骨髓活檢免疫組化的具體運用及病例分享教學課件

骨髓活檢免疫組化的具體運用及病例分享王蓉Ppt骨髓活檢免疫組化的具體運用及病例分享王蓉Ppt1骨髓活檢的適應癥1.全血細胞減少2.不明原因的肝脾腫大3.不明原因的發(fā)熱4.骨髓干抽或稀釋5.低增生性MDS或AL6.淋巴瘤侵犯骨髓7.再生障礙性貧血8.骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤骨髓活檢的適應癥1.全血細胞減少2病例一男，23歲，因“發(fā)熱伴頭痛1月余，右側(cè)肢體疼痛20天”入院。每日仍有發(fā)熱，體溫波動于約3739℃，無明顯畏寒、寒戰(zhàn)，無盜汗納差、腹脹，伴大便次數(shù)較前減少，肛門未停止排氣，活動上肢時偶有胸骨旁局限性疼痛，無明顯腹痛、腹瀉，無惡心、嘔吐，無咳嗽、咳痰，無皮疹，無尿頻、尿急、尿痛，睡眠一般，近2月體重減輕15斤。病例一男，23歲，因“發(fā)熱伴頭痛1月余，右側(cè)肢體疼痛20天”3實驗室檢查血常規(guī)提示W(wǎng)BC1.12×109/L，LY92%，HB88g/L，PLT112×109/L。生化白蛋白

37.1

g/L，乳酸脫氫酶

416

U/L，γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶

62.9

U/L。ECT全身多處骨代謝異常增高。實驗室檢查血常規(guī)提示W(wǎng)BC1.12×109/L，LY924骨髓涂片檢查提示三系增生明顯活躍，血小板散在少見。骨髓涂片檢查提示三系增生明顯活躍，血小板散在少見。5骨髓活檢結(jié)果提示：骨髓腔中見大量腫瘤細胞。骨髓活檢結(jié)果提示：骨髓腔中見大量腫瘤細胞。6免疫組化結(jié)果CD3（），CD20（），CD38（），CD138（+），MUM1（），Ki67（+），κ（+），λ（+），EMA（+++），CKpan（+++），Des（），MyoD1（），CD30（），CD56（），Syn（），CgA（），AFP（），PLAP（），CD117（），P63（），CD99（），S100（），CK7（），CK20（），TTF1（），結(jié)合HE切片，本例為骨髓轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤，傾向轉(zhuǎn)移性癌。免疫組化結(jié)果CD3（），CD20（），CD38（），C7骨髓涂片再次復片閱片可見一處成堆出血的異常細胞，骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤。骨髓涂片再次復片閱片可見一處成堆出血的異常細胞，骨髓轉(zhuǎn)移性腫8成堆出現(xiàn)的有核紅細胞成堆出現(xiàn)的有核紅細胞9結(jié)果診斷骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)果診斷骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤10病例二女，60歲，因“全身肌肉關(guān)節(jié)疼痛8月余”入院（風濕科）?；颊?月余前無明顯誘因下出現(xiàn)全身多部位疼痛，包括肢帶肌及多關(guān)節(jié)疼痛，肩背及腰臀部疼痛明顯，關(guān)節(jié)以雙髖、雙膝、雙肩受累明顯，伴頭痛、雙眼復視、耳鳴，伴面部麻木。全身無皮疹，皮膚濕潤；兩側(cè)頸部分別可觸及腫大淋巴結(jié)一枚，約蠶豆大小，無觸痛，質(zhì)地韌，活動度可。病例二女，60歲，因“全身肌肉關(guān)節(jié)疼痛8月余”入院（風濕科）11實驗室檢查血常規(guī)白細胞17.44×109/L，中性粒細胞82.10

%，紅細胞計數(shù)

1.95×109/L，血紅蛋白

57

g/L，

血小板計數(shù)

65

×109/L。生化示谷丙轉(zhuǎn)氨酶

41.7

U/L谷草轉(zhuǎn)氨酶

59.4

U/L乳酸脫氫酶

1000

U/L，γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶

154

U/L，堿性磷酸酶

495.8

U/L，總膽紅素22.3umol/L，間接膽紅素15.9umol/L，白蛋白

34.2

g/L。實驗室檢查血常規(guī)白細胞17.44×109/L，中性粒細胞12骨髓涂片提示三系增生減低，閱片可見原幼細胞。骨髓涂片提示三系增生減低，閱片可見原幼細胞。13骨髓活檢提示骨髓中原幼細胞明顯增多，灶性增生。骨髓活檢提示骨髓中原幼細胞明顯增多，灶性增生。14免疫組化結(jié)果CD3散在小簇+，CD5散在小簇+，CD20+++，PAX5++++，CD34散在+，MPO粒細胞+，TdT，BCL6，CD10結(jié)合HE切片，本例提示為B細胞淋巴瘤侵犯骨髓免疫組化結(jié)果CD3散在小簇+，CD5散在小簇+，CD20++15CD14:陰性CD15:65.9umol/L，白蛋白

34.9umol/L，白蛋白

34.0%，在所有WM、MCLSMZL、B-CLPD-U中不表達。25

g/L↓,免疫球蛋白G

5.免疫球蛋白免疫球蛋白M

0.70umol/L，DBIL72.9%CD10:66.1%CD56:陰性CD38:98.路下游的關(guān)鍵核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子1%CD64:陰性CD33:52.2%CD13:20%CD11b:陰性CD34:6.04×1012/L；提示三系增生減低，骨髓稀釋可能。異常細胞：該細胞胞體偏大，胞漿量豐富，呈藍色，有泡沫感；肝臟膈頂部不規(guī)則片狀低密度影，考慮偏良性病變可能。9%CD3:陰性病理檢查結(jié)果（脾穿刺）極少量穿刺組織，見出血，極少量纖維結(jié)締組織，和極少量肝組織。淋巴瘤的診斷，分型及鑒別診斷標本TCRβ、TCRγ重排檢測陰性三月后復查骨髓涂片提示急性淋巴細胞白血病CD14:陰性CD15:65.三月后復查骨16流式細胞結(jié)果流式細胞結(jié)果17R1門表達HLADR:97.2%CD13:20%CD11b:陰性CD34:6.1%CD117:陰性CD19:96.1%CD64:陰性CD33:52.2%CD14:陰性CD15:65.1%CD56:陰性CD38:98.7%CD22:43.4%CD20:64.9%CD10:66.9%CD3:陰性CD7:陰性CD5:陰性CD8:陰性CD4:陰性CD2:陰性TDT:33.7%cMPO:陰性cCD3:陰性cCD79a:88.5%結(jié)論CD13+CD33+CD15+BALL,建議進一步檢測t(9;22).骨髓活檢免疫組化的具體運用及病例分享教學課件18染色體結(jié)果46,XX[20]染色體結(jié)果46,XX[20]19分子生物學結(jié)果IGH、IGK重排檢測陽性標本TCRβ、TCRγ重排檢測陰性分子生物學結(jié)果IGH、IGK重排檢測陽性20結(jié)果診斷BALL結(jié)果診斷BALL21病例三男，70歲，因“腹痛半月余，加重伴皮膚鞏膜黃染8天”入院。（消化科）3月前，患者無明顯誘因出現(xiàn)腹部隱痛，伴腹脹、厭食，偶有惡心，無嘔吐，無發(fā)熱，未予重視。1周后，患者飲酒1斤后，腹痛、腹脹、厭食等癥狀加重。患者訴血便，共4次，每次量約50ml，色鮮紅，不成形，訴便后腹痛輕微緩解，無嘔吐、惡心、發(fā)熱，發(fā)現(xiàn)皮膚、鞏膜逐漸增黃。病例三男，70歲，因“腹痛半月余，加重伴皮膚鞏膜黃染8天”入22實驗室檢查血常規(guī)N0.77×109/L，PLT50×109/L。生化ALT321U/L，AST334U/L，LDH601U/L，ALB23.60g/L，TBIL82.70umol/L，DBIL72.10umol/L。腹部增強CT膽囊泥沙樣結(jié)石，膽囊炎。前列腺腫大。脾大。實驗室檢查血常規(guī)N0.77×109/L，PLT5023全腹部增強CT肝臟膈頂部不規(guī)則片狀低密度影，考慮偏良性病變可能。炎性病變？脂肪肝；膽囊增大，結(jié)合MR，考慮膽囊炎。脾大；脾臟內(nèi)側(cè)緣團塊樣稍低密度影及脾門處低密度影，性質(zhì)待定。腹腔干周圍脂肪密度稍高，局限性腹脂炎可能。盆腔少許積液。全腹部增強CT肝臟膈頂部不規(guī)則片狀低密度影，考慮偏良性病變可24CT引導下脾穿刺術(shù)病理檢查結(jié)果（脾穿刺）極少量穿刺組織，見出血，極少量纖維結(jié)締組織，和極少量肝組織。CT引導下脾穿刺術(shù)病理檢查結(jié)果（脾穿刺）極少量穿刺組織，見出25肝臟穿刺病理示（肝穿刺）條索樣肝組織，可見3個匯管區(qū)，肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝細胞輕度水腫變性，部分肝細胞脂肪變性，部分肝細胞內(nèi)膽汁淤積，匯管區(qū)少量炎細胞浸潤。肝臟穿刺病理示（肝穿刺）條索樣肝組織，可見3個匯管區(qū)，肝小葉26PETCT腹部顯影清晰，肝臟密度較低，CT值約37HU，肝臟頂部見一大小約3.3cm×2.8cm稍低密度影，CT值約30HU，放射性攝取增高，SUV最大值12.6；脾臟體積稍大，其內(nèi)見2處放射性攝取增高灶，較大約5.3cm×4.4cm，密度稍低，CT值約35HU，SUV最大值12.2；右側(cè)心包脂肪墊見一大小約稍大淋巴結(jié)影，放射性攝取增高，SUV最大值5.8。PETCT腹部顯影清晰，肝臟密度較低，CT值約37HU，肝臟27第一次骨髓涂片（3.06）提示三系增生減低，骨髓稀釋可能。第一次骨髓涂片（3.06）提示三系增生減低，骨髓稀釋可能。28是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。0%，在所有WM、MCLSMZL、B-CLPD-U中不表達。標本TCRβ、TCRγ重排檢測陰性25

g/L↓,免疫球蛋白G

5.12×109/L，LY92%，HB88g/L，PLT112×109/L。男，23歲，因“發(fā)熱伴頭痛1月余，右側(cè)肢體疼痛20天”入院。腹腔干周圍脂肪密度稍高，局限性腹脂炎可能。生化ALT321U/L，AST334U/L，LDH601U/L，ALB23.路下游的關(guān)鍵核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合HE切片，本例提示為NK細胞淋巴瘤侵犯骨髓可能性大。04×1012/L；9%CD10:66.10例LEF1陰性患者均為具有不典型免疫表型標本TCRβ、TCRγ重排檢測陰性髓系腫瘤由于細胞分化階段不如淋系明顯，所以髓系腫瘤主要依靠骨髓象及遺傳學，僅作輔助診斷?；颊咭驉盒膰I吐，為胃內(nèi)容物，次數(shù)頻繁，排便排氣，2天前出現(xiàn)鼻出血1次，鮮紅色，量約20ml。79,XX,-1,-1,-3,-4,-4,-5,+8,-9,-10,-13,-16,-16,-16,-16,+18,-21,-22,+mar1,+mar2[cp3]/46,XX[7]0%，在所有WM、MCLSMZL、B-CLPD-U中不表達。生化ALT321U/L，AST334U/L，LDH601U/L，ALB23.8cm稍低密度影，CT值約30HU，放射性攝取增高，SUV最大值12.女，60歲，因“全身肌肉關(guān)節(jié)疼痛8月余”入院（風濕科）。第二次骨髓涂片（3.24）三系增生減低，異常細胞占2%，可見吞噬組織細胞。是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。第二次骨髓涂片（3.2429第三次骨髓涂片（3.30）骨髓提示大量吞噬組織細胞，三系增生活躍，形態(tài)大致正常。第三次骨髓涂片（3.30）骨髓提示大量吞噬組織細胞，三系增生30骨髓活檢（3.24）提示異常細胞散在及小簇浸潤，胞體偏大，形態(tài)不規(guī)則，胞漿量豐富，核不規(guī)則，核染色質(zhì)較粗，部分可見核仁。閱片可見吞噬組織細胞。骨髓活檢（3.24）提示異常細胞散在及小簇浸潤，胞體偏大，形31免疫組化CD3散在+，CD5散在+，CD20散在+，PAX5散在+，CD2+++，CD56++，TIA1+++。結(jié)合HE切片，本例提示為NK細胞淋巴瘤侵犯骨髓可能性大。免疫組化CD3散在+，CD5散在+，CD20散在+，PAX532第二次骨髓活檢（3.30）提示三系增生活躍，易見吞噬組織細胞，未見異形細胞。第二次骨髓活檢（3.30）提示三系增生活躍，易見吞噬組織細胞33流式細胞，染色體及分子生物學均未見異常EB病毒DNA定量1.36×104/ml。結(jié)論考慮侵襲性NK淋巴瘤？流式細胞，染色體及分子生物學均未見異常34病例四女，52歲，上腹部疼痛7天，伴鼻出血1次患者因惡心嘔吐，為胃內(nèi)容物，次數(shù)頻繁，排便排氣，2天前出現(xiàn)鼻出血1次，鮮紅色，量約20ml。體格檢查神志清，精神萎，發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，查體合作，中度貧血貌，全身皮膚粘膜無黃染，無肝掌及蜘蛛痣，雙側(cè)頸部可觸及腫大淋巴結(jié)，約1×1cm，質(zhì)中，有觸痛，余淺表淋巴結(jié)未及腫大。右側(cè)季肋部疼痛。肝脾未及。病例四女，52歲，上腹部疼痛7天，伴鼻出血1次35實驗室檢查血常規(guī)示W(wǎng)BC2.75×109/L；RBC2.04×1012/L；HB63g/L；血小板計數(shù)35×109/L。生化檢查肌酐

336.7

umol/L↑，尿酸

1122

umol/↑L，乳酸脫氫酶

597

U/L↑，總蛋白

56.90

g/L↓，白蛋白

34.10

g/L↓；血清免疫固定電泳輕鏈L型；24h尿輕鏈總量L輕鏈7.144g腹部B超脂肪肝，右腎結(jié)石，左腎囊腫，膽胰脾輸尿管未見明顯異常；胸腹部CT雙側(cè)胸膜多發(fā)淋巴結(jié)影，伴兩側(cè)胸腔積液，雙側(cè)腎上腺多發(fā)結(jié)節(jié)影，考慮轉(zhuǎn)移瘤可能，支氣管炎，兩下肺慢性炎癥，雙側(cè)腎盂結(jié)石；免疫球蛋白免疫球蛋白M

0.17

g/L↓,免疫球蛋A

0.25

g/L↓,免疫球蛋白G

5.13

g/L↓；鐵蛋白

796.50

ng/mL↑；實驗室檢查36骨髓涂片骨髓增生活躍閱片可見異常細胞10×10骨髓涂片骨髓增生活躍閱片可見10×1037100×10100×10100×10100×10異常細胞：該細胞胞體偏大，胞漿量豐富，呈藍色，有泡沫感；胞核大，大多不規(guī)則，異型性明顯，可見多核。100×10100×10100×10100×10異常細胞：該38初步考慮那些疾??？1.淋巴瘤骨髓浸潤？2.骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤？3.急性白血病？4.多發(fā)性骨髓瘤？5.其他疾病？初步考慮那些疾病？1.淋巴瘤骨髓浸潤？399umol/L，白蛋白

34.結(jié)果提示：骨髓腔中見大量腫瘤細胞。胸腹部CT雙側(cè)胸膜多發(fā)淋巴結(jié)影，伴兩側(cè)胸腔積液，雙側(cè)腎上腺多發(fā)結(jié)節(jié)影，考慮轉(zhuǎn)移瘤可能，支氣管炎，兩下肺慢性炎癥，雙側(cè)腎盂結(jié)石；CD3（），CD20（），CD38（），CD138（+），MUM1（），Ki67（+），κ（+），λ（+），EMA（+++），CKpan（+++），Des（），MyoD1（），CD30（），CD56（），Syn（），CgA（），AFP（），PLAP（），CD117（），P63（），CD99（），S100（），CK7（），CK20（），TTF1（），結(jié)合HE切片，本例為骨髓轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤，傾向轉(zhuǎn)移性癌。胸腹部CT雙側(cè)胸膜多發(fā)淋巴結(jié)影，伴兩側(cè)胸腔積液，雙側(cè)腎上腺多發(fā)結(jié)節(jié)影，考慮轉(zhuǎn)移瘤可能，支氣管炎，兩下肺慢性炎癥，雙側(cè)腎盂結(jié)石；1周后，患者飲酒1斤后，腹痛、腹脹、厭食等癥狀加重。是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。右側(cè)心包脂肪墊見一大小約稍大淋巴結(jié)影，放射性攝取增高，SUV最大值5.胸腹部CT雙側(cè)胸膜多發(fā)淋巴結(jié)影，伴兩側(cè)胸腔積液，雙側(cè)腎上腺多發(fā)結(jié)節(jié)影，考慮轉(zhuǎn)移瘤可能，支氣管炎，兩下肺慢性炎癥，雙側(cè)腎盂結(jié)石；淋巴瘤的診斷，分型及鑒別診斷是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。60g/L，TBIL82.體格檢查神志清，精神萎，發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，查體合作，中度貧血貌，全身皮膚粘膜無黃染，無肝掌及蜘蛛痣，雙側(cè)頸部可觸及腫大淋巴結(jié)，約1×1cm，質(zhì)中，有觸痛，余淺表淋巴結(jié)未及腫大。組化CD38++，CD138++，CD56，κ，λ+，MUM1+++，CD34血管內(nèi)皮+。進一步分析免疫組化結(jié)果1%CD64:陰性CD33:52.實驗室檢查生化ALT321U/L，AST334U/L，LDH601U/L，ALB23.骨髓病理提示，結(jié)節(jié)樣增生的幼稚細胞，細胞胞體偏大，胞漿量豐富；胞核大，大多不規(guī)則，異型性明顯，約占有核細胞80%。9umol/L，白蛋白

34.骨髓病理提示，結(jié)節(jié)樣增生的40免疫組化結(jié)果組化CD38++，CD138++，CD56，κ，λ+，MUM1+++，CD34血管內(nèi)皮+。結(jié)合HE切片，本例考慮為多發(fā)性骨髓瘤。免疫組化結(jié)果組化CD38++，CD138++，CD56，κ，41流式細胞異常漿細胞占33%（CD138+CD38+CD19-CD56-）流式細胞異常漿細胞占33%（CD138+CD38+CD19-42染色體核型分析79,XX,-1,-1,-3,-4,-4,-5,+8,-9,-10,-13,-16,-16,-16,-16,+18,-21,-22,+mar1,+mar2[cp3]/46,XX[7]染色體核型分析79,XX,-1,-1,-3,-4,-4,-543分子生物學檢查該檢測標本IGK重排檢測陽性分子生物學檢查該檢測標本IGK重排檢測陽性44多發(fā)性骨髓瘤λ型DS分期III期B組ISS分期Ⅲ期結(jié)果多發(fā)性骨髓瘤λ型DS分期III期B組ISS分期Ⅲ期結(jié)果4570例MM患者不同檢測方法腫瘤負荷的比較方法骨髓涂片流式細胞骨髓活檢MM細胞比例26.29%±22.01%7.20%±10.92%59.50%±29.70%MM患者骨髓瘤細胞呈局灶性分布、骨髓粘滯度高以及骨髓穿刺抽取骨髓量較多導致標本稀釋所致，因此判定腫瘤負荷以骨髓活檢最為準確。初診MM，聯(lián)合骨髓活檢病理、骨髓穿刺及涂片流式細胞儀檢測檢測是目前MM骨髓診斷的“金標準”。70例MM患者不同檢測方法腫瘤負荷的比較方法骨髓涂片流式細胞46免疫組化是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。以特異性抗體（一抗）與組織中相應抗原反應后，加入酶標記的第二抗體，二抗與抗原抗體復合物的一抗結(jié)合，形成抗原抗體酶復合物，用所標記酶的底物與酶反應生成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物生成部位即為抗原存在部位。免疫組化是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。47免疫組化的優(yōu)點對異常細胞進行定位及定性對疾病急性診斷及鑒別診斷回顧性診斷及分析免疫組化的優(yōu)點對異常細胞進行定位及定性48免疫組化的應用淋巴瘤的診斷，分型及鑒別診斷髓系腫瘤由于細胞分化階段不如淋系明顯，所以髓系腫瘤主要依靠骨髓象及遺傳學，僅作輔助診斷。免疫組化的應用淋巴瘤的診斷，分型及鑒別診斷49結(jié)果的判定結(jié)果的判定50骨髓活檢免疫組化的具體運用及病例分享教學課件51總結(jié)臨床明確診斷總結(jié)臨床明確診斷52淋巴增強因子-1（LEF1）LEF1是LEF1/TCF轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一LEF1是經(jīng)典的Wnt信號通路下游的關(guān)鍵核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子

LEF1調(diào)節(jié)一系列與細胞周期和增殖相關(guān)的基因淋巴增強因子-1（LEF1）LEF1是LEF1/TCF53LEF1LEF1在結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等多種實體腫瘤均呈高表達LEF1在機體造血細胞，尤其是前B細胞和T淋巴細胞的正常分化過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用LEF1在多種血液惡性腫瘤中表達增高，在不同種類的惡性腫瘤中有著不完全相同的甚至完全相反的作用。LEF1LEF1在結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等多種實體腫54骨髓免疫組化病種陽性病例數(shù)（例）總病例數(shù)（例）陽性比例（%）CLL687887.2FL22010.0MCL 0170WM0200MZL050B-CLPD-U050骨髓免疫組化病種陽性病例數(shù)（例）總病例數(shù)（例）陽性比例（%）55LEF1蛋白在CLL、FL標本中存在表達，陽性率分別為87.2%、10.0%，在所有WM、MCLSMZL、B-CLPD-U中不表達。在CLL組和非CLL組（包括所有WM、MCL、FL、SMZL、B-CLPD-U等）比較存在顯著差異（P=0.000）。LEF1蛋白的表達水平在WM、MCL、FL、SMZL、B-CLPD-U等表達較低，組間比較無統(tǒng)計學差異（P=0.481）。結(jié)果分析結(jié)果分析56在78例CLL中共發(fā)現(xiàn)10例LEF1陰性患者慢淋免疫表型積分均≥4分經(jīng)過FISH檢測t(11;14)排除MCL10例LEF1陰性患者均為具有不典型免疫表型進一步分析免疫組化結(jié)果在78例CLL中共發(fā)現(xiàn)10例LEF1陰性患者進一步分析免疫組57LEF1陰性CLL典型CLL（LEF1陽性）CD5表達CD20表達CD5中等CD5弱CD20弱CD20強LEF1陰性CLL典型CLL（LEF1陽性）CD5表達CD258CD148CD200CD200CD148LEF1陰性CLL典型CLL（LEF1陽性）CD200/CD148>1CD200/CD148<1CD148CD200CD200CD148LEF1陰性CLL典59小結(jié)

LEF1的表達在CLL中顯著升高，與B-CLPD組的表達存在顯著差異，且以LEF1蛋白作為鑒別診斷CLL具有較高的特異度和敏感度（分別為97%，87%)，提示B-CLPD患者骨髓LEF1蛋白表達水平可作為CLL和其他B-CLPD鑒別。LEF1表達陰性的CLL具有獨特的免疫表型。小結(jié)60Thankyou!Thankyou!61謝謝觀看！謝謝觀看！62骨髓活檢免疫組化的具體運用及病例分享王蓉Ppt骨髓活檢免疫組化的具體運用及病例分享王蓉Ppt63骨髓活檢的適應癥1.全血細胞減少2.不明原因的肝脾腫大3.不明原因的發(fā)熱4.骨髓干抽或稀釋5.低增生性MDS或AL6.淋巴瘤侵犯骨髓7.再生障礙性貧血8.骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤骨髓活檢的適應癥1.全血細胞減少64病例一男，23歲，因“發(fā)熱伴頭痛1月余，右側(cè)肢體疼痛20天”入院。每日仍有發(fā)熱，體溫波動于約3739℃，無明顯畏寒、寒戰(zhàn)，無盜汗納差、腹脹，伴大便次數(shù)較前減少，肛門未停止排氣，活動上肢時偶有胸骨旁局限性疼痛，無明顯腹痛、腹瀉，無惡心、嘔吐，無咳嗽、咳痰，無皮疹，無尿頻、尿急、尿痛，睡眠一般，近2月體重減輕15斤。病例一男，23歲，因“發(fā)熱伴頭痛1月余，右側(cè)肢體疼痛20天”65實驗室檢查血常規(guī)提示W(wǎng)BC1.12×109/L，LY92%，HB88g/L，PLT112×109/L。生化白蛋白

37.1

g/L，乳酸脫氫酶

416

U/L，γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶

62.9

U/L。ECT全身多處骨代謝異常增高。實驗室檢查血常規(guī)提示W(wǎng)BC1.12×109/L，LY9266骨髓涂片檢查提示三系增生明顯活躍，血小板散在少見。骨髓涂片檢查提示三系增生明顯活躍，血小板散在少見。67骨髓活檢結(jié)果提示：骨髓腔中見大量腫瘤細胞。骨髓活檢結(jié)果提示：骨髓腔中見大量腫瘤細胞。68免疫組化結(jié)果CD3（），CD20（），CD38（），CD138（+），MUM1（），Ki67（+），κ（+），λ（+），EMA（+++），CKpan（+++），Des（），MyoD1（），CD30（），CD56（），Syn（），CgA（），AFP（），PLAP（），CD117（），P63（），CD99（），S100（），CK7（），CK20（），TTF1（），結(jié)合HE切片，本例為骨髓轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤，傾向轉(zhuǎn)移性癌。免疫組化結(jié)果CD3（），CD20（），CD38（），C69骨髓涂片再次復片閱片可見一處成堆出血的異常細胞，骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤。骨髓涂片再次復片閱片可見一處成堆出血的異常細胞，骨髓轉(zhuǎn)移性腫70成堆出現(xiàn)的有核紅細胞成堆出現(xiàn)的有核紅細胞71結(jié)果診斷骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)果診斷骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤72病例二女，60歲，因“全身肌肉關(guān)節(jié)疼痛8月余”入院（風濕科）。患者8月余前無明顯誘因下出現(xiàn)全身多部位疼痛，包括肢帶肌及多關(guān)節(jié)疼痛，肩背及腰臀部疼痛明顯，關(guān)節(jié)以雙髖、雙膝、雙肩受累明顯，伴頭痛、雙眼復視、耳鳴，伴面部麻木。全身無皮疹，皮膚濕潤；兩側(cè)頸部分別可觸及腫大淋巴結(jié)一枚，約蠶豆大小，無觸痛，質(zhì)地韌，活動度可。病例二女，60歲，因“全身肌肉關(guān)節(jié)疼痛8月余”入院（風濕科）73實驗室檢查血常規(guī)白細胞17.44×109/L，中性粒細胞82.10

%，紅細胞計數(shù)

1.95×109/L，血紅蛋白

57

g/L，

血小板計數(shù)

65

×109/L。生化示谷丙轉(zhuǎn)氨酶

41.7

U/L谷草轉(zhuǎn)氨酶

59.4

U/L乳酸脫氫酶

1000

U/L，γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶

154

U/L，堿性磷酸酶

495.8

U/L，總膽紅素22.3umol/L，間接膽紅素15.9umol/L，白蛋白

34.2

g/L。實驗室檢查血常規(guī)白細胞17.44×109/L，中性粒細胞74骨髓涂片提示三系增生減低，閱片可見原幼細胞。骨髓涂片提示三系增生減低，閱片可見原幼細胞。75骨髓活檢提示骨髓中原幼細胞明顯增多，灶性增生。骨髓活檢提示骨髓中原幼細胞明顯增多，灶性增生。76免疫組化結(jié)果CD3散在小簇+，CD5散在小簇+，CD20+++，PAX5++++，CD34散在+，MPO粒細胞+，TdT，BCL6，CD10結(jié)合HE切片，本例提示為B細胞淋巴瘤侵犯骨髓免疫組化結(jié)果CD3散在小簇+，CD5散在小簇+，CD20++77CD14:陰性CD15:65.9umol/L，白蛋白

34.9umol/L，白蛋白

34.0%，在所有WM、MCLSMZL、B-CLPD-U中不表達。25

g/L↓,免疫球蛋白G

5.免疫球蛋白免疫球蛋白M

0.70umol/L，DBIL72.9%CD10:66.1%CD56:陰性CD38:98.路下游的關(guān)鍵核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子1%CD64:陰性CD33:52.2%CD13:20%CD11b:陰性CD34:6.04×1012/L；提示三系增生減低，骨髓稀釋可能。異常細胞：該細胞胞體偏大，胞漿量豐富，呈藍色，有泡沫感；肝臟膈頂部不規(guī)則片狀低密度影，考慮偏良性病變可能。9%CD3:陰性病理檢查結(jié)果（脾穿刺）極少量穿刺組織，見出血，極少量纖維結(jié)締組織，和極少量肝組織。淋巴瘤的診斷，分型及鑒別診斷標本TCRβ、TCRγ重排檢測陰性三月后復查骨髓涂片提示急性淋巴細胞白血病CD14:陰性CD15:65.三月后復查骨78流式細胞結(jié)果流式細胞結(jié)果79R1門表達HLADR:97.2%CD13:20%CD11b:陰性CD34:6.1%CD117:陰性CD19:96.1%CD64:陰性CD33:52.2%CD14:陰性CD15:65.1%CD56:陰性CD38:98.7%CD22:43.4%CD20:64.9%CD10:66.9%CD3:陰性CD7:陰性CD5:陰性CD8:陰性CD4:陰性CD2:陰性TDT:33.7%cMPO:陰性cCD3:陰性cCD79a:88.5%結(jié)論CD13+CD33+CD15+BALL,建議進一步檢測t(9;22).骨髓活檢免疫組化的具體運用及病例分享教學課件80染色體結(jié)果46,XX[20]染色體結(jié)果46,XX[20]81分子生物學結(jié)果IGH、IGK重排檢測陽性標本TCRβ、TCRγ重排檢測陰性分子生物學結(jié)果IGH、IGK重排檢測陽性82結(jié)果診斷BALL結(jié)果診斷BALL83病例三男，70歲，因“腹痛半月余，加重伴皮膚鞏膜黃染8天”入院。（消化科）3月前，患者無明顯誘因出現(xiàn)腹部隱痛，伴腹脹、厭食，偶有惡心，無嘔吐，無發(fā)熱，未予重視。1周后，患者飲酒1斤后，腹痛、腹脹、厭食等癥狀加重?；颊咴V血便，共4次，每次量約50ml，色鮮紅，不成形，訴便后腹痛輕微緩解，無嘔吐、惡心、發(fā)熱，發(fā)現(xiàn)皮膚、鞏膜逐漸增黃。病例三男，70歲，因“腹痛半月余，加重伴皮膚鞏膜黃染8天”入84實驗室檢查血常規(guī)N0.77×109/L，PLT50×109/L。生化ALT321U/L，AST334U/L，LDH601U/L，ALB23.60g/L，TBIL82.70umol/L，DBIL72.10umol/L。腹部增強CT膽囊泥沙樣結(jié)石，膽囊炎。前列腺腫大。脾大。實驗室檢查血常規(guī)N0.77×109/L，PLT5085全腹部增強CT肝臟膈頂部不規(guī)則片狀低密度影，考慮偏良性病變可能。炎性病變？脂肪肝；膽囊增大，結(jié)合MR，考慮膽囊炎。脾大；脾臟內(nèi)側(cè)緣團塊樣稍低密度影及脾門處低密度影，性質(zhì)待定。腹腔干周圍脂肪密度稍高，局限性腹脂炎可能。盆腔少許積液。全腹部增強CT肝臟膈頂部不規(guī)則片狀低密度影，考慮偏良性病變可86CT引導下脾穿刺術(shù)病理檢查結(jié)果（脾穿刺）極少量穿刺組織，見出血，極少量纖維結(jié)締組織，和極少量肝組織。CT引導下脾穿刺術(shù)病理檢查結(jié)果（脾穿刺）極少量穿刺組織，見出87肝臟穿刺病理示（肝穿刺）條索樣肝組織，可見3個匯管區(qū)，肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝細胞輕度水腫變性，部分肝細胞脂肪變性，部分肝細胞內(nèi)膽汁淤積，匯管區(qū)少量炎細胞浸潤。肝臟穿刺病理示（肝穿刺）條索樣肝組織，可見3個匯管區(qū)，肝小葉88PETCT腹部顯影清晰，肝臟密度較低，CT值約37HU，肝臟頂部見一大小約3.3cm×2.8cm稍低密度影，CT值約30HU，放射性攝取增高，SUV最大值12.6；脾臟體積稍大，其內(nèi)見2處放射性攝取增高灶，較大約5.3cm×4.4cm，密度稍低，CT值約35HU，SUV最大值12.2；右側(cè)心包脂肪墊見一大小約稍大淋巴結(jié)影，放射性攝取增高，SUV最大值5.8。PETCT腹部顯影清晰，肝臟密度較低，CT值約37HU，肝臟89第一次骨髓涂片（3.06）提示三系增生減低，骨髓稀釋可能。第一次骨髓涂片（3.06）提示三系增生減低，骨髓稀釋可能。90是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。0%，在所有WM、MCLSMZL、B-CLPD-U中不表達。標本TCRβ、TCRγ重排檢測陰性25

g/L↓,免疫球蛋白G

5.12×109/L，LY92%，HB88g/L，PLT112×109/L。男，23歲，因“發(fā)熱伴頭痛1月余，右側(cè)肢體疼痛20天”入院。腹腔干周圍脂肪密度稍高，局限性腹脂炎可能。生化ALT321U/L，AST334U/L，LDH601U/L，ALB23.路下游的關(guān)鍵核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合HE切片，本例提示為NK細胞淋巴瘤侵犯骨髓可能性大。04×1012/L；9%CD10:66.10例LEF1陰性患者均為具有不典型免疫表型標本TCRβ、TCRγ重排檢測陰性髓系腫瘤由于細胞分化階段不如淋系明顯，所以髓系腫瘤主要依靠骨髓象及遺傳學，僅作輔助診斷?；颊咭驉盒膰I吐，為胃內(nèi)容物，次數(shù)頻繁，排便排氣，2天前出現(xiàn)鼻出血1次，鮮紅色，量約20ml。79,XX,-1,-1,-3,-4,-4,-5,+8,-9,-10,-13,-16,-16,-16,-16,+18,-21,-22,+mar1,+mar2[cp3]/46,XX[7]0%，在所有WM、MCLSMZL、B-CLPD-U中不表達。生化ALT321U/L，AST334U/L，LDH601U/L，ALB23.8cm稍低密度影，CT值約30HU，放射性攝取增高，SUV最大值12.女，60歲，因“全身肌肉關(guān)節(jié)疼痛8月余”入院（風濕科）。第二次骨髓涂片（3.24）三系增生減低，異常細胞占2%，可見吞噬組織細胞。是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。第二次骨髓涂片（3.2491第三次骨髓涂片（3.30）骨髓提示大量吞噬組織細胞，三系增生活躍，形態(tài)大致正常。第三次骨髓涂片（3.30）骨髓提示大量吞噬組織細胞，三系增生92骨髓活檢（3.24）提示異常細胞散在及小簇浸潤，胞體偏大，形態(tài)不規(guī)則，胞漿量豐富，核不規(guī)則，核染色質(zhì)較粗，部分可見核仁。閱片可見吞噬組織細胞。骨髓活檢（3.24）提示異常細胞散在及小簇浸潤，胞體偏大，形93免疫組化CD3散在+，CD5散在+，CD20散在+，PAX5散在+，CD2+++，CD56++，TIA1+++。結(jié)合HE切片，本例提示為NK細胞淋巴瘤侵犯骨髓可能性大。免疫組化CD3散在+，CD5散在+，CD20散在+，PAX594第二次骨髓活檢（3.30）提示三系增生活躍，易見吞噬組織細胞，未見異形細胞。第二次骨髓活檢（3.30）提示三系增生活躍，易見吞噬組織細胞95流式細胞，染色體及分子生物學均未見異常EB病毒DNA定量1.36×104/ml。結(jié)論考慮侵襲性NK淋巴瘤？流式細胞，染色體及分子生物學均未見異常96病例四女，52歲，上腹部疼痛7天，伴鼻出血1次患者因惡心嘔吐，為胃內(nèi)容物，次數(shù)頻繁，排便排氣，2天前出現(xiàn)鼻出血1次，鮮紅色，量約20ml。體格檢查神志清，精神萎，發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，查體合作，中度貧血貌，全身皮膚粘膜無黃染，無肝掌及蜘蛛痣，雙側(cè)頸部可觸及腫大淋巴結(jié)，約1×1cm，質(zhì)中，有觸痛，余淺表淋巴結(jié)未及腫大。右側(cè)季肋部疼痛。肝脾未及。病例四女，52歲，上腹部疼痛7天，伴鼻出血1次97實驗室檢查血常規(guī)示W(wǎng)BC2.75×109/L；RBC2.04×1012/L；HB63g/L；血小板計數(shù)35×109/L。生化檢查肌酐

336.7

umol/L↑，尿酸

1122

umol/↑L，乳酸脫氫酶

597

U/L↑，總蛋白

56.90

g/L↓，白蛋白

34.10

g/L↓；血清免疫固定電泳輕鏈L型；24h尿輕鏈總量L輕鏈7.144g腹部B超脂肪肝，右腎結(jié)石，左腎囊腫，膽胰脾輸尿管未見明顯異常；胸腹部CT雙側(cè)胸膜多發(fā)淋巴結(jié)影，伴兩側(cè)胸腔積液，雙側(cè)腎上腺多發(fā)結(jié)節(jié)影，考慮轉(zhuǎn)移瘤可能，支氣管炎，兩下肺慢性炎癥，雙側(cè)腎盂結(jié)石；免疫球蛋白免疫球蛋白M

0.17

g/L↓,免疫球蛋A

0.25

g/L↓,免疫球蛋白G

5.13

g/L↓；鐵蛋白

796.50

ng/mL↑；實驗室檢查98骨髓涂片骨髓增生活躍閱片可見異常細胞10×10骨髓涂片骨髓增生活躍閱片可見10×1099100×10100×10100×10100×10異常細胞：該細胞胞體偏大，胞漿量豐富，呈藍色，有泡沫感；胞核大，大多不規(guī)則，異型性明顯，可見多核。100×10100×10100×10100×10異常細胞：該100初步考慮那些疾?。?.淋巴瘤骨髓浸潤？2.骨髓轉(zhuǎn)移性腫瘤？3.急性白血病？4.多發(fā)性骨髓瘤？5.其他疾??？初步考慮那些疾??？1.淋巴瘤骨髓浸潤？1019umol/L，白蛋白

34.結(jié)果提示：骨髓腔中見大量腫瘤細胞。胸腹部CT雙側(cè)胸膜多發(fā)淋巴結(jié)影，伴兩側(cè)胸腔積液，雙側(cè)腎上腺多發(fā)結(jié)節(jié)影，考慮轉(zhuǎn)移瘤可能，支氣管炎，兩下肺慢性炎癥，雙側(cè)腎盂結(jié)石；CD3（），CD20（），CD38（），CD138（+），MUM1（），Ki67（+），κ（+），λ（+），EMA（+++），CKpan（+++），Des（），MyoD1（），CD30（），CD56（），Syn（），CgA（），AFP（），PLAP（），CD117（），P63（），CD99（），S100（），CK7（），CK20（），TTF1（），結(jié)合HE切片，本例為骨髓轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤，傾向轉(zhuǎn)移性癌。胸腹部CT雙側(cè)胸膜多發(fā)淋巴結(jié)影，伴兩側(cè)胸腔積液，雙側(cè)腎上腺多發(fā)結(jié)節(jié)影，考慮轉(zhuǎn)移瘤可能，支氣管炎，兩下肺慢性炎癥，雙側(cè)腎盂結(jié)石；1周后，患者飲酒1斤后，腹痛、腹脹、厭食等癥狀加重。是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。右側(cè)心包脂肪墊見一大小約稍大淋巴結(jié)影，放射性攝取增高，SUV最大值5.胸腹部CT雙側(cè)胸膜多發(fā)淋巴結(jié)影，伴兩側(cè)胸腔積液，雙側(cè)腎上腺多發(fā)結(jié)節(jié)影，考慮轉(zhuǎn)移瘤可能，支氣管炎，兩下肺慢性炎癥，雙側(cè)腎盂結(jié)石；淋巴瘤的診斷，分型及鑒別診斷是免疫學與組織化學相結(jié)合的一個分支。60g/L，TBIL82.體格檢查神志清，精神萎，發(fā)育正常，營養(yǎng)中等，查體合作，中度貧血貌，全身皮膚粘膜無黃染，無肝掌及蜘蛛痣，雙側(cè)頸部可觸及腫大淋巴結(jié)，約1×1cm，質(zhì)中，有觸痛，余淺表淋巴結(jié)未及腫大。組化CD38++，CD138++，CD56，κ，λ+，MUM1+++，CD34血管內(nèi)皮+。進一步分析免疫組化結(jié)果1%CD64:陰性CD33:52.實驗室檢查生化ALT321U/L，AST334U/L，LDH601U/L，ALB23.骨髓病理提示，結(jié)節(jié)樣增生的幼稚細胞，細胞胞體偏大，胞漿量豐富；胞核大，大多不規(guī)則，異型性明顯，約占有核細胞80%。9umol/L，白蛋白

34.骨髓病理提示，結(jié)節(jié)樣增生的102免疫組化結(jié)果組化CD38++，CD138++，CD56，κ，λ+，MUM1+++，CD34血管內(nèi)皮+。結(jié)合HE切片，本例考慮為多發(fā)性骨髓瘤。免疫組化結(jié)果組化CD38++，CD138++，CD56，κ，103流式細胞異常漿細胞占33%（CD138+CD38+CD19-CD56-）流式細胞異常漿細胞占33%（CD138+CD38+CD19-104染色體核型分析79,XX,-1,-1,-3,-4,-4,-5,+8,-9,-10,-13,-16,-16,-16,-16,+18,-21,-22,+mar1,+mar2[cp3]/46,XX[7]染色體核型分析79,XX,-1,-1,-3,-4,-4,-5105分子生物學檢查該檢測標本IGK重排檢測陽性分子生物學檢查該檢測標本IGK重排檢測陽性106多發(fā)性骨髓瘤λ型DS分期III期B組ISS分期Ⅲ期結(jié)果多發(fā)性骨髓瘤λ型DS分期III期B組ISS分期Ⅲ期結(jié)果10770例MM患者不同檢測方法腫瘤負荷的比較方法骨髓涂片流式細胞骨髓活檢MM細胞比例26.29%±22.01%7.20%±10.92%59.50%±29.70%MM