1930.2370.2780.3160.3510.3831170.2680.3160.3590.3980.4330.4641180.3730.4220.4640.5010.5340.562118.50.4390.4890.5270.5620.5930.6191190.5180.5620.5990.6310.6580.6811200.7200.7500.7740.7940.8110.8251211.001.001.001.001.001.001221.391.331.291.251.231.217475F0值示意圖7576滅菌方式的開(kāi)發(fā)與確認(rèn)7677滅菌方式的選擇決策樹(shù)7778濕熱滅菌工藝的無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)78原則標(biāo)準(zhǔn)--定義通過(guò)物理/生物學(xué)方法證明，單位產(chǎn)品內(nèi)微生物存在的概率不得超過(guò)百萬(wàn)分之一，即批產(chǎn)品的污染概率不得超過(guò)百萬(wàn)分之一實(shí)際控制標(biāo)準(zhǔn)過(guò)度殺滅法殘存概率法79藥典要求EP對(duì)過(guò)度殺滅法的工藝要求： 對(duì)溶液的滅菌條件至少為121oC×15分鐘；也可采用其它組合條件，但滅菌效果須與上述相等效。目標(biāo)：SAL=10-6或更低USP對(duì)過(guò)度殺滅法的工藝要求： 對(duì)溶液的滅菌條件需達(dá)到12D，至少為12分鐘目標(biāo)：使D121=1分鐘，數(shù)量為106的微生物經(jīng)過(guò)滅菌后達(dá)到SAL=10-6。7980滅菌工藝的開(kāi)發(fā)與設(shè)計(jì)根據(jù)滅菌前帶菌量進(jìn)行設(shè)計(jì)（產(chǎn)品特性設(shè)計(jì)法）基于對(duì)滅菌前產(chǎn)品所含微生物的耐熱特性和數(shù)量以及產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性滅菌后產(chǎn)品的污染概率須小于10-6。過(guò)度殺滅法基于工藝程序能殺滅更加耐熱微生物，并且再加上一定的安全系數(shù)；對(duì)生物指示劑孢子的殺滅能力更高。工藝選擇兼顧產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性和無(wú)菌要求。8081濕熱滅菌中的微生物死亡模式實(shí)驗(yàn)表明，在恒定的滅菌溫度下，同一種微生物的死亡遵循一級(jí)動(dòng)力學(xué)規(guī)則，其死亡速率是微生物的耐熱參數(shù)D和殺滅時(shí)間的函數(shù)，與滅菌程序中微生物的數(shù)量無(wú)關(guān)。可用下面的半對(duì)數(shù)一級(jí)動(dòng)力模式表示：LgNF=LgN0

-F(T,z)/DT

NF滅菌F分鐘后，微生物存活的數(shù)量F(T,z)滅菌程序在T℃和溫度系數(shù)z下的等效滅菌時(shí)間DT微生物在T℃下，下降一對(duì)數(shù)單位所需的時(shí)間。說(shuō)明：該特定溫度必須與F值計(jì)算中所采用的溫度相一致N0初始微生物的數(shù)量8182B.設(shè)備確認(rèn)要素8283從設(shè)計(jì)到確認(rèn)的簡(jiǎn)化模式83用戶需求(即目標(biāo))功能設(shè)計(jì)--確定要哪些功能詳細(xì)設(shè)計(jì)--工程上如何實(shí)現(xiàn)完成建設(shè)功能試驗(yàn)啟動(dòng)性能試驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)施PQOQIQ設(shè)計(jì)確認(rèn)工廠驗(yàn)收84滅菌設(shè)備的用戶需求（原則）需要思考的問(wèn)題工藝的要求是什么（即達(dá)到怎樣的滅菌效果）？滅菌對(duì)象：固體物品？液體產(chǎn)品？還是用于消毒和滅菌帶生物污染的垃圾？最大滅菌物品的尺寸及可能的裝載密度？對(duì)滅菌柜的具體要求（如有關(guān)運(yùn)行/控制方面）?8485滅菌設(shè)備的用戶需求（原則）關(guān)注要點(diǎn)安裝部位和維修空間工藝要求控制系統(tǒng)使用效率8586滅菌設(shè)備的用戶需求（示例）工藝要求

腔室體積，內(nèi)架車層數(shù)；腔室工作壓力；設(shè)備運(yùn)行時(shí)間；是否需要使用脈動(dòng)真空程序；腔體內(nèi)溫度的分布均勻性；雙扉滅菌柜應(yīng)有門互鎖功能；設(shè)備具有良好的密閉性…安全要求

故障檢測(cè)和報(bào)警功能；設(shè)備安全罩配備，電氣控制柜配有安全鎖；工作噪聲要求；急停按鈕；斷電保護(hù)…安裝環(huán)境要求8687滅菌設(shè)備的用戶需求（示例）公用系統(tǒng)要求

壓縮空氣；純蒸汽；工業(yè)蒸汽；冷卻水；電力要求外觀及材質(zhì)要求自控系統(tǒng)要求

PLC自動(dòng)控制，觸摸屏控制；數(shù)據(jù)存儲(chǔ)；具有自動(dòng)記錄打印功能，記錄數(shù)據(jù)傳感器和控制所用傳感器不是同一個(gè)；程序參數(shù)可調(diào)；三級(jí)密碼權(quán)限管理；可選擇“中文”；控制模式包括“自動(dòng)”和“手動(dòng)”；預(yù)留通信接口文件與服務(wù)要求其他要求8788建造和測(cè)試程序8889滅菌設(shè)備的確認(rèn)活動(dòng)清單（示例）89

中外存在差異90滅菌設(shè)備的確認(rèn)活動(dòng)清單（示例）9091滅菌設(shè)備的確認(rèn)活動(dòng)清單（示例）9192設(shè)備的性能確認(rèn)（PQ）要素試車（空載熱分布試驗(yàn)和/或滿載熱分布試驗(yàn)）92溫度探頭10-20支，探頭精確度±0.15℃須有探頭與腔室原探頭并列放置檢測(cè)報(bào)警和安全系統(tǒng)的可靠性真空系統(tǒng)的可靠性（產(chǎn)生的效率、維持時(shí)間等）滅菌溫度下，各點(diǎn)間最大溫差（腔室內(nèi)的）<=2℃，同一點(diǎn)的最大溫差±1.0℃重復(fù)試驗(yàn)至少3次以證明重現(xiàn)性93C.工藝驗(yàn)證要素9394滅菌工藝的驗(yàn)證（PV）要素每種裝載方式下的熱穿透試驗(yàn)證明特定滅菌程序殺滅微生物的均一性和有效性;證明滅菌程序的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性;證明滅菌程序?qū)Ρ粶缇锲返倪m用性。容器內(nèi)部產(chǎn)品的熱穿透試驗(yàn)證明在每種裝載方式下：各點(diǎn)溫度分布的均一性、滅菌結(jié)果的重現(xiàn)性;證明最冷點(diǎn)達(dá)到了設(shè)定效果。94高中低95PV常用BI形式生物指示劑試驗(yàn)結(jié)果與熱穿透試驗(yàn)保持一致所有測(cè)試點(diǎn)均應(yīng)確保SAL不低于10-6試驗(yàn)次數(shù)足以符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求（至少重復(fù)3次試驗(yàn)，試樣數(shù)為10–20支/次）9596滅菌程序殺滅力的表述生物殺滅力（FBiological）用以證明滅菌程序殺滅效果的標(biāo)準(zhǔn)BI制劑試驗(yàn)結(jié)果可直接反映滅菌效果有時(shí)可取代物理手段的不足(如探頭無(wú)法放入)局限性：較難進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析物理殺滅力（FPhysical）長(zhǎng)期的試驗(yàn)確立了標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間Fo與微生物殺滅的效果的相關(guān)性，因此，人們常將它作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)精確測(cè)定熱分布和熱穿透狀況，用于計(jì)算不同滅菌程序的滅菌效果測(cè)量數(shù)據(jù)便于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析9697滅菌程序PV合格標(biāo)準(zhǔn)物理確認(rèn)的合格標(biāo)準(zhǔn)(示例)如下：用熱穿透探頭測(cè)得超過(guò)設(shè)定溫度的最短及最長(zhǎng)時(shí)間F0的下限及上限；滅菌階段結(jié)束時(shí)的最低F0值滅菌階段的最低和最高壓力飽和蒸汽溫度和壓力之間的關(guān)系滅菌階段腔室的最低和最高溫度熱穿透溫度探頭之間的最大溫差或F0的變化范圍熱分布試驗(yàn)中溫度探頭間的最大溫差最長(zhǎng)平衡時(shí)間；最少正常運(yùn)行的探頭數(shù)9798滅菌程序PV合格標(biāo)準(zhǔn)-續(xù)生物確認(rèn)合格標(biāo)準(zhǔn)（示例）：微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)中，孢子的對(duì)數(shù)下降值符合預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的陽(yáng)性和陰性對(duì)照符合設(shè)定要求應(yīng)在滅菌程序性能確認(rèn)中進(jìn)行必要的論證，證明FPHY和FBIO間大體上一致（基本一致：F生物可能小些，F(xiàn)物理可能大些）

98選用BI的注意事項(xiàng)只能采用芽孢來(lái)做濕熱滅菌程序的挑戰(zhàn)性試驗(yàn)：純度要求--這些孢子必須達(dá)到一定的純度（基本沒(méi)有生長(zhǎng)態(tài)菌或微小的殘骸和團(tuán)塊等）穩(wěn)定性好--有確定的耐熱特性（不應(yīng)有大的波動(dòng)）有合法來(lái)源--其母代菌株應(yīng)該從公認(rèn)的菌種庫(kù)購(gòu)買挑戰(zhàn)試驗(yàn)中，所選用生物指示劑的接種量應(yīng)比產(chǎn)品或其它裝載的生物負(fù)荷高生物指示劑的耐熱性應(yīng)比生物負(fù)荷強(qiáng)99100濕熱滅菌驗(yàn)證常用的BI在過(guò)度殺滅程序的確認(rèn)中，最常采用BI：嗜熱脂肪芽孢桿菌/Geobacillusstearothermophilus，前稱Bacillusstearothermophilus；也可采用其他對(duì)濕熱滅菌耐熱性強(qiáng)的微生物。在采用“殘存概率法”確認(rèn)中，典型的BI有：Clostridumsporogenes（生孢梭菌，梭狀芽孢桿菌

）Bacillusatrophaeus（萎縮芽孢桿菌）Bacillussmithii（史密氏桿菌，前稱凝結(jié)芽孢桿菌）Bacillussubtilis（枯草芽孢桿菌5230）100對(duì)市銷售BI的確認(rèn)進(jìn)行形態(tài)學(xué)和純度確認(rèn)(至少鑒別至菌屬)芽孢計(jì)數(shù)復(fù)核蒸汽滅菌工藝用BI，95-100℃下暴熱預(yù)處理15分鐘環(huán)氧乙烷和干熱滅菌工藝用BI，80-85℃下暴熱預(yù)處理10分鐘預(yù)處理后迅速轉(zhuǎn)移至冰水浴內(nèi)合格標(biāo)準(zhǔn)：Lg(實(shí)測(cè)值)和Lg(標(biāo)示值)在0.3-1.48之間D值復(fù)核(根據(jù)需要及實(shí)驗(yàn)室能力來(lái)定)101101生物指示劑驗(yàn)證-過(guò)度殺滅工藝選擇與滅菌條件（工藝、對(duì)象及程序）相適應(yīng)的生物指示劑（B.stearothermophilusATCC7953被視為標(biāo)準(zhǔn)菌株D121.1=1.5分，單位數(shù)量105–106個(gè)孢子）生物指示劑與溫度探頭并列在同一部位(10-20支)按規(guī)定條件培養(yǎng)生物指示劑，如嗜熱脂肪芽孢桿菌的培養(yǎng)溫度為55-60oC，培養(yǎng)7天，每天檢查。對(duì)生物指示劑用培養(yǎng)基進(jìn)行促生長(zhǎng)檢查進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)所有經(jīng)受挑戰(zhàn)試驗(yàn)的樣品均呈陰性102102生物指示劑驗(yàn)證–非過(guò)度殺滅工藝選擇與滅菌條件（工藝、對(duì)象及程序）相適應(yīng)的生物指示劑生物指示劑的耐熱性不得低于孢子在相應(yīng)產(chǎn)品中的耐熱性不得低于產(chǎn)品中污染菌的耐熱性用于每次挑戰(zhàn)試驗(yàn)的所有BI批號(hào)必須相同生物指示劑的接種量計(jì)算 F0=D121.1×(logN0-logNt)103103驗(yàn)證條件優(yōu)化案例：某公司生產(chǎn)三種大輸液產(chǎn)品A、B和C，與微生物相關(guān)的基本參數(shù)如右表請(qǐng)根據(jù)這表中參數(shù)，設(shè)計(jì)出產(chǎn)品滅菌程序的BI驗(yàn)證方案BI=生物指示劑產(chǎn)品ABC藥液含菌量≤1000≤100≤1000D值DC≤DBIDC≤DBIDC≤DBI滅菌程序117℃×25分117℃×20分117℃×20分F09-138.5-129-13DBI0.80.90.7104驗(yàn)證條件優(yōu)化可只選B代表三個(gè)產(chǎn)品，理由：生物指示劑在其中的耐熱性最高，而滅菌程序的F0值下限8.5低于其它二個(gè)產(chǎn)品驗(yàn)證時(shí)，生物負(fù)荷取高限，以103CFU/瓶計(jì)算試驗(yàn)應(yīng)證明，滅菌程序能使BI至少下降9個(gè)對(duì)數(shù)單位,所需F0為0.9×9=8.1分當(dāng)F0為8.1分時(shí)，這三個(gè)產(chǎn)品均可達(dá)到無(wú)菌保證的要求105106標(biāo)準(zhǔn)溶液的使用要求孢子在標(biāo)準(zhǔn)溶液中的耐熱性≥孢子在產(chǎn)品溶液中的耐熱性孢子的耐熱性在標(biāo)準(zhǔn)溶液中比較穩(wěn)定有孢子在標(biāo)準(zhǔn)溶液中的耐熱性資料標(biāo)準(zhǔn)溶液更方便于制備和檢測(cè)適用于替代滅菌程序相近的不同產(chǎn)品的滅菌工藝驗(yàn)證106滅菌程序確認(rèn)示例-1過(guò)度殺滅工藝期望的物理殺滅時(shí)間FPHY和FBIO均≥12分。如使用D為2.1分的BI，那么完全殺滅挑戰(zhàn)試驗(yàn)中BI的最低N0可通過(guò)以下方法計(jì)算：LgN0=LgNF＋F/D=Lg100＋12/2.1LgN0=5.71；N0=5.2×105因此，能殺滅N0=5.2×105、D為2.1分的BI最低可接受滅菌程序，系經(jīng)BI確認(rèn)的過(guò)度殺滅程序FBIO≥12.0分107滅菌程序確認(rèn)示例-2非完全殺滅終點(diǎn)程序。如設(shè)計(jì)要求F0為8分鐘；BI接種數(shù)量N0為2×106；D為2.0分鐘，則終點(diǎn)NF的最大值可以通過(guò)計(jì)算得到，并仍然可以保證滅菌程序賦予被滅菌品期望的FBIOLgNF=LgN0－F/D=Lg2×106－8.0/2.0（降4lg單位）LgNF=6.3－4.0=2.30；∴NF≈

2.0×102因此，如果最低合格滅菌程序MAC能使D為2分鐘的BI由N0=2×106低于NF~2.0×102（終點(diǎn)值）時(shí)，則證明生物殺滅時(shí)間FBIO≥8分鐘。108109滅菌工藝驗(yàn)證文件編制示例1

Purpose&Scope目的及范圍2

Background背景2-1產(chǎn)品介紹2-2滅菌釜介紹（加熱及水噴淋裝置，溫度控制系統(tǒng)）2-3裝載及位置命名2-4滅菌程序2-5術(shù)語(yǔ)解釋3

RiskAnalysis風(fēng)險(xiǎn)分析風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別：產(chǎn)品內(nèi)部冷熱點(diǎn)、滅菌釜腔室內(nèi)溫度分布風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別：產(chǎn)品熱穿透、產(chǎn)品裝載方式風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別：挑戰(zhàn)試驗(yàn)參數(shù)、生物指示劑適用性110滅菌工藝驗(yàn)證文件編制示例4Personnel實(shí)施人員5Calibration設(shè)備儀器校驗(yàn)5-1滅菌釜溫度控制系統(tǒng)介紹5-2滅菌釜測(cè)溫探頭5-3驗(yàn)證用儀器6StandardProcedures試驗(yàn)規(guī)程7

ValidationMethod驗(yàn)證方法7-1驗(yàn)證策略7-2樣品制備111滅菌工藝驗(yàn)證文件編制示例7-3樣品測(cè)試a包裝內(nèi)熱分布b滿載溫度分布c單車裝載溫度分布d最小裝載熱穿透e單車裝載熱穿透f滿載熱穿透g生物指示劑挑戰(zhàn)試驗(yàn)8

Deviations偏差管理1123-3.干熱滅菌工藝112113干熱滅菌/去熱原工藝的適用范圍干熱滅菌適用于能夠耐受高溫且不容易為蒸汽穿透或者容易被濕熱所破壞的物料粉末油品、油脂玻璃制品和不銹鋼鋼設(shè)備干熱滅菌需要更高的溫度和（或者）更長(zhǎng)的時(shí)間，但其工藝通常比較簡(jiǎn)單濕熱滅菌的基本概念及所開(kāi)發(fā)的方法，通?？蛇m用于干熱滅菌113114工藝目標(biāo)目標(biāo)1：干熱滅菌（殘存概率）根據(jù)被滅菌品的微生物污染數(shù)量及其耐熱性，確立滅菌程序的相關(guān)參數(shù)目標(biāo)2：干熱滅菌（過(guò)度殺滅）被滅菌品的熱穩(wěn)定性更好采用此程序時(shí)，通常沒(méi)有必要對(duì)生物負(fù)荷進(jìn)行測(cè)試目標(biāo)3：干熱滅菌與細(xì)菌內(nèi)毒素滅活去熱原是最終目標(biāo)賦予被滅菌品的微生物殺滅力遠(yuǎn)高于目標(biāo)2114115干熱滅菌/去熱原工藝驗(yàn)證通常的物理和生物學(xué)測(cè)試順序設(shè)備安裝確認(rèn)設(shè)備基本性能的確認(rèn)關(guān)鍵傳感器、監(jiān)控器和控制系統(tǒng)的校準(zhǔn)滅菌設(shè)備熱動(dòng)力學(xué)特性的確認(rèn)（熱分布確認(rèn)）工藝的設(shè)計(jì)/工程學(xué)確認(rèn)工藝的微生物學(xué)驗(yàn)證測(cè)試數(shù)據(jù)的回顧審核整個(gè)文件的最終批準(zhǔn)115116干熱對(duì)微生物的熱致死特性干熱對(duì)微生物的熱致死特性與濕熱相似FH值的概念與濕熱滅菌中的F0值相類似，是指在某特定溫度下所產(chǎn)生的滅菌效果與在160℃下相等效時(shí)所需要的滅菌時(shí)間(分鐘)計(jì)算公式116117生物指示劑確認(rèn)的意義通過(guò)生物指示劑驗(yàn)證確認(rèn)加熱介質(zhì)的均勻性（溫度分布）確認(rèn)裝載方式中升溫最慢點(diǎn)/冷點(diǎn)的位置（熱穿透）確認(rèn)使耐干熱滅菌的孢子下降12個(gè)對(duì)數(shù)單位的最小FH值（過(guò)度殺滅工藝）程序的重現(xiàn)性，即保證最難加熱點(diǎn)/冷點(diǎn)位置始終能獲得規(guī)定FH值117118干熱對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的破壞作用基本知識(shí)點(diǎn)熱原可以通過(guò)干熱破壞通常采用非常高的溫度，提供了極大的無(wú)菌安全余地應(yīng)考慮到熱處理之前的細(xì)菌內(nèi)毒素水平對(duì)一個(gè)干熱程序的去熱原能力，可以通過(guò)滅活已知挑戰(zhàn)水平的純細(xì)菌內(nèi)毒素來(lái)加以證明118119干熱對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的破壞作用對(duì)FH值的計(jì)算公式與前述相似，以250℃作為標(biāo)準(zhǔn)溫度，Z最低取46.4℃，該公式僅用于對(duì)內(nèi)毒素的去除進(jìn)行量化估測(cè)如果干熱滅菌溫度超過(guò)220℃，可以用考查細(xì)菌內(nèi)毒素下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位的方法來(lái)替代生物指示劑驗(yàn)證干熱去熱原的通常條件250℃×30min650℃×1min180℃×4hour119120主題4.參數(shù)放行的定義參數(shù)放行定義--歐洲AsystemofreleasethatgivestheassurancethatproductisoftheintendedqualitybasedoninformationcollectedduringthemanufacturingprocessandonthecompliancewithspecificGMPrequirementsrelatedtoParametricRelease.參數(shù)放行是根據(jù)生產(chǎn)過(guò)程中收集到的信息，以及符合GMP與參數(shù)放行相關(guān)具體要求，以保證產(chǎn)品符合預(yù)期的質(zhì)量的放行系統(tǒng)。(EUAnnex17,2001)不只局限于無(wú)菌檢查，可應(yīng)用于成品的質(zhì)量特性。121參數(shù)放行定義--美國(guó)Asterilityassurancereleaseprogramwheredemonstratedcontrolofthesterilizationprocessenablesafirmtousedefinedcriticalprocesscontrols,inlieuofthesterilitytest,tofulfilltheintentof21CFR211.165(a)and211.167(a)USFDASubmissionGuidance,2010andUSFDACPGSec.490.200,2012。能夠確認(rèn)制造廠采用了確定的關(guān)鍵工藝控制，以替代無(wú)菌檢查，并保證滿足聯(lián)邦法規(guī)211.165(a)和211.167(a)無(wú)菌要求的放行計(jì)劃/系統(tǒng)。只適用于無(wú)菌保證計(jì)劃，重心放在滅菌工藝。122參數(shù)放行定義--全球PDA技術(shù)報(bào)告No.30--2012修訂版Asterilityreleaseprogramthatisfoundeduponeffectivecontrol,monitoringanddocumentationofavalidatedsterile-productmanufacturingprocesswheresterilityreleaseisbasedondemonstratedachievementofcriticaloperationalparametersinlieuofend-productsterilitytesting.基于對(duì)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的無(wú)菌產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝的有效控制、監(jiān)測(cè)并有文件記錄，證明關(guān)鍵運(yùn)行參數(shù)達(dá)到無(wú)菌放行要求，以替代最終產(chǎn)品無(wú)菌檢查的無(wú)菌放行系統(tǒng)。123無(wú)菌檢查與參數(shù)放行的對(duì)比按藥典要求取樣及檢驗(yàn)以最終產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)以生產(chǎn)過(guò)程中收集到的信息為依據(jù)符合GMP與參數(shù)放行相關(guān)要求保證產(chǎn)品符合預(yù)期的質(zhì)量無(wú)菌檢查參數(shù)放行參數(shù)放行的界定檢查無(wú)菌=>無(wú)菌檢查=>等待14天等待檢驗(yàn)結(jié)果在等待結(jié)果期間，產(chǎn)品壓庫(kù)

無(wú)菌檢查有假陽(yáng)性或陽(yáng)性的可能，須調(diào)查檢查無(wú)菌=>參數(shù)放行要求=>不需要等待即時(shí)放行在放行前，不需要作無(wú)菌檢查126主題5.參數(shù)放行的技術(shù)基礎(chǔ)1275-1.無(wú)菌保證系統(tǒng)127參數(shù)放行的基本概念什么是參數(shù)放行參數(shù)放行系指根據(jù)對(duì)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的滅菌工藝進(jìn)行有效的控制、監(jiān)測(cè)和相關(guān)文檔資料，來(lái)代替對(duì)最終滅菌產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)菌檢查的無(wú)菌評(píng)價(jià)放行程序128實(shí)行參數(shù)放行的意義滅菌工藝驗(yàn)證的自然結(jié)果克服成品無(wú)菌檢查的統(tǒng)計(jì)學(xué)局限性和不精確結(jié)果減少質(zhì)量控制成本縮短生產(chǎn)周期，降低庫(kù)存壓力128參數(shù)放行的實(shí)踐要求參數(shù)放行須得到政府部門的批準(zhǔn)嚴(yán)格控制和監(jiān)測(cè)滅菌前產(chǎn)品中的微生物污染狀況嚴(yán)格控制滅菌工藝須用指示劑監(jiān)控每個(gè)滅菌批須有區(qū)分已滅菌和未滅菌產(chǎn)品的系統(tǒng)容器的密封完好性驗(yàn)證129129歐美國(guó)家的參數(shù)放行美國(guó)針對(duì)四種滅菌方式濕熱滅菌、干熱滅菌、環(huán)氧乙烷滅菌、輻射滅菌130歐洲針對(duì)三種滅菌方式濕熱滅菌、干熱滅菌、輻射滅菌130參數(shù)放行法的首選工藝濕熱滅菌工藝是參數(shù)放行的首選工藝有效、簡(jiǎn)單微生物殺滅范圍廣研究透徹，可信賴度高易于控制和驗(yàn)證131131濕熱滅菌工藝的參數(shù)放行流程控制列出滅菌工藝的操作步驟明確每一關(guān)鍵參數(shù)的一級(jí)和二級(jí)控制限度明確必須報(bào)警的運(yùn)行參數(shù)及機(jī)械性能參數(shù)安裝足夠的輔助性傳感/測(cè)量?jī)x器給予主系統(tǒng)充分的保障保證所有的工藝參數(shù)監(jiān)測(cè)器均處在經(jīng)校驗(yàn)的合格狀態(tài)下工作產(chǎn)品滅菌工藝驗(yàn)證之前應(yīng)首先對(duì)滅菌釜進(jìn)行徹底的（空載）性能確認(rèn)分別在滿載或部分裝載狀態(tài)下，驗(yàn)證滅菌設(shè)備的性能132132濕熱滅菌工藝參數(shù)放行的關(guān)鍵工藝參數(shù)腔室溫度（一級(jí)控制、二級(jí)控制，溫度儀表）腔室壓力（一級(jí)控制、二級(jí)控制，壓力儀表）滅菌時(shí)間（一級(jí)控制為暴熱時(shí)間，二級(jí)控制為各階段的開(kāi)始時(shí)間和相應(yīng)時(shí)間間隔）滅菌工藝賦予產(chǎn)品的F0值評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：如果上述不合格關(guān)鍵參數(shù)超過(guò)一個(gè)，即使生物指示劑指示合格，該批應(yīng)視為非無(wú)菌批。更不得以無(wú)菌檢查結(jié)果來(lái)仲裁133133參數(shù)放行的基礎(chǔ)–無(wú)菌保證系統(tǒng)無(wú)菌保證系統(tǒng)是實(shí)施參數(shù)放行的基礎(chǔ)，是為保證產(chǎn)品無(wú)菌所采取的計(jì)劃和活動(dòng)的總和。對(duì)于最終滅菌產(chǎn)品，通過(guò)消除可能導(dǎo)致非無(wú)菌品產(chǎn)生的各種潛在風(fēng)險(xiǎn)，達(dá)到無(wú)菌保證的目的。134134無(wú)菌保證系統(tǒng)的要素135無(wú)菌保證系統(tǒng)產(chǎn)品設(shè)計(jì)原料和輔助系統(tǒng)滅菌前生產(chǎn)過(guò)程防止混淆產(chǎn)品密封完整性滅菌工藝全面質(zhì)量管理體系1351365-2.風(fēng)險(xiǎn)管理136生產(chǎn)過(guò)程控制–基本原則基本原則生產(chǎn)按照經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的工藝進(jìn)行防止微生物污染發(fā)生防止已滅菌品與未滅菌品發(fā)生混淆137137最終滅菌工藝產(chǎn)品的微生物污染控制點(diǎn)滅菌前微生物污染水平初始污染菌數(shù)及其耐熱性滅菌釜冷卻用水避免產(chǎn)品在滅菌工藝的冷卻階段中發(fā)生二次污染138138風(fēng)險(xiǎn)管理的生命周期139風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)分析風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)風(fēng)險(xiǎn)控制風(fēng)險(xiǎn)降低風(fēng)險(xiǎn)接受風(fēng)險(xiǎn)溝通溝通風(fēng)險(xiǎn)回顧回顧139批產(chǎn)品參數(shù)放行前應(yīng)確認(rèn)和檢查的無(wú)菌保證相關(guān)項(xiàng)目產(chǎn)品完好性滅菌前產(chǎn)品和滅菌釜冷卻介質(zhì)的微生物污染水平滅菌指示劑的變化情況過(guò)濾器完好性試驗(yàn)測(cè)試數(shù)據(jù)滅菌釜已完成計(jì)劃性預(yù)修和常規(guī)檢查，所有非計(jì)劃性維修均經(jīng)無(wú)菌保證工程師和微生物專家審批所有儀器、儀表均經(jīng)校準(zhǔn)滅菌釜通過(guò)產(chǎn)品裝載確認(rèn)試驗(yàn)產(chǎn)品灌封數(shù)量、送往滅菌釜的數(shù)量、滅菌釜內(nèi)數(shù)量、移出滅菌釜的數(shù)量、送往包裝工序的數(shù)量和考慮放行的數(shù)量均處于平衡狀態(tài)滅菌過(guò)程記錄經(jīng)相關(guān)人員審核放行140140參數(shù)放行的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估示例141141參數(shù)放行的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估示例142142參數(shù)放行程序示意圖1431431445-3.耐熱性測(cè)定與密封完整性驗(yàn)證144145單細(xì)胞微生物的死亡規(guī)律在死亡過(guò)程中活性細(xì)胞數(shù)量以相對(duì)恒定的速率下降使用物理或化學(xué)方法殺滅純種單細(xì)胞微生物時(shí)，單位時(shí)間內(nèi)死亡的微生物數(shù)量比例（如百分比）相對(duì)穩(wěn)定145LgN=-U/DT+LgN0微生物死亡遵循半對(duì)數(shù)致死規(guī)律146半對(duì)數(shù)熱致死模型(等效滅菌線）146

147D值的影響因素物理、化學(xué)條件、環(huán)境因素、濕度，如：孢子所處的介質(zhì)、測(cè)試溫度、內(nèi)包裝材料滅菌時(shí)間（由加熱和冷卻滯后所致的影響）加熱和培養(yǎng)計(jì)數(shù)之間的溫度、時(shí)間和環(huán)境條件用來(lái)培養(yǎng)計(jì)數(shù)滅菌后孢子的培養(yǎng)基等芽孢是否處于被包裹狀態(tài)，此狀態(tài)會(huì)使其耐熱性大大增強(qiáng)微生物的耐熱性（或統(tǒng)稱對(duì)滅菌劑的耐受性）147148D值的影響因素-續(xù)影響微生物的耐熱性因素還包括：在氯化鈉或氯化鉀存在條件下，G..嗜熱脂肪桿菌的耐熱性會(huì)增強(qiáng)；在二價(jià)鈣離子和鎂離子存在時(shí)，B.凝結(jié)芽孢桿菌的耐熱性也會(huì)增強(qiáng)；在鉀離子存在的情況下，C.梭狀芽孢梭菌的耐熱性會(huì)增強(qiáng)鰲合劑的存在（如檸檬酸）也會(huì)影響耐熱性，強(qiáng)鰲合劑可以競(jìng)爭(zhēng)性作用周圍的離子，使包衣式芽孢的耐熱性產(chǎn)生變化。在接種的載體上（例如紙或橡膠），也可觀察到相似的耐熱性差異。……148FractionNegativeMethod陰性分?jǐn)?shù)法

-Spearman-KarberMethod史丕曼-卡伯法

-Stumbo,Murphy,andCochranMethod

DT值的確定方法149DirectEnumerationMethod直接計(jì)數(shù)法

又稱SurvivalCurveMethod殘存曲線法149D值測(cè)定儀器150Biological

Indicator—EvaluatorResistometer(簡(jiǎn)稱BIER/Vessel)油浴裝置–用于殘存曲線法

150D值測(cè)定儀器的典型溫度曲線151溫度時(shí)間(分鐘)151殘存曲線法測(cè)定D值儀器及材料油?。ㄟm宜的溫度范圍，精度，容量）毛細(xì)管與支架試驗(yàn)用芽孢懸浮液準(zhǔn)備工作懸浮液占試驗(yàn)懸浮液比例不超過(guò)10%每0.05ml試驗(yàn)懸浮液中的芽孢為106-108確定試驗(yàn)參數(shù)數(shù)據(jù)分析線性回歸和相關(guān)系數(shù)要求Y=mX+b，m=(Y∑X-∑XY)/(X∑X-∑X2)γ=mδX/δY152152實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)153121.1±0.5℃下梭狀芽孢桿菌孢子在PBS中的存活數(shù)量時(shí)間(min)存活數(shù)量(CFU)對(duì)數(shù)值01.02.03.04.05.01.7×105

3.1×104

5.0×103

1.3×103

4.0×102

4.0×101

5.244.493.703.112.61.60153D值計(jì)算154121.1±0.5oC下梭狀芽孢桿菌孢子在PBS中的存活曲線1.根據(jù)曲線進(jìn)行測(cè)量：任選兩個(gè)對(duì)數(shù)值的整數(shù)值，找到相對(duì)應(yīng)的滅菌時(shí)間用時(shí)間差除以對(duì)數(shù)差，得D值慣用法：測(cè)出一個(gè)對(duì)數(shù)單位的時(shí)間差如圖示:3.1-1.7=1.4(分鐘)2.利用EXCEL平臺(tái)直接計(jì)算殘存曲線斜率，再取負(fù)倒數(shù)D=-1/(-0.6989)=1.43(分鐘)154Spearman-KarberMethod155T=Tk－d/2－(d/10×f)例：通過(guò)陰性分?jǐn)?shù)法估算D值[每組中無(wú)微生物生長(zhǎng)樣品數(shù)（f）/每組樣品數(shù)（n）]D=T/(log10N0+0.2507)155Stumbo-Murphy-CochranMethod156DT=u/Log10N0－Log10(2.303Log10n/q)n–樣品總數(shù)

q–暴熱處理后的陰性樣品總數(shù)156Z值測(cè)定與計(jì)算測(cè)定某一微生物至少在三個(gè)溫度點(diǎn)的D值每個(gè)溫度點(diǎn)的D值至少單獨(dú)測(cè)量三次,取其平均值(同溫度下各D值間差異應(yīng)小于10%);以D值對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo),溫度點(diǎn)為橫坐標(biāo),繪出Z值線(線性相關(guān)系數(shù)r2>0.9);該線的斜率的負(fù)倒數(shù)即為某微生物在特定介質(zhì)內(nèi)的Z值.157157產(chǎn)品密封完整性驗(yàn)證–目的與要求理論上講，無(wú)菌檢查有助于發(fā)現(xiàn)因密封性缺陷而產(chǎn)生大面積微生物污染的產(chǎn)品應(yīng)證明產(chǎn)品經(jīng)受挑戰(zhàn)性滅菌（如最高F0值或二次滅菌）后，在其有效期內(nèi)始終保持密封系統(tǒng)的完好性密封完好性的再驗(yàn)證158158產(chǎn)品密封完整性驗(yàn)證–微生物侵入試驗(yàn)示意圖159培養(yǎng)基容器支架菌懸液容器/膠塞密封處159產(chǎn)品密封完整性驗(yàn)證–微生物侵入試驗(yàn)的要點(diǎn)（1）樣品準(zhǔn)備在生產(chǎn)線上將培養(yǎng)基灌裝至產(chǎn)品容器，并在生產(chǎn)線上完成壓塞、軋蓋工序。經(jīng)最高溫度-F0值組合程序滅菌培養(yǎng)14天，確認(rèn)無(wú)微生物生長(zhǎng)確認(rèn)培養(yǎng)基的靈敏度160160產(chǎn)品密封完整性驗(yàn)證–微生物侵入試驗(yàn)的要點(diǎn)（2）測(cè)試用微生物–銅綠假單胞菌ATCC9027測(cè)試后培養(yǎng)7天首次測(cè)試后，利用剩余樣品每隔12個(gè)月重復(fù)挑戰(zhàn)試驗(yàn)1次，直至有效期滿。161161162主題6.參數(shù)放行實(shí)施展望參數(shù)放行的歷史1981年美國(guó)首個(gè)藥品參數(shù)放行申請(qǐng)遞交。1985年1月，在正式的行業(yè)指南公布前，獲得獲批首次遞交的申請(qǐng)被視為次后申請(qǐng)的標(biāo)準(zhǔn)模式1987年，F(xiàn)DA頒布法規(guī)CPG7132a.13直到上世紀(jì)90年代中期，才有其他公司獲得參數(shù)放行的批準(zhǔn)2010年2月，F(xiàn)DA參數(shù)放行申報(bào)指南2012年8月，F(xiàn)DA更新了CPG（達(dá)標(biāo)指南）163目前支持參數(shù)放行的國(guó)家美國(guó)英國(guó)瑞士瑞典愛(ài)爾蘭荷蘭挪威西班牙新加坡澳大利亞比利時(shí)加拿大哥倫比亞捷克共和國(guó)丹麥德國(guó)匈牙利中國(guó)？164ICH參數(shù)放行引入ICH文件之中參數(shù)放行已達(dá)成國(guó)際性共識(shí)參數(shù)放行的基本條件強(qiáng)化微生物/工程學(xué)的監(jiān)管教育背景：工程學(xué)和微生物學(xué)經(jīng)驗(yàn)：有微生物學(xué)和滅菌工程設(shè)計(jì)的工作經(jīng)驗(yàn)經(jīng)濕熱滅菌和無(wú)菌保證的專業(yè)培訓(xùn)有足夠的能力，來(lái)監(jiān)管無(wú)菌保證程序的開(kāi)發(fā)、驗(yàn)證以及日?？刂?監(jiān)測(cè)，包括：驗(yàn)證計(jì)劃和科學(xué)合理的手段產(chǎn)品的處置有微生物學(xué)及工程設(shè)計(jì)資質(zhì)的人員參數(shù)放行程序的基本要素166無(wú)菌保證計(jì)劃以可靠的質(zhì)量系統(tǒng)為基礎(chǔ)可靠的無(wú)菌保證計(jì)劃由以下要素組成：對(duì)微生物和工程學(xué)的強(qiáng)化監(jiān)管質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理產(chǎn)品設(shè)計(jì)生產(chǎn)工藝的設(shè)計(jì)對(duì)環(huán)境和產(chǎn)品生物負(fù)荷的監(jiān)測(cè)和控制將已滅菌與未滅菌產(chǎn)品隔離（裝載監(jiān)控）滅菌系統(tǒng)設(shè)計(jì)滅菌工藝開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證持續(xù)監(jiān)測(cè)和控制變更控制風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的重點(diǎn)人員產(chǎn)品設(shè)計(jì)生產(chǎn)工藝設(shè)計(jì)環(huán)境，產(chǎn)品生物負(fù)荷的監(jiān)測(cè)和控制已滅菌未滅菌品的隔離滅菌系統(tǒng)的設(shè)計(jì)滅菌工藝開(kāi)發(fā)和確認(rèn)/驗(yàn)證持續(xù)監(jiān)測(cè)和控制變更控制工藝流程的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估168美國(guó)藥典中的微生物學(xué)章節(jié)內(nèi)容169Chart10b.Microbiology—SterileProducts?55?BIOLOGICALINDICATORS—RESISTANCEPERFORMANCETESTS?63?MYCOPLASMATESTS?71?STERILITYTESTS?151?PYROGENTEST?1072?DISINFECTANTSANDANTISEPTICS?1112?APPLICATIONOFWATERACTIVITYDETERMINATIONTONONSTERILE

PHARMACEUTICALPRODUCTS?1113?MICROBIALCHARACTERIZATION,IDENTIFICATION,ANDSTRAINTYPING?1116?MICROBIOLOGICALCONTROLANDMONITORINGOFASEPTICPROCESSINGENVIRONMENTS?1117?MICROBIOLOGICALBESTLABORATORYPRACTICES?1207?PACKAGEINTEGRITYEVAL